Universidad Nacional de Tumbes Escuela de Postgrado CULTIVO DE MICROALGAS Ing. Edgar López...

Universidad Nacional de TumbesUniversidad Nacional de Tumbes

Escuela de PostgradoEscuela de Postgrado

CULTIVO DE MICROALGASCULTIVO DE MICROALGAS

Ing. Edgar López Landavery, MS.c

Criterios de SelecciónCriterios de Selección

Alimento

DisponibilidadCosto de producciónSimplicidadVersatilidad

FÍSICO PurezaDisponibilidadAceptabilidad

NUTRICIONAL Ingerible-Digerible Requerimientos energéticos Requerimientos nutritivos

CULTIVO PREDADOR

Cadena de alimentaciónCadena de alimentación

Clasificación de MicroalgasClasificación de Microalgas

CianophytaCianophyta = microalgas verde-azules = microalgas verde-azules Más primitivas Más primitivas

Procariontes Procariontes Pared celular posee cápsulas de proteína-Pared celular posee cápsulas de proteína-

polisacpolisacáriáridosdos Sólo poseen Clorofila a. Poseen ficobilinas y Sólo poseen Clorofila a. Poseen ficobilinas y

carotenoidescarotenoides No poseen flagelos No poseen flagelos Unicelulares, coloniales y filamentos (cianobacterias)Unicelulares, coloniales y filamentos (cianobacterias)

Spirulina, Oscillatoria, AnabaenaSpirulina, Oscillatoria, Anabaena

Bacterias

Microalgas

CYANOPHYTACYANOPHYTA

Clorophyta = Algas verdesClorophyta = Algas verdes

Grupo más avanzadoGrupo más avanzado EucariotesEucariotes Pared celular de celulosaPared celular de celulosa Algunas especies con flagelosAlgunas especies con flagelos Poseen clorofila a y b, algunos carotenoidesPoseen clorofila a y b, algunos carotenoides Formas unicelulares y filamentosFormas unicelulares y filamentos Tetraselmis, Dunaliella, Chlorella, Tetraselmis, Dunaliella, Chlorella,

ChlamydomonasChlamydomonas

CHLOROPHYTACHLOROPHYTA

Chlorella sp.

Bacillariophyta= DiatomeasBacillariophyta= Diatomeas

ÚÚnnicosicos con pared celular de sílice con pared celular de síliceEucariotesEucariotesNo poseen flagelosNo poseen flagelosClorofila a y c, algunos carotenoides Clorofila a y c, algunos carotenoides

=fucoxantina=fucoxantinaUnicelulares y filamentosUnicelulares y filamentosChaetoceros, Thalassiosira, Skeletonema, Chaetoceros, Thalassiosira, Skeletonema,

PhaeodactylumPhaeodactylum

BACILLARIOPHYTABACILLARIOPHYTA

Chrysophyta= algas pardasChrysophyta= algas pardas

Similares características que diatomeasSimilares características que diatomeasCarecen de pared con síliceCarecen de pared con síliceAlgunas especies con flagelos Algunas especies con flagelos Clorofila a y c, carotenoides = fucoxantinaClorofila a y c, carotenoides = fucoxantinaFormas unicelularesFormas unicelulares Isochrysis, Nannochloropsis, MonochrysisIsochrysis, Nannochloropsis, Monochrysis

Clases y Géneros de Clases y Géneros de MicroalgasMicroalgas

CLASE GENERO Bivalvos Crustáceos ZooplanctonLarvas Juveniles Larvas Post-larvas Rotíferos Artemia

Bacillarophyceae Skeletonema X X X XThalassiosira X X X XPhaeodactylum X X X XChaetoceros X X X X XCylindrotheca XNitzschia X XAmphora X

Haptophyceae Isochrysis X X X X XPseudoisochrysis X X

Crysophyceae Monochrysis X X X X

Prasynophyceae Tetraselmis X X X X X XPyramimonas X XMicromonas X

Clases y Géneros de Clases y Géneros de microalgasmicroalgas

CLASE GENERO Bivalvos Crustáceos ZooplanctonLarvas Juveniles Larvas Post-larvas Rotíferos Artemia

Cryptophyceae Chlamydomonas X X X XChlorococcum X

Xantophyceae Olisthodiscus X

Chlorophyceae Carteria XDunaliella X X X

Cyanophyceae Spirulina X X X X X

Condiciones generales de Condiciones generales de cultivocultivo

PARAMETROS RANGO OPTIMO

Temperatura ºC 16.0 - 27.0 18.0 - 24.0

Salinidad (ups) 12.0 - 24.0 20.0 - 24.0

Intensidad de luz (lux) 1.000-10.000 2.500-5.000

Fotoperiodo 16:8 (mínimo)

(luz:oscuridad, horas) 24:0 (máximo)

pH 7.0 - 9.0 8.2-8.7

Dinámica de crecimientoDinámica de crecimientoC

reci

mie

nto

Pob

laci

onal

(Núm

. De

célu

las/

ml

I

II

IIIIV

V

I. Fase de inducción o retraso del crecimiento II. Fase ExponencialIII. Fase de declinación relativa al crecimientoIV. Fase estacionariaV. Fase de muerte

Días de cultivo

Fase deseada

Requerimientos químicosRequerimientos químicos

MacronutrientesMacronutrientesNitrato Nitrato Fosfato Fosfato Relación Relación 66:1:1

MicronutrientesMicronutrientesMetales trazas: Metales trazas: Co, Cu, Fe, Mn, ZnCo, Cu, Fe, Mn, ZnVitaminas:Vitaminas: BB11, B, B1212, Biotina, Biotina

Silicatos: Silicatos: específicos para diatomeasespecíficos para diatomeas

Tratamiento del Agua de CultivoTratamiento del Agua de Cultivo

Filtración y Esterilización Mecánica Filtración y Esterilización Mecánica Agua claras Agua claras filtros de cartucho diferentes filtros de cartucho diferentes

mmAgua cargadas de partículasAgua cargadas de partículasFiltro de arena + filtro de diatomeas Filtro de arena + filtro de diatomeas filtro filtro

de cartucho de cartucho ultravioleta ultravioleta

Sistema de FiltraciónSistema de Filtración< 20,000 galones< 20,000 galones

Bombas

Filtro de arenaFiltros

20 a 35 micrasFiltros

1 a 5 micras

FiltroUV

Tanque decultivo

Vía opcional

Sistema de Ultrafiltración Sistema de Ultrafiltración

1 micra 10 micrasCarbón

5 micrasCarbón

Ultrafiltración

OpcionalUV

Tanque de Cultivo


Ultravioleta: flujo es elUltravioleta: flujo es el factor más factor más importanteimportanteCondición: previa filtración mecánica a Condición: previa filtración mecánica a

30-35 micras (30-35 micras (m)m)

Ozono: en concentraciones altas Ozono: en concentraciones altas cloraminascloraminas

Rule of thumbRule of thumb si se lo percibe, suficiente si se lo percibe, suficiente parapara

ocasionar daños a la saludocasionar daños a la salud


Esterilización por calor : Esterilización por calor : AutoclaveAutoclave Método más efectivoMétodo más efectivo Involucra temperaturas de 120 Involucra temperaturas de 120 C y 20 psiC y 20 psi Tiempo dependiente del volumenTiempo dependiente del volumen

1 L1 L 15 min15 min 20 L 20 L 45 min45 min

Altas temperaturas COAltas temperaturas CO22 pH pH precipitación de precipitación de

nutrientes nutrientes

Microondas: 1 - 1.5 L Microondas: 1 - 1.5 L 84 84 C C 8-10 8-10 minmin

Costoso

Tratamiento del Agua de CultivoTratamiento del Agua de Cultivo Pasteurización Pasteurización Volúmenes < 1000LVolúmenes < 1000L

Temperatura de 73 Temperatura de 73 C C 10-15 min 10-15 minEnfriar durante la noche a T Enfriar durante la noche a T C ambienteC ambienteRepetir el proceso en 24 horasRepetir el proceso en 24 horasDisminuye la precipitación de nutrientesDisminuye la precipitación de nutrientesRelativamente baratoRelativamente barato

Energía solar Energía solar Volúmenes > 1,000 LVolúmenes > 1,000 L Tanques con material aislante Tanques con material aislante

(invernadero)(invernadero)


Clorinación Clorinación Método más común y simpleMétodo más común y simple

Hipoclorito de Sodio Hipoclorito de Sodio 2.5 ppm 2.5 ppm estabilizadoresestabilizadoresHipoclorito de CalcioHipoclorito de Calcio 12-25 ppm12-25 ppm30 min 30 min 12-24 horas 12-24 horas

Desactivación: Tiosulfato de Sodio Desactivación: Tiosulfato de Sodio

Fuentes de contaminaciónFuentes de contaminaciónInsectos

Lluvia

Sistema de agua

Fuente de agua

Cultivo inicial

Fertilización

Piedra difusoras

Aire

Sistema de aire

Tanque de cultivo

Boca

Manos sucias

Vidriería

TIPOS DE CULTIVOSTIPOS DE CULTIVOS

Tipo de Cultivo Ventajas Desventajas

Interiores Predecibles CostosoExteriores Baratos Menos predeciblesCerrado Menor contaminaci—n CostosoAbierto Barato Mayor contaminaci—nAxˇnico Predecibles Costoso, dif’cilNo-Axˇnico Barato, M‡s f‡cil Suceptible a crashContinuo Eficiente Dif’cil

Automatizado Equipo costosoTasa de produccion alta

Semi-continuo F‡cil Calidad espor‡dicaM‡s o menos eficiente menos confiable

Batch o Recolecci—n completa F‡cil Menos eficienteM‡s confiable Calidad inconsistente

Tipos de CultivoTipos de Cultivo Cultivo Batch ó Recolección CompletaCultivo Batch ó Recolección Completa

Transferencia de microalgas (antes de la fase Transferencia de microalgas (antes de la fase estacionaria) a volúmenes mayores enriquecidosestacionaria) a volúmenes mayores enriquecidos

De acuerdo a la concentración de la microalga, el De acuerdo a la concentración de la microalga, el inóculo debe ser del 2-10% del final del cultivoinóculo debe ser del 2-10% del final del cultivo

Ampliamente utilizadoAmpliamente utilizado simplicidad simplicidad y flexibilidady flexibilidad Método confiable, pero no el más eficienteMétodo confiable, pero no el más eficiente Cosecha cuando se alcanza máxima densidadCosecha cuando se alcanza máxima densidad Calidad de las microalgas menos predecibleCalidad de las microalgas menos predecible

Tipos de CultivoTipos de Cultivo Cultivo Semi-continuoCultivo Semi-continuo

Mantenimiento del cultivo mediante cosechas Mantenimiento del cultivo mediante cosechas periódicas parciales, recuperando el volumen periódicas parciales, recuperando el volumen original y suplementando con nutrientesoriginal y suplementando con nutrientes

Pueden ser interiores o exterioresPueden ser interiores o exteriores Duración es impredecibleDuración es impredecible Contaminación con competidores, predadores y/o Contaminación con competidores, predadores y/o

contaminantes contaminantes no son útilesno son útiles Cosechas de volúmenes mayores que el cultivo Cosechas de volúmenes mayores que el cultivo

batchbatch

Tipos de CultivoTipos de Cultivo Cultivo ContinuoCultivo Continuo

Nutrientes y agua filtrada adicionados al mismo Nutrientes y agua filtrada adicionados al mismo tiempo que stiempo que see cosech cosechaa

Pueden ser operados de dos formas:Pueden ser operados de dos formas:Cultivo Turbidoestáticos.- concentración Cultivo Turbidoestáticos.- concentración

de las microalgas de las microalgas fijafija mediante adicimediante adicióón n automáticautomática dea de medio fresco medio fresco

Cultivo Quemostático.- Medio de cultivo Cultivo Quemostático.- Medio de cultivo fresco fresco SSuministruministroo a una tasa constante y a una tasa constante y predeterminadapredeterminada

Métodos de aislamiento y Métodos de aislamiento y mantenimientomantenimiento

Gota de muestra

1ra dilución

2da dilución

3ra dilución Agar nutritivo

Caja de Petri

Esquema de producciónEsquema de producción

Cultivo bach

Cosecha

Fiola 2 L

10 a 14 días

5 a 7 días

Carboys óFundas plásticas

160 L7 días

Cilindro de fibra

Tanque 500 L

5,000 L 25,000 L

3 a 7 días

3 a 7 días

3 a 7 días

3 a 7 días

Cuantificación de MicroalgasCuantificación de Microalgas

Cuantificación directaCuantificación directaCámaras: Cámaras: Hematocitómetro Hematocitómetro 2-30 2-30

Sedgwick-Rafter Sedgwick-Rafter 50-100 50-100 Palmer Malony Palmer Malony 5-150 5-150 Speirs LevySpeirs Levy 5-75 5-75 Petroff HouserPetroff Houser 0.5-5 0.5-5

Peso seco: muestra representativa es Peso seco: muestra representativa es separada por centrifugación o filtración separada por centrifugación o filtración Resultados expresados en peso seco por Resultados expresados en peso seco por

volumen volumen

Cuantificación de MicroalgasCuantificación de MicroalgasCuantificación indirectaCuantificación indirecta

Coulter Counter:Coulter Counter: contador electrónico de contador electrónico de partículapartícula

EspectrofotometríaEspectrofotometría: : Clorofila a:Clorofila a: Pigmento puede ser examinado Pigmento puede ser examinado

por la luz absorbida a 664, 647 y 630 nmpor la luz absorbida a 664, 647 y 630 nmTurbidez: Turbidez: Medir absorbancia a 750 nmMedir absorbancia a 750 nm

Disco Secchi: Disco Secchi: medición de la turbidez que medición de la turbidez que las microalgas impartenlas microalgas imparten

Fluorometría: Fluorometría: mide clorofila mediante mide clorofila mediante exposición a la luz azulexposición a la luz azul

Material de CultivoMaterial de Cultivo

MaterialesMateriales VidrioVidrio PlásticoPlástico Polietileno transparentePolietileno transparente PolicarbonatosPolicarbonatos Fibra de vidrioFibra de vidrio Tanques de concretoTanques de concreto Tanques de madera (liners)Tanques de madera (liners) Tanques de tierra (liners)Tanques de tierra (liners)

Material puede ser tóxico!!!Material puede ser tóxico!!!

TiposTipos Cajas petriCajas petri ErlenmeyersErlenmeyers CarboysCarboys Tubos de ensayoTubos de ensayo FiolasFiolas Fundas plásticasFundas plásticas TanquesTanques PiscinasPiscinas EstanquesEstanques

Producción de microalgasProducción de microalgas Cultivo en piscinasCultivo en piscinas

Tierra, cemento, linersTierra, cemento, liners Fertilizante agrícolasFertilizante agrícolas Bloom naturalBloom natural Inóculos Inóculos

monoespecíficosmonoespecíficos Relativamente barataRelativamente barata Contaminación, Contaminación,

predaciónpredación Pobre consistencia y Pobre consistencia y

crashescrashes Taiwan: Taiwan: SkeletonemaSkeletonema

Cultivo algas bénticasCultivo algas bénticas Cultivo de Abalon Cultivo de Abalon

((HaliotisHaliotis sp), sp), P.vannameiP.vannamei

Plástico corrugado, Plástico corrugado, aquamats (sustratos)aquamats (sustratos)

Especies más Especies más cultivadas:cultivadas:

Navicula Navicula NitzschiaNitzschia AmphoraAmphora

Tiempo : 1-3 semanas Tiempo : 1-3 semanas 10 10 díasdías

Costos de ProducciónCostos de ProducciónCosto de Producción Notas Fuente(US $/ Kg peso seco)

Tetraselmis suecica Calculado de Helm 300 200 l batch culture et.al. (1979)

Diatomeas varias Calculado de Walsh167 Cultivo continuo et.al. (1987)

4 a 20 Cultivos exteriores De pauw y Persoone160-200 Cultivos interiores -1988

Cultivo continuo Dravers (1990)23-115 en fundas (8 ton) y 150(ton)

Tanque de cultivo Donaldson (1992)50 (450 ton)

50-400 Encuesta internacional Laboratorios de bivalvos Coutteau y Sorgeloos

1992

Valor NutricionalValor Nutricional

Valor nutricional depende:Valor nutricional depende:TamañoTamañoDigestibilidadDigestibilidadProducción de compuestos tóxicosProducción de compuestos tóxicosComposición bioquímicaComposición bioquímica

Proteínas Proteínas 12 - 35% 12 - 35% Lípidos Lípidos 7.2 - 23% 7.2 - 23% Carbohidratos Carbohidratos 4.6 - 23% 4.6 - 23%

Contenido de HUFAS, EPA, ARA, DHA, Contenido de HUFAS, EPA, ARA, DHA, importantes para organismos marinosimportantes para organismos marinos

Valor NutricionalValor Nutricional

Concentraciones significativas de EPAConcentraciones significativas de EPA Diatomeas: Diatomeas: Chaetoceros calcitrans, C. gracilis, S. constatum, Chaetoceros calcitrans, C. gracilis, S. constatum,

T. pseudonanaT. pseudonana Concentraciones significativas de DHAConcentraciones significativas de DHA

Prymnesiophyta: Prymnesiophyta: Isochrysis Isochrysis spsp., P. lutheri, Chroomonas salina., P. lutheri, Chroomonas salina

Microalgas ricas en ácido ascórbico:Microalgas ricas en ácido ascórbico: 0.11-1.62%0.11-1.62% Valor nutricional varía de acuerdo a condiciones Valor nutricional varía de acuerdo a condiciones

cultivocultivo Alimentación con diferentes microalgas es superior Alimentación con diferentes microalgas es superior

Uso de microalgas en Uso de microalgas en AcuiculturaAcuicultura

Moluscos BivalvosMoluscos Bivalvos 30% del costo operacional30% del costo operacional Requerimiento depende de la producciónRequerimiento depende de la producción

SemillaSemilla Talla comercialTalla comercial

Juveniles mayores consumidoresJuveniles mayores consumidores Algas utilizadas: Algas utilizadas: Isochrysis sp. , T-Iso, I. Galbana, Isochrysis sp. , T-Iso, I. Galbana,

Chaetoceros gracilis, C. calcitrans, Tetraselmis Chaetoceros gracilis, C. calcitrans, Tetraselmis suecica, Thalasiossira pseudonana, P. lutheri, suecica, Thalasiossira pseudonana, P. lutheri, Skeletonema costatumSkeletonema costatum


Moluscos BivalvosMoluscos BivalvosCombinaciones de flagelados y diatomeas Combinaciones de flagelados y diatomeas

estimulan la metamorfosisestimulan la metamorfosisCantidad dependiente de densidad de larvas Cantidad dependiente de densidad de larvas

(cel.µl (cel.µl -1-1))I. galbanaI. galbana 50 50C. calcitransC. calcitrans 250 250I. galbana/ C. calcitransI. galbana/ C. calcitrans 28/125 28/125I. g/C. cal/T. suecicaI. g/C. cal/T. suecica 33/83/33 33/83/33


Preferencia de cria juevniles en exteriorPreferencia de cria juevniles en exterior

Crecimiento influenciado por la ración de Crecimiento influenciado por la ración de alimentoalimento

EspecieEspecie Condiciones de cultivo de las microalgasCondiciones de cultivo de las microalgas Condiciones de cultivo de los bivalvosCondiciones de cultivo de los bivalvos

Condiciones prácticas utilizan altas tasas de Condiciones prácticas utilizan altas tasas de alimento 5-6% (peso seco de algas/peso vivo de alimento 5-6% (peso seco de algas/peso vivo de semilla/día)semilla/día)


CAMARONES PENAEIDOSCAMARONES PENAEIDOS Se alimenta a partir de NSe alimenta a partir de N55

Algas más utilizadas:Algas más utilizadas: Chaetoceros gracilisChaetoceros gracilis Skeletonema costatumSkeletonema costatum TetraselmisTetraselmis spp. spp. ThalasiossiraThalasiossira spp. spp.

Hábitos alimenticios cambian, disminuyendo consumo Hábitos alimenticios cambian, disminuyendo consumo de algasde algas

Estabilización del aguaEstabilización del agua- “Método del mismo tanque” Algas cultivadas en el - “Método del mismo tanque” Algas cultivadas en el

mismo tanque, suministro de fertilizantes y uso de mismo tanque, suministro de fertilizantes y uso de energía solar. Japón - energía solar. Japón - Penaeus japonicusPenaeus japonicus


PECES MARINOSPECES MARINOS “ “ Técnica del agua verde ”Técnica del agua verde ” Efectos de las microalgas en el cultivo no es Efectos de las microalgas en el cultivo no es

completamente entendido:completamente entendido: Estabilizan calidad de agua (OEstabilizan calidad de agua (O2 2 y remoción de y remoción de

produuctos metabólicos)produuctos metabólicos) Fuente directa de alimento. Polisacaridos estimulan Fuente directa de alimento. Polisacaridos estimulan

sistema inmunesistema inmune Fuente indirecta de alimento (rotíferos y Fuente indirecta de alimento (rotíferos y ArtemiaArtemia)) Incremento en la incidencia de alimentación (contraste Incremento en la incidencia de alimentación (contraste

y dispersión de luz)y dispersión de luz) Control microbiano (alga exudado en agua y/o larva)Control microbiano (alga exudado en agua y/o larva)

Sustitutos de las microalgasSustitutos de las microalgasSustituto Ventajas Desventajas

Disponibilidad Tiempo de vidaMicroalgas preservadas Concentración Alto costo

Disminuye contaminación

Microalgas heterotróficas Altas densidades Pocas especiesBajo costo Cambios en composición

bioquímica

Ingredientes pueden ser Degradación bacterianaDietas Microencapsuladas encapsulados Poca flotabilidad

Acumulaciones

Alta estabilidad Levaduras Tamaño apropiado Pared celular poco digerible

Producción a bajo costo Bajo valor nutricional

InfraestructuraInfraestructura

Ambientes internosAmbientes internos Cepario: Cepario: TemperatuTemperatura : 16 -18º Cra : 16 -18º C Volúmen de producción : 20 mL - 3LVolúmen de producción : 20 mL - 3L

Sala de carboysSala de carboys TemperatuTemperatura : 18 - 24º Cra : 18 - 24º C Volúmen de producción : 30LVolúmen de producción : 30L

Sala de lavado y esterilizadoSala de lavado y esterilizado Agua de mar y agua dulceAgua de mar y agua dulce

InfraestructuraInfraestructura Ambientes externosAmbientes externos

Plataforma acondicionada con aireaciónPlataforma acondicionada con aireación Cilindros de fibra de vidrio de 1 tCilindros de fibra de vidrio de 1 tnn Tanques rectangulares de concreto de 2 tnTanques rectangulares de concreto de 2 tn

Sistema de aireSistema de aire Blower de 1,5 HP para cultivos externos Blower de 1,5 HP para cultivos externos Blower de 1 HP para cultivos internosBlower de 1 HP para cultivos internos

Sistema de abastecimiento de agua de marSistema de abastecimiento de agua de mar Agua directa del mar con bomba de 2 HPAgua directa del mar con bomba de 2 HP Filtros de piola y carbón activadoFiltros de piola y carbón activado

MetodologíaMetodología Desinfección de línea de aguaDesinfección de línea de agua

Cloro activo 800 – 1000 ppm/2 díasCloro activo 800 – 1000 ppm/2 días Enjuagar con agua de mar durante 24 horasEnjuagar con agua de mar durante 24 horas Lavado carbón activado Lavado carbón activado

Desinfección de línea de aireDesinfección de línea de aire 100 -300 mL formol en blower, drenar por 30 – 40 minutos 100 -300 mL formol en blower, drenar por 30 – 40 minutos Enjuagar con agua dulceEnjuagar con agua dulce 100 – 200 mL de alcohol/1 hora100 – 200 mL de alcohol/1 hora

Lavado y esterilización de materialLavado y esterilización de material Solución de ácido (500 mL HNOSolución de ácido (500 mL HNO33/25 L de agua) por 30 minutos/25 L de agua) por 30 minutos Enjuagar con agua de mar filtrada y potable esterilizada Enjuagar con agua de mar filtrada y potable esterilizada Carboys, cilindros y masivos: 5000 ppm cloro activo y enjuagarCarboys, cilindros y masivos: 5000 ppm cloro activo y enjuagar

MetodologíaMetodología Preparación de nutrientesPreparación de nutrientes

Cultivos purosCultivos puros S1: 75 g S1: 75 g NaNONaNO33 + 5 g + 5 g NaHNaH22POPO44.H.H22OO

S2: 22 g S2: 22 g NaNa22SiOSiO33.5H.5H22OO

S3: 4.2 g EDTA disódico + 3 g S3: 4.2 g EDTA disódico + 3 g FeClFeCl33.6H.6H22OO S4: 0.1 g de Biotina + 0.1 g de Cianocobalimina + 0.5 g de Tiamina S4: 0.1 g de Biotina + 0.1 g de Cianocobalimina + 0.5 g de Tiamina CarboysCarboys S1: S1: 150g de Nitrato de Sodio y 10g de Fosfato de Sodio industrial150g de Nitrato de Sodio y 10g de Fosfato de Sodio industrial S2: 60g de Metasilicato de Sodio industrial S2: 60g de Metasilicato de Sodio industrial S3: 20g de EDTA disódico + 10g de Cloruro férrico S3: 20g de EDTA disódico + 10g de Cloruro férrico Exteriores Exteriores S1: S1: 600g de Nitrato de Sodio y 40g de Fosfato de Sodio industrial 600g de Nitrato de Sodio y 40g de Fosfato de Sodio industrial S2:150g de Metasilicato de Sodio industrial S2:150g de Metasilicato de Sodio industrial S3: 20g de EDTA industrial y 10g de Cloruro Férrico S3: 20g de EDTA industrial y 10g de Cloruro Férrico

MetodologíaMetodología

APLICACIONES

SOLUCIONES

OBSERVACIONESS1 S2 S3 S4

Cultivos puros (0.5- 3L) 1 ml/L 1ml/L 1ml/L 1ml/L Para los tubos agregar 0,8ml/L de la S2

Cultivos en Carboys (30L) 1ml/L 1ml/L 1ml/L ------ La S3 se prepara en 1gl y se esteriliza a 1L

Cultivos exteriores (cilindros y masivo) 100ml/TN 80ml/TN 30ml/TN ------ Las soluciones no se esterilizan

Fertilización de los cultivos


producción

Cepa 3-4 días

Nueva cepa

0.5 L 3 L

30 L

1 tn5 tn

X 7

2 días

200 mL

2 días

2 días

X 3

2 días0.5-1 tn

agar

cosecha

Siembra

2 días2-3 días


Preparación del agarPreparación del agar Bactoagar al 2 - 2.5 % en agua de mar filtrada y autoclavarBactoagar al 2 - 2.5 % en agua de mar filtrada y autoclavar Agregar 0.3 mL de las soluciones S1, S2, S3 y S4Agregar 0.3 mL de las soluciones S1, S2, S3 y S4 Llenar placas con 15-20 mL Llenar placas con 15-20 mL

Siembra en placasSiembra en placas Seleccionar la cepa más adecuada Seleccionar la cepa más adecuada Colocar 2 gotas de la cepa y rayar en estríasColocar 2 gotas de la cepa y rayar en estrías Incubar de 10 – 15 días: 18-24º C y luz constanteIncubar de 10 – 15 días: 18-24º C y luz constante

Extracción de coloniasExtracción de colonias Colonias libres de bacteriasColonias libres de bacterias Colocar en medo de cultivo Colocar en medo de cultivo 3-5 días con iluminación 3-5 días con iluminación

Mantenimiento de cepas

MetodologíaMetodología Limpieza de cepasLimpieza de cepas

Diluciones sucesivas hasta Diluciones sucesivas hasta 1010-4-4 Mantener a 18º C con iluminaciónMantener a 18º C con iluminación Dejar crecer de 5 a 10 díasDejar crecer de 5 a 10 días

Conteo celularConteo celular Hematocitómetro Hematocitómetro N (Cél/mL) = C*2500 ó N (Cél/mL) = C*50000 N (Cél/mL) = C*2500 ó N (Cél/mL) = C*50000

Alimentación larvariaAlimentación larvaria Ecuación de dilución Ecuación de dilución (C(C11VV11=C=C22VV22)) Incognita = volumen de alga a ser retirado de masivosIncognita = volumen de alga a ser retirado de masivos

GRACIAS

Universidad Nacional de Tumbes Escuela de Postgrado CULTIVO DE MICROALGAS Ing. Edgar López...

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