Desarrollo de una cepa mutante de
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Desarrollo de una cepa mutante de Bacillus subtilis que muestra una mayor producción de acetoína
Vázquez Sánchez Jorge
Objetivo Producción específica y mejorada de acetoína por la cepa
mutante de Bacillus subtilis. A través de la fermentación , se confirmó que la cepa mutante,
TH-49, no era capaz de utilizar acetoına como su fuente de energía para el crecimiento después de haber consumido la
glucosa
Introducción La Acetoína es un compuesto orgánico producido de forma
natural por las levaduras del género saccharomyces durante la fermentación alcohólica. Es precursor en la biosíntesis del 2,3-
butadieno y el diacetílo.
Acetoina.s3d
Método de obtención En comparación con la síntesis química y enzimática, la fermentación microbiana es el
método más competitivo en la producción a escala de Acetoína.
Materiales y métodos. B. subtilis N-12 .
Medio de cultivo apropiado. Incubador agitador
Irradiación de rayos UV Aislamiento de las cepas mutantes.
Tratamiento por mutagenesis (NTG). 2 Aislamiento
Radiación ultravioleta (UV)
Los mutantes fueron seleccionados en base a la velocidad de producción de Acetoína
Tratamiento por mutagenesis con Nitrosoguanidina (NTG)
NTG
Los mutantes fueron seleccionados en base a la velocidad de producción de Acetoína
Tratamiento compuesto
NTG
los mutantes de alto rendimiento fueron seleccionados de acuerdo a la tasa de producción de Acetoína
Estabilidad de el mutante del mutante TH49
1643.8
Fermentación a escala de banco de la cepa mutante TH-49
Análisis GC de los productos de fermentación de mutante
cepa TH-49
Análisis GC-MS de productos de fermentación del mutante
cepa TH-49
Radiación ultravioleta
Los dímeros distorsionan la conformación del ADN inhibiendo la replicación
Agentes mutagénicos
EMS
Guanina6-Etilguanina
Enlace de hidrógeno
MUTÁGENOS FÍSICOSMUTÁGENOS FÍSICOS
• Radiaciones ionizantes
• Radiaciones no ionizantes
MUTÁGENOS QUÍMICOSMUTÁGENOS QUÍMICOS
• Ácido nitroso
• Agentes alquilantes
• Sustancias análogas a las bases nitrogenadas
• Sustancias intercalantes
Pueden provocar la rotura de los cromosomas y modificar las bases nitrogenadas.
Provocan la formación de enlaces covalentes entre dos bases pirimidínicas contiguas, dando origen a dímeros.
Transforma la citosina en uracilo y la adenina en hipoxantina provocando incorporación de bases erroneas en la replicación del ADN.
Añaden grupos etilo o metilo a las bases nitrogenadas alterando la replicación del ADN.
Sustituyen a las bases nitrogenadas del Adn y provocan transiciones.
Se intercalan entre las bases de una cadena dando origen a inserciones o delecciones de un solo par de bases.
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Aleatoria vs dirigida: test de fluctuación (Luria & Delbrück)
Mutación en el DNAMutación en el DNA
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Mutación en el DNAMutación en el DNA
Aleatoria vs dirigida: test de fluctuación
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Mutación en el DNAMutación en el DNA
Tasas y frecuencias de mutación espontáneas
Frecuencia por gen (gameto o replicación) (10-4-10-8)
Por nucleótido (10-8 - 10-9)
Frec. Mutación: 2/8Tasa mutación: 1/7 (número de divisiones celulares = número células finales - 1)