UNIVERSIDAD DE BUENOS AIRES. FACULTAD DE MEDICINA

II CÁTEDRA DE MICROBIOLOGÍA, PARASITOLOGÍA E INMUNOLOGÍA

MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA I

CLASE TEÓRICA 4

EL DNA RECOMBINANTE: ESTRATEGIAS BÁSICAS DE CLONACIÓN Y EXPRESIÓN DE GENES.

APLICACIONES EN MICROBIOLOGÍA

Profesor Regular Titular: Dr. Norberto Sanjuan

Doctor en Medicina (UBA)

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GAATTC GGATCCCTTAAG CCTAGG

EcoRI BamHI

ENDONUCLEASAS DE RESTRICCIÓN

EcoRI BamHI

EcoRI BamHI

CORTE, MEZCLA Y LIGACIÓN

DNA RECOMBINANTE

DNA «A»

DNA «B»

7. CORTAR UN PLÁSMIDO (VECTOR) CON LAS MISMAS ENZIMAS DE RESTRICCIÓN

LUEGO, LIGAR EL INSERTO DE DNA VIRAL SALVAJE CON EL DNA DEL PLÁSMIDO. ESTO SE REALIZA TANTO CON EL FRAGMENTO SOBRE EL

QUE SE HARÁ LA MUTACIÓN COMO CON EL RESTO DEL GENOMA VIRAL

RESTRICCIÓN EcoRI / BamHI

6. SEPARAR LOS FRAGMENTOS POR ELECTROFORESIS

FUENTE DE PODERBANDAS DE DNA VISTAS CON UV

LUEGO, CORTAR LAS BANDAS DESEADAS Y RECUPERAR EL DNA DEL VIRUS SALVAJE

7. CORTAR UN PLÁSMIDO (VECTOR) CON LAS MISMAS ENZIMAS DE RESTRICCIÓN

LUEGO, LIGAR EL INSERTO DE DNA VIRAL SALVAJE CON EL DNA DEL PLÁSMIDO. ESTO SE REALIZA TANTO CON EL FRAGMENTO SOBRE EL

QUE SE HARÁ LA MUTACIÓN COMO CON EL RESTO DEL GENOMA VIRAL

8. TRANSFORMAR BACTERIAS(MÉTODO DEL CLORURO DE CALCIO)

Escherichia coli

9. SELECCIONAR LAS COLONIAS QUE CONTIENEN EL PLÁSMIDO CON EL INSERTO

COLONIAS BLANCAS Y AZULES. SÓLO LAS BLANCAS CONTIENEN EL DNA DESEADO.

13. PICAR UNA COLONIA BLANCA Y CULTIVARLA EN UN VOLUMEN GRANDE DE CALDO

LUEGO, OBTENER EL DNA PLASMÍDICO CON EL INSERTO DE DNA VIRAL DESTRUYENDO LAS PROTEINAS. MAXIPREP.