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  • 1. INTRODUCCINSalto de seccin (Continua)

    La propagacin de plantas consiste e efectuar su multiplicacin por medios tanto

    sexuales como asexuales. La reproduccin asexual, consiste en la propagacin

    empleando partes vegetativas de la planta original, es posible porque cada clula de

    la planta contiene la informacin gentica necesaria para generar una nueva planta,

    esta caracterstica se conoce como totipotencia celular (HARTMANN y KESTER,

    1995).

    Dentro de los mtodos asexuales, se tiene la propagacin de cultivos in vitro tales

    como cultivo de vulos, embriones, semillas, polen, esporas, cultivos de pice, micro

    injertos, clulas y tejidos.

    La micropropagacin, consiste en producir plantas a partir de porciones muy

    pequeas de ellas, de tejidos o clulas cultivadas aspticamente en un tubo de

    ensayo o en otro recipiente, donde se puedan controlar estrictamente las

    condiciones del ambiente y la nutricin (HARTMANN y KESTER, 1995). Estos

    sistemas de propagacin requieren de instalaciones como laboratorios y personal

    adiestrado para la realizacin de las labores.

    Esta tcnica se ha convertido en una alternativa importante dentro de los mtodos

    convencionales de propagacin en una amplia gama de especies (HARTMANN y

    KESTER, 1995), y se compone de cuatro etapas secuenciales: establecimiento,

    proliferacin o multiplicacin, enraizamiento y aclimatacin (BOUTHERIN y BRON,

    1994).

    Una planta que se ha originado in vitro, difiere en muchos aspectos de las que se

    forman in vivo (PIERIK, 1990), ya que sus condiciones tanto ambientales como del

  • sustrato, la luz, nutricin, son muy diferentes. Adems es importante sealar que el

    crecimiento in vitro es hetertrofo e in vivo auttrofo.

    El ambiente in vitro, con una alta humedad relativa, bajo o nulo intercambio

    gaseoso, escasez de CO2 durante casi todo el perodo, produccin de etileno y baja

    densidad fotosinttica, induce perturbaciones en las plantas desarrolladas bajo esa

    condicin. Despus de transferir las plantas al ambiente ex vitro, las plantas tienen

    que corregir todas esas anormalidades para aclimatizarse al nuevo ambiente, ya

    sea en invernadero o campo (KADLECEK et al., 2001). Por otra parte, la anatoma

    de la hoja es influenciada por la luz y la humedad, diferencindose anatmicamente

    de las originadas in vivo (BRAINERD et al., 1981).

    Debido a esto, la aclimatacin es un factor importante en la posterior supervivencia

    de la planta, ya que es una etapa crtica dentro del proceso, en la que se produce la

    mayor prdida. En ella se debe comenzar reduciendo gradualmente la humedad

    relativa, para permitir con esto adems del cierre estomtico, una mejor formacin

    de cutcula y disminuir la prdida de agua. Por otra parte, para tener mejores

    resultados en el establecimiento in vivo es necesario el desarrollo radicular in vitro

    (PIERIK, 1990).

    La disminucin de la humedad relativa al interior del tubo de cultivo y con ello el

    incremento de la ventilacin, parece tener un mayor efecto en vid, reforzando el

    funcionamiento estomtico y con esto permitir un mejor control de la prdida de

    agua por parte de las hojas (GRIBAUDO, NOVELLO y RESTAGNO, 2001).

    Existen varios informes que detallan las etapas in vitro de las vides, pero se ha dado

    una escasa atencin a la etapa de la aclimatacin. Comparado con otras especies

    leosas, la sobrevivencia de las vides micropropagadas es relativamente baja

    (THOMAS, 1998).

    En cuanto al cerezo, diversos son los estudios realizados a nivel mundial en

    bsqueda de nuevas variedades y portainjertos. La propagacin in vitro, ha surgido

  • como una alternativa importante dentro de la multiplicacin de patrones. Es por ello

    interesante el estudiar el comportamiento de esta especie, durante la etapa ms

    complicada de la micropropagacin, la aclimatacin, para generar antecedentes y

    facilitar el proceso a futuro.

    Es por ello, que en este estudio se propone, mediante la preaclimatacin en cmara

    de crecimiento, con el uso de sellos en los frascos de cultivo, permitir una mayor

    ventilacin y la disminucin gradual de la humedad relativa, para as disminuir el

    estrs hdrico sufrido por las plantas al momento del trasplante, mediante un mejor

    funcionamiento estomtico y aumentar con esto la sobrevivencia in vivo, permitir

    una aclimatacin ms fcil y hacer ms comercial el proceso.

    Adems, se realizar un estudio histolgico de hoja en vid, para analizar la

    evolucin de los estomas en los estados secuenciales de la propagacin in vitro,

    para entender desde un punto de vista descriptivo su funcionamiento, y cmo

    influyen en la tasa de sobrevivencia durante la aclimatizacin.

    Objetivos:

    1.- Evaluar distintos sistemas de sellado en la preaclimatacin de plantas de vid y

    cerezo Gisela 5 propagadas in vitro, que conduzcan a una adecuada etapa de

    aclimatizacin.

    2.- Evaluar la sobrevivencia de las plantas de vid y cerezo Gisela 5 propagadas in

    vitro preaclimatadas, en la etapa de aclimatizacin.

    3.- Analizar mediante el uso de fotografas de cortes histolgicos, la condicin en la

    que se presentan los estomas en cada uno de los estados secuenciales de la

    propagacin in vitro de vid.

  • 2. REVISIN BIBLIOGRFICA. 2.1. Cultivo in vitro: El trmino cultivo in vitro se aplica a todo cultivo bajo cristal en medio asptico, pero

    incluye diversas tcnicas cuyos mtodos y fines son muy diferentes. La tcnica

    general consiste en tomar un fragmento de tejido vegetal, colocarlo en un medio

    nutritivo y provocar (gracias a un equilibrio adecuado de los elementos del medio)

    directamente o tras manipulacin el desarrollo de una plntula. El conjunto de estas

    operaciones se desarrolla en condiciones estriles y se seguir por una

    aclimatacin en medio tradicional (BOUTHERIN y BRON, 1994).

    El cultivo in vitro es gracias a una propiedad de las clulas vegetales llamada

    totipotencia celular, que significa que: toda clula vegetal viva con ncleo, capaz,

    cual fuere su especializacin del momento, de reproducir fielmente la planta entera

    de la cual proviene. Cada clula posee entonces la totalidad del patrimonio gentico

    de la planta (BOUTHERIN y BRON, 1994).

    HARTMANN y KESTER (1995) sealan una clasificacin general de los sistemas

    de cultivo in vitro, utilizando sistemas aspticos y este es el siguiente: cultivo de

    meristemas, microinjertos, pices de tallos, cultivo de tejidos o clulas (callos,

    protoplastos, etc), cultivo de anteras, polen, vulos, embriones, semillas y esporas.

    2.2. Micropropagacin: El fin de la micropropagacin es el de reproducir en gran cantidad plantas idnticas

    al pie madre, y no teniendo la micropropagacin influencia sobre la calidad sanitaria

  • de la planta propagada, es indispensable poseer como punto de partida un material

    sano (BOUTHERIN y BRON, 1994).

    Dentro de las ventajas sealadas por MARGARA (1988), permite propagar un gran

    nmero de especies difciles de multiplicar, a menudo por los mtodos clsicos

    puede realizarse con un nivel de proliferacin elevado en un estado precoz de

    desarrollo, con frecuencia esta propagacin in vitro se une a la lucha fitosanitaria, ya

    que las plantas obtenidas, son usualmente libres de virus, bacterias, hongos

    parsitos, y constituyen un material de calidad.

    Por su parte, BOUTHERIN y BRON (1994), sealan otras ventajas como mejorar la

    seleccin, ya que a partir de un individuo notable, se puede comercializar

    rpidamente un clon interesante, garanta de homogeneidad, adems limita o

    suprime los pies madre y por consiguiente libera superficies de invernadero y

    permite la programacin de cultivos a lo largo de todo el ao, o la produccin en

    perodos muy precisos, sin que el nmero de pies madre o su estado por reposo

    vegetativo tengan influencia y por ltimo, la formacin de un banco de genes que

    podrn conservar especies o cultivares que ofrezcan un inters agronmico,

    hortcola, industrial, ecolgico, etc.

    THOMAS y SCHIEFELBEIN (2001) destacan la posibilidad de guardar stocks

    durante aos, sin la prdida de potencial de multiplicacin con una serie de

    subcultivos y el retorno de plantas normales al campo con caractersticas de adulto.

    En cuanto a las desventajas MARGARA (1988) indica que se puede obtener

    variantes distintas a la planta madre por su morfologa o fisiologa, la necesidad de

    usar determinados tejidos para una especie dada, ya que se debe acudir a los

    tejidos aptos para sintetizarlos en forma natural. Por su parte BOUTHERIN y BRON

    (1994), mencionan el costo como desventaja ya que en una planta in vitro es ms

    elevado que el de aquella multiplicada por mtodos tradicionales. Sin embargo, este

    inconveniente se compensa con frecuencia con una ganancia de productividad, el

    riesgo de mutacin porque la tasa de variabilidad es ms elevada, por ltimo, las

  • dificultades de xito, cierto nmero de vegetales se multiplican fcilmente in vitro,

    otros permanecen rebeldes a esta tcnica, en especial en las especies leosas.

    2.3. Propagacin in vitro: 2.3.1. Establecimiento

    La vid es propagada convencionalmente usando estacas de madera dormante (36 a

    46 cm de largo) recolectadas durante el invierno. Estas son plantadas durante la

    primavera en contenedores, para posteriormente ser trasplantadas a la via. Este es

    un proceso lento y limi