Verificación de placas Petrifilm™ RYM (Rapid Yest and Mold ...
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Andrés Ávila1 1 Estudiante de Bacteriología, integrante del semillero de investigación SIMA
adscrito al Grupo de Investigación GIMBIC
Verificación de placas Petrifilm™ RYM (Rapid Yest and Mold) 3M para estudio de las
matrices de crema de leche y Tampico en la planta Jenaro Pérez de la Cooperativa
Colanta.
Andrés Felipe Avila Fuentes
Director
Linda Chams Chams
Universidad de Córdoba
Facultad ciencias de la salud
Programa Bacteriología
Montería-Córdoba
2021
Andrés Ávila1 1 Estudiante de Bacteriología, integrante del semillero de investigación SIMA
adscrito al Grupo de Investigación GIMBIC
Verificación de placas Petrifilm™ RYM (Rapid Yest and Mold) 3M para estudio de las
matrices de crema de leche y Tampico en la planta Jenaro Pérez de la Cooperativa
Colanta.
Verification of 3M Petrifilm ™ RYM (Rapid Yest and Mold) plates for the study of milk
cream and Tampico matrices at the Jenaro Pérez plant of the Colanta Cooperative.
Resumen: Las empresas dedicadas a la producción, envasado y distribución de alimentos, deben
contar con estrictos mecanismos de control de calidad que aseguren la inocuidad de los
productos que fabrican, es por ello que la Cooperativa Colanta, desde el área de control calidad,
realiza ajustes para garantizar la inocuidad de los mismos. En el laboratorio de Microbiología, es
donde se realizan los análisis que permiten verificar el cumplimiento de calidad establecido para
cada uno de los productos fabricados. Sin embargo, estos métodos requieren de una verificación
para demostrar que cumple con los requisitos para ser utilizado bajo las condiciones del
laboratorio y a su vez dar cumplimiento a lo establecido en la Resolución 1619 de 2015. Es el
caso de la verificación del PetrifilmTM RYM en la planta Jenaro Pérez-Medellín que se realizó
bajo estrictos protocolos, el cual brindó resultados confiables lo que permite dar uso para los
análisis de los productos en cuestión, esto se puede constatar con las variables a determinar
(precisión intermedia, sesgo y porcentaje de recuperación) cuyos valores expresados en los
resultados cumple con dichas condiciones para que sea puesto en rutina para las matrices
analizadas (crema de leche y Tampico).
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Con todos los resultados obtenidos se puede determinar que el método alternativo cuenta con
todas las condiciones para ser empleado, brindando resultados en los tiempos esperados,
proporcionando facilidad en la lectura, generando comodidad de uso y mejor administración de
los espacios que se utilizan para la incubación de los mismos.
Palabras clave: Verificación, Petrifilm™ RYM, control calidad de alimentos, Mohos,
Levaduras, Candida albicans
Abstrab
The companies dedicated to the production, packaging and distribution of food must have strict
quality control mechanisms that ensure the harmlessnessof the products they manufacture, that is
why the Colanta Cooperative, from the quality control area, makes adjustments to guarantee the
safety of the same. In the Microbiology laboratory, it is where the analyzes are carried out that
allow verifying the quality compliance established for each of the manufactured products.
However, these methods require verification to demonstrate that it meets the requirements to be
used under laboratory conditions and in turn comply with the provisions of Resolution 1619 of
2015. This is the case of the verification of PetrifilmTM RYM in the Jenaro Pérez-Medellín plant
that was carried out under strict protocols, which provided reliable results, which allows use for
the analysis of the products in question, this can be verified with the variables to be determined
(intermediate precision, bias and recovery percentage) The values of which expressed in the
results meet these conditions to be put into routine for the matrices analyzed (milk cream and
Tampico).
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With all the results obtained, it can be determined that the alternative method has all the
conditions to be used, providing results in the expected times, providing ease in reading,
generating ease of use and better management of the spaces used for incubation thereof.
Keywords: Verification, Petrifilm ™ RYM, food quality control, Molds, Yeasts, Candida
albicans.
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CONTENIDO 1. INTRODUCCIÓN. ................................................................................................................................... 7
2. OBJETIVOS. ........................................................................................................................................... 9
2.1 objetivo general. ................................................................................................................................ 9
2.2 Objetivos específicos. ......................................................................................................................... 9
3. MARCO TEÓRICO. ............................................................................................................................... 10
4. MATERIALES Y MÉTODOS. ................................................................................................................. 16
4.1 Preparación de la muestra contaminada artificialmente: .............................................................. 16
4.2 MATRICES ANALIZADAS: .................................................................................................................. 19
4.3 TRAZABILIDAD METROLÓGICA: ....................................................................................................... 19
4.4 CONDICIÓN DE MUESTRAS: ............................................................................................................. 19
5. RESULTADOS. ...................................................................................................................................... 19
5.2 Análisis de resultados. ..................................................................................................................... 24
6. CONCLUSIÓN. ..................................................................................................................................... 25
7. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS. ......................................................................................................... 26
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CONTENIDO DE TABLAS.
Tabla 1. Precisión Intermedia RYM Tampico ................................................................................ 20
Tabla 2. Precisión Intermedia RYM crema de leche. ...................................................................... 21
Tabla 3. Precisión Intermedia YGC crema de leche. ....................................................................... 22
Tabla 4. Cálculos de % de recuperación (exactitud) YGC crema de leche. ..................................... 23
Tabla 5. Cálculos de % de recuperación (exactitud) RYM crema de leche. ..................................... 23
Tabla 6. Cálculos de % de recuperación (exactitud) RYM Tampico. ............................................. 23
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1. INTRODUCCIÓN. El control de calidad en las empresas de alimentos está basado en estrictos seguimientos que
permiten establecer cuáles son los puntos críticos durante la fabricación, envasado y
comercialización del producto. La finalidad de todo este proceso es garantizar la inocuidad de los
alimentos que fabrican, por esta razón la Cooperativa Colanta, desde el área de control calidad
realiza aportes para alcanzar este objetivo.
La Cooperativa, cuenta con un laboratorio de Microbiología, donde se realizan diversos análisis
que permiten verificar el cumplimiento de las especificaciones establecidas para cada uno de los
productos fabricados. La empresa cuenta con la política integral que busca “Generar una cultura
orientada al mejoramiento continuo de los procesos y a la prevención de sucesos que puedan
afectar la calidad e inocuidad del producto” (Colanta, 2018). además del cumplimiento de
diversas normas colombianas, reguladas por el Instituto Nacional de Vigilancia de
Medicamentos y Alimentos (INVIMA).
Para la industria de alimentos, el análisis microbiológico es una herramienta fundamental para el
control microbiológico de la materia prima, procesos de fabricación, manipuladores, superficies,
utensilios y producto terminado. Este tipo de análisis permite establecer el grado de
contaminación de los productos alimenticios y asegura el cumplimiento de la calidad en todas las
etapas del proceso.
Dentro de los métodos empleados para la identificación de microorganismos en el laboratorio de
Microbiología están los métodos cualitativos y cuantitativos. Los métodos cualitativos, están
basados principalmente en la determinación de la presencia o ausencia de un microorganismo en
una muestra analizada; mientras que los métodos cuantitativos, determinan de manera directa o
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indirecta la carga microbiana contenida en una muestra. Algunos ejemplos de técnicas
cuantitativas son: recuento de mesófilos aerobios, recuento de coliformes totales, recuento E.
coli, recuento de Staphilococcus aures, recuento de mohos y levaduras, estos últimos
microorganismos son los de interés en este trabajo.
El Petrifilm™ RYM, es un sistema con medio de cultivo, listo para usar, que contiene nutrientes
complementados con antibióticos para inhibir el crecimiento bacteriano en las muestras
analizadas, facilita el desarrollo de los microrganismos deseados para la ejecución exitosa del
estudio, además cuenta con un agente gelificante soluble en agua fría y un indicador que provee
de características especiales a las colonias que crecen en el medio, logrando así diferenciar por
características macroscópicas las colonias de mohos, levaduras y su posterior enumeración.
Este método busca reducir el tiempo de incubación de las matrices analizadas a cuarenta y ocho
(48) horas, determinando si los resultados arrojados por los mismos aportan un valor confiable
en cuanto a la contaminación de las muestras por parte de los microorganismos de importancia
para el estudio. El tiempo del análisis se reduce en más de un 50% en comparación con el
procedimiento convencional (siembra en caja de Petri). Esto representa ventajas para la
producción y liberación de los productos analizados para su comercialización.
Sin embargo, este método requiere de una verificación con la cual se logre demostrar que cumple
con los requisitos para la aplicación prevista bajo las condiciones del laboratorio de la planta
Jenaro Pérez - Medellín, así como lo dicta la resolución 1619 de 2015, en la cual se establece el
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Sistema de Gestión de la Red Nacional de Laboratorios en los ejes estratégicos de Vigilancia en
Salud Pública y de Gestión de Calidad.
Por otro lado, se busca que los laboratorios de control calidad de los parámetros fisicoquímicos y
microbiológicos cumplan con los lineamientos que aseguren la confiabilidad del resultado y la
gestión alrededor del mismo. Es así como surge la necesidad de verificar la efectividad de las
placas de Petrifilm™ RYM para el recuento rápido de Mohos y levaduras, en las matrices de
crema de leche y Tampico producidas en la planta Jenaro Pérez de Colanta – Medellín y
asegurar que se cumplan con los estándares y requisitos para la implementación diaria de las
mismas.
2. OBJETIVOS.
2.1 objetivo general. Verificar la efectividad de las placas de Petrifilm™ RYM para el recuento rápido de Mohos y
Levaduras, en las matrices crema de leche y Tampico en la planta Jenaro Pérez de Colanta -
Medellín.
2.2 Objetivos específicos. Comparar la efectividad del método alternativo con respecto al método convencional.
Comprobar que el método alternativo proporciona las características de diferenciación en el
crecimiento de microorganismos y proporciona facilidad en su cuantificación.
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3. MARCO TEÓRICO. Los análisis microbiológicos realizados para la verificación del PetrifilmTM RYM en la planta
Jenaro Pérez, Medellín, se realizó con el fin de contar con un método alternativo, cuyas
características fuesen capaces de satisfacer las necesidades de los análisis que se realizan
diariamente en la planta, dotando al laboratorio con características competitivas que le permitan
sobrellevar la carga de la producción que en esta se presenta.
El método alternativo con el estudio intra-laboratorio fue comparado contra el método
convencional de referencia (siembra en profundidad con agar YGC), determinando así la
capacidad que presenta para recuperar el analito en una matriz determinada, dichos resultados
también se contrastaron entre analistas para así determinar qué tan reproducible es y su desfase
entre resultados.
Este método alternativo provee puntos a favor con respecto al método convencional, dado que el
tiempo de análisis es reducido, el gasto energético por parte del personal y de la empresa en la
preparación de los medios es menor, se economiza espacio al momento de la incubación por su
portabilidad, haciendo que el trabajo en laboratorio sea de mejor desempeño y se presente
óptimo desarrollo en todos los procesos que requieran este tipo de análisis.
Cuando se obtienen resultados de crecimiento en las placas PetrifilmTM RYM, se logra
determinar fácilmente el crecimiento de mohos y levaduras, puesto que el medio brinda de
características a los crecimientos de los microorganismos, lo cual ofrece desenvoltura para su
respectivo conteo. También se deja en evidencia que dicho conteo no se presenta interferencia
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con la lectura de las placas, ya que en su mecanismo de crecimientos las colonias adoptan ciertas
características que las hacen inconfundibles para su respectiva diferenciación.
Mohos
“Se da comúnmente el nombre de moho a ciertos hongos multicelulares filamentosos, dotados de
un micelio verdadero, microscópicos, y cuyo crecimiento en los alimentos se conoce fácilmente
por su aspecto aterciopelado o algodonoso” (ecobiouvm, 2014, p.108).
Las células que componen a los organismos eucariontes son de pared rígida y membranas
plasmáticas delgadas, estas en su pared no contienen peptidoglicano, y están compuestas por
carbohidratos y contienen ADN lineal comprendido en una membrana nuclear. Los mohos están
integrados por las hifas que pueden ser tabicadas o no, además juegan un papel de gran
importancia en el desarrollo y reproducción del mismo. La reproducción de estos puede ser de
tipo sexual o asexual (mitosis), cuando se da sexualmente (meiosis) se extiende una hifa que
entra en contacto con el aire y así formar esporas ya sean libres (conidio) o en sacos
(esporangio), los cuales son tenidos en cuenta para la clasificación taxonómica de ellos (Aguirre,
2016).
La contaminación fúngica de un alimento tiene mucha importancia, no tan sólo por su acción
deteriorante, que pudre y malogra materias primas y productos manufacturados, sino también por
la capacidad de algunos hongos para sintetizar gran variedad de micotoxinas, para provocar
infecciones y, incluso, para provocar reacciones alérgicas en personas hipersensibles a los
antígenos fúngicos. Por estos motivos, para conocer la calidad microbiológica de un producto, es
pertinente realizar un recuento de hongos y levaduras. (ecobiouvm, 2014, p.105).
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Los mohos y las levaduras están ampliamente distribuidos en el medio ambiente, ciertamente
estos pueden encontrarse como microbiota nativo de los alimentos o contaminantes. Algunas
especies son usadas en la elaboración de alimentos, pero en cantidades controladas ya que
pueden llegar a ser dañinos para la salud y los mismos alimentos. (Aguirre, 2016, p.9).
Propiedades fisiológicas.
En comparación con la mayoría de las levaduras y de las bacterias, la mayoría de los mohos
necesitan menor cantidad de humedad disponible. Un porcentaje total de humedad por debajo del
14 al 15 por ciento en la harina o en algunos frutos secos impedirá o retardará mucho el
crecimiento de los mohos. Los mohos podrían considerarse mesófilos, es decir, que son capaces
de crecer bien a temperaturas normales. La temperatura óptima de la mayoría se encuentra
alrededor de los 25 a 30°C, aunque algunos son psicotrofos y algunos son termófilos. Son
aerobios, esto es cierto por lo menos en los mohos que crecen en la superficie de los alimentos.
Casi todos los mohos son capaces de crecer dentro de un amplio intervalo de pH (pH
comprendido entre 2 y 8.5), aunque la mayoría crece mejor a pH ácido. Son capaces de utilizar
muchos tipos de alimentos, que van desde sencillos a complejos. Poseen enzimas hidrolíticas, y
de aquí que algunos se utilicen para la producción industrial de las amilasas, pectinasas,
proteasas y lipasas. (Camacho, 2009, p.2)
Algunos géneros de mohos importantes en alimentos.
GENERO IMPORTANCIA EN LA INDUSTRIA Y
EFECTOS SOBRE LOS ALIMENTOS.
Mucor
Intervienen en la alteración de algunos
alimentos y se utilizan en la fabricación de
otros.
M. rouxii, se utiliza para la sacarificación
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del almidón, para la maduración de quesos
y para la fabricación de algunos alimentos
orientales.
Rhizopus
La especie R. stolonifer, o moho del pan, es
muy común e interviene en la alteración de
algunos alimentos: bayas, frutas, hortalizas,
pan, etc.
Aspergillus
Los aspergillus son mohos muy abundantes.
Algunas especies intervienen en las
alteraciones que experimentan los
alimentos, mientras que otros son de
utilidad para preparar determinados
alimentos. A. Niger se utiliza para la
producción industrial de ácido cítrico y
glucónico y de algunas enzimas. A. flavus se
utiliza para la fabricación de ciertos
alimentos orientales y en la obtención de
enzimas.
Penicillium
Es otro género de mohos de frecuente
incidencia y de importancia en los
alimentos, P. expansum produce la
podredumbre blanda de las frutas; P.
digitatum y P. italicum producen la
podredumbre de frutas cítricas. Las especies
P. camemberti, P. roqueforti se utilizan en
la maduración de quesos.
Levaduras
El término levadura se refiere a aquellos hongos que generalmente no son filamentosos, sino
unicelulares y de forma ovoide o esferoide, y que se reproducen por gemación o por fisión. Las
levaduras que se encuentran en los alimentos pueden ser benéficas o perjudiciales. Las levaduras
se utilizan en la elaboración de alimentos como el pan, la cerveza, vinos, vinagre y quesos,
también se utilizan en la obtención de enzimas y alimentos fermentados. Las levaduras son
perjudiciales cuando producen la alteración del sauerkraut, de los zumos de frutas, de los jarabes,
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de la melaza, de la miel, de las carnes, del vino, de la cerveza y de otros alimentos. La mayoría
de las colonias jóvenes de levaduras son húmedas y algo mucosas; la mayoría de las colonias son
blancuzcas, aunque algunas tienen un color crema o rosado. Son oxidativas, fermentativas, o
bien su actividad metabólica es a la vez de ambos tipos. (Camacho, 2009, p.4)
ALGUNOS GÉNEROS DE LEVADURAS IMPORTANTES.
GENERO IMPORTANCIA EN LA INDUSTRIA Y
EFECTOS SOBRE LOS ALIMENTOS.
Schizosaccharomyces
Las levaduras de este género se han
encontrado en frutas tropicales, en la melaza
y en la miel.
Saccharomyces
La especie S. cerevisiae se emplea en
muchas industrias alimentarias, como en la
fermentación del pan, fermentación de la
cerveza, fermentación de los vinos, en la
producción de alcohol, glicerol e invertasa.
Kluyveromyces.
K. marxianus (antes Saccharomyces
fragilis) se utiliza en la obtención de
productos lácteos por su capacidad de
fermentar la lactosa.
Zygosaccharomyces
Las levaduras de este género son
importantes por su capacidad para crecer en
medios con elevadas concentraciones de
azúcar (osmófilas), intervienen en la
alteración de la miel, jarabes y melazas, y
también en la fermentación de la salsa de
soya y de algunos vinos.
Pichia
Crecen en la superficie de los líquidos
formando una película. P. membranafaciens
produce una película en la superficie de las
cervezas y vinos.
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Debaromyces Forman película en la superficie de las
salmueras. D. kloeckeri crece en la
superficie de los quesos y de los embutidos.
Hanseniaspora.
Estas levaduras tienen forma de limón y
crecen en los zumos de frutas.
Torulopsis.
Originan problemas en las fábricas de
cervezas. T. sphaerica fermenta la lactosa,
alterando productos lácteos. Otras especies
alteran la leche condensada azucarada, los
concentrados de zumos de frutas y los
alimentos ácidos.
Candida
La especie C. utilis se cultiva para la
obtención de proteína unicelular para
incorporarla tanto a alimentos destinados al
consumo humano como a piensos. La
especie C. krusei se utiliza junto con los
cultivos iniciadores de productos lácteos. C.
lipolytica produce alteración de la
mantequilla y margarina.
Brettanomyces.
Producen grandes cantidades de ácido e
intervienen en la fermentación de la cerveza
belga de tipo “lambic”, de las cervezas
inglesas y de los vinos franceses.
Trichosporon.
Estas levaduras crecen mejor a temperaturas
bajas, encontrándose en las fábricas cerveza
y en la superficie de vacuno refrigerada.
Rhodotorula.
Estas levaduras de color rojo, rosa o
amarillo, pueden producir manchas en la
superficie de los alimentos como en la
superficie de las carnes, o zonas de color
rosado en el sauerkraut.
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Para hacer una identificación del crecimiento de los microorganismos tenemos en cuenta las
características de crecimiento en los Petrifilm incubados previamente. Para diferenciar las
colonias en las Placas 3M Petrifilm para el Recuento Rápido de Mohos y Levaduras,
identificaremos una o más de las características propias de los organismos que aquí se
desarrollan.
4. MATERIALES Y MÉTODOS. Se realizó un estudio descriptivo experimental en la planta Jenaro Pérez de Colanta –Medellín,
para verificar el método cuantitativo de las Placas Petrifilm™ RYM teniendo en cuenta los
parámetros de desempeño de precisión intermedia, porcentaje de recuperación y sesgo. La
metodología utilizada para el estudio realizado, se basó principalmente en la capacidad que
presenta el método alternativo (PetrifilmTM RYM) para cumplir a cabalidad todos los parámetros
mencionados.
El método alternativo fue comparado con el convencional de siembra en profundidad en cajas de
Petri con agar YGC, utilizado para la detección de Mohos y Levaduras en alimentos para
consumo humano.
4.1 Preparación de la muestra contaminada artificialmente: Para la preparación de la muestra artificialmente se usó la cepa Candida albicans (ATCC
10231™), en una concentración 1.5 x 108 UFC/ml, la cual de acuerdo con el fabricante se debe
trabajar en condiciones específicas para realizar la activación del Pellet, teniendo en presente la
temperatura y el volumen del diluyente de acuerdo con la concentración deseada para desarrollar
la actividad prevista.
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Precisión intermedia: después de la contaminación artificial de las matrices, se procedió a
realizar la siembra por parte de los analistas dispuestos para dicho estudio bajo las mismas
condiciones y calidad de las muestras.
Porcentaje de recuperación: se realizó la contaminación artificial para las matrices analizadas
(Crema de leche y Tampico) con la cepa mencionada anteriormente, y se determinó la capacidad
del método analítico para determinar cuantitativamente el microorganismo inoculado en las
matrices.
Sesgo: se realizó contaminación artificial con la cepa Epower®, para las matrices de crema de
leche y Tampico, la cual se encontraba estéril, se sembró la concentración media de la
contaminación por duplicado, con un total de 10 repeticiones, la siembra fue realizada de
acuerdo con los protocolos establecidos para la placa de Petrifilm™ RYM.
Rango de Lectura Placas Petrifilm™ RYM: 15 a 150 UFC/ml.
Incubación de Placas Petrifilm™ RYM: de acuerdo con la Guía de Interpretación de Placas
Petrifilm™ RYM, se incubaron las placas a 25-28°C, por 48 horas para evidenciar crecimiento
de los microorganismos; algunos hongos tardan un poco más en su crecimiento, por lo que se
incuban por 12 horas más para evidenciar su desarrollo.
Preparación de las matrices, cepa de referencia a utilizar y siembra.
A partir de una solución madre que contiene la carga del microorganismo (1,5x108
ufc/ml)
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De la solución anterior, se tomó 1ml y posteriormente se trasvaso a un tubo de 9ml con
agua peptona estéril, para obtener diluciones seriadas, disminuyendo la carga hasta la
dilución 101.
Posteriormente, se realiza la preparación de las matrices a analizar (homogernizado). Se
toman 10gr de crema de leche y 10 ml de Tampico, luego de estas mediciones se
adicionan en 90ml de agua Peptona al 0.1% para obtener una dilución 10-1. Este proceso
se realiza por triplicado.
Cuando se tienen las 3 diluciones de las matrices, se les adiciona 1ml de las diluciones
seriadas del microorganismo 101, 102 y 103 a las soluciones de las matrices que se
pesaron por triplicado.
A partir de las soluciones de las matrices contaminadas artificialmente, se procedió a
sembrar 1ml de cada dilución realizando 10 siembras en caja de Petri (método
convencional) y 10 siembras en placas Petrifilm RYMTM (método alternativo), este
proceso lo realizaran 3 analistas distintos, bajo las mismas condiciones y disposición de
material.
La solución 102 uno de los analistas (Marcela Rodríguez) la realizó por duplicado en
ambos métodos, convencional y alternativo.
Luego de estos pasos, se plaqueó del Agar YGC en las cajas de Petri y difusión en el
Petrifilm RYM con los discos de difusión.
Después de solidificados los medios se proceden a la incubación a 25°C; YGC durante 5
días y RYM durante 3 días.
Se realizó su lectura posterior a la incubación
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4.2 MATRICES ANALIZADAS:
Crema de leche y Tampico.
4.3 TRAZABILIDAD METROLÓGICA: Todos los planes de verificación y calibración de los equipos de ensayo y medición fueron
revisados y se evidenció que las fechas de calibración se encontraban vigentes, lo cual indica que
los equipos utilizados cumplen con las especificaciones establecidas para su operación.
4.4 CONDICIÓN DE MUESTRAS: Las muestras inicialmente fueron analizadas bajo los estándares de control calidad de la
Cooperativa Colanta, asegurando así que los lotes de las matrices analizadas se encontraran
libres de microorganismos interferentes.
Para la evaluación de las matrices se partió de un tipo de condición de muestra, la contaminada
artificialmente, en la cual se trabajó con material de referencia Epower® (Cepas ATCC
cuantitativas), Candida albicans (ATCC 10231™).
5. RESULTADOS. Precisión Intermedia RYM Tampico
Para el caso de la matriz de Tampico, sólo se realizó el ejercicio en las Placas Petrifilm™ RYM
ya que es una exigencia de casa matriz. Se tuvo en cuenta el procesamiento de las matrices por
tres analistas diferentes en 10 ocasiones repetidas, utilizando los mismos instrumentos de
medición, el mismo día, misma hora; bajo las mismas condiciones; para cuestiones de análisis
de información cada uno de los datos obtenidos fueron transformados a Log10 a lo que se obtuvo
los siguientes resultados:
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El promedio de los 30 datos obtenidos fue 1.40, Desviación estándar de 0.089 y el Coeficiente de
variación fue de 6%, además se procesó los datos de manera individual de cada una de los
analistas a lo que se obtuvo que las desviaciones estándar de cada uno (Sr) estuvieron por debajo
de la desviación estándar global (Precisión intermedia), evidenciando que el criterio de
aceptación se cumple a conformidad.
Tabla 1. Precisión Intermedia RYM Tampico
Precisión intermedia RYM crema de leche:
El promedio de los 30 datos fue 1.46, Desviación estándar de 0.126 y el Coeficiente de variación
fue de 9%, además se procesó los datos de manera individual de cada uno de los analistas a lo
que se obtuvo que las desviaciones estándar de cada uno (Sr) estuvo por debajo de la desviación
estándar global (Precisión intermedia), evidenciando que el criterio de aceptación se cumple a
conformidad.
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Tabla 2. Precisión Intermedia RYM crema de leche.
Precisión intermedia YGC crema de leche:
El promedio de los 30 datos fue 1.43, Desviación estándar de 0.11 y el Coeficiente de variación
fue de 8%, además se procesó los datos de manera individual de cada uno de los analistas a lo
que se obtuvo que las desviaciones estándar de cada uno (Sr) estuvo por debajo de la desviación
estándar global (Precisión intermedia), evidenciando que el criterio de aceptación se cumple a
conformidad
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Tabla 3. Precisión Intermedia YGC crema de leche.
Para cada uno de los casos descritos a continuación el criterio de aceptación fue 70-120% de
recuperación (Exactitud), los análisis se realizaron teniendo en cuenta tres niveles de
contaminación artificial (bajo, medio, alto), sin embargo para este caso se tomaron los resultados
de los niveles medios ya que la especificación de la matriz Crema de leche se encuentra dentro
de este rango y es las más amplia entre las dos matrices evaluadas. Cada uno de los promedios
de las tablas presentadas a continuación estuvo dentro del criterio de aceptación anteriormente
mencionado
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Tabla 4. Cálculos de % de recuperación (exactitud) YGC crema de leche.
Tabla 5. Cálculos de % de recuperación (exactitud) RYM crema de leche.
Tabla 6. Cálculos de % de recuperación (exactitud) RYM Tampico.
Cabe anotar que al comparar las dos técnicas presentadas en las tablas 4 y 5 se evidenció una
buena concordancia de recuperación entre ambas a lo que la matriz puede ser procesada en
cualquiera de los dos medios de cultivo.
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5.2 Análisis de resultados. Como las placas de Petrifilm RYM ya han sido validadas por un organismo de referencia
(AOAC), nuestro estudio nos permite ampliar la gama de matrices en las que se puede utilizar
este medio de cultivo y se verifica correctamente su funcionalidad dado que cumple con el
requisito de porcentaje de recuperación de un analito en una muestra problema, haciéndolo
confiable para su posterior uso tal como se evidencio en las tablas 5 y 6 en las cuales se probó
que tan exactos fueron los datos obtenidos a partir de las matrices en cuestión.
Teniendo en cuenta los parámetros enunciados en La AOAC 2014.05 (2014), se tomó el grupo
de alimentos que más se acomoda al comportamiento de las matrices en estudio; alimentos fríos;
en donde para la desviación de repetibilidad y reproducibilidad el dato es 0.1 en concentraciones
medias (25° C durante 60 horas) los resultados obtenidos se encuentran con valores aproximados
a este valor, sin embargo se evidenció que para la matriz de Tampico el dato obtenido fue mucho
menor al valor citado (0.089) lo cual le aporta robustez a la técnica y obedece a las necesidades
emitidas por casa matriz (Tampico Beverage).
Según Aguirre (2016) afirma que “La sensibilidad de las Placas RYM Petrifilm es igual que la
sensibilidad del método convencional cuando se utilizan cultivos puro ya que no muestra
diferencias significativas” (p. 60). En el presente estudio se evidencio de igual manera una
concordancia entre las dos técnicas y matrices evaluadas por lo que cualesquiera de las dos
técnicas son elegibles en algún caso.
En este estudio no se realizó análisis a muestras contaminadas naturalmente ya que el proceso se
encuentra estandarizado y en su mayoría no se obtienen Recuentos de este indicador además de
que en el caso del Tampico esta es una matriz agreste para el crecimiento y multiplicación de
Andrés Ávila1 1 Estudiante de Bacteriología, integrante del semillero de investigación SIMA
adscrito al Grupo de Investigación GIMBIC
estos indicadores sin embargo se demostró que en caso de que se presente una contaminación en
el producto terminado la técnica me permite recuperar dicho agente en cualquiera de las matrices
evaluadas.
Para el caso del análisis de los datos se tomó la concentración intermedia ya que están dentro de
los rangos de lectura de ambos medios de cultivo (15 – 150UFC/ml), notándose además en los
resultados que el procedimiento fue ejecutado de manera adecuada.
Al momento de realizar cada una de las lecturas de las diferentes siembras; si bien es claro que la
morfología de los Mohos es diferente a las levaduras; este medio proporcionó mucha más
claridad y agilidad al momento de realizar dicha actividad gracias a que dentro de sus
componentes posee un indicador.
6. CONCLUSIÓN. Con los resultados obtenidos en los estudios realizados, se logra constatar la estandarización de
nuevas técnicas que brinden un rendimiento más elevado en el trabajo rutinario de las empresas
productoras de alimentos, con los cuales se logra maximizar todos los puntos específicos de los
análisis, que son un gran musculo de ayuda para el quehacer dentro de los laboratorios. Las
Placas Petrifilm traen un sin número de ventajas, dentro de las cuales se tiene el costo, rapidez en
la lectura, tiempo de incubación, almacenamiento, reducción en los errores humanos durante su
preparación.
Andrés Ávila1 1 Estudiante de Bacteriología, integrante del semillero de investigación SIMA
adscrito al Grupo de Investigación GIMBIC
Con base al análisis planteado en el cual se buscaba comparar dos técnicas de recuperación de
Mohos y levaduras (método convencional y alternativo) se puede concluir que ambas técnicas
cumplen con los requisitos aplicables al método y matriz establecidos.
7. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS. Aguirre, R. A. (2016). validacion de la placa 3M petrifilm (RYM) para la determinacion
rapida de mohos y levaduras en alimentos, frente al metodo convencional. Mexico:
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