UTILIZACIÓN DE ANTICUERPOS EN

BIOMEDICINA

Métodos y Técnicas de Estudio en Biología Celular

UTILIZACIÓN DE ANTICUERPOS EN

BIOMEDICINA

UTILIZACIÓN DE ANTICUERPOS EN BIOMEDICINA

Inmunoblotting (western blot), Dot/slot blotInmunocitoquímicaInmunofluorescenciaInmunoprecipitaciónELISA/EIA/RIACromatografía de inmunoafinidadMicroscopia electrónica (morfología)

UTILIZACIÓN DE ANTICUERPOS EN BIOMEDICINA

Estructura de los anticuerpos

Tipos de Anticuerpos

Selección clonal: Delección

Selección clonal: expansión

Conceptos

Inmunógeno, antígeno.Carrier: BSA, KLH.Unión covalente (cross-linking): MBS, glutaraldehido, DSS.Péptidos inmunogénicosProteínas nativas y desnaruralizadas.Otras moléculasAdjuvante de Freund: completo e incompleto.Primera inmunización y recuerdos.

Conceptos

Anticuerpos policlonales

1. Inmunización del conejo

2. Recuerdos

3. Extracción de sangre

4. Preparación del suero

5. Purificación del anticuerpo (métodos opcionales)

6. Caracterización del antisuero

Anticuerpos policlonales

Anticuerpos monoclonales

1. Inmunización del ratón

2. Extracción del bazo

3. Preparación de hibridomas (mieloma+B)

4. Selección de los clones

5. Producción y uso de anticuerpos

Elección del tipo de anticuerpo

Marcaje de Anticuerpos

Marcaje de Anticuerpos para uso en Células

Immunoblotting (western blot)Immunoblotting (western blot)

Inmunocitoquímica

Las flechas indican la presencia de neuronas con hormona liberadora de la hormona del crecimiento en el Núcleo Arcuato (cerebro) de rata de 4 meses.

Inmunocitoquímica

Localización de la “calbinding” (calbindina) en cerebelo de rata

Microscopia (confocal e inmunofluorescencia)

Inmunoprecipitación

Inmunoprecipitación

ELISA

ELISA

Cromatografía de inmunoafinidadCromatografía de inmunoafinidad

Oro Coloidal

Internalización de transferrina marcada con oro coloidal (6,6 nm) en células endoteliales. La barra corresponde a 0,25 M.

Oro Coloidal

Internalización de transferrina marcada con oro coloidal (6,6 nm). G: aparato de Golgi; Lu: lumen vascularLa barra corresponde a 0,25 M.