3.1. EXTRACCIÓN Y PURIFICACIÓN. LA PRIMERA ETAPA

3.2. PRETATAMIENTO DE LAS MUESTRAS BIOLÓGICAS3.2.1. SANGRE3.2.2. CULTIVOS CELULARES3.2.3. TEJIDOS ANIMALES O VEGETALES FRESCOS3.2.4. TEJIDOS FIJADOS EN FORMOL E INCLUIDOS EN PARAFINA3.2.5. OTRAS MUESTRAS

3.3. EXTRACCIÓN DE ÁCIDOS NUCLEICOS3.3.1. LA SOLUCIÓN DE LISIS3.3.2. TRATAMIENTOS EN CÉLULAS CON PARED CELULAR3.3.3. VERIFICACIÓN DE LOS RESULTADOS DE LA LISIS3.3.4. CONSIDERACIONES EN LA EXTRACCIÓN DE AND

3.4. PURIFICACIÓN DE LOS ÁCIDOS NUCLEICOS3.4.1. PURIFICACIÓN CON SOLVENTES ORGÁNICOS3.4.2. PRECIPITACIÓN CON SALES (SALTING-OUT)3.4.3. CROMATOGRAFÍA DE INTERCAMBIO IÓNICO3.4.4. CROMATOGRAFÍA DE ADSORCIÓN3.4.5. PURIFICACIÓN MEDIANTE ESFERAS MAGNÉTICAS3.4.6. ULTRAFILTRACIÓN3.4.7. PURIFICACIÓN DE PLÁSMIDOS

ÍNDICE: : EXTRACCIÓN Y PURIFICACIÓN DE ÁCIDOS NUCLÉICOS

3.5. AUTOMATIZACIÓN DEL PROCESO DE EXTRACCIÓN/PURIFICACIÓN

3.5.1. VENTAJAS DE LA AUTOMATIZACIÓN3.5.2. TIPOS DE INSTRUMENTOS AUTOMÁTICOS

3.6. CALIDAD DE LOS ÁCIDOS NUCLEICOS PURIFICADOS

3.6.1. INTREGRIDAD DE LOS ÁCIDOS NUCLEICOS3.6.2. PUREZA DE LOS ÁCIDOS NUCLEICOS3.6.3. CONCENTRACIÓN DE LOS ÁCIDOS NUCLEICOS3.6.4. FUNCIONALIDAD DE LOS ÁCIDOS NUCLEICOS PURIFICADOS

3.7. ALMACENAMIENTO DE LOS ÁCIDOS NUCLEICOS PURIFICADOS

Extracción y purificación:

PURIFICACIÓN ÁCIDOS

NUCLEICOS

SOLVENTES ORGÁNICOS

PRECIPITACIÓN CON SALES (salting-out)

CROMATOGRAFÍA DE INTERCAMBIO

IÓNICO

CROMATOGRAFÍA DE ADSORCIÓN

ESFERAS MAGNÉTICAS

ULTRAFILTRACIÓN

PURIFICACIÓN PLÁSMIDOS

ProcedimientoP. SOLVENTES ORGÁNICOS:

ProcedimientoCROMATOGRAFÍA INTERCAMBIO IÓNICO:

MAE: Dimetilaminetanol Ácidos nucleicos

http://www.cultek.com/aplicaciones.asp?p=Aplicacion_AN_Purificacion&opc=tecnicas&idap=35

Fig. 3.14. Representación gráfica de la secuencia de elución de las moléculas presentes en un lisado celular desde una columna de intercambio iónico a medida que aumenta la concentración salina del tampón de lavado.

CROMATOGRAFÍA DE ADSORCIÓN

● Cuando al medio acuoso se le añade una salcaotrópica, esta atrae las moléculas de agua y retira la capa hidratante de ambas estructuras, creando un entorno hidrofóbico que permite la interacción entre la sílice y el ácido nucleico.

● Se utilizanmembranas de lanade vidrio o perlas de sílice empaquetadasen columnas de polipropileno que ajustan en tuboscolectores tipoeppendorf.

ULTRAFILTRACIÓN PURIFICACIÓN PLÁSMIDOS: GRADIENTE CsCl