PRODUCCIÓN ANIMAL Septiembre-Octubre 2014 • N.º 2866 PRODUCCIÓN ANIMALPRODUCCIÓN ANIMALPRODUCCIÓN ANIMAL

B. García Morante, J. Segalés y M. SibilaCentre de Recerca en Sanitat Animal (CReSA), Universitat Autònoma de Bar celona.

Departament de Sanitat i d’Anatomia Animals, Facultat de Veterinària, Universitat Autònoma de Barcelona.

RESUMEN

Mycoplasma hyopneumoniae (M. hyopneumoniae) esel agente etiológico de la Micoplasmosis por cinay uno de los principales patógenos implicados enla neumonía enzoótica (NE) y el complejo r espi-ratorio porcino (PRDC). En todos los casos, setrata de enfermedades r espiratorias de cursocrónico que afectan a cerdos especialmente en lasfases de transición y engor de, con grandes reper-cusiones económicas. Para el diagnóstico y lamonitorización de la infección por M. hyopneumo-niae se dispone de difer entes técnicas, entre ellasla serología, siendo la herramienta más común-mente usada para la monitorización del estadosanitario de una granja. En este artículo derevisión se describe la utilidad, interpr etación,ventajas e inconvenientes que pr esenta el uso dela serología en el diagnóstico de la infección porM. hyopneumoniae. Un diagnóstico apr opiadodebe permitir discernir si M. hyopneumoniae estáimplicado en los problemas presentes en la granjay, en consecuencia, permitir la toma de decisionespara el control de la infección.

INTRODUCCIÓN

Mycoplasma hyopneumoniae (M. hyopneumoniae) esun patógeno porcino que puede estar implicadoen tres enfermedades r espiratorias distintasdependiendo de la existencia de co-infecciones.La infección exclusiva por M. hyopneumoniae(muy poco fr ecuente) sería la causa de laMicoplasmosis porcina. En aquellos casos dondese produce una infección combinada con otrasbacterias constituiría la neumonía enzoótica(NE). Finalmente, cuando además de la infec-ción bacteriana existe implicación vírica, segenera el llamado complejo r espiratorio porcino(PRDC). En todos los casos, se trata de enfermeda-des respiratorias de curso crónico que afectan acerdos especialmente en las fases de transición yengorde, con grandes repercusiones económicas.

La gravedad de los signos clínicos de estasenfermedades está básicamente condicionadapor la cepa de M. hyopneumoniae implicada, lapresión de infección, la pr esencia de infeccionesconcomitantes y por las condiciones ambienta-

UTILIZACIÓN E INTERPRETACIÓN DE LAUTILIZACIÓN E INTERPRETACIÓN DE LASEROLOGÍA PARA EL DIAGNÓSTICO DESEROLOGÍA PARA EL DIAGNÓSTICO DE

LA INFECCIÓN POR MYCOPLASMA LA INFECCIÓN POR MYCOPLASMA HYOPNEUMONIAEHYOPNEUMONIAE

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Palabras claves: Mycoplasma hyopneumoniae; Micoplasmosis porcina; Neumonía enzoótica;Complejo respiratorio porcino; Serología.

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les. Así, cuando la infección por M. hyopneumo-niae se encuentra combinada con otr os agentesinfecciosos, ya sean de naturaleza vírica o bacte-riana, la sintomatología clínica es más grave y lainfección pasa de cursar mayoritariamente deforma subclínica a presentarse como un procesocaracterizado por anor exia, disnea, pir exia y,eventualmente, la muerte del animal.

M. hyopneumoniae se transmite mediante aeroso-les o por contacto dir ecto con secreciones deltracto respiratorio de cerdos infectados. En lamayoría de los casos, las cer das jóvenes, conbajos niveles de inmunidad, actúan como r eser-vorio e infectan por contacto directo a sus lecho-nes. Éstos llegan a la transición y actúan comofuente de infección para otr os cerdos cuando lainmunidad pasiva ofrecida por los anticuerposmaternales empieza a disminuir . La infecciónpor M. hyopneumoniae es, en general, de transmi-sión lenta per o muy duradera (detección enhisopos bronquiales hasta 200 días post-infec-ción). De hecho, experimentalmente se hanobservado ratios de reproducción (Rn) por valorde 1.47, mostrando que un lechón infectadopuede llegar a transmitir la infección a prácti-camente 1,5 cerdos susceptibles. El ciclo epide-miológico de M. hyopneumoniae semuestra en el Figura 1.

M. hyopneumoniae se encuentraprincipalmente en las superficiesmucosas del tracto r espiratorio,donde se adhiere y lo daña, facilitan-do al mismo tiempo, la colonizaciónpor otros agentes infecciosos. Laslesiones macroscópicas que se obser-van en dicha infección consisten enáreas de consolidación pulmonar deun color grisáceo que se extienden,generalmente, bilateralmente en loslóbulos pulmonares más craneales(Figura 2a). Los hallazgos micr oscó-picos correspondientes a dichaslesiones se suelen caracterizar por lapresencia de acúmulos de célulasmononucleares y/o polimorfonucle-ares en el lumen y alr ededor de lasvías aéreas, así como en los alvéolos.En algunas ocasiones, también sepueden observar folículos linfoideshiperplásicos alrededor de bronquios

y bronquiolos, reflejando una implicación signifi-cativa de la r espuesta inmunitaria celular en eldesarrollo de las lesiones (Figura 2b).

DIAGNÓSTICO DE LA INFECCIÓN PORM. hyopneumoniae

Clínicamente, la infección por M. hyopneumoniae secaracteriza principalmente por la pr esencia de tosseca no productiva. Cuando existe co-infección conotros patógenos, la clínica de la enfermedad empeo-ra, apareciendo signos respiratorios más graves.Aunque estos signos clínicos pueden ser indicativosde una infección por este patógeno, la falta deespecificidad diagnóstica, conjuntamente con laposible presencia de animales infectados subclínica-mente, hace que se r equiera de métodos diagnósti-cos más fiables y específicos. Algo similar sucedecon las lesiones pulmonares macro y microscópi-cas. Se trata de lesiones no específicas de M.hyopneumoniae, por lo que se r equiere confirma-ción mediante la detección del patógeno conotras técnicas laboratoriales.

La técnica tradicional para el diagnósticodefinitivo de la infección por M. hyopneumoniaeera el cultivo bacteriológico a partir defragmentos pulmonares afectados. Sin embar-

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El diagnóstico de la infección por M. hyopneumoniae

Figura 1. Ciclo epidemiológico de Mycoplasma hyopneumoniae. Lascerdas actúan como reservorio, transmitiendo verticalmente porcontacto directo la infección a algunos lechones que pasaran a la

transición. En transición y engorde se transmite la infección horizon-talmente por contacto directo entre animales, llegando, en el engorde,a la máxima incidencia. Si la reposición es propia, se cierra el círculo,

perpetuando la presencia de la bacteria en la explotación.

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go, esta bacteria es particularmente difícil deaislar, ya sea por su cr ecimiento lento, por elrequerimiento de medio de cultivo especializa-do o por la interfer encia existente con otr osmicoplasmas porcinos, comúnmente M. hyorhi-nis (frecuentemente presente en el tracto r espi-ratorio porcino). De este modo, aunque el culti-vo bacteriológico es pr obablemente la técnicamás sensible de detección del agente, en laactualidad se utilizan básicamente otras técni-cas, especialmente la r eacción en cadena de lapolimerasa (PCR). Alternativamente, el uso deserología pareada o perfiles de anticuerpostambién permiten la monitorización de la infec-ción y determinar el momento apr oximado deinfección.

Hoy día existen varias técnicas de PCR descri-tas para la detección del genoma de M.

hyopneumoniae. Éstas pueden r ealizarse a partirde una gran variedad de muestras del tractorespiratorio. Dada la localización del micr oor-ganismo, se r ecomienda (siempre que seaposible) tomar muestras del tracto r espiratorioinferior (tales como lavado br onco-alveolar,hisopo bronquial o tejido pulmonar) ya que esel lugar de acción del patógeno. Por el contra-rio, el hisopo nasal se considera una muestraútil y fácil para lamonitorización de la infeccióna nivel de granja, per o no para un diagnósticode la infección a nivel individual. Los métodosde PCR son más rápidos y mucho menoslaboriosos que el cultivo bacteriano; sin embar-go, el peligro de contaminación de la muestraes mucho mayor. Otro inconveniente de estatecnología es que da información sobr e lapresencia de ADN de un determinado patóge-no en una muestra, pudiendo ser este agenteinfeccioso viable o no. Así pues, mediante lamera detección del ADN, no se podrá discrimi-nar si existe una infección activa o no.

La serología es la herramienta más comúnmenteusada para el monitoreo del estado sanitario de unagranja. A continuación, se describirá esta tecnologíadetalladamente, así como su utilidad, interpr eta-ción, ventajas e inconvenientes que pr esenta en eldiagnóstico de la infección por M. hyopneumoniae.

Figura 2: Lesiones compatibles con una infección por M. hyopneumoniae. Lesiones macroscópicas en las que se aprecia conso-lidación pulmonar cráneo ventral bilateral (Figura 2a). Lesiones microscópicas de neumonía bronco-intersticial con forma-ción de folículos peribronquiales y peribronquiolares (Figura 2b).

Clínicamente, la infección por M. hyopneu-moniae se caracteriza principalmente porla presencia de tos seca no productiva.Cuando existe co-infección con otrospatógenos, la clínica de la enfermedadempeora, apareciendo signos respirato-rios más graves.

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LA SEROLOGÍA COMO HERRAMIENTADIAGNÓSTICA DE LA INFECCIÓN PORM. hyopneumoniae

Aunque las técnicas de biología molecularson cada vez más usadas, la detección deanticuerpos específicos mediante pr uebasserológicas sigue siendo el método más utili-zado para detectar la exposición al agente.

A nivel de granja, a grandes rasgos, se puedenrealizar dos tipos de perfiles serológicos: trans-versales y longitudinales. En la primeraopción, el muestreo se efectúa en una sola vez,testando simultáneamente grupos de animalesde diferentes edades y etapas productivas. Estetipo de muestreo proporciona información delestado sanitario de la explotación respecto a undeterminado agente patógeno en un determi-nado momento. Sin embar go, para la corr ectainterpretación de los r esultados obtenidos, esimportante tener en cuenta que los animalestestados en cada gr upo de edad son distintos.Sin embargo, este tipo de ser operfiles, son degran utilidad si se r ealizan de forma r utinariay con el objetivo de tener un histórico del perfilserológico de la granja. Por el contario, en unestudio longitudinal se r ealiza el seguimientode un gr upo de animales a lo lar go del cicloproductivo. Este tipo de estudios permitenconocer la respuesta serológica de un gr upoparticular de animales. Este tipo de ser operfi-les, aunque dan una información muy útil, seutilizan en menor medida por que requieren laidentificación y seguimiento de los animalesdurante el ciclo productivo.

La técnica ser ológica más utilizada para ladetección de anticuerpos específicos fr ente M.hyopneumoniae es el ensayo inmunoenzimático(ELISA). Esta técnica es un test rápido, econó-mico y fácilmente automatizable que aportainformación de gran utilidad r eferente a lapresencia de anticuerpos maternales (duraciónde la inmunidad maternal) así como deltiempo que necesitan los animales paraestablecer una r espuesta serológica activafrente a la infección (momento de ser oconver-sión) o a la vacunación. En la mayoría de lasinfecciones por patógenos r espiratorios porci-nos, los r esultados obtenidos mediante elELISA son de fácil interpretación. Sin embargo,en el caso de M. hyopneumoniae, la interpreta-

ción de los r esultados serológicos va sujeta alconocimiento de la epidemiología de la infec-ción.

INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOSSEROLÓGICOS

Los puntos clave a tener en cuenta para la inter-pretación correcta de los r esultados serológicosfrente M. hyopneumoniae son:

Tiempo transcurrido entre la seroconver-sión y la infección

En comparación con otros patógenos respi-ratorios, M. hyopneumoniae se transmitemuy lentamente ya que se adhiere al epite-lio respiratorio y coloniza lentamente eltejido pulmonar. Consecuentemente, laseroconversión en condiciones de campoes normalmente tar día (4-8 semanas post-infección) y muy variable entr e granjas, eincluso entre lotes de una misma granja. Elmomento de la ser oconversión dependerábásicamente de la pr esión de infección(número de animales infectados porgrupo), de la cepa concr eta y de la car gabacteriana (cantidad de bacteria pr esenteen el tracto r espiratorio). Es por ello que,en el caso de la infección por M. hyopneu-moniae, no se puede extrapolar fácilmenteel momento de la infección a partir delmomento de la ser oconversión (Figura 3).Este aspecto se debe tener en cuenta alvalorar los r esultados serológicos deanimales individuales o en momentospuntuales. Es decir , el hecho que unanimal sea ser onegativo no implica queesté libre de infección; de hecho, se puedenobservar lesiones pulmonares típicas de M.hyopneumoniae en animales ser onegativos.Este punto es de especial importancia paraaquellas explotaciones en pr ocesos deerradicación de este patógeno.

La técnica tradicional para el diagnósticodefinitivo de la infección por M. hyopneumo-niae era el cultivo bacteriológico a partir defragmentos pulmonares afectados. Sinembargo, esta bacteria es particularmentedifícil de aislar.

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Variabilidad entre kits serológicos

En el mer cado existen dos modalidades deELISA para la detección de anticuerpos fr ente aM. hyopneumoniae: ELISA indirecto y ELISA debloqueo o competición. La variación existenteentre los distintos ensayos disponibles en elmercado es otro factor a tener en cuenta para lacorrecta interpretación de los resultados seroló-gicos. Cada test difier e en sensibilidad (capaci-dad para detectar positivos) y especificidad(capacidad para detectar negativos). En variosestudios se ha demostrado una buena especifi-cidad de ambos tipos de test ELISA. Sin embar-go, recientemente se ha descrito la posibleaparición de reacciones cruzadas con anticuer-

pos específicos frente otros micoplasmas porci-nos. En cuanto a la sensibilidad, los test debloqueo o competición suelen ser más sensiblesque los indirectos. Por otro lado, se ha observa-do que la sensibilidad de los test ser ológicosestá influenciada por el momento de infecciónen la que se encuentra el animal, siendo menossensibles en estados tempranos de infecc ión.Así, conocer qué tipo de técnica ELISA seusa en cada situación es esencial para inter-pretar adecuadamente los r esultados seroló-gicos obtenidos.

Anticuerpos naturales fr ente anticuerposvacunales

Los tests de ELISA comerciales disponibles porahora en el mer cado no permiten difer enciarentre anticuerpos adquiridos por la infecciónnatural de los derivados de la vacunación. Sinembargo, actualmente existe en el mer cado untest ELISA indirecto que permite la detección ycuantificación de anticuerpos frente M. hyopneu-moniae. Esta cuantificación podría potencial-mente diferenciar animales vacunados deanimales vacunados e infectados, facilitando lamonitorización de la infección en granjas dondeusan la vacunación como profilaxis.

Correlación entre anticuerpos y lesionespulmonares

La ausencia de r elación entre lasunidades o valores serológicos (ratioS/P, porcentaje de inhibición, etc.)versus la protección frente a la enfer-medad es otr o factor que añadedificultad a la interpr etación de losresultados serológicos.

La correlación entre la ser oconver-sión y la pr esencia y/o gravedad delesiones pulmonares compatibles conNE se ha estudiado tanto a nivel dematadero como a nivel experimental.En matadero se ha visto que lapresencia y la extensión de lesionespulmonares asociadas a M. hyopneu-moniae son más graves en función delmomento en qué los animales seinfectan, así como del tiempo trans-currido para que tales lesionesremitan. De hecho, se sabe que enaquellos animales que han ser ocon-

Figura 3: Estudio longitudinal donde se muestra simultáneamente el porcenta-je de animales seropositivos frente a M. hyopneumoniae (línea en rojo) y elporcentaje de animales positivos por PCR de M. hyopneumoniae (columnas enazul). Se aprecia claramente como el momento de infección no coincide con elmomento de seroconversión, siendo este último más tardío. Se empiezan adetectar animales positivos por PCR a las 3 semanas de vida, incrementandosignificativamente entre las 9 y 12 semanas de vida, mientras que no se empie-zan a ver claramente animales seropositivos hasta las 15-18 semanas devida.

Los puntos clave a tener en cuenta para lainterpretación correcta de los resultadosserológicos frente M. hyopneumoniae son:

- Tiempo transcurrido entre la seroconversióny la infección - Variabilidad entre kits serológicos - Anticuerpos naturales fr ente anticuerposvacunales

- Correlación entre anticuerpos y lesionespulmonares

El diagnóstico de la infección por M. hyopneumoniae

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vertido a una edad próxima al sacrificio,las lesiones compatibles con M. hyopneu-moniae más graves estarán pr obablementeasociadas a elevados títulos de anticuer-pos. Experimentalmente, los valor es S/Pmás elevados también coinciden con lasevaluaciones de lesiones pulmonar escompatibles con NE más graves. Noobstante, el uso del valor S/P como valorpredictivo de las lesiones pulmonar esmacroscópicas compatibles con NE es unatemática que requiere más estudios.

En la tabla 1 se describe de forma simplificada lasventajas e inconvenientes de la detección ser ológicade la infección por M. hyopneumoniae.

Teniendo en cuenta la epidemiología de lainfección por M. hyopneumoniae, juntamentecon las características de las herramientasdiagnósticas mencionadas, es evidente que eldiagnóstico de la infección por este agenteinfeccioso no es fácil y que se debe basar enla combinación de varias de estas herramien-tas. Un diagnóstico apr opiado debe permitirdiscernir si M. hyopneumoniae es el agentecausal de los pr oblemas presentes en lagranja y, en consecuencia, permitir la toma dedecisiones para el control de la infección.

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Tabla 1: Resumen de las ventajas e inconvenientes de la detección serológica por ELISA de la infección porMycoplasma hyopneumoniae.

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