Xenotrasplante de Islotes Pancreaticos y Cel de Sertoli de Porcino Dr Rafael Valdes

7/25/2019 Xenotrasplante de Islotes Pancreaticos y Cel de Sertoli de Porcino Dr Rafael Valdes

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AntecedentesAntecedentes


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AntecedentesAntecedentes

Diabetes en Mxico.

Evolucin del trataiento

convencional. Evolucin del es!uea intensivo

"ras#lante de islotes $alo%nico&.

"ras#lante de islotes $xeno%nico&.


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JustifcacinJustifcacin

'(n con el es!uea intensivo lasco#licaciones a#arecern.

En trans#lantes alo%nicos)

* Escasez de donadores cadavricos.* Ma+or ries%o de transisin de enferedades.

* ,o#licaciones !uir(r%icas

* Dao e#tico

* 'lto costo del trataiento inunosu#resor* 'lto ries%o de co#licaciones secundarias

*"ie#o de sobrevida corto


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XenotrasplanteXenotrasplante

Ries%o de infeccin #or RetrovirusEnd%eno /orcino $/ERV&

0tras zoonosis


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Retos del XenotrasplanteRetos del Xenotrasplante

Su#ervivencia de las clulasi#lantadas)

* Recazo inunol%ico

* 1actores no inunol%icos

,o#atibilidad funcional de lasclulas i#lantadas

* De la insulina #orcina + otras oronas

* De los sisteas re%uladores uanos


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Diseo ExperimentalDiseo Experimental

a& ,reacin de un sitioinunol%icaente #rivile%iado)

Dis#ositivo

1oracin de col%ena autlo%a

2nunoodulacin #or clulas deSertoli

b& "ras#lante 2slotes 3 Sertoli


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DispositioDispositio

Usamos un dispositivo diseado enUsamos un dispositivo diseado en

nuestro laboratorio, que consiste en unnuestro laboratorio, que consiste en un

cilindro de malla metlica de 6 cm de largo,cilindro de malla metlica de 6 cm de largo,

con dos tapones de polipropileno, uno decon dos tapones de polipropileno, uno de

ellos con un mbolo que llena el cilindro.ellos con un mbolo que llena el cilindro.


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!mplante del dispositio!mplante del dispositioDos meses antes del xenotrasplante,Dos meses antes del xenotrasplante,

dos a cuatro dispositivos fuerondos a cuatro dispositivos fueronimplantados subcutneamente en laimplantados subcutneamente en la

pared abdominal anterior.pared abdominal anterior.


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"rocesamiento de !slotes y"rocesamiento de !slotes ySertolisSertolis

El p"ncreas # los test$c%los sonEl p"ncreas # los test$c%los sonmacerados # di&eridos con %namacerados # di&eridos con %na

sol%cin de Liberasa HI.sol%cin de Liberasa HI.

'e %tilizan'e %tilizancerdos de (cerdos de (d$as de )idad$as de )ida

El p"ncreas esEl p"ncreas esremo)idoremo)idoinmediatamentinmediatamente desp%s dee desp%s dee%tanasia pore%tanasia por

exan&%inacin.exan&%inacin.

Los islotes # las 'ertolisLos islotes # las 'ertolisson c%lti)adosson c%lti)ados

separadamente a *(+separadamente a *(+


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#ontrol de calidad#ontrol de calidadLa p%reza de los islotesLa p%reza de los islotes

es de -es de -on tincin de Ditizona.on tincin de Ditizona.

%reza de 'ertoli /*.0-1%reza de 'ertoli /*.0-1por MI' # sox/.por MI' # sox/.

La )iabilidad es determinada porLa )iabilidad es determinada portincin de iod%ro de propidiotincin de iod%ro de propidio

2Islotes1/3-, 'ertoli /4-52Islotes1/3-, 'ertoli /4-5

6poptosis 2Islotes1 3.-,6poptosis 2Islotes1 3.-,'ertoli 78.4-5'ertoli 78.4-5

#tometr$a de fl%9o contra#tometr$a de fl%9o contra

6nnexina6nnexina

F%ncionalidad1F%ncionalidad1

:ndices de:ndices deestim%lacin deestim%lacin de

Islotes ;77.4Islotes ;77.4

'ertoli1'ertoli1deteccin dedeteccin de

losterinaslosterinas


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Diseo ExperimentalDiseo Experimental

* ReclutaientoReclutaientototalente voluntariototalente voluntario

* /ronstico con/ronstico con

trataientos actualestrataientos actuales* /rocediiento/rocediiento

Ex#erientalEx#eriental* 0b4etivos0b4etivos

* MetasMetas* Ries%osRies%os*

,osto econico,osto econico

* 0bli%aciones del0bli%aciones delvoluntariovoluntario

* 0bli%aciones del 5os#ital0bli%aciones del 5os#ital

ipo 77= adolescentes con Diabetes >ipo 7


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$iotica$iotica

2nstituciones revisoras)

* ,oisin 6acional de 7iotica

*1acultad de Medicina8 96'M* 5os#ital 2nfantil de Mxico 1edericoGez


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$iotica$iotica

,u#liiento de la declaracin de 5elsin:i* ;'rt. caces en la atencin de un enfero8el dico8 con el consentiiento inforado del#aciente8 #uede #eritirse usar #rocediientos

#reventivos8 dia%nsticos + tera#uticos nuevos ono #robados8 si8 a su 4uicio8 ello da al%unaes#eranza de salvar la vida8 restituir la salud oaliviar el sufriiento. Sie#re !ue sea #osible8tales edidas deben ser investi%adas a >n deevaluar su se%uridad + e>cacia. En todos los

casos8 esa inforacin nueva debe ser re%istrada+8 cuando sea o#ortuno8 #ublicada. Se debense%uir todas las otras noras #ertinentes de estaDeclaracin..?


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Diseo ExperimentalDiseo Experimental Monitoreo)

* Re!ueriientos de insulina ex%ena* 5eo%lobina %licosilada* 2nsulina #orcina circulante* 'nt@%enos 'nti -Gal + eol@ticos de cerdo* /ERV $inclu+endo failiares coabitantes&

A dis#ositivo reovido


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Se%uridadSe%uridad

Medidas de se%uridad de los aniales enla %ran4a)* Gran4a cerrada + aislada $B:&.

* Red contra aves.* 7arreras contra roedores.

* /ro%raa extensivo de vacunacin

* ,uarentena estricta $7ao de entrada * 7ao

de salida&.* Monitoreo de salud aleatorio.

* Re%istro e identi>cacin detallada de cadaanial.


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Se%uridadSe%uridad

Medidad de se%uridad de los anialesdonadores.

"aiz icrobiol%ico #ara)* 'u4esz:+ $elisa&

* Erisi#ela $elisa&

* Salonella s#.$elisa&

* Salonella s#.$cultivo de @%ado + vlvula ileocecal&

* 7rucella a. $a%lutinacin&.

* 2nFuenza /orcina $inibicin de a%lutinacin&

* e#tos#ira $icroa%lutinacin AH es#ecies&.* M+co#lasa +o#neuoniae $elisa&

* ,oronavirus $elisa&

* "oxo#lasosis $elisa&


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#ontin%encias#ontin%enciasObserv. Clnica oObserv. Clnica o

de !abde !ab

sospec"osasospec"osa

#euni$n#euni$n

dede

%ersona%ersona

ll

Diagn$sticoDiagn$stico

&ratamiento&ratamiento

especficoespecfico

'eguimiento'eguimiento &ratamiento&ratamiento

(ospital(ospitalO)'O)'

*ran+a*ran+a

%roductora%roductora

)anual de)anual de

bioseguridad debioseguridad de

la gran+ala gran+a

nstitucionesnstituciones

-xterna-xterna

ContactarContactar

familias familias

%ersonas%ersonas

cercanascercanas

'ecretara'ecretarade 'aludde 'alud

CuarentenaCuarentena


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Retroirus End%eno "orcinoRetroirus End%eno "orcino

=8*0

70*0

787

480*/0

7 = * 3

E?@ 73 bp

arriles1

7. Marcadores de tamaAo=. ontrol Be&ati)o

*. DB6 porcino

3. DB6 de acientes


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ResultadosResultados

'nticuer#os 'nti -Gal

8

4887888

7488

=888

=488*888

*488

3888

3488

re>x D$a ( D$a 73 7mes *mes 0mes D$a ( 7mes

ttulos

7aAo

Tiempo Post trasplante

=nd>x=+ >x

/0/0

/0/0

/0/0

11

////

22

1133

/0/0

n cuerpos en e ensayon cuerpos en e ensayo


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n cuerpos en e ensayon cuerpos en e ensayo&exicano '()))*())1+ s. El Sueco&exicano '()))*())1+ s. El Sueco

'1,,)*1,,-+'1,,)*1,,-+

>$t%los de Cema&l%tininas I&M contra eritrocitos porcinos replicando>$t%los de Cema&l%tininas I&M contra eritrocitos porcinos replicandoexactamente el mtodo de Lindebor& E. Xenotransplantation =8871exactamente el mtodo de Lindebor& E. Xenotransplantation =8871 =(*=*. =(*=*.

00

4411

/6/6

5050

6464

/01/01

036036

aldes et al.aldes et al. *rot" et al.*rot" et al.

77

p89.999/, )ann:;"itne U testp89.999/, )ann:;"itne U test

&iter

&iter


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Reuerimientos de !nsulinaReuerimientos de !nsulina


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ResultadosResultadosEl #rier %ru#o de A= #acientes tras#lantados al #rier ao deltras#lante8

H no tuvieron reducciones8 H ostraron reduccionesvariadas.

/aciente $I Reduccin&

A


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Deteccin de insulina #orcina ensuero #or 5/,


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9n dis#ositivo fue reovido de cada unode los #acientes8 #ara #oder serretras#lantados + #osibleente lle%ar a lainde#endencia de insulina.

os dis#ositivos reovidos fueronanalizados #or inunoisto!u@ica #arainsulina8 %luca%on8 M2S $un arcador declulas de Sertoli&8 + ,D


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!nsulina!nsulina

11 11

22 22

33 334444

(-(-

/l/l


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/luca%on/luca%on


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Sustancia !n0ibidoraSustancia !n0ibidora&ulleriana '&!S+&ulleriana '&!S+


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11

11

22

22

33

33

44

44

55

55

66

66

CD3 HumanoCD3 Humano

InsulinaInsulina

Q-03-164-5Q-03-164-5


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#onclusiones#onclusiones

6o a abido seales de zoonosis

6o a+ co#licaciones etablicas

6o a+ intolerancia al dis#ositivo o al#rocediiento.

El sistea inune de los #acientes

se antiene intacto8 edido #orreacciones intradricas.


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Res#uesta 2nune* /ersistencia de insulina $AKKI de los

dis#ositivos reovidos& + clulas #ositivas

a %luca%on $KI& en cantidades variablesdes#us de B aos8 + de anerasor#rendente8 coexistiendo con linfocitos "

* 6o a+ correlacin entre los niveles deanticuer#o + su#ervivencia de las clulas.

* 6o a+ una res#uesta t@#ica des#us delretras#lante


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Modi>caciones en los re!ueriientos deinsulina ex%ena

* En BKI de los casos ubo reducciones8 en

al%unos casos cerca de AKKI #or varios eses.* El otro BKI #udiera no aber tenido su>cientesclulas su#ervivientes8 o una enorsensibilidad a la insulina.

a #resencia de insulina #orcina se a#odido detectar en la circulacin #or ediode 5/,


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"asos !nmediatos"asos !nmediatos

2denti>car los sisteas anti%nicosen el cerdo !ue sean i#ortantes#ara el xenotras#lante a uano* Res#uesta uoral

'nticuer#os 'nti -Gal Gru#os san%u@neos ti#o '70 1eneno de 'coodaiento en los dis#ositivos /ruebas de reactividad cruzada #ara ant@%enos

#roteicos en islotes + Sertolis contra anticuer#osuanos #reforados.

* Res#uesta celular ,aracterizacin de los linfocitos " en los dis#ositivos.


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"asos !nmediatos"asos !nmediatos

,uanti>cacin de la co#osicincelular dentro de los dis#ositivos.

ospital !n2antil de &xicoospital !n2antil de &xico


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ospital !n2antil de &xicoospital !n2antil de &xico34ederico /me5634ederico /me56

#olaboracin con otras#olaboracin con otras


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#olaboracin con otras#olaboracin con otras!nstituciones.!nstituciones.

Dr amillo ?icordi, Dr L%ca In)erardi

Diabetes ?esearcC Instit%te,ni)ersit# of Miami

Dr Da)id Cite,?obarts ?esearcC Instit%te,ni)ersit# of estern !ntario

Dr Gordon eir,oslin Diabetes enter.

oston, M6Dr ?obert Elliott,

Diatranz Ltd, BeJ Kealand


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