Metabolismo del EritrocitoMetabolismo del Eritrocito

Fundatal 2006Fundatal 2006

ReticulocitoReticulocito

EritroblastoEritroblasto

EritrocitoEritrocito

Pérdida del núcleo

Pérdida de ARN y mitocondrias

EritrocitoEritrocito

Metabolismo reducidoMetabolismo reducido

Ausencia de Ausencia de Ciclo de KrebsCiclo de Krebs

Ausencia de núcleoAusencia de núcleo y ribosomas y ribosomas

Ausencia de síntesis Ausencia de síntesis de proteínas de proteínas

No se produce renovación No se produce renovación del stock de enzimas del stock de enzimas

Glicólisis Glicólisis anaerobiaanaerobia

Agotamiento progresivo de enzimasAgotamiento progresivo de enzimasque limitan la sobrevida del GRque limitan la sobrevida del GR

Ausencia de Ausencia de mitocondriasmitocondrias

Glucosa

Glucosa 6PGP

IFructosa 6P

Fructosa 1-6P

ATPADP HKMM

gg

DHAP G3P

ALDTP

I

1,3DPG

NAD

NADHG3PD

H

PiPi

PFKMgMgATPADP

Vía Pentosas

Síntesis GSHVIA EMBDEN-MEYERHOFVIA EMBDEN-MEYERHOF

Reducción Meta Hb

1,3DPG

PGKADP

ATPMMgg

3PG

2PG

PGM

PEP

PIRUVATO

ENOL

ADP

ATPMMgg PK

LACTATOLDH

Degradación Nucleótidos

y Vías de rescate

2,3DPG

DPGM

DPGP

Shunt Rapoport

Luebering

VIA EMBDEN MEYERHOFVIA EMBDEN MEYERHOF

pH (-)

pH (+)

NADNADH

Funciones del ciclo de EMPFunciones del ciclo de EMP

1. Inicia y mantiene la glicólisis1. Inicia y mantiene la glicólisis2. Síntesis de GSH2. Síntesis de GSH3. Activación de ribosa -5P (PRPP)3. Activación de ribosa -5P (PRPP)4. Mantenimiento de integridad y plasticidad de la 4. Mantenimiento de integridad y plasticidad de la

membranamembrana5. Mantenimiento de bomba cationes ATPasa dep5. Mantenimiento de bomba cationes ATPasa dep

Modulación de la curva de disociación de oxiHbModulación de la curva de disociación de oxiHb

1. Interviene en la reducción de piruvato a lactato1. Interviene en la reducción de piruvato a lactato 2. Reducción de MetaHb2. Reducción de MetaHb

Producción de intermediarios de la glicólisis anaerobia

ATP

2,3 DPG

NADH

Glucosa

Glucosa 6P

Gliceraldehído 3P

6P-gluconato

Ribulosa 5P + CO2

G6PDH

6PGDH

NADPH

NADP

NADPH

NADP

Fructosa 6P

CICLO DE LAS PENTOSASCICLO DE LAS PENTOSAS

Xilulosa 5P Ribosa 5P

F6P +

G3P

(…)

SÍNTESIS y REGENERACIÓN DE SÍNTESIS y REGENERACIÓN DE GLUTATIÓNGLUTATIÓN

Ácido glutámico

CisteínaATP

ADP

GCS

glutamilcisteína

Glicina

ATP

ADP

Glutatión

Sintetasa GSHG6P

6PG

NADP

NADPH GSSG

H2O2

H2O

O2

Stress oxidativ

o

SOD

G6PDG6PD

Glutatión Glutatión PeroxidasPeroxidas

aa

Glutatión Glutatión ReductasReductas

aa

CAPACIDAD REDUCTORACAPACIDAD REDUCTORA

NAD Cit bNAD Cit b5 5 HbHb

NADH Cit bNADH Cit b5 red5 red Meta Hb Meta Hb

Vía principal

67%

Vías accesorias

NADP AM oxid HbNADPH AM red Meta Hb

5%

NADP GSH dehidroasc HbNADPH GS-SG ascórbico MetaHb

16%

NADP GSH HbNADPH GS-SG MetaHb 12%

GSH R

GSH R

MetaHb R NADHdep

MetaHb R NADPHdep

Glucosa Glu H2O + ½ O2

Cys

GC Catalasa

G6P Gly

NADP+ 2 GSH H2O2 Hb Cb5+++ NADH

NADPH Cb5++ NAD+

6PG

NADP+ AzMet NADPH

NADPH GS=SG 2 H20 Hb AzMet NADP+

R5P

PRPP

G3P

F1-

6DP

F

6P6P

GD

G

6PD

H

K

Hemicromos reversibles

Hemicromos irreversibles

Cuerpos de Heinz

ox

red

MetaHb- prevención- reducción

Fe+++

Fe++

GS=SG-R GSH-P (FAD) (Se)

ATP-asaADP

ATP

AMP

AK

ADENOSINA

PRPP

Adenosina Quinasa

APRT

Inosina

R-5-P

ADA

ADPATP

H2ONH3

AdeninaPP

i

RPPK

Shunt HMP

R-1-P

CMP

UMP

UridinaCitidina Hipoxanti

na

R-1,5-P2

P5’N Pi

PPiIMP

Pi

AMPATP

PRMPNP

VÍA DE RESCATE DE PURINASVÍA DE RESCATE DE PURINAS

ARN ribosomal

ribonucleasa

nucleótidos

purínicos pirimidínicos

AMP GMP UMP CMP

P5´N

Pi

Uridina Citidina

Anemias HemolíticasAnemias Hemolíticas

Pruebas de laboratorioPruebas de laboratorio

ANEMIA HEMOLÍTICA – Pruebas de ANEMIA HEMOLÍTICA – Pruebas de LaboratorioLaboratorio

Objetivos:Objetivos:

1.1. Destrucción acelerada de G. R.Destrucción acelerada de G. R.

2.2. Eritropoyesis aceleradaEritropoyesis acelerada

3.3. Diagnóstico diferencial Diagnóstico diferencial

Destrucción acelerada de Glóbulos RojosDestrucción acelerada de Glóbulos Rojos– Vida ½ eritrocitaria con Vida ½ eritrocitaria con 5151Cr Cr

Bilirrubina indirectaBilirrubina indirecta LDHLDH– Signos de hemólisis intravascularSignos de hemólisis intravascular

ANEMIA HEMOLÍTICA – Pruebas de ANEMIA HEMOLÍTICA – Pruebas de LaboratorioLaboratorio

50

100

0 27 Días10

% A

ctiv

idad

de

5151 C

rC

r

Haptoglobina y hemopexinaHaptoglobina y hemopexina Hemoglobina libre en plasmaHemoglobina libre en plasma

– MetahemalbuminemiaMetahemalbuminemia

– Hemoglobinuria Hemoglobinuria

– HemosideruriaHemosideruria Estercobilinógeno Estercobilinógeno

y urobilinógenoy urobilinógeno

ANEMIA HEMOLÍTICA – Pruebas de ANEMIA HEMOLÍTICA – Pruebas de LaboratorioLaboratorio

Signos de hemólisis intravascularSignos de hemólisis intravascular

Hb

Hb libre

MetaHb

Hem

Hb-hapto

Dimerosαβ

Globina

+ Hapto

+ Albúmina

+ Hemopexina

Hemopexina-Hem

MetahemaAlb + Hemopexina

ANEMIA HEMOLÍTICA – Pruebas de ANEMIA HEMOLÍTICA – Pruebas de LaboratorioLaboratorio

Eritropoyesis aceleradaEritropoyesis acelerada– SANGRE:SANGRE:

ReticulocitosisReticulocitosis

PolicromatofiliaPolicromatofilia

MacrocitosisMacrocitosis

Punteado basófiloPunteado basófilo

Eritroblastos circulantesEritroblastos circulantes

– M.O.:M.O.:Hiperplasia eritroideHiperplasia eritroide

– FERROCINÉTICA:FERROCINÉTICA: Turn over de FeTurn over de Fe

ANEMIA HEMOLÍTICA – Pruebas de ANEMIA HEMOLÍTICA – Pruebas de LaboratorioLaboratorio

Diagnóstico diferencialDiagnóstico diferencial– Hemograma completoHemograma completo

– Examen del frotis de sangre periféricaExamen del frotis de sangre periférica

– Recuento de reticulocitosRecuento de reticulocitos

– Prueba de CoombsPrueba de Coombs

– Electroforesis de HbElectroforesis de Hb

– Resistencia osmótica globularResistencia osmótica globular

– AutohemólisisAutohemólisis

– Test de HamTest de Ham

– Test de isopropanolTest de isopropanol

Déficit de Piruvato KinasaDéficit de Piruvato Kinasa

Déficit de Piruvato KinasaDéficit de Piruvato Kinasa

Test de Screening Test de Screening – AutohemólisisAutohemólisis::

FundamentoFundamento:: HemHemólisis por anomalía intrínseca ólisis por anomalía intrínseca del GR al someterlo a incubación a 37del GR al someterlo a incubación a 37ºC / 48 hs. ºC / 48 hs. con y sin agregado de glucosa y ATPcon y sin agregado de glucosa y ATPResultadoResultado: :

– V.N: < 2.0% en ausencia de glucosa V.N: < 2.0% en ausencia de glucosa – < 0.9% en presencia de glucosa < 0.9% en presencia de glucosa

DesventajaDesventaja:: – Tiempo (laboratorista)Tiempo (laboratorista)– No diagnóstico diferencial No diagnóstico diferencial

Déficit de Piruvato KinasaDéficit de Piruvato Kinasa

Test de Screening Test de Screening – Técnica de FluorescenciaTécnica de Fluorescencia::

PEPPEP ++ ++ADPADP

PKPK

PIRUVATOPIRUVATO ATPATP

PIRUVATOPIRUVATO ++ ++NADH + NADH + HH++

LACTATOLACTATO NADNAD++

LDHLDH

FluoresceFluoresce NO Fluoresce

Déficit de Piruvato KinasaDéficit de Piruvato KinasaTest Diagnósticos: Test Diagnósticos: – Dosaje cuantitativo de la actividad enzimática Dosaje cuantitativo de la actividad enzimática

de PKde PK

Desventajas:Desventajas: – Existencia de variantes cinéticas con Existencia de variantes cinéticas con afinidad por el afinidad por el

sustrato (System Low)sustrato (System Low)– ReticulocitosisReticulocitosis

– Biología MolecularBiología Molecular

PEPPEP ++ ++ADPADP

PKPK

PIRUVATOPIRUVATO ATPATP

PIRUVATOPIRUVATO ++ ++NADH + NADH + HH++

LACTATOLACTATO NADNAD++

LDHLDH

Déficit de Déficit de Glucosa-6-Fosfato-dehidrogenasaGlucosa-6-Fosfato-dehidrogenasa

Déficit de G6PDHDéficit de G6PDH

Tests de ScreeningTests de Screening– Test Brewer:Test Brewer:

Pasos:Pasos:

1.1. Hb (roja) + NOHb (roja) + NO22Na Na Hbi (marrón) Hbi (marrón)

2.2. Hbi + Azul Metileno + NADPH Hbi + Azul Metileno + NADPH Hb + NADP + leucobase Hb + NADP + leucobase

Desventaja:Desventaja:– No sirve para detección de heterocigotasNo sirve para detección de heterocigotas

Glucosa Glu H2O + ½ O2

Cys

GC Catalasa

G6P Gly

NADP+ 2 GSH H2O2 Hb Cb5+++ NADH

NADPH Cb5++ NAD+

6PG

NADP+ AzMet NADPH

NADPH GS=SG 2 H20 Hb AzMet NADP+

R5P

PRPP

G3P

F1-

6DP

F

6P6P

GD

G

6PD

H

K

Hemicromos reversibles

Hemicromos irreversibles

Cuerpos de Heinz

ox

red

MetaHb- prevención- reducción

Fe+++

Fe++

GS=SG-R GSH-P (FAD) (Se)

Déficit de G6PDHDéficit de G6PDHTests de ScreeningTests de Screening

– Test CitoquímicoTest Citoquímico

Hb Hb Hbi Hbi CNHbi (sol. con HCNHbi (sol. con H22OO22) )

G6PDG6PDHH

Formazan insol.Formazan insol.

MTT

NONO22NaNa HCNHCN

Déficit de G6PDHDéficit de G6PDHTests de ScreeningTests de Screening

– Electroforesis de isoenzimas de G6PDHElectroforesis de isoenzimas de G6PDH

B :B : normal normal

A :A : normal africana normal africana

A-:A-: población afroamericana población afroamericana

Mediterránea:Mediterránea: población blanca población blanca

Déficit de G6PDHDéficit de G6PDH

Tests diagnósticos: Tests diagnósticos: – Dosaje cuantitativo de la actividad enzimática Dosaje cuantitativo de la actividad enzimática

de G6PDHde G6PDH

– Biología MolecularBiología Molecular

G6P + NADP+ 6PG + NADPH + H+

6PG + NADP+ Ribulosa-5-P + NADPH + H+ + CO2

G-6-PDH

6-PGDH

Hora de despertarse…Hora de despertarse…

¡Muchas Gracias!