Primer Semestre 21 Primer Semestre Microalgas Microalgas ... · Primer Semestre 21 13 Primer...
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VD Primer Semestre 2017 13 VD Primer Semestre 2017 12 Microalgas Microalgas INTRODUCCIÓN Se han descrito aproximadamente 4000 especies de fitoplanc- ton marino en el mundo (Sournia et al., 1991), alrededor de 300 de ellos regularmente formar bloom con efectos adversos y 80 tienen la propiedad de producir toxinas. A estos eventos se les conoce como Floración Algal Nociva (FAN). En general, los efectos nocivos se producen cuando estas microalgas sinteti- zan metabolitos secundarios tóxicos con propiedades biológicas potentes contra miembros de los ecosistemas donde habitan o sobre humanos por el consumo de productos del mar (Halle- graeff, 2003). Algunas de estas microalgas generan efectos nocivos sobre sal- mónidos en cultivo. En general, las diatomeas que poseen una teca constituida de sílice lesionan mecánicamente e irritan las membranas branquiales, causando una cascada de eventos que afectan la capacidad osmoregulatoria de los peces (Yang & Al- bright, 1992). En tanto otras especies (dinoflagelados y fitoflage- lados) serían generadoras de ficotoxinas, o producirían especies reactivas de oxígeno (ROS) y ácidos grasos poliinsaturados (PU- FAs) que generarían reacciones toxigénicas conducentes a ne- crosis de células branquiales (Dorantes Aranda et al., 2015). Un tercer mecanismo de nocividad para salmónidos se produciría por hipoxia debido a respiración de las microalgas o por la des- composición de la floración del fitoplancton que sofocaría a los peces (Rensel & Whyte, 2003). La industria salmonicultora en Chile no ha estado ajena a esta situación que se produce en varias partes del mundo y ha sufrido los efectos de las Floraciones Algales Nocivas. Entre las especies que han afectado a la industria en los últimos años se pueden mencionar a los dinoflagelados Alexandrium catenella, Karenia spp. y Karlodinium cf australe, a la diatomea Chaetoceros con- volutus y el fitoflagelado Pseudochattonella cf. verruculosa. Floraciones algales nocivas y su impacto en peces Carlos Sandoval Hurtado 1,2, Enrique Paredes Herbach 3, Manuel Mejia 2, Alejandra Aguilera 5, Claudia Uribe 4. 1 M.V., MSc (c). Escuela de Graduados, Fac. Ciencias Veterinarias, Universidad Austral de Chile. 2 Investigación & Desarrollo Laboratorio Vehice Ltda. 3 M.V., Dr. med.vet.Instituto de Patología Animal, Universidad Austral de Chile. 4 Bióloga Marina, Investigación y Desarrollo Asesorías North Patagonia Ltda. 5 Bióloga Marina, Dr. Cs. Biológicas. Facultad de Ciencia, Universidad San Sebastian, Sede de la Patagonia HISTOLOGÍA BRANQUIA NORMAL Imagen 1. Branquia Normal. H&E. Se observan laminillas primarias y secundarias sin alteración. (Imagen. Carlos Sandoval). EFECTOS DE ESPECIES FAN SOBRE HISTOLOGÍA BRANQUIAL Alexandrium catenella - Dinoflagelado Dependiendo de su estado fisiológico, las células vegetativas se agrupan formando cadenas (2-60 células) (imagen 2). Células solitarias presentan una forma redonda, ligeramente más ancha que alta. El tamaño celular depende del estado fisiológico de la célula, pero normalmente se encuentra entre los 20-48 um de ancho y 18-23 um de alto. Se encuentra en el sur de Chile y la temperatura óptima para su crecimiento es de 12ºC, habita en distintas salinidades, aunque presenta mayor afinidad a salini- dades menores a 30 psu (Mardo- nes & Clément, 2016). Es una potente productora de toxi- nas paralizantes (VPM) del grupo Saxitoxinas (SXT) y Gonyautoxi- nas que pueden generar graves problemas a la salud pública (Mardones & Clément, 2016). También genera daño en salmo- nes, cuya patogenia se encuentra Imagen 2. Se observa un ejemplar de Alexandrium catenella (imagen. Ale- jandra Aguilera) en estudio (Mardones et al., 2015, Aguilera et al., 2016). No obstante, a nivel histológico las branquias presentan alteraciones vasculares como aneurisma y trombosis lamelar (Imagen 4), ne- crosis de epitelio lamelar e hiperplasia lamelar (Imagen 3). Chaetoceros cf. convolutus - Diatomea Células heterovalvares con cloroplastos en las setas. Valva supe- rior convexa con setas emergiendo cercanas a la zona central; valva inferior plana con setas emergiendo desde bien dentro del margen de la valva (Imagen 5). Se detecta durante todo el año, en la columna de agua recurrentemente entre los 10 - 15 m, entre 9 - 14ºC y 18 - 33 psu (Mardones & Clément, 2016). El mecanismo de daño es a través de las espinas de sílice presen- tes en las setas que se introducen en la branquia y generan alte- raciones vasculares, cuadros inflamatorios e hiperplasia lamelar, con reacción a cuerpo extraño en un intento por encapsular la seta de sílice (Imagen 6). En Chile, se han presentado eventos recurrentes de esta microalga que han causado mortalidades en salmónidos. En el año 2010 se presentó en la zona de Chiloé centro y también en el Fiordo Puyuhuapi en el sector de Cisnes. Pseudochattonella cf. verruculosa - Fitoflagelado Fitoflagelado que posee abundantes cloroplastos de color dorado, presentan dos flagelos, uno de los cuales, está dirigido hacia ade- lante y tiene la capacidad de permitir el desplazamiento celular, con flagelo posterior liso. El tamaño de la célula varía entre 12 - 45 µm dependiendo del estado del ciclo de vida en el que se encuentre. En la superficie, la célula está cubierta por estructuras especializadas que asemejan a papilas o verrugas, de ahí el nombre “verruculosa”, estas estructuras son mucocistos a través de los cuales descarga mucus (Imagen 7) (Hosoi-Tanabe et al., 2007, Chang et al., 2014) Se distribuye en masas de agua que fluctúan entre 10 - 18ºC y entre 13.5 - 33 psu ((Villanueva et al., 2016). Respecto a su distribución geográfica se ha reportado en Alemania, Dinamarca, Suecia, Noruega, Japón y sur de Chile en el año 2016 con mortalidades de peces (Eckford-Soper & Daugbjerg, 2016) El mecanismo ictiotóxico aún no es entendido. La evidencia indica que la producción de ROS, radical anión superóxido, ya sea solo o en combinación con ácidos grasos libres poliinsaturados produce la toxicidad asociada con las floraciones del género (Marshall et al., 2005). El estrés osmótico puede ser considerado como un factor determinante pues generaría la lisis de la célula que acelera la mortalidad de salmones (Tang et al., 2007). Ha sido reportada la producción de neurotoxinas por la especie Chatonella marina, sin embargo, no ha sido demostrado en Pseudochattonella verru- culosa durante floraciones al norte de Europa. Los peces afectados presentan altas mortalidades, nado en su- perficie de columna de agua, letargia, con presencia de pete- quias en superficie branquial. En análisis histológico se observa telangiectasia lamelar y trombosis lamelar difusa, necrosis de epitelio lamelar e hiperplasia branquial (Imágenes 8 - 11). En hígado se observa una necrosis hepática multifocal. Imagen 3. Branquia. H&E. Se obser- va reacción de hiperplasia encapsu- lando a un ejemplar de Alexandrium catenella. (Imagen. Carlos Sando- val). Imagen 4. Branquia. H&E. Se obser- va trombosis lamelar en exposición a Alexandrium catenella. (Imagen. Carlos Sandoval). Imagen 5. Se observa un ejemplar de Chaetoceros cf. convolutus Imagen 6. Branquia. H&E. Se ob- serva reacción a cuerpo extraño en peces afectados por Chaetoceros cf. convolutus. (Imagen. Carlos Sando- val) Imagen 7. Se observa un ejemplar de Pseudochattonella cf. verruculo- sa (Imagen. Carlos Sandoval) Imagen 8. Branquia. H&E. Se ob- serva branquia con telangiectasia severa difusa en exposición a Pseu- dochattonella cf. verruculosa (Ima- gen. Carlos Sandoval) Imagen 9. Frotis Fresco. Se observa branquia con telangiectasia y hemo- rragia lamelar severa multifocal en exposición a Pseudochattonella cf. verruculosa.
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INTRODUCCIÓN Se han descrito aproximadamente 4000 especies de fitoplanc-ton marino en el mundo (Sournia et al., 1991), alrededor de 300 de ellos regularmente formar bloom con efectos adversos y 80 tienen la propiedad de producir toxinas. A estos eventos se les conoce como Floración Algal Nociva (FAN). En general, los efectos nocivos se producen cuando estas microalgas sinteti-zan metabolitos secundarios tóxicos con propiedades biológicas potentes contra miembros de los ecosistemas donde habitan o sobre humanos por el consumo de productos del mar (Halle-graeff, 2003).
Algunas de estas microalgas generan efectos nocivos sobre sal-mónidos en cultivo. En general, las diatomeas que poseen una teca constituida de sílice lesionan mecánicamente e irritan las membranas branquiales, causando una cascada de eventos que afectan la capacidad osmoregulatoria de los peces (Yang & Al-bright, 1992). En tanto otras especies (dinoflagelados y fitoflage-lados) serían generadoras de ficotoxinas, o producirían especies reactivas de oxígeno (ROS) y ácidos grasos poliinsaturados (PU-FAs) que generarían reacciones toxigénicas conducentes a ne-crosis de células branquiales (Dorantes Aranda et al., 2015). Un tercer mecanismo de nocividad para salmónidos se produciría por hipoxia debido a respiración de las microalgas o por la des-composición de la floración del fitoplancton que sofocaría a los peces (Rensel & Whyte, 2003).
La industria salmonicultora en Chile no ha estado ajena a esta situación que se produce en varias partes del mundo y ha sufrido los efectos de las Floraciones Algales Nocivas. Entre las especies que han afectado a la industria en los últimos años se pueden mencionar a los dinoflagelados Alexandrium catenella, Karenia spp. y Karlodinium cf australe, a la diatomea Chaetoceros con-volutus y el fitoflagelado Pseudochattonella cf. verruculosa.
Floraciones algales nocivas y su impacto en peces
Carlos Sandoval Hurtado1,2, Enrique Paredes Herbach3, Manuel Mejia 2, Alejandra Aguilera5, Claudia Uribe4.
1 M.V., MSc (c). Escuela de Graduados, Fac. Ciencias Veterinarias, Universidad Austral de Chile. 2 Investigación & Desarrollo Laboratorio Vehice Ltda.
3 M.V., Dr. med.vet.Instituto de Patología Animal, Universidad Austral de Chile.4 Bióloga Marina, Investigación y Desarrollo Asesorías North Patagonia Ltda.
5 Bióloga Marina, Dr. Cs. Biológicas. Facultad de Ciencia, Universidad San Sebastian, Sede de la Patagonia
HISTOLOGÍA BRANQUIA NORMAL
Imagen 1. Branquia Normal. H&E. Se observan laminillas primarias y secundarias sin alteración. (Imagen. Carlos Sandoval).
EFECTOS DE ESPECIES FAN SOBRE HISTOLOGÍA BRANQUIAL Alexandrium catenella - DinoflageladoDependiendo de su estado fisiológico, las células vegetativas se agrupan formando cadenas (2-60 células) (imagen 2). Células solitarias presentan una forma redonda, ligeramente más ancha que alta. El tamaño celular depende del estado fisiológico de la célula, pero normalmente se encuentra entre los 20-48 um de ancho y 18-23 um de alto. Se encuentra en el sur de Chile y la temperatura óptima para su crecimiento es de 12ºC, habita en distintas salinidades, aunque presenta mayor afinidad a salini-dades menores a 30 psu (Mardo-nes & Clément, 2016).
Es una potente productora de toxi-nas paralizantes (VPM) del grupo Saxitoxinas (SXT) y Gonyautoxi-nas que pueden generar graves problemas a la salud pública (Mardones & Clément, 2016). También genera daño en salmo-nes, cuya patogenia se encuentra
Imagen 2. Se observa un ejemplar de Alexandrium catenella (imagen. Ale-jandra Aguilera)
en estudio (Mardones et al., 2015, Aguilera et al., 2016). No obstante, a nivel histológico las branquias presentan alteraciones vasculares como aneurisma y trombosis lamelar (Imagen 4), ne-crosis de epitelio lamelar e hiperplasia lamelar (Imagen 3).
Chaetoceros cf. convolutus - DiatomeaCélulas heterovalvares con cloroplastos en las setas. Valva supe-rior convexa con setas emergiendo cercanas a la zona central; valva inferior plana con setas emergiendo desde bien dentro del margen de la valva (Imagen 5). Se detecta durante todo el año, en la columna de agua recurrentemente entre los 10 - 15 m, entre 9 - 14ºC y 18 - 33 psu (Mardones & Clément, 2016).
El mecanismo de daño es a través de las espinas de sílice presen-tes en las setas que se introducen en la branquia y generan alte-raciones vasculares, cuadros inflamatorios e hiperplasia lamelar, con reacción a cuerpo extraño en un intento por encapsular la seta de sílice (Imagen 6). En Chile, se han presentado eventos recurrentes de esta microalga que han causado mortalidades en salmónidos. En el año 2010 se presentó en la zona de Chiloé centro y también en el Fiordo Puyuhuapi en el sector de Cisnes.
Pseudochattonella cf. verruculosa - FitoflageladoFitoflagelado que posee abundantes cloroplastos de color dorado, presentan dos flagelos, uno de los cuales, está dirigido hacia ade-
lante y tiene la capacidad de permitir el desplazamiento celular, con flagelo posterior liso. El tamaño de la célula varía entre 12 - 45 µm dependiendo del estado del ciclo de vida en el que se encuentre. En la superficie, la célula está cubierta por estructuras especializadas que asemejan a papilas o verrugas, de ahí el nombre “verruculosa”, estas estructuras son mucocistos a través de los cuales descarga mucus (Imagen 7) (Hosoi-Tanabe et al., 2007, Chang et al., 2014)
Se distribuye en masas de agua que fluctúan entre 10 - 18ºC y entre 13.5 - 33 psu ((Villanueva et al., 2016).
Respecto a su distribución geográfica se ha reportado en Alemania, Dinamarca, Suecia, Noruega, Japón y sur de Chile en el año 2016 con mortalidades de peces (Eckford-Soper & Daugbjerg, 2016)
El mecanismo ictiotóxico aún no es entendido. La evidencia indica que la producción de ROS, radical anión superóxido, ya sea solo o en combinación con ácidos grasos libres poliinsaturados produce la toxicidad asociada con las floraciones del género (Marshall et al., 2005). El estrés osmótico puede ser considerado como un factor determinante pues generaría la lisis de la célula que acelera la mortalidad de salmones (Tang et al., 2007). Ha sido reportada la producción de neurotoxinas por la especie Chatonella marina, sin embargo, no ha sido demostrado en Pseudochattonella verru-culosa durante floraciones al norte de Europa.
Los peces afectados presentan altas mortalidades, nado en su-perficie de columna de agua, letargia, con presencia de pete-quias en superficie branquial. En análisis histológico se observa telangiectasia lamelar y trombosis lamelar difusa, necrosis de epitelio lamelar e hiperplasia branquial (Imágenes 8 - 11). En hígado se observa una necrosis hepática multifocal.
Imagen 3. Branquia. H&E. Se obser-va reacción de hiperplasia encapsu-lando a un ejemplar de Alexandrium catenella. (Imagen. Carlos Sando-val).
Imagen 4. Branquia. H&E. Se obser-va trombosis lamelar en exposición a Alexandrium catenella. (Imagen. Carlos Sandoval).
Imagen 5. Se observa un ejemplar de Chaetoceros cf. convolutus
Imagen 6. Branquia. H&E. Se ob-serva reacción a cuerpo extraño en peces afectados por Chaetoceros cf. convolutus. (Imagen. Carlos Sando-val)
Imagen 7. Se observa un ejemplar de Pseudochattonella cf. verruculo-sa (Imagen. Carlos Sandoval)
Imagen 8. Branquia. H&E. Se ob-serva branquia con telangiectasia severa difusa en exposición a Pseu-dochattonella cf. verruculosa (Ima-gen. Carlos Sandoval)
Imagen 9. Frotis Fresco. Se observa branquia con telangiectasia y hemo-rragia lamelar severa multifocal en exposición a Pseudochattonella cf. verruculosa.
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Karlodinium cf. australe - DinoflageladoHa sido reportada en Australia (Wood,1992), Sudafrica (Brown et al, 1979), Japón (Shimada et al, 1982), Europa, Asia y Nor-teamérica. En Chile se reportó con altas mortalidades en la Re-gión de Magallanes en el periodo estival del año 2014 (Uribe com pers.).
Este dinoflagelado atecado al igual que Karenia sp. pertenece al orden Gymnodiniales el cual es euritérmico y eurihalino, detec-tándose en masas de agua que fluctúan entre 8,5 - 33,3 psu y entre 8,1-17,8 ºC, posee cingulum y sulcus bien diferenciados y dos flagelos hetero-dinámicos, con formas y tamaños muy va-riables, y núcleo en posición variable dependiendo de la especie (Imagen 12) (De Salas et al., 2008)
Presenta efectos hemolítico, ictiotóxico y citotóxico producido por actividad de las karlotoxinas (KmTx)(Deeds et al., 2002; Moo-ney et al., 2009).
Durante el evento registrado en la región de Magallanes los pe-ces afectados presentaron natación superficial, letargia, aumento
en la secreción de mucus y mortalidades masivas (Imagen 13). En histología se observa una necrosis difusa de epitelio lamelar, lo que puede afectar el intercambio de gases e iones a través de las branquias (Imagen 14-15).
Karenia spp. - DinoflageladoHa sido reportada en Australia, Sudafrica, Japón, Europa, Asia y Norteamérica (Brand et al., 2012). En Chile se reportan morta-lidades de peces por esta microalga el año 1999 y en Golfo de Penas en el periodo estival del año 2017.
Este dinoflagelado atecado pertenece al orden Gymnodinial, Fa-milia Kareniaceae. Poseen cloroplastos de color verde-amarillo, los tamaños varían entre 13 y 50 um dependiendo de la especie. Posee un surco apical recto que se une al sulcus, las formas pue-den ser acorazonadas o cónicas (Haywood et al., 2004)
Mecanismo de toxicidad: presenta toxicidad hemolítica, citotóxi-ca y ácidos grasos poliinsaturados. Las ictiotoxinas producidas por esta especie generan una severa necrosis para los delicados tejidos epiteliales, no sólo de las branquias sino también del in-testino (Fossat et al., 1999).
Se observa hiperplasia, hipertrofia, fusiones de lamelas secunda-rias con edema severo y aneurisma en las branquias, que incluye necrosis severa, con extraños núcleos en forma de estrella (Brett et al. 1978), (Jones et al., 1982), además de una necrosis coa-gulativa multifocal en hígado (Erard-Le Denn y Ryckaert, 1990). En algunos casos cuando existe ingestión de la toxina esta puede provocar enteritis y necrosis hepática focal (Roberts et al.,1983).
En Chile en el Golfo de Penas, en el año 2017 la toxina produjo en los peces alteraciones vasculares severas en las branquias, como aneurisma lamelar, edema subepitelial y espongiosis seve-ra difusa con presencia de mortalidades agudas (Imagenes 17 y 18).
Imagen 11. Macro. Branquia. Se observan líneas blancas lamela-res consistentes con hiperplasia lamelar en exposición a Pseudo-chattonella cf. verruculosa (Ima-gen. Carlos Sandoval)
Imagen 10. Macro. Branquia. Se observa petequias en superficie lamelar en exposición en Pseudo-chattonella cf. verruculosa (Ima-gen. Carlos Sandoval)
Imagen 15. Branquia. H&E. Se observa un ejemplar sugerente a Karlodinium cf. australe entre laminillas secundarias (Imagen. Carlos Sandoval)
Imagen 12. Se observa un ejem-plar de Karlodinium cf. australe (Imagen. Claudia Uribe).
Imagen 13. Macro. Se observan peces con natación superficial afec-tados por Karlodinium cf. australe.
Imagen 14. Branquia. H&E. Se observan branquias con necrosis difusa por exposición a Karlodi-nium cf. australe. (Imagen. Carlos Sandoval)
Imagen 16. Se observa un ejem-plar de Karenia spp. (Imagen. Claudia Uribe)
EVALUACIÓN DE FAN VEHICE – NORTH PATAGONIAEspecie - Grupo Toxicidad Macro Histología
Karenia spp.
Dinoflagelado
Toxicidad:30 cel/ml Histología branquia:- Espongiosis- Aneurisma- Necrosis
Pseudochattonella cf. verruculosa
Fitoflagelado
Toxicidad:> 10 cel/ml
Histología branquia:- Aneurisma- Necrosis
Karlodinium cf. australe
Dinoflagelado
Toxicidad:500 cel/ml
Histología branquia:- Aneurisma- Necrosis
Alexandrium catenella
Dinoflagelado
Toxicidad:> 300 cel/ml
Histología branquia:- Hiperplasia- Necrosis- Aneurisma
Chaetoceros convolutus
Diatomea
Toxicidad:> 5 cel/ml
Histología branquia:- Hiperplasia- Reacción a cuerpo extraño
BIBLIOGRAFÍARef. Toxicidad: Alejandra Aguilera (2016), Claudia Uribe (com Pers.), Clément & Lembeye (1993); INTESAL.
Imagen 17. Branquia. H&E. Se ob-serva branquia con espongiosis se-vera difusa en exposición a Karenia spp. (Imagen. Carlos Sandoval).
Imagen 18. Branquia. H&E. Se observa branquia con telangiec-tasia severa difusa en exposición a Karenia spp. (Imagen. Carlos Sandoval)
Aguilera, A., Gutierrez, A., Mayorga, J., Villanueva, F., Varela, D. 2016. Effects of Alexandrium catenella on post smolt salmon Abstract book 17 th International Conference on Harmful Algae, Brazil. Pp. 194Aguilera A. X. Gutiérrez, J. Mayorga, F. Villanueva y D. Varela (2016) Effects of Alexandrium catenella on Atlantic salmon post smolt. Abstract book 17th International Conference on Harmful Algae, Brazil. 2016. Pp 145Brand, L.E. Campbell, L. y Bresnan, E. 2012. Karenia: The biology and ecology of a toxic genus. Harmful Algae 14: 156-156–178 Chang, F.H., Sutherland, J.E., McVeagh, M., Gall, M., 2014. Molecular phylogeny, pigment composition, toxicology and life history of Pseudoch-attonella cf. verruculosa (class Dictyochophyceae) from Wellington har-bour, New Zealand. Harm- ful Algae 34, 42–55. De Salas M., A. Laza-Martinez & G. Hallegraeff (2008). Novel Unar-mored dinoflagellates from the toxigenic family Kareniacea (Gymndoni-ales): Five species of Karlodinium an one new takayama from the Austra-lian sector of the Southern Ocean. J. Phycol (44): 241-257.Deeds JR, Reimschuessel R, Place AR (2006) Histopathological effects in fish exposed to the toxins from Karlodinium micrum. J Aquat Anim Health 18: 136–148.Dorantes-Aranda, J.J., Seger, A., Mardones, J.I., Nichols, P.D., Halle-graeff, G.M., 2015. Progress in understanding algal bloom-mediated fish kills: the role of superox- ide radicals, phycotoxins and fatty acids. PLOS ONE 10 (7), e0133549. Eckford-Soper L & Daugbjerg N (2016). The ichthyotoxic genus Pseudo-chattonella (Dictyochophyceae): Distribution, toxicity, enumeration, ecologi-cal impact, succession and life history- A review. Harful Algae (58) 51-58.Hallegraeff GM (2003) Harmful algal blooms: a global overview. In: Hallegraeff GM, Anderson DM, Cembella AD (eds) Manual on harmful marine microalgae, vol 11, 2nd edn. IOC-UNESCO. Paris, pp 25–4.Hara Y., Doi K. & Chihara M. 1994. Four new species of Chattonella
(Raphidophyceae, Chromophyta) from Japan. Japan Journal of Phyco-logy 42:407-420.Haywood, A.J., Steidinger, K.A., Truby, E.W., Bergquist, P.R., Bergquist, P.L., Adamson, J. & MacKenzie, L. (2004). Comparative morphology and molecular phylogenetic analysis of three new species of the ge-nus Karenia (Dinophyceae) from New Zealand. Journal of Phycology 40: 165-1Mardones, J., & Clément, A., 2016. Manual de microalgas del sur de Chile. 186pp Mardones J.I., J.J. Dorantes-Aranda, P.D. Nichols & G.M. Hallegraeff 2015. Fish gill damage by the dinoflagellate Alexandrium catenella from Chilean fjords: Synergistic action of ROS and PUFA. Harmful Algae: (49): 40-49Mooney BD, Dorantes-Aranda JJ, Place AR, Hallegraeff GM (2011) Ichthyotoxicity of gymnodinioid dinoflagellates: PUFA and superoxide effects in sheepshead minnow larvae and rainbow trout gill cells. Mar Ecol Prog Ser 426: 213–224. Rensel JC & JNC Whyte (2003) Finfish mariculture and harmful algal blooms. In: Manual on Harmful Marine Microalgae. (GM Hallegraeff, DM Anderson & AD Cembella, eds), UNESCO Publishing, Paris, pp. 693-722.Sournia, A., M. J. Chrétiennot-Dinet y M. Ricard. 1991. Marine phyto-plankton: how many species in the world ocean? Journal of Plankton Research 13:1093-1099. Yang CZ & LJ Albight (1992) Effects of the harmful diatom Chaetoceros concavicornis on respiration of rainbow trout Oncorhynchus mykiss. Dis. Aquat. Org. (14): 105-114.Villanueva F., G. Urrutia, C. Uribe, M. Seguel, A. Aguilera, B. Olivares, D.Varela, J. Paredes (2016). Harmful Algal Bloom of Pseudochattonella verruculosa (Dictyochophyceae, Florenciellales) associated with salmon farm mortalities in the south of Chile. Abstract book 17 th International Conference on Harmful Algae, Brazil. Pp. 194
