Western blot

Western blot Macias Izquierdo Andy

Grupo 5 Principio de la tcnica Separacin de los antigenos de lisado viral con sulfato de sodio dodecil (SDS).Transferencia (absorcion) de los antigenos separados a papel de nitrocelulosa, y Prueba de la muestra del suero desconocido directamente en la membrana absorbente utilizando una tcnica similar a la E.L.I.S.A

Materiales Suero problema del paciente Bandeja Pocillo pipeta de Pasteur Kit de western blot : TAMPON DE LAVADO DILUIDO ( 1: 19 ) TAMPOM BLOTTING DE TRABAJO ( 1: 9) CONJUGADO SUSTRATO TIRAS DE NITROCELULOSA SUSTANCIA CONTROL

Procedimiento de la tcnica Aada 2 ml de Tampn de lavado diluido a cada pocillo.Coloque cada tira en su pocillo con el nmero hacia arriba (incluir tiras para los tres controles).Incubar durante 2 minutos a temperatura ambiente en un plato basculante (12-16 ciclos/min). Extraiga el tampn por pocillo.Aada 20 micro litros de suero del paciente o de control en cada uno de los pocillos.Cubra la bandeja e incube 1 hora a temperatura ambiente en la plataforma basculante.Incline la bandeja para aspirar la mezcla de los pocillos.Lave tres veces cada tira con 2 ml de Tampn de trabajo diluido dejando que se empapen durante 5 min en la plataforma durante los lavados.Aspire el sustrato y aclare las tiras 3 veces con agua de calidad reactivo para detener la reaccin.Dejar secar las tiras dentro de los pocillos o en toallas de papel.Coloque las tiras en una hoja de trabajo, observe las bandas y califique los resultados

INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS POL: ENZIMAS - transcriptasa reversa GAG: CAPSIDE ENV: ENVOLTURA

Peso molecular GenAntgeno Descripcingp 160ENVForma polimrica de la gp 41Ancha y difusa de glucoprotenagp 120ENVMembrana externaDifusa de glucoprotenaP 66POLTranscriptasa inversaBanda discretaP 55GAGProtena precursoraBanda discretaP 51POLTranscriptasa inversaBanda discreta justo por debajo de p 55P 39GAGFragmento de p 55Banda discretagp 41ENVTransmembranaDifusa de glucoprotenaP 31POLendonucleasaDobleteP 24GAGProtena centralBanda anchaP 17GAGProtena centralBanda anchaORGANIZACINCRITERIO DE POSITIVIDAD ASTPHLD/CDCCualquiera par: p24, gp 41 gp120/160FDAPresencia de: p24 , p31 y gp41 Gp120/160Standardizacin SerologaConsorcio de Retrovirus (CRSS)Al menos dos bandas: p24 p31 y gp41 o gp 120/160American Red CroosTres bandas, una de cada producto.Del genoma: env, gag y pol.

NTERPRETACINPERFILPOSITIVO2 ENV + GAG + POLINDETERMINADO1 ENV + GAG + POLGAG + POLGAGPOLNEGATIVONinguna bandaBandas no significativas