Mara Antonia Malajovich / Guas de actividades

Biotecnologa: enseanza y divulgacin

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MICROPROPAGACIN

CULTIVO IN VITRO DE MERISTEMAS DE AJO

El ajo (Allium sativum, famlia Amaryllidaceae) es

una monocotilednea, originaria de Asia. El bulbo, o

cabeza de ajo, est formado por bulbillos o dientes

de ajo (Figura 1).

Debido a las propiedades aromticas conferidas por

la alicina, dichos bulbillos resultan un condimento

indispensable en la cocina de varios pueblos.

Con algunas propiedades antimicrobianas, el ajo

tambin es utilizado en la medicina popular para el

control de la presin sangunea, del colesterol, de

las enfermedades coronarias y de la ateroesclerosis.

La propagacin es asexuada, a partir de los

bulbillos. En el ajo-semilla, se consigue eliminar los

virus por cultivo in vitro de los meristemas prximos

al disco caulinar basal. Existen diversas estrategias

de mejoramiento gentico, basadas en la

informacin existente en los Bancos de

Germoplasma.

Figura 1. El ajo (Allium sativum). Arriba: cabeza de

ajo; en el medio: corte de la cabeza de ajo; abajo:

corte longitudinal de un diente de ajo, mostrando el

disco caulinar basal.

BIBLIOGRAFA

MALAJOVICH M.A. e MANN V.S. Micropropagacin. Gua 80: El laboratorio de enseanza; Gua 85:

La desinfeccin de los instrumentos; Gua 90: La desinfeccin de los explantes y Gua 96: Los medios

de cultivo. http://www.bteduc.bio.br

PEAT G. AND JONES M. A protocol for rapid, measurable plant tissue culture using stem disc meristem

micropropagation of garlic (Allium sativum L.). SSR 93(345), 2012.

Disco caulinar basal

Brote

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ACTIVIDAD PRCTICA

OBJETIVO

Cultivar, in vitro, explantes de disco caulinar basal de ajo.

MATERIAIS

Un diente de ajo, bistur o cuchillo afilado, azulejo, frasco desinfectante con agua sanitaria diluida al

medio, 3 frascos con agua destilada estril, pinzas, papel toalla, una placa de Petri con papel toalla

estril, 4 frascos con medio nutritivo estril *, palitos estriles, alcohol 70, mechero Bunsen

(opcional).

* El medio nutritivo es una solucin de sales minerales a las que se adiciona sacarosa (1 a 5%), agar

(0,7%) y agua de coco, como se indica en las Guas 111: Micropropagacin: medios clsicos y 112:

Micropropagacin: medios alternativos.

PROCEDIMIENTO

La limpieza del lugar de trabajo es fundamental, as como la higiene de las manos. El

lugar de trabajo ser desinfectado con alcohol 70. Cuidado! El alcohol es inflamable.

Los participantes se lavarn muy bien las manos y los antebrazos con agua y jabn,

antes de pasarse alcohol 70.

Esterilizar el material contaminado antes de descartarlo.

1. Separacin de los explantes

Pelar el bulbillo (diente de ajo) y cortar justo en la parte seca de la base, como se observa en la

figura de abajo.

2. Desinfeccin de la superficie de los explantes

Esterilizar el bulbillo por inmersin, durante 20 minutos, en agua sanitaria diluida a La mitad y con

una gota de detergente.

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3. Lavados en agua destilada estril

Hacer 3 lavados de 1, 3 y 5 minutos, agitando suavemente.

4. Establecimiento del cultivo

o En condiciones aspticas, poner los dientes de ajo en una placa de Petri que contiene papel toalla

estril.

o Con un bistur afilado, separar una lmina de 2 mm del disco basal y corarlo al medio.

o Transferir los dos explantes al frasco con medio de cultivo estril, manteniendo la polaridad de

uno de los fragmentos e invirtiendo la del otro.

5. Seguimiento

Observar semanalmente el crecimiento de los explantes.

En relacin con la bibliografa citada, respetamos la indicacin de colocar los dientes de ajo en la

heladera durante al menos una semana antes de iniciar la actividad prctica. No agregamos el

antifngico Nipagin (metilparabeno) en los lavados, como recomiendan los autores, pero realizamos

los tests del procedimiento.

La ventaja de comenzar con la esterilizacin del diente de ajo reside en conseguir eliminar los

contaminantes. A pesar de que el proceso daa los tejidos externos, esto no parece afectar la lmina

caulinar basal que est dentro del bulbillo.

Esta actividad exige tiempo de preparacin, porque demanda bastante material estril, pero el

resultado es excelente. Luego de algunas semanas, observamos el crecimiento de los explantes de

ajo, a partir de la regin meristemtica del disco basal del bulbillo (Figura 2).

CMO MONTAR UN PROYECTO?

Probar el procedimiento con puerro o cebolla.

Modificar la composicin del medio nutritivo.

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Figura 2. Explantes de disco caulinar basal de bulbillos de ajo cultivados in vitro.