Desarrollo de una cepa mutante de Bacillus subtilis que muestra una mayor producción de acetoína

 

Vázquez Sánchez Jorge

Objetivo Producción específica y mejorada de acetoína por la cepa

mutante de Bacillus subtilis. A través de la fermentación , se confirmó que la cepa mutante,

TH-49, no era capaz de utilizar acetoına como su fuente de energía para el crecimiento después de haber consumido la

glucosa

Introducción La Acetoína  es un compuesto orgánico producido de forma

natural por las levaduras del género saccharomyces durante la fermentación alcohólica. Es precursor en la biosíntesis del 2,3-

butadieno y el diacetílo.

Acetoina.s3d

Método de obtención En comparación con la síntesis química y enzimática, la fermentación microbiana es el

método más competitivo en la producción a escala de Acetoína.

Materiales y métodos. B. subtilis N-12 .

Medio de cultivo apropiado. Incubador agitador

Irradiación de rayos UV Aislamiento de las cepas mutantes.

Tratamiento por mutagenesis (NTG). 2 Aislamiento

Radiación ultravioleta (UV)

Los mutantes fueron seleccionados en base a la velocidad de producción de Acetoína

Tratamiento por mutagenesis con Nitrosoguanidina (NTG)

NTG

Los mutantes fueron seleccionados en base a la velocidad de producción de Acetoína

Tratamiento compuesto

NTG

los mutantes de alto rendimiento fueron seleccionados de acuerdo a la tasa de producción de Acetoína

Estabilidad de el mutante del mutante TH49

1643.8

Fermentación a escala de banco de la cepa mutante TH-49

Análisis GC de los productos de fermentación de mutante

cepa TH-49

Análisis GC-MS de productos de fermentación del mutante

cepa TH-49

Radiación ultravioleta

Los dímeros distorsionan la conformación del ADN inhibiendo la replicación

Agentes mutagénicos

EMS

Guanina6-Etilguanina

Enlace de hidrógeno

MUTÁGENOS FÍSICOSMUTÁGENOS FÍSICOS

• Radiaciones ionizantes

• Radiaciones no ionizantes

MUTÁGENOS QUÍMICOSMUTÁGENOS QUÍMICOS

• Ácido nitroso

• Agentes alquilantes

• Sustancias análogas a las bases nitrogenadas

• Sustancias intercalantes

Pueden provocar la rotura de los cromosomas y modificar las bases nitrogenadas.

Provocan la formación de enlaces covalentes entre dos bases pirimidínicas contiguas, dando origen a dímeros.

Transforma la citosina en uracilo y la adenina en hipoxantina provocando incorporación de bases erroneas en la replicación del ADN.

Añaden grupos etilo o metilo a las bases nitrogenadas alterando la replicación del ADN.

Sustituyen a las bases nitrogenadas del Adn y provocan transiciones.

Se intercalan entre las bases de una cadena dando origen a inserciones o delecciones de un solo par de bases.

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Aleatoria vs dirigida: test de fluctuación (Luria & Delbrück)

Mutación en el DNAMutación en el DNA

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Mutación en el DNAMutación en el DNA

Aleatoria vs dirigida: test de fluctuación

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Mutación en el DNAMutación en el DNA

Tasas y frecuencias de mutación espontáneas

Frecuencia por gen (gameto o replicación) (10-4-10-8)

Por nucleótido (10-8 - 10-9)

Frec. Mutación: 2/8Tasa mutación: 1/7 (número de divisiones celulares = número células finales - 1)