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UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

FACULTAD DE CIENCIAS MÉDICAS

CARRERA DE LABORATORIO CLÍNICO E HISTOTECNOLÓGICO

Determinación de niveles de anticuerpos IgG contra neumococo en niños de 7 a 9 años de

edad vacunados contra neumococo mediante técnica de elisa en la escuela Plinio Robalino

Cruz durante el año 2014.

Proyecto de Titulación previa a la obtención del Título de licenciada en Laboratorio Clínico e

Histotecnológico.

Sandoval Reinoso Doris Raquel

TUTOR: DR. Carlos Wladimir Torres Serrano

QUITO, 2015.

ii

DEDICATORIA

A estudiantes, profesionales de la salud y especialmente a la comunidad para que

podamos informarnos e informar acerca de las vacunas contra el neumococo y así empezar

a inmunizar y evitar nuevas epidemias y a la vez nuevos brotes de esta bacteria;

contribuyendo a mejorar la calidad de salud en nuestro país (Ecuador).

iii

AGRADECIMIENTO

A Dios solamente por brindarme la vida, permitirme conocer a gente buena que han

compartido sus conocimientos (mis maestros) pues ellos me han compartido sus

experiencias.

Darme una madre ejemplar y maravillosa; porque ella siempre es de mi inspiración ya

que nos enseñó lo valioso de la vida, lo ético y lo moral.

Y por último, y no menos más importante (mi esposo) mi compañero de vida el cual

siempre está conmigo en las buenas y en las malas.

Mira que te mando que te esfuerces y seas valiente; no temas ni desmayes, porque Jehová tu

Dios estará contigo en donde quiera que vayas. (JOSUE 1:9) Tomado de la Biblia Reina

Valera versión 1960

iv

AUTORIZACIÓN DE LA PUBLICACION DEL TRABAJO DE TITULACIÓN

Yo, Sandoval Reinoso Doris Raquel en calidad de autora del Trabajo de Titulación

realizado sobre “Determinación de niveles de anticuerpos IgG contra neumococo en niños de

7 a 9 años de edad vacunados contra neumococo mediante técnica de elisa en la Escuela

Plinio Robalino Cruz durante el Año 2014” por la presente autorizo a la UNIVERSIDAD

CENTRAL DEL ECUADOR , hacer uso de todos los con tenidos que me pertenecen o de

parte de los que contienen esta obra, con fines estrictamente académicos o de investigación.

Los derechos que como autor me corresponden, con excepción de la presente autorización,

seguirán vigentes a mi favor, de conformidad con lo establecido en los artículos 5.6.8; 19 y

demás pertinentes de la Ley de Propiedad Intelectual y su Reglamento.

Quito, 10 de noviembre del 2015.

----------------------------------------

Doris Raquel Sandoval Reinoso

CI: 1720275690

[email protected]

Teléfono: 0992621317

mailto:[email protected]

v

APROBACIÓN DEL TUTOR/A

DEL TRABAJO DE TITULACIÓN

En mi calidad de tutor del trabajo de Titulación, presentado por DORIS RAQUEL

SANDOVAL REINOSO, para optar por el Grado de Licenciada en Laboratorio Clínico e

Histotecnológico; cuyo Título es “DETERMINACIÓN DE NIVELES DE

ANTICUERPOS IGG CONTRA NEUMOCOCO EN NIÑOS DE 7 A 9 AÑOS DE

EDAD VACUNADOS CONTRA NEUMOCOCO MEDIANTE TÉCNICA DE ELISA

EN LA ESCUELA PLINIO ROBALINO CRUZ DURANTE EL AÑO 2014”, considero

que dicho trabajo reúne los requisitos y méritos suficientes para ser sometidos a la

presentación pública y evaluación por parte del jurado examinador que se designe.

En la ciudad de Quito, a los 12 días del mes de noviembre del 2015

Atentamente:

--------------------------------------

Dr. Carlos Wladimir Torres Serrano

DOCENTE-TUTOR

vi

APROBACIÓN DEL TRIBUNAL

Los miembros del Tribunal Examinador aprueban el informe de titulación “Determinación

de niveles de anticuerpos IgG contra neumococo en niños de 7 a 9 años de edad

vacunados contra neumococo mediante técnica de elisa en la Escuela Plinio Robalino

Cruz durante el año 2014”, presentado por: DORIS RAQUEL SANDOVAL REINOSO

Para constancia certifican,

Dr. Ángel Alarcon Dr. Milton Tapia

PRESIDENTE VOCAL

M.Sc. Yolanda Paredes

VOCAL

vii

ÍNDICE

CONTENIDO PAGS

DEDICATORIA.......................................................................................................................... ii

AGRADECIMIENTO ............................................................................................................... iii

AUTORIZACIÓN DE LA PUBLICACION DEL TRABAJO DE TITULACIÓN ....................... iv

APROBACIÓN DEL TUTOR/A ................................................................................................. v

APROBACIÓN DEL TRIBUNAL .............................................................................................. vi

ÍNDICE .................................................................................................................................... vii

LISTA DE IMÁGENES ............................................................................................................. xi

LISTA DE GRÁFICOS ............................................................................................................. xii

LISTA DE TABLAS ................................................................................................................. xiii

LISTA DE ANEXOS ................................................................................................................ xiv

RESUMEN .............................................................................................................................. xv

ABSTRACT ............................................................................................................................ xvi

INTRODUCCIÓN ..................................................................................................................... 1

CAPÍTULO I ............................................................................................................................. 3

1.- EL PROBLEMA................................................................................................................... 3

1.1.- PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA ............................................................................. 3

1.2.- UBICACIÓN ...................................................................................................................... 4

1.3.- FORMULACIÓN DEL PROBLEMA ................................................................................. 5

1.4.- OBJETIVOS ....................................................................................................................... 6

1.4.1.- Objetivos generales ............................................................................................................................. 6 1.4.2.- Objetivos específicos ......................................................................................................................... 6

1.5.- Justificación ....................................................................................................................... 6

CAPITULO II ............................................................................................................................ 9

2.- MARCO TEÓRICO ............................................................................................................ 9

2.1.- MARCO LEGAL ............................................................................................................... 9

2.2.- AGENTE NEUMOCOCO .................................................................................................. 9

IMAGEN N° 1: Bacteria Neumocócica ................................................................................... 10

2.3.- ESTRUCTURA................................................................................................................. 10

2.3.1.- ESTRUCTURA CELULAR DEL NEUMOCOCO ......................................................................... 10

viii

2.3.1.1.- LA CÁPSULA .......................................................................................................................... 11 2.3.1.2.- PARED CELULAR ................................................................................................................. 12

2.3.2.- ESTRUCTURA ANTIGENICA....................................................................................................... 12

2.4.- RESERVORIO ................................................................................................................. 13

2.5.- PATOGENIA ................................................................................................................... 13

2.6.- MECANISMOS DE TRANSMISIÓN ............................................................................... 14

2.7.- SINTOMATOLOGIA ....................................................................................................... 15

2.8.- CLÍNICA PRONOSTICO ................................................................................................ 15

2.9.- INMUNIDAD PARA EL NEUMOCOCO ........................................................................ 15

2.9.1.- CÉLULAS DE LA INMUNIDAD INNATA ................................................................................... 16 2.9.2.- COMPLEMENTO ............................................................................................................................ 16

2.10.- SINDROME DE NEUMOCOCO................................................................................... 17

2.11.- DIAGNOSTICO ............................................................................................................. 17

2.11.1.- TINCIÓN DE GRAM Y CULTIVO DE MUESTRAS BIOLÓGICAS ......................................... 17 2.11.2.- TÉCNICAS MOLECULARES: TEST DE AMPLIFICACIÓN DE ADN (PCR) ......................... 18 2.11.3.- TÉCNICA DE ELISA .................................................................................................................... 18

2.11.3.1.- HISTORIA .............................................................................................................................. 18 2.11.3.2.- FUNDAMENTO Y TIPOS DE ELISA.................................................................................. 19 2.11.3.3.- ELISA DIRECTO. .................................................................................................................. 19 2.11.3.5. - ELISA SÁNDWICH .............................................................................................................. 20 2.11.3.6.- ELISA HETEROGÉNEO ...................................................................................................... 21 2.11.3.7.- ELISA COMPETITIVO.......................................................................................................... 22 2.11.3.8.- SOLUCIÓN DE LAVADO. .................................................................................................... 24 2.11.3.7.- CONJUGADOS. ..................................................................................................................... 24

2.12.- EPIDEMIOLOGIA ........................................................................................................ 25

2.12.1.- EPIDEMIOLOGIA MUNDAL ...................................................................................................... 25 2.11.2.- EPIDEMIOLOGIA DEL ECUADOR ............................................................................................ 25

TABLA N° 1. DEFUNCIONES TOTALES POR AÑO Y GRUPO DE EDAD, SEGÚN

CAUSA DE MUERTE NEUMONÍAS. ECUADOR 1999 A 2003 ........................................ 26

TABLA 2. DATOS DE SEROTIPOS DE NEUMOCOCO CORRESPONDIENTES A

ECUADOR (2005 – 2011)...................................................................................................... 27

2.13.- VACUNAS Y ANTIBIÓTICOS ....................................................................................... 27

2.13.1.- VACUNA NO CONJUGADA (23 VALENTE) ............................................................................ 28 2.13.1.1.- INDICACIONES .................................................................................................................... 28 2.13.1.2.- INMUNIDAD ......................................................................................................................... 28 2.13.1.3.- CONTRAINDICACIONES .................................................................................................... 28

2.13.2.- VACUNA CONJUGADA DE SIETE SEROTIPOS ...................................................................... 29 2.13.2.1.- INMUNIDAD ......................................................................................................................... 29 2.13.2.2.- CONTRAINDICACIONES .................................................................................................... 29

2.13.3.- VACUNA ANTINEUMOCÓCICA CONJUGADA 13-VALENTE. ............................................ 29 2.13.4.- VACUNA CONJUGADA DE 10 SEROTIPOS (PCV) ................................................................. 30

CAPITULO III ......................................................................................................................... 32

ix

METODOLOGIA .................................................................................................................... 32

3.1.- TIPO DE INVESTIGACION ............................................................................................ 32

3.2.- NIVELES DE INVESTIGACION ..................................................................................... 32

3.3.- TECNICAS E INSTRUMENTOS DE INVESTIGACION................................................ 32

3.4.- UNIVERSO Y MUESTRA ............................................................................................... 32

3.4.1.- UNIVERSO ................................................................................................................... 32

3.4.2.- MUESTREO ..................................................................................................................................... 33 3.4.2.1.- CRITERIOS DE INCLUSIÓN ...................................................................................................... 33

3.4.2.2.- CRITERIOS DE EXCLUSIÓN ................................................................................................ 33

3.5.- TÉCNICA E INSTRUMENTO DE RECOLECCIÓN DE DATOS ................................... 33

3.5.1.- TECNICA ......................................................................................................................................... 33 3.5.2.- PROCEDIMIENTO DE LA TECNICA DE ELISA (INSERTO DEL KIT E-DG-96 PARA

NEUMOCOCO IgG PARA TÉCNICA DE ELISA) .................................................................................. 33

3.6.- TIPOS DE ANÁLISIS....................................................................................................... 34

3.7.- CONSIDERACIONES ÉTICAS ....................................................................................... 34

CAPITULO VI......................................................................................................................... 35

4.1.- RESULTADOS ................................................................................................................. 35

TABLA Nº3 DISTRIBUCIÓN DE NIÑOS SEGÚN SEXO ................................................. 35

GRÁFICO Nº 1: DISTRBUCIÓN DE NIÑOS SEGÚN SEXO ........................................... 35

TABLA Nº4 DISTRIBUCIÓN DE NIÑOS DE 7 A 9 AÑOS DE EDAD ............................ 36

GRÁFICO Nº2 DISTRIBUCIÓN DE NIÑOS SEGÚN EDAD DE 7 A 9 AÑOS.............. 36

TABLA Nº5 DISTRIBUCIÓN DE NIÑOS SEGÚN GRADO DE ESCOLARIDAD .......... 37

GRÁFICO Nº3 DISTRIBUCIÓN DE NIÑOS SEGÚN GRADO DE ESCOLARIDAD ..... 37

TABLA Nº6 DISTRIBUCIÓN DE NIÑOS SEGÚN DIAGNOSTICO DE ENFERMEDAD

NEUMOCOCICA POR ENCUESTAS ................................................................................... 38

GRÁFICO Nº 4 DISTRIBUCIÓN DE NIÑOS SEGÚN DIAGNOSTICO DE

ENFERMEDAD NEUMOCOCICA ....................................................................................... 38

TABLA Nº7 DISTRIBUCIÓN DE NIÑOS POR ANTECEDENTES FAMILIARES DE

ENFERMEDAD NEUMOCÓSICA MEDIANTE ENCUESTAS .......................................... 39

GRÁFICO Nº 5 DISTRIBUCIÓN DE NIÑOS POR ANTECEDENTES FAMILIARES DE


TABLA Nº8 DISTRIBUCIÓN DE NIÑOS CON APLICACIÓN DE VACUNA CONTRA

NEUMOCOCO ........................................................................................................................ 40

GRÁFICO Nº 6 DISTRIBUCIÓN DE NIÑOS CON APLICACIÓN DE VACUNA

CONTRA NEUMOCOCO ...................................................................................................... 40

x

TABLA Nº9 NÚMERO DE DOSIS DE VACUNA EN NIÑOS CONTRA NEUMOCOCO

.................................................................................................................................................. 41

GRÁFICO Nº 7 NÚMERO DE DOSIS DE VACUNA EN NIÑOS CONTRA

NEUMOCOCO ........................................................................................................................ 41

TABLA Nº 10 DISTRIBUCIÓN DE NIÑOS SEGÚN RESULTADO MEDIANTE LA

TECNICA DE ELISA PARA NEUMOCOCO IgG ............................................................... 42

GRÁFICO Nº 8 DISTRIBUCIÓN DE NIÑOS SEGÚN RESULTADO MEDIANTE LA


TABLA Nº 11 DISTIRIBUCIÓN DE NIÑOS SEGÚN RESULTADO DE IgG Y NUMERO

DE DOSIS ................................................................................................................................ 43

GRÁFICO Nº 9 DISTIRBUCIÓN DE NIÑOS SEGÚN RESULTADO DE IgG Y NUMERO

DE DOSIS ................................................................................................................................ 43

4.2.- DISCUSIÓN..................................................................................................................... 44

4.3.- CONCLUSIONES ............................................................................................................ 45

4.4.- RECOMENDACIÓNES ................................................................................................... 45

CAPITULO V .......................................................................................................................... 46

LA PROPUESTA .................................................................................................................... 46

BIBLIOGRAFÍA ..................................................................................................................... 47

ANEXOS ................................................................................................................................. 50

ANEXO N°1.- RECURSOS Y COSTOS ................................................................................... 50

ANEXO N°2.- FORMULARIO PARA PADRES DE FAMILIA ............................................... 52

ANEXO N°3.- HOJA DE ENCUESTA A LOS PADRES DE FAMILIA ................................... 53

ANEXO N°4 ............................................................................................................................. 55

xi

LISTA DE IMÁGENES

CONTENIDO PAGS.

IMAGEN Nº 1 BACTERIA NEUMOCÓCICA .................................................................... 10

IMAGEN Nº 2 ESTRUCTURA DE LA PARED DEL NEUMOCOCO ............................... 11

IMAGEN Nº 3 ESTRUCTURA ANTIGÉNICA DEL NEUMOCOCO ................................ 13

IMAGEN Nº 4 MICROPLACAS DE POLIESTILENO DE 96 POCILLOS ......................... 23

IMAGEN Nº 5 LAVADOR DE MICROPLACAS DE 96 POCILLOS .................................. 23

xii

LISTA DE GRÁFICOS

CONTENIDO PAGS.

GRÁFICO Nº 1: DISTRBUCIÓN DE NIÑOS SEGÚN SEXO ........................................... 35

GRÁFICO Nº5 DISTRIBUCIÓN DE NIÑOS SEGÚN EDAD DE 7 A 9 AÑOS.............. 36

GRÁFICO Nº3 DISTRIBUCIÓN DE NIÑOS SEGÚN GRADO DE ESCOLARIDAD ..... 37


ENFERMEDAD NEUMOCOCICA ....................................................................................... 38

GRÁFICO Nº 5 DISTRIBUCIÓN DE NIÑOS POR ANTECEDENTES FAMILIARES DE



CONTRA NEUMOCOCO ...................................................................................................... 40

GRÁFICO Nº 7 DISTRIBUCIÓN DE NÚMERO DE DOSIS DE VACUNA RECIBIDO

POR NIÑOS............................................................................................................................. 41



GRÁFICO Nº 9 DISTRIBUCIÓN DE NIÑOS SEGÚN RESULTADO DE IgG Y NUMERO

DE DOSIS ................................................................................................................................ 43

xiii

LISTA DE TABLAS

CONTENIDO PAGS.

TABLA N° 1 DEFUNCIONES TOTALES POR AÑO Y GRUPO DE EDAD, SEGÚN

CAUSA DE MUERTE NEUMONÍAS. ECUADOR 1999 A 2003 ........................................ 26

TABLA Nº 2 DATOS DE SEROTIPOS DE NEUMOCOCO CORRESPONDIENTES A

ECUADOR (2005 – 2011)...................................................................................................... 27

TABLA Nº3 DISTRIBUCIÓN DE NIÑOS SEGÚN SEXO ................................................. 35

TABLA Nº4 DISTRIBUCIÓN DE NIÑOS DE 7 A 9 AÑOS DE EDAD ............................ 36

TABLA Nº5 DISTRIBUCIÓN DE NIÑOS SEGÚN GRADO DE ESCOLARIDAD .......... 37

TABLA Nº6 DISTRIBUCIÓN DE NIÑOS SEGÚN DIAGNOSTICO DE ENFERMEDAD

NEUMOCOCICA POR ENCUESTAS ................................................................................... 38

TABLA Nº7 DISTRIBUCIÓN DE NIÑOS POR ANTECEDENTES FAMILIARES DE


TABLA Nº8 DISTRIBUCIÓN DE NIÑOS CON APLICACIÓN DE VACUNA CONTRA

NEUMOCOCO ........................................................................................................................ 40

TABLA Nº9 DISTRIBUCIÓN DE NÚMERO DE DOSIS DE VACUNA RECIBIDO POR

NIÑOS ..................................................................................................................................... 41



TABLA Nº 11 DISTIRIBUCIÓN DE NIÑOS SEGÚN RESULTADO DE IgG Y NUMERO

DE DOSIS ................................................................................................................................ 43

xiv

LISTA DE ANEXOS

CONTENIDO PAGS.

ANEXO N°1.- RECURSOS Y COSTOS ................................................................................ 50

ANEXO N°2.- FORMULARIO PARA PADRES DE FAMILIA .......................................... 52

ANEXO N°3.- HOJA DE ENCUESTA A LOS PADRES DE FAMILIA ............................. 53

ANEXO N°4.- TRÌPTICO ....................................................................................................... 54

xv

TITULO: Determinación de niveles de anticuerpos IgG contra neumococo en niños

de 7 a 9 años de edad vacunados contra neumococo mediante técnica de elisa en la escuela

Plinio Robalino Cruz durante el año 2014.

Autora: Doris Raquel Sandoval Reinoso

Tutor: Dr. Carlos Wladimir Torres Serrano

RESUMEN

Se realizó este estudio debido a que aproximadamente, un millón de niños menores de 10

años de edad mueren por enfermedad neumocócica anualmente. Ministerio de Salud Pública,

Programa Amplio de Inmunizaciones (MSP,PAI 2009), pues la neumonía es la segunda causa

más común de meningitis bacteriana.

El neumococo se encuentra en los humanos y convive con ellos en el día a día, y afecta

por igual a todas las edades.

El 40 al 70 % de las personas normales son portadores asintomáticos de neumococos. La

patogenicidad del microorganismo depende de sus propiedades invasivas y está relacionada

con la presencia de su cápsula.

En esta investigación que fue descriptiva, de corte transversal, técnica estadística en Excel;

con un período de duración de un año, los resultados determinan que el 96 % no tiene

antecedentes de infección por Neumococo pero el 4 % si, lo que demuestra que la bacteria

está circulando en la ciudad de Quito. Según el Simposio Regional de Lima - Perú en Latina

America y el Caribe 1.6 millones de niños menores de 9 años tiene un episodio de

enfermedad neumocócica cada año (QUADROS.C,2008) y la Asociación Española de

Pediatría esta bacteria coloniza la nasofaringe del 25-80 % de los niños menores de 10 años

y causa dos formas de enfermedad: invasiva (meningitis, bacteriemia, sepsis, neumonía

bacteriana y otras) y no invasiva, como la neumonía, la otitis media y la sinusitis. Más del 60

% de los casos de la enfermedad neumocócica ocurre en niños mayores de 24 meses, sobre

todo a expensas de las neumonías bacterianas.

Por tanto el aporte de este trabajo es dar a conocer que la bacteria neumococo puede ser

una causa de muerte de niños en nuestro país, así como también concientizar a la población

sobre la importancia de la vacuna, las consecuencias que puede provocar el no vacunar

responsablemente a los niños, el no aplicar las cuatro dosis de vacunas en el tiempo adecuado

ya que puede ocasionar que los niños pierdan su inmunización y la bacteria ataque

nuevamente; todo esto contribuirá a evitar que existan nuevos brotes de serotipos de la

bacteria neumococo.

xvi

PALABRAS CLAVES: NEUMOCOCO/ BACTERIA/ ELISA/ INMUNOLOGÍA

TITLE: “Determining antibodies against IgG pneumococcus in children 7 to 9 years old

immunized against pneumococcus through elisa technique at Plinio Robalino Cruz during

2014”

Author: Doris Raquel Sandoval Reinoso

Tutor: Dr. Carlos Wladimir Torres Serrano

ABSTRACT

This study was performed because approximately one million children under 10 years old

die every year due to pneumococcus, Ministry of Public Health, Broad Immunization

Program (MSP,PAI 2009), with pneumonia being the second most common cause of bacterial

meningitis.

Humans carry and cohabit with pneumococcus every day, and it affects all ages equally.

From 40 to 70% of normal people are asymptomatic carries of pneumococcus. The

Microorganism’s pathogenicity depends on its invasive properties and is related to the

presence of its capsule.

This investigation was descriptive, crosscutting and the statistic technique was used in

Excel; it lasted one year and the results determine that 96% have no record of pneumococcus

infection, but 4 % does. This shows that the bacteria are circulating in the city of Quito.

According to the Regional Symposium held in Lima, Peru, in Latin America the Caribbean

1.6 million children under 9 years old have a pneumococcus episode every year

(QUADROS.C,2008) and according to the Spanish Pediatrician Association, this bacteria

colonizes the nasopharynx in 25-80% of children under 10 years old and leads to two types of

diseases: an invasive disease ( meningitis, bacteremia, sepsis, bacterial pneumonia and

others) and non-invasive, such as pneumonia, the otitis medium and the sinusitis.

More than 60% of the cases of pneumococcus disease happen in children over 24 months,

particularly at the expense of bacterial pneumonia.

Therefore, this work’s contribution is to inform that the pneumococcus bacteria could be the

reason for the death of children in our country; and the importance of the vaccine and the

consequences of not immunizing children in a responsible way, of not applying four doses of

vaccines on time and that this could make children loose their immunization and have the

bacteria attack once again. All this will contribute to avoid new serotype outbreaks of

pneumococcus bacteria.

KEYWORDS: PNEUMOCOCCUS / BACTERIA / ELISA / IMMUNOLOGY

xvii

CERTIFICACIÓN

Certifico haber realizado la anterior traducción del español al inglés. Declaro, además, que

los datos y el espíritu del texto se han mantenido totalmente en la traducción según lo mejor

de mi conocimiento.

Quito, 23 de enero del 2016

Mariacruz González C.

Perito Traductora

CC 1704608130

1

INTRODUCCIÓN

Streptococcus pneumoniae es un patógeno humano destacado pues es responsables de

muchas enfermedades graves y la principal causa de mortalidad infantil en todo el mundo. El

neumococo es muy apto a colonizar e infectar diferentes nichos en el cuerpo humano, y su

adaptación al entorno es un aspecto central de su patogenia. En la actualidad el genoma

reveló que el gen neumocócico también codifica múltiples sRNAs, muchos de los cuales

tienen un papel importante en la virulencia.

El conocimiento de la bacteria neumococo sigue siendo muy limitado, y se necesita

investigación futura para una mejor comprensión de las funciones y mecanismos. (MSP,PAI.

2009)

El neumococo se transmite de persona a persona por las secreciones (gotitas) respiratorias,

siendo los pacientes más susceptibles a las infecciones neumocócicas graves e invasivas los

niños y aquellos con linfomas o mielomas, sida y otras deficiencias inmunológicas. La lesión

previa del epitelio respiratorio por bronquitis crónica o virus respiratorios comunes, en

especial el virus de la gripe, parece predisponer a la invasión neumocócica. (LONGO.D,

2011)

Luego de la colonización de la nasofaringe se produce una infección si los organismos

pasan a zonas adyacentes como: senos paranasales, trompa de Eustaquio; y su eliminación se

dificulta por edema de la mucosa que produce el mismo microorganismo. (BELLO.A,2007)

El sistema inmune innato representa el primer evento en la defensa del huésped, siendo de

tipo inespecífico, constituye la respuesta más precoz a la invasión microbiana. Actúa para

contener la infección desde los primeros minutos a través de mecanismos incluyendo

fagocitosis, activación de citoquinas y muerte microbiana. Además, el sistema inmune innato

inicia y apoya a la inmunidad adaptativa. (PATIÑO.S., 2010)

La OMS, afirma que las enfermedades causadas por Streptococo pneumoniae constituyen

un importante problema mundial de salud pública.

2

En el año 2000, se produjeron alrededor de 14,5 millones de sucesos de enfermedad

neumocócica grave, lo que ocasionó cerca de 826.000 muertes en niños de 1 a 5 años, de los

que unos 91.000 eran niños VIH-positivos. Organización Mundial de la Salud (OMS, 2013)

En el Ecuador el Ministerio de Salud Pública estableció una prevalencia de enfermedades

causadas por el agente neumococo del 22,9 por 100.000 habitantes en niños que fueron

atendidos en hospitales de la red Pública de Salud, (MSP,PAI. 2009)

3

CAPÍTULO I

1.- EL PROBLEMA

1.1.- PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

Las infecciones por neumococo dan lugar a una enfermedad invasora o no invasora a

partir de la nasofaringe, la cual se establece y se extender siendo uno de los principales

agentes causantes de meningitis y la causa más frecuente de neumonía, bacteriemia, sinusitis

y otitis media aguda en los niños menores de 2 años de edad. El neumococo causa una gran

variedad de manifestaciones clínicas, desde el estado de portador asintomático o colonización

nasofaríngea hasta la sepsis fulminante. (MSP,PAI. 2009

El neumococo es uno de los patógenos con mayor impacto global, el S. pneumoniae quizá

sea uno de los más complejos de estudiar, tanto desde el punto de vista clínico como

epidemiológico. El cual afecta a individuos de todas las edades. (MSP,PAI. 2009)

Aproximadamente, un millón de niños menores de 10 años de edad mueren por

enfermedad neumocócica anualmente. (MSP,PAI. 2009)

Los pacientes con otitis media y un porcentaje grande de casos de sinusitis y neumonías

son causados por el Streptococcus pneumoniae conocido como neumococo. La enfermedad

neumocócica constituye una de las diez primeras causas de muerte en los países

subdesarrollados. Se estima que el 15-30% de todas las neumonías son debidas al

neumococo. (MSP,PAI. 2009)

Las enfermedades no invasivas suelen ser más frecuentes y menos graves, generalmente

limitadas a vías respiratorias, y se pueden manifestar como una infección ótica, sinusal y

bronquial. (MSP,PAI. 2009)

El riesgo de infectarse con la bacteria neumocócica es mayor en los niños menores de 2

años por la incapacidad para responder a antígenos polisacáridos debido a la inmadurez de su

sistema inmune, así como también en niños de 5 a 10 años ya que esta población está más

expuesta a relacionarse con multitudes de gentes infectadas y en individuos

inmunodeprimidos. Otros factores de riesgo de meningitis neumocócica son los niños con

bajo peso al nacer o pretérminos con peso menor a 2.500 gramos o menos de 37 semanas de

4

gestación. El padecimiento de insuficiencia renal crónica o síndrome nefrótico, la infección

por el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) asintomática o sintomática, las

inmunodeficiencias y otras enfermedades crónicas del corazón, pulmones e hígado suponen

un mayor riesgo de padecimiento de enfermedad neumocócica invasiva. (MSP,PAI. 2009)

Aunque el Neumococo ha sido bastante sensible a numerosos antibióticos, incluyendo

penicilinas, cefalosporinas, tetraciclinas, cloranfenicol, vancomicina, etc., uno de los factores

que hacen indispensable la utilización de la vacuna es el aumento de cepas resistentes a los

antibióticos dado el uso indiscriminado de éstos, lo que aumenta la agresividad y

patogenicidad del virus aumentando las complicaciones y muertes originadas por esta

bacteria. Siendo en estas dos últimas décadas que ha desencadenado la aparición de

neumococos resistentes a algunos antibacterianos, e incluso cepas multiresistentes.

(MSP,PAI. 2009)

1.2.- UBICACIÓN

En Ecuador, las infecciones de vías respiratorias continúan siendo una de las 10 primeras

causas de morbilidad y mortalidad en los menores de cinco años de edad. En las infecciones

de origen comunitario los principales agentes etiológicos son virus y bacterias. Dentro de las

bacterias, Streptococcus pneumoniae y Moraxella catharralis son las que se aíslan con mayor

frecuencia. (SOLORZANO.S, 2015). En niños menores de cinco años, S. pneumoniae causa

infecciones como otitis media, sinusitis o neumonía, que pueden ir acompañadas de otras

enfermedades invasoras como meningitis y bacteriemia. (ECHANIZ.A, 1997)

El S. pneumoniae habita en la faringe y nasofaringe de sujetos sanos. La frecuencia de

portadores es variable pero se estima entre 5 a 75%. (GRAY.B, 1997) La colonización inicia

en la etapa de lactancia y la cantidad de portadores disminuye en forma inversamente

proporcional a la edad; se encuentra de 38 a 45% en menores de cinco años, de 29 a 39% en

niños de 5 a 9 años y de 9 a 25% en niños de 9 a 14 años. (LEIBERMAN.A, 1999)

Los estudios de desarrollo nasofaríngeo han sido utilizados para conocer, desde el punto

de vista epidemiológico, tanto la frecuencia como los serotipos que dominan en una

población. Se ha reconocido que existe variación de los serotipos en cada país. Existen 90

serotipos de S. pneumoniae, de los cuales casi la mitad han sido implicados en distintas

5

enfermedades, lo que ha complicado el desarrollo de una vacuna con cobertura total de los

serotipos. (LOPEZ.J, 1995)

Recientemente en diversos países del mundo y en Ecuador se está utilizando una vacuna

conjugada, que contiene trece serotipos de S. pneumoniae de mayor predominio en

enfermedad invasora (meningitis, neumonía, bacteriemia) y otitis media aguda en Estados

Unidos de América (EUA), Canadá y algunos países europeos. (MIRANDA.N, 1995)

Después de la introducción de la vacuna conjugada heptavalente (PCV-7), se han descrito

cambios en la epidemiología de los diferentes serotipos de neumococo, consistentes en la

disminución del estado de portador nasofaríngeo y la incidencia de enfermedad neumocócica

invasiva (ENI), por los serotipos contenidos en la PVC-7.Debido a la vacunación masiva de

niños con PCV-7 se observa la proliferación de nuevos serotipos emergentes como

consecuencia de un fenómeno de sustitución o de cambio capsular. (DAGAN.R, 1998)

En Ecuador el Ministerio de Salud Pública estableció una prevalencia de 22,9 por 100000

habitantes en niños que fueron atendidos en hospitales de la red Pública de Salud, esto es una

alarma en la integridad de la niñez ya que no se sabe si existan nuevos brotes o no se esté

inmunizando como es correcto. (MSP,PAI. 2009)

1.3.- FORMULACIÓN DEL PROBLEMA

¿Cuáles son los niveles de anticuerpos IgG contra neumococo en niños de 7 a 9 años de

edad vacunados contra neumococo mediante técnica de Elisa en la escuela Plinio Robalino

Cruz durante el año 2014?

6

1.4.- OBJETIVOS

1.4.1.- Objetivos generales

Determinar los niveles de anticuerpos IgG contra la bacteria neumococo en niños de 7

a 9 años de edad en la Escuela Plinio Robalino Cruz mediante técnica de ELISA, en el

Laboratorio de Genética de la Facultad de Ciencias Médicas.

1.4.2.- Objetivos específicos

Identificar el número de casos de neumococo en niños de 7 a 9 años.

Conocer cuántas dosis de vacuna existe en dichos niños contra Neumococo mediante

encuestas.

Determinar los niveles de anticuerpos IgG contra neumococo el los niños de 7 a 9

años de edad.

Elaborar un folleto informativo de la importancia de vacunar a los niños con el

número de dosis adecuadas.

1.5.- Justificación

Según datos de la OMS, las enfermedades causadas por S. neumoniae constituyen

un importante problema mundial de salud pública. En el año 2000, se produjeron alrededor

de 14,5 millones de sucesos de enfermedad neumocócica grave, lo que ocasionó cerca

de 826.000 muertes en niños de 1 a 59 meses, de los que unos 91.000 eran niños VIH-

positivos. Las muertes en los niños VIH- negativos, más del 61% se produjo en diez países

africanos y asiáticos (India 27%, China 12%, Nigeria 5%, Pakistán 5%, Bangladesh 4%,

Indonesia 3%, Etiopía 3%, Congo 3%, Kenya 2%, y Filipinas 2%). En 2007, la

OMS recomendó ya el uso de vacunas contra el neumococo en todos los países, insistiendo

en la más alta prioridad para aquellos países con altas tasas de neumonía secundaria y de

mortalidad en menores de cinco años. (SUAREZ.M, 2013)

7

Como su nombre indica, el Streptococcus pneumoniae o Neumococo es el agente

etiológico de las infecciones neumocócicas. El microorganismo es capaz de escapar a la

fagocitosis y a la acción del complemento. Las cepas no capsuladas no son patógenas. Así

mismo es el polisacárido capsular el que permite la clasificación del neumococo en 90 tipos

serológicos distintos y es también responsable de la creación de los anticuerpos protectores,

confiriendo una inmunidad que es característicamente tipo específica, de manera que la

infección o vacunación con un tipo, no protege de la infección por los restantes.

(SUAREZ.M, 2013)

El S. pneumoniae tiene predilección por el tracto respiratorio, con eventual invasión, por

continuidad o a distancia, gracias a su capacidad bacteriana. Las características clínicas de la

infección están determinadas por el sitio de infección y las características del huésped y del

agente, variando entre la portación por individuos sanos o la faringitis leve hasta la

septicemia fulminante o la meningitis. Habitualmente se separan en infecciones invasoras o

sistémicas (neumonía, septicemia, meningitis, etc.) y localizadas o no invasoras (otitis media,

sinusitis, conjuntivitis, artritis, etc.). (SUAREZ.M, 2013)

Las infecciones neumocócicas presentan una contagio continuo, siendo más frecuente

en países en vías de desarrollo y en grupos socioeconómicos bajos. Pero por lo general es

de aparición esporádica en países desarrollados, aunque pueden surgir epidemias en grupos

cerrados. Su incidencia es máxima en invierno y primavera en zona templadas, lo que se

corresponde lógicamente con la forma de transmisión (aérea, de persona a persona). Las

epidemias de gripe, por la alteración de la mucosa respiratoria y otros factores, predisponen

una mayor incidencia de enfermedad neumocócica. (SUAREZ.M, 2013)

Se han descrito epidemias recurrentes en Sudáfrica y existen otros lugares con elevada

incidencia, como Nueva Guinea, probablemente debido a un elevado número de portadores y

la existencia de un estrecho contacto interpersonal. (SUAREZ.M, 2013)

En EEUU, la tasa anual de incidencia de infecciones neumocócicas en 1997 fue de 15-30

casos/100.000 habitantes, elevándose a 50-83/100.000 en mayores de 65 años y hasta

160/100.000 en menores de 2 años. En adultos predomina la neumonía bacteriémica pero en

los niños el sitio primario de infección fue más variable. En 2007 las estimaciones fueron de

40.000 casos y 4.400 muertes por enfermedad neumocócica invasiva (bacteriemias y

8

meningitis) en 2008 la incidencia global de la enfermedad neumocócica invasiva.

(SUAREZ.M, 2013)

En Europa la incidencia de enfermedad invasiva por neumococo oscila entre los 0,4 casos

por 100.000 habitantes y los 20 casos por 100.000. Debe tenerse en cuenta que las

estrategias de vigilancia son muy heterogéneas según regiones de Europa, lo que ha

dificultado la comparación de datos. Ya en 2010, con grandes mejoras en la vigilancia, se

dispone de más y mejores datos de incidencia de esta enfermedad. Durante ese año se

registraron 21.565 casos de enfermedad neumocócica invasiva en el total de los 26 países.

Las tasas de notificación más altas fueron entre los niños menores de un año y en los niños de

5 años o más. (SUAREZ.M, 2013)

En el Ecuador entre los años 1999 y 2003 existen aproximadamente 14.000 defunciones

por causas de enfermedades agudas del tracto respiratorio y solo de las neumonías un

(90.25%), siendo esta patología la que define el comportamiento de las enfermedades agudas

del tracto respiratorio. Ministerio de Salud Publica. (MSP. 2008).

9

CAPITULO II

2.- MARCO TEÓRICO

2.1.- MARCO LEGAL

Según la Constitución de la República del Ecuador del 2008, Capitulo segundo, Derechos del

Buen Vivir Sección Séptima: Salud, Artículo 32:

“La salud es un derecho que garantiza el Estado, cuya realización se vincula al ejercicio de

otros derechos, entre ellos el derecho al agua, la alimentación, la educación, la cultura física,

el trabajo, la seguridad social, los ambientes sanos y otros que sustentan el buen vivir.

El Estado garantizara este derecho mediante políticas económicas, sociales, culturales,

ambientales; y el acceso permanente, oportuno y sin exclusión a programas, acciones y

servicios de promoción y atención integral de salud, salud sexual y salud reproductiva. La

presencia de los servicios de salud se regirá por los principios de equidad, universalidad,

solidaridad, interculturalidad, calidad, eficacia, precaución y bioética, con enfoque de género

y generacional”

Por lo tanto el derecho a la salud debe aplicarse a todos los ciudadanos sin preferencia

alguna, todos deben ser atendidos por igual y sobre todo un trato especial, ya que los

pacientes son vulnerables y ello ayudara al paciente a sentirse bien. (MSP, 2008)

2.2.- AGENTE NEUMOCOCO

El neumococo es un tipo de microorganismo estreptocócica. Los individuos se infectan a

través de la relación con personas que están contagiadas o con personas que no están

enfermas pero que llevan la bacteria en la parte extrema de su nariz, los contagios

neumocócicos pueden ser leves o graves. (QUINTANA.D, 2015)

El neumococo causa otitis, sinusitis y neumonía; y la causa más común de meningitis

bacteriana (tras el meningococo). Este microorganismo se encuentra en los individuos y que

conviven con ellos en el día a día. Afecta a todas las edades aunque la generalidad de los

casos se da entre los mayores de 60 años. Además, las personas afectadas de muchas

http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/streptococcalinfections.html

10

enfermedades crónicas y de inmunodeficiencias tienen un riesgo alto de padecer la infección.

(FARRE.G, 2012)

IMAGEN N° 1: Bacteria Neumocócica

Fuente: http://www.losmicrobios.com.ar/microbios/?page_id=1292

CONSULTADO EN: 25/06/2015

2.3.- ESTRUCTURA

2.3.1.- ESTRUCTURA CELULAR DEL NEUMOCOCO

Es un microorganismo Gram positivo de 1,2-1,8 µm de longitud, que presenta una forma

ovalada y el extremo distal como punta de lanza. Es inmóvil, no forma endosporas, y es un

miembro alfa-hemolítico del género Streptococcus. Generalmente, se muestra en forma de

diplococo, por lo que fue denominado Diplococcus pneumoniae. (TORRES.C, 2014)

El neumococo es un patógeno humano autor de un gran número de infecciones

(neumonía, sinusitis, peritonitis) y de procesos invasivos severos (meningitis, sepsis),

especialmente en ancianos, niños y personas inmunodeprimidas. Es la principal bacteria

causante de Neumonia adquirida en la sociedad. (BAUTISTA.G, 2011)

http://www.losmicrobios.com.ar/microbios/?page_id=1292

http://es.wikipedia.org/wiki/Streptococcus#Estreptococo_Alfa-Hemol.C3.ADtico

http://es.wikipedia.org/wiki/G%C3%A9nero_(biolog%C3%ADa)

http://es.wikipedia.org/wiki/Streptococcus

http://es.wikipedia.org/wiki/Neumon%C3%ADa

http://es.wikipedia.org/wiki/Sinusitis

http://es.wikipedia.org/wiki/Peritonitis

http://es.wikipedia.org/wiki/Meningitis

http://es.wikipedia.org/wiki/Sepsis

11

Metabólicamente el neumococo es una bacteria microaerófilo, catalasa negativo, que se

encuentra dentro del grupo de los microorganismos ácido láctica, ya que este mezclado; es el

importante producto resultante de la fermentación de carbohidratos. (PEÑA.S, 2014)

La diferencia morfológica más repetidamente aislada en personas infectadas con

neumococo es la forma “lisa” de Griffith, que se presenta encapsulada, con los bordes lisos y

cuyos cultivos tienen una apariencia de tipo mucosa. Fue esencialmente Griffith, quien, en

1928, dio a conocer que la cápsula es el primordial factor de virulencia. (OMS, 2013)

2.3.1.1.- LA CÁPSULA

La cápsula es la parte más externa y el primer factor de virulencia del neumococo. Está

formada, por polisacáridos cargados negativamente que envuelven a la célula y que se

conservan unidos a la superficie del germen, mediante enlaces covalentes. (PASTOR.M,

2007)

Existen 92 serotipos capsulares distintos conocidos hasta el momento con una

composición química compleja e inconstante. (PIO.R, 2004)

La cápsula no parece tener nada que ver en los fenómenos de adherencia, invasión o

inflamación, es fundamental para la virulencia del germen debido a su capacidad para

encerrar el reconocimiento de neumococo por parte del hospedador, impidiendo así

su fagocitosis. (RUBIO.T, 2011)

IMAGEN N° 2: Estructura de la pared del neumococo

http://es.wikipedia.org/wiki/Factor_de_virulencia

http://es.wikipedia.org/wiki/Polisac%C3%A1ridos

http://es.wikipedia.org/wiki/Virulencia

http://es.wikipedia.org/wiki/Fagocitosis

12

Fuente:http://lacienciaysusdemonios.com/2010/11/19/plagas-del-siglo-xxi-el-

%E2%80%9Cneumococo%E2%80%9D/


2.3.1.2.- PARED CELULAR

La pared celular envuelve a la membrana citoplasmática y concede a la bacteria una

morfología típica. La estructuras, a modo de exoesqueleto, sirve a las bacterias como

elemento de ajuste al medio externo, protegiéndola de su posible lisis, ya sea osmótica o

mecánica. Además de ser el intermedio de intercambio de solutos entre el exterior y el

interior celular, la pared del germen sirve de punto de unión para toda una batería de

proteínas mezcladas en procesos de desarrollo y división celular, y en las interacciones de la

célula con el medio exterior. La pared desempeña un papel importante en los procesos de

población, adherencia, inflamación e invasión bacteriana. (MEDINA.Y, 2015)

La composición de la pared varía de unos géneros a otros. En el caso de neumococo está

constituida por un armazón de cadenas de peptidoglicano (mureína) y los ácidos teicoicos y

lipoteicoicos asociados a ellas, formando este conjunto una organización multilaminar con un

espesor comprendido entre 15-40 nm. (PROAÑO.U, 2014).

Los importantes componentes de su pared celular son el peptidoglicanos, el ácido teicoico

y la integridad de la pared está dada por la presencia de cadenas laterales peptídicas entre

cogidos por acción de enzimas como las transpeptidasas y carboxipeptidasas. Estas enzimas

son inactivas por los antibióticos B – lactamicos. (BELLO.A, 2007)

2.3.2.- ESTRUCTURA ANTIGENICA

El polisacárido capsular es inmunológicamente distinto y permite la diferencia en más de

80 tipos sexológicos de neumococos con antisueros específicos. (RED.O, 2014)

La parte somática del neumococo tiene una proteína M, y un carbohidrato C que es

frecuente para todos los neumococos. El carbohidrato C puede ser precipitado por la proteína

C reactiva, substancia presente en el suero de pacientes con procesos inflamatorios,

neoplásicos. (RED.O, 2014)

http://lacienciaysusdemonios.com/2010/11/19/plagas-del-siglo-xxi-el-%E2%80%9Cneumococo%E2%80%9D/

http://lacienciaysusdemonios.com/2010/11/19/plagas-del-siglo-xxi-el-%E2%80%9Cneumococo%E2%80%9D/

http://es.wikipedia.org/wiki/Peptidoglicano

13

IMAGEN N° 3: Estructura Antigénica Del Neumococo

Fuente: http://slideplayer.es/slide/37543/


2.4.- RESERVORIO

El reservorio del neumococo es el hombre. Esta bacteria forma parte de la flora frecuente

de la rinofaringe de las personas sanas, durante el invierno y el principio de la primavera. Los

niños de edad preescolar están infectados entre un 30 y 60%, los escolares el 20- 30% y los

niños mayores un 15-20%. Los adultos que viven con niños preescolares están colonizados

más comúnmente que los que no lo hacen. ( POMA.D, 2015)

2.5.- PATOGENIA

Luego de la colonización de la nasofaringe se produce una infección, si las bacterias pasan

a zonas adyacentes como: senos paranasales, trompa de Eustaquio; y su expulsión se niega

por edema de la mucosa que produce el mismo germen puede producir meninguitis.

(BELLO.A, 2007)

También produce neumonía si la bacteria se inhala por los bronquiolos o los alveolos y no

son eliminados. Los que no se aparten pueden ser por la presencia de infección vírica, humo

de cigarrillo u otra sustancia toxica que aumenta la cantidad de mucus y la disminución de la

acción ciliar. (BELLO.A, 2007)

http://slideplayer.es/slide/37543/

14

Luego que las bacterias llegan a una zona no usual activan el complemento por la vía

clásica y alterna, se producen citocinas y la afinidad de neutrófilos y así de fagocitosis, pero

la capsula es resistente a ella. Y como no puede ser fagocitada empieza la infección, la cual

se puede esparcir a espacios articulares, meninges, cavidad peritoneal. (POZO.F, 2005)

La patogenicidad de este germen está dada por el avance de la fagocitosis y de estimular

inflamación y daño de tejidos, todo dado por su encapsulación, ya que los neumococos no

encapsulados nunca causan enfermedades invasoras. (BELLO.A, 2007)

Los síntomas de la enfermedad se deben a la inflamación de los tejidos que producen.

Cuando ataca el sistema nervioso central en la meningitis produce lesión neuronal.

(HOLGER.J, 2012)

También en la patogenicidad actúa la autolisina, que al causar la lisis del microorganismo

esta deja sus contenidos y aumenta la reacción de inflamación. También en la meningitis se

liberan aminoácidos excitadores por el tejido neuronal lo que ayuda a las lesiones de esta

enfermedad. (BELLO.A, 2007)

Del 40 al 70 % de las personas normales son transportadores asintomáticos de

neumococos. La patogenicidad de la bacteria depende de sus propiedades invasivas y está

relacionada con la presencia de su cápsula, que frena la alimentación de los organismos

encapsulados por los fagocitos. (RED.O, 2014)

Los neumococos penetran por las vías respiratorias superiores a partir de las secreciones

respiratorias de individuos infectados. El neumococo es el importante agente causal de

neumonías bacterianas. También produce meningitis, septicemia e infecciones del oído medio

(otitis) y de los senos paranasales (sinusitis). (RED.O, 2014)

2.6.- MECANISMOS DE TRANSMISIÓN

Se transmite de persona a persona por las secreciones (gotitas) respiratorias, estando los

pacientes más susceptibles a las infecciones neumocócicas graves e invasivas aquellos con

linfomas o mielomas, sida y otras deficiencias inmunológicas. (LONGO.D, 2011)

15

Se considera un microorganismo esencialmente invasor debido al polisacárido capsular,

del que depende su virulencia por la capacidad de esquivar a la fagocitosis y a la acción del

complemento. (LONGO.D, 2011)

El neumococo puede contaminar las vías respiratorias superiores, causando cuadros de

otitis media y sinusitis. También contagia las vías respiratorias inferiores por microaspiración

desde la orofaringe, alcanzando la cavidad pleural y el corazón. Si las defensas pulmonares

no son capaces de parar la infección, esta puede alcanzar hasta los ganglios linfáticos y,

puede atacar el torrente sanguíneo. (POMA.D, 2015).

2.7.- SINTOMATOLOGIA

La sintomatología del agente neumococo son: dificultad de tragar, dolor de garganta,

fiebre y ocasionalmente náuseas, vómitos y manifestaciones intestinales.

Signos: Aumento de tamaño de las amígdalas, inflamación de la faringe y amígdalas

(enrojecimiento de la faringe y amígdalas), es habitual observar las amígdalas recubiertas por

un exudado faringoamigdalar (exudado blanco amarillento con predomino de

polimorfonucleares) y ganglios regionales aumentados de tamaño y dolorosos a la palpación.

(VALLEJO.M, 2007)

Diagnóstico Diferencial: Virus Epstein Barr, Adenovirus, Neisseria Gonorrhoeae

(VALLEJO.M, 2007)

2.8.- CLÍNICA PRONOSTICO

El pronóstico del paciente depende de qué tan rápido reciba el tratamiento.

Aproximadamente 1 de cada 5 personas que contraen esta enfermedad morirá a causa de ella.

Entre el 25 y el 50% tendrá dificultades serias del cerebro y del sistema nervioso a largo

plazo (MUÑOZ.K, 2015)

2.9.- INMUNIDAD PARA EL NEUMOCOCO

El sistema innato constituye la primera respuesta en la protección del huésped, pues

constituye la respuesta más rápida a la invasión microbiana. Actúa para proliferar la infección

desde los primeros minutos a través de fagocitosis, activación de citoquinas y muerte

16

microbiana. Además, el sistema innato inicia y apoya a la inmunidad adaptativa.

(ZEPEDA.F, 2013)

2.9.1.- CÉLULAS DE LA INMUNIDAD INNATA

Las células alveolares tipo I y tipo II participan en la respuesta innata produciendo

citoquinas y quimioquinas durante la neumonía. Los macrófagos alveolares son esenciales en

la fagocitosis de esta bacteria y en la coordinación de la respuesta innata a la infección.

(ZEPEDA.F, 2013)

Los neutrófilos son principales para conseguir la expulsión de la bacteria y para la

terminación de la neumonía. La destreza del neutrófilo para luchar contra el neumococo, se

puede decir que es la más importante, junto con las quimiotaxis y fagocitosis puede producir

la muerte microbiana. La respuesta del sistema inmune innato aumenta la fabricación de

neutrófilos desde la médula ósea y estimula la liberación de formas maduras e inmaduras a la

circulación. (ZEPEDA.F, 2013)

2.9.2.- COMPLEMENTO

El sistema del complemento comprende más de 30 proteínas séricas, cuando estas son

activadas ayudan a la defensa del huésped al realizar sus funciones de quimiotaxis y acción

bactericida (este último es el ataque de membrana). Las tres vías de activación del

complemento descritas: (ZEPEDA.F, 2013)

a) La vía clásica es activada por anticuerpos que se unen a un antígeno. (ZEPEDA.F,

2013)

b) La vía alternativa es activada continuamente en bajos niveles pero sólo es amplificada

sobre superficies extrañas. (ZEPEDA.F, 2013)

c) La vía de la lectina es activada por reconocimiento de la lectina ligadora de manosa que

se une a los carbohidratos sobre la superficie microbiana. (ZEPEDA.F, 2013)

La importancia del complemento en la defensa del huésped contra el neumococo es

reconocido por las severas infecciones sufridas cuando existen defectos congénitos de este

sistema. De este modo, se producen infecciones neumocócicas recurrentes a lo largo de la

vida. Este hecho se ve en el laboratorio a través de estudios experimentales, donde se aprecia

17

que la vía clásica del complemento es la más importante en la protección contra la infección

del neumococo. La vía alternativa también contribuiría, pero su rol en la defensa contra el

neumococo sería menor. (ZEPEDA.F, 2013)

En este sentido la acción protectora de la vacuna, al estimular la producción de anticuerpos

específicos contra el neumococo, facilitaría la activación del complemento por la vía clásica

sobre la superficie bacteriana. Sin embargo, el neumococo ha desarrollado diversos

mecanismos de evasión a la acción del complemento. La cápsula del neumococo evita la

fagocitosis mediante diferentes mecanismos, como la disminución de la activación de la vía

clásica y por reducción de la activación de la vía alternativa. Cuando se produce estos efectos

combinados, la cápsula neumocócica impide la fagocitosis. Además, la cápsula evitaría que la

bacteria sea atrapada en el mucus y la trampa de los neutrófilos. (ZEPEDA.F, 2013)

2.10.- SINDROME DE NEUMOCOCO

La tríada de neumonía, endocarditis y meningitis neumocócica es conocida como

síndrome de Austrian, cuyo nombre se debe al Dr. Robert Austrian (1916-2007), que

describió la tríada en una serie de 8 pacientes en el año 1957. (SOLORZANO.S, 2010)

Antes del descubrimiento de la penicilina, el neumococo era una de las causas más

comunes de endocarditis. (SOLORZANO.S, 2010)

La puerta de ingreso del síndrome de Austrian son las vías respiratorias. El síndrome de

Austrian se caracteriza por afectar principalmente a las cavidades del corazón.

(SOLORZANO.S,2010)

2.11.- DIAGNOSTICO

2.11.1.- TINCIÓN DE GRAM Y CULTIVO DE MUESTRAS BIOLÓGICAS

El análisis de los contagios se ha fundado tradicionalmente en el cultivo microbiológico de

muestras (gold standard o patrón oro), antecedidas por la tinción de Gram (de esputo en el

caso de la neumonía y del LCR en la meningitis, así como del hemocultivo en ambos). Las

muestras biológicas se deben conseguir idealmente antes de iniciar el tratamiento antibiótico.

(MARTINEZ.C,2014)

18

La sensibilidad de los hemocultivos es baja, alrededor de 20% en niños. Los hemocultivos

positivos son más frecuentes en los casos de meningitis Neumocócica. La tinción de Gram

más el cultivo de LCR sirven para determinar la mayoría de los casos de meningitis

neumocócica. (MARTINEZ.C, 2014)

2.11.2.- TÉCNICAS MOLECULARES: TEST DE AMPLIFICACIÓN DE ADN (PCR)

Las técnicas fundadas en la amplificación de ADN, como la PCR (polymerase chain

reaction o reacción en cadena de la polimerasa) tienen cada vez más importancia como

herramientas diagnósticas. Sus ventajas son que pueden descubrir mínimas cantidades de

ADN de patógenos microbianos, se afectan menos por el uso primero de antibióticos y

proporcionan resultados en poco tiempo (horas). La técnica de PCR puede ser cualitativa y

cuantitativa (PCR a tiempo real). La PCR se puede realizar en sangre o en otros fluidos

corporales como son: esputo, saliva. En sangre se puede realizar en sangre fresca con EDTA.

(PATIÑO.S, 2000)

En niños la PCR, en esputo, ofrece una baja especificidad y una elevada posibilidad de

obtener falsos positivos por contaminación, añadido a la dificultad de obtener esputos.

(PATIÑO.S,2010)

Las ventajas de las técnicas moleculares son su elevada especificidad, permiten obtener el

serotipo y se obtiene el resultado en horas. Los inconvenientes son posibilidad de falsos

positivos por detectar microorganismos no infectivos. Además exigen laboratorios y personal

técnico, utilizable sólo en algunos centros, y es un método muy costoso.

(MARTINEZ.C,2014)

2.11.3.- TÉCNICA DE ELISA

2.11.3.1.- HISTORIA

1966 Avrameas y Uriel pensaron la idea de marcar antígenos y anticuerpos con

enzimas. (FERNANDEZ.N, 2015)

1966 Nekane, Pierce conjugaron enzimáticamente anticuerpos para localizar

antígenos víricos en cortes de tejidos de animales. (FERNANDEZ.N, 2015)

19

1971, Engvall y Perlmann describieron el primer método de ELISA, como alternativa

al radioinmunoanalisis (RIA), para titular inmunoglobulinas. (FERNANDEZ.N,

2015)

1974, Voller utilizó el método de la microplaca y propuso su uso para cuantificar

anticuerpos inducidos por enfermedades infecciosas. (FERNANDEZ.N, 2015)

1985, Primer Kit comercial para detectar la enfermedad de Aujeszky (rabia)

(FERNANDEZ.N, 2015)

2.11.3.2.- FUNDAMENTO Y TIPOS DE ELISA.

Según Fernández,.N.(2015) la técnica de ELISA se basa en el uso de antígenos o

anticuerpos marcados con una enzima, de forma que los conjugados resultantes tengan

actividad tanto inmunológica como enzimática. Al estar uno de los componentes (antígeno o

anticuerpo) marcado con una enzima, la reacción antígeno-anticuerpo quedará inmovilizada

y, por tanto, será revelada mediante la adición de un substrato especifico que al actuar la

enzima producirá un color observable a simple vista o cuantificable mediante el uso de un

espectrofotómetro o un colorímetro.

Los diferentes tipos de ELISA son los que se enumeran a continuación:

ELISA Directo.

ELISA Indirecto.

ELISA sándwich o Doble.

ELISA Heterólogo.

ELISA competitivo

2.11.3.3.- ELISA DIRECTO.

Según Fernández,.N. (2015) consta de las siguientes etapas:

• Fijación al soporte insoluble de antígenos específicos para los anticuerpos objeto de

estudio.

Lavado para eliminar los antígenos fijados o no fijados.

• Adición de anticuerpos marcados con una enzima; si los anticuerpos reaccionan con los

antígenos, el complejo quedará solubilizado.

20

Lavado para eliminar los anticuerpos marcados que no hayan reaccionado.

• Adición de un substrato sobre el que sea capaz de actuar la enzima marcadora.

Lectura visual o colorimétrica del producto final coloreado.

2.11.3.4.- ELISA INDIRECTO.


• Fijación al soporte insoluble de antígenos específicos para los anticuerpos objeto de

estudio.

Lavado para eliminar los antígenos fijados o no fijados.

• Adición del suero problema, de tal forma que sus anticuerpos reaccionarán

específicamente con los antígenos fijados al soporte.


• Adición de anti-anticuerpos conjugados con una enzima, los cuales reaccionan con los

anticuerpos específicos añadidos en el paso anterior y que se encuentran fijados a los

antígenos.

Lavado para eliminar los anti-anticuerpos marcados que no hayan reaccionado.

• Adición de un substrato sobre el que sea capaz de actuar la enzima marcadora. Se puede

parar la reacción si se desea.

• Lectura visual o colorimétrica del producto final coloreado.

2.11.3.5. - ELISA SÁNDWICH


• Fijación al soporte insoluble de anticuerpos específicos del agente patógeno a detectar.

Lavado para eliminar los anticuerpos fijados o no fijados.

• Adición de la muestra problema de tal forma que si está presente el agente patógeno de

diagnóstico (antígeno), reaccionará específicamente con los anticuerpos fijados al soporte.

21

Lavado para eliminar los antígenos que no hayan reaccionado y los restos de la muestra

no fijados.

• Adición de anticuerpos específicos del antígeno a detectar (deben tener un determinante

antigénico diferente de los anticuerpos) conjugados con una enzima, los cuales reaccionan

con los antígenos añadidos con la muestra problema y que se encuentran fijados a los

anticuerpos.




2.11.3.6.- ELISA HETEROGÉNEO



Lavado para eliminar los anticuerpos fijados o no fijados.

• Adición de la muestra problema de tal forma que si está presente el agente patógeno de

diagnóstico (antígeno), reaccionará específicamente con los anticuerpos fijados al soporte.

Lavado para eliminar los antígenos que no hayan reaccionado y los restos de la muestra no

fijados.

• Adición de anticuerpos específicos del antígeno a detectar), los cuales reaccionan con los

antígenos añadidos con la muestra problema y que se encuentran fijados a los anticuerpos.

Lavado para eliminar los anticuerpos que no hayan reaccionado.

• Adición de anticuerpos conjugados con una enzima anti-anticuerpos empleados en el

paso anterior.

Lavado para eliminar los anti-anticuerpos marcados que no hayan reaccionado.


22


2.11.3.7.- ELISA COMPETITIVO.



Lavado para eliminar los anticuerpos fijados deficientemente o no fijados.

• Adición en concentración conocida de una mezcla de antígenos del anticuerpo utilizado

en el paso anterior, marcados con una enzima y antígenos desconocidos objeto de estudio.

Paralelamente, añadir únicamente antígenos del anticuerpo usado en el paso anterior,

marcados con una enzima.

Lavar para eliminar los antígenos que no hayan reaccionado.


• Lectura visual o colorimétrica del producto final coloreado de ambas pruebas y comparar

los resultados.

Si las lecturas de ambas pruebas son similares, el antígeno a estudio no tienen nada que ver

con los anticuerpos empleados para tapizar el soporte. Si hay diferencia en las lecturas de

ambos pocillos, el antígeno objeto de estudio, está relacionado serológicamente con el

anticuerpo empleado para tapizar el soporte y la diferencia de densidad óptica, es

proporcional a la concentración del antígeno problema en la muestra.

La fase sólida debe ser de un tipo que permita un fácil manejo (especialmente en los

procesos de lavado) y la creación de la unión de antígenos o anticuerpos sobre su superficie.

Las microplacas de 96 pocillos y un volumen de 350µL son especialmente ventajosos

para procesar un elevado número de muestras y una vez tapizadas, el material inmovilizado

permanece reactivo mucho tiempo siempre que se mantenga seco y a baja temperatura.

Normalmente se utilizan microplacas de poliestireno de fondo plano que pueden adquirirse

estériles y con o sin tapa.

23

IMAGEN N° 4: Microplacas De Poliestireno De 96 Pocillos

Fuente: http://www.cultek.com/inf/otros/soluciones/Soluciones-ELISA-protocolos.pdf


Las técnicas de ELISA se realizan mediante la adición secuencial de todos los reactivos

necesarios separados por etapas de lavado. Cada una de las operaciones puede realizarse

manualmente con micropipetas o con equipamiento para la automatización de todas y cada

una de las etapas. Esta completa automatización se justifica por la necesidad de procesar y

analizar un gran número de muestras y necesitar una elevada repetición de resultados.

IMAGEN N° 5: Lavador De Microplacas De 96 Pocillos

Fuente: http://www.cultek.com/inf/otros/soluciones/Soluciones-ELISA-protocolos.pdf


http://www.cultek.com/inf/otros/soluciones/Soluciones-ELISA-protocolos.pdf


24

2.11.3.8.- SOLUCIÓN DE LAVADO.

Solución salina con Tween

ClNa ................................................... 8,5gr

Tween 20 ........................................... 0,5mL

Agua destilada .................................... 1000mL

2.11.3.7.- CONJUGADOS.

La enzima escogida como marcador debe unirse fácilmente a antígenos y anticuerpos,

encontrarse en estado puro a un precio razonable y tener un substrato cromogénico

conveniente y de fácil preparación. Las enzimas más utilizadas son fosfatas alcalina,

peroxidasa de rábano y ß-galactosidasa. (FERNANDEZ.N, 2015)

Las operaciones de marcado o conjugación, llevan implícitas dos etapas:

• Purificación de los anticuerpos a partir de un antisuero bruto mediante una precipitación

generalmente salina de las proteínas del antisuero. (CULTEK.A,2015)

• Marcado de los anticuerpos con la enzima mediante el uso de un agente puente que

normalmente suele ser el glutaraldehído o el del periodato sódico. (CULTEK.A,2015)

2.11.3.9.- VENTAJAS

Estable cuando se almacena y manipula adecuadamente.

Puede almacenarse a más de 4 grados centígrados durante más de 6 meses.

Disponible como enzima libre o como conjugado.

Bastante barata.

Tamaño pequeño.

Amplia variedad de sustratos comerciales disponibles. (CULTEK.A,2015)

25

2.11.3.10.- DESVENTAJAS

Incompatible con bastantes estabilizantes.

La peroxidasa y algunos metales interfieren en su actividad. (CULTEK.A,2015)

2.12.- EPIDEMIOLOGIA

La enfermedad neumocócica constituye una de las diez primeras causas de muerte en los

países desarrollados. (PARRA.D, 2015)

La infección neumocócica es la causa de 40.000 muertes anuales en los EE.UU, cifra

superior a la de cualquier otra enfermedad bacteriana prevenible con vacunas. Se estima que

el 15-30% de todas las neumonías son debidas al neumococo, siendo el agente etiológico más

frecuente de las neumonías de origen comunitario. (PARRA.D, 2015) Los niños pequeños de

edad entre los recién nacidos hasta los 10 años son los más susceptibles para contraer esta

bacteria y asi producir una alta tasa de mortalidad infantil. (PARRA.D, 2015)

La máxima incidencia de las infecciones neumocócicas tiene lugar en los niños menores

de 10 años por la incapacidad para responder a antígenos polisacáridos debido a la inmadurez

de su sistema inmune. ( PARRA.D, 2015)

2.12.1.- EPIDEMIOLOGIA MUNDAL

Según la Organización Mundial de la Salud (OMS), la neumonía provoca la muerte de dos

millones de niños cada año, más defunciones que las causadas por el sida, la malaria y el

sarampión juntos. (OMS. 2013).

2.11.2.- EPIDEMIOLOGIA DEL ECUADOR

Según el Ministerio de Salud Pública del Ecuador (MSP), de 14.001 defunciones por

causas de enfermedades agudas del tracto respiratorio entre los años 1.999-2003 se

diagnosticó que el resfriado común e influenza tiene un (0.93%) y el (90.25%) en neumonías.

26

TABLA N° 1. DEFUNCIONES TOTALES POR AÑO Y GRUPO DE EDAD, SEGÚN

CAUSA DE MUERTE NEUMONÍAS. ECUADOR 1999 A 2003

Fuente:https://aplicaciones.msp.gob.ec/salud/archivosdigitales/documentosDirecciones/dnn/a

rchivos/lineamientos%20t%c3%89cnicos%20operativos%20para%20la%20vacunaci%c3%9

3n%20contra%20la%20influenza%20estacional%20y%20neumococo%20de.pdf


La neumonía ha provocado la muerte de más de seis mil niños en el año 2003 como se

explica en la tabla N° 1, pues existe en nuestro país 36 serotipos de la bacteria neumococo

como se explica en la tabla N°2. (MSP. 2008).

Como se observa en dicha tabla en el año 2000 a 2005 se ha obtenido datos de 55

serotipos de neumococo y en el año 2011 se a erradicado 22 serotipos de el neumococo por lo

que se presenta 36 serotipos de estan dia a dia en personas portadoras transitando en en pais.

(MSP. 2008).

27

TABLA 2. DATOS DE SEROTIPOS DE NEUMOCOCO CORRESPONDIENTES A

ECUADOR (2005 – 2011)

Fuente: http://dspace.ucuenca.edu.ec/bitstream/123456789/22038/1/scopus%2071.pdf


2.13.- VACUNAS Y ANTIBIÓTICOS

Las vacunas se vienen utilizando en la prevención de las enfermedades neumocócicas

desde hace más de 30 años.

Dada la alta capacidad de reproducción de las bacterias del neumococo y a sus

mecanismos de resistencia a antibióticos, algunos niños pueden presentar resistencia a los

antibióticos, de modo que frente a una infección de 200.000 bacterias, un antibiótico puede

eliminar a 199.999 pero si queda una bacteria con capacidad de resistencia a ese antibiótico,

gracias a su maquinaria de replicación, en pocas horas habrá generado, nuevamente, millones

de bacterias resistentes a los antibióticos. (SALVADOR. F, 2014)

Saber cómo está constituida la capsula del neumococo es algo esencial para

desarrollar nuevas vacunas y antibióticos porque al conocer su estructura podemos diseñar

moléculas dirigidas directamente contra esta proteína (PcsB), esencial para la reproducción

del neumococo y evitar así que prolifere la infección de esta bacteria resistente.

(SALVADOR.F, 2014)

Existen disponibles 4 tipos de vacunas:

a) Vacuna elaborada a base de antígenos polisacáridos capsulares (23 valente).

http://dspace.ucuenca.edu.ec/bitstream/123456789/22038/1/scopus%2071.pdf

http://www.abc.es/salud/noticias/20140430/abci-resistencia-antibioticos-201404301421.html

28

b) Vacuna conjugada (7 valente).

c) Vacuna Conjugada (10 valente).

d) Vacuna Conjugada (13 valente). (BASTIDAZ.N, 2006)

2.13.1.- VACUNA NO CONJUGADA (23 VALENTE)

2.13.1.1.- INDICACIONES

La vacuna antineumocóccica no conjugada está indicada en niños a partir de los 2 años de

edad, que integran los grupos de alto riesgo de padecer enfermedad invasiva por

Streptococcus pneumoniae. (BASTIDAZ.N, 2006)

Mayores de 2 años con:

• Cardiopatía congénita

• Enfermedades pulmonares crónicas

• Diabetes mellitus

• VIH

• Leucemias

2.13.1.2.- INMUNIDAD

La eficacia protectora de la vacuna, se presenta a partir de los 15 días de aplicación. La

duración de la inmunidad se estima en 5 años, disminuyendo a 3 años en pacientes

inmunocomprometidos. Esto genera una respuesta inmunitaria; a través de anticuerpos tipo-

específicos que favorecen la fagocitosis y muerte de neumococos por células fagocitarias.

(BASTIDAZ.N, 2006)

2.13.1.3.- CONTRAINDICACIONES

Reacción alérgica grave (anafilaxia) algún componente de la vacuna. Está contraindicada

la revacunación antes de los 3 años de la dosis anterior. (BASTIDAZ.N, 2006)

29

2.13.2.- VACUNA CONJUGADA DE SIETE SEROTIPOS

Se han desarrollado vacunas utilizando la técnica de conjugar antígenos polisacáridos a

proteínas transportadoras. (BASTIDAZ.N, 2006)

Las proteínas utilizadas para este proceso son la toxina diftérica atenuada, membrana

externa de Neisseria meningitidis, toxoide diftérico o toxoide tetánico. (BASTIDAZ.N, 2006)

Estas vacunas han demostrado muy buena inmunidad para la mayoría de los serotipos

evaluados y eficacia protectora desde los 2 meses de edad, para infecciones invasivas

incluyendo neumonía y meningitis. Además, disminuyen la portación nasofaringea de

Streptococcus pneumoniae en los niños vacunados. Un conjugado 7-valente, que incluye los

serotipos polisacáridos 4, 6B, 9V, 14, 19F, 23F, fue aprobado en Estados Unidos y otros

países donde estos serotipos representan el 82 % de los causantes de infecciones invasivas.

Los niños recibieron una dosis a los 2, 4 y 6 meses y una dosis de refuerzo entre los 5 y 6

años de edad. La eficacia para prevenir infección invasiva fue mayor al 90 %, y del 6 % para

prevenir episodios de otitis media. (BASTIDAZ.N, 2006)

2.13.2.1.- INMUNIDAD

Se observó después de 3 o 4 dosis, una eficacia estimada frente a los serotipos específicos

de la vacuna del 94 al 97%. (BASTIDAZ.N, 2006)

2.13.2.2.- CONTRAINDICACIONES

Hipersensibilidad a algún componente de la vacuna. (BASTIDAZ.N, 2006)

2.13.3.- VACUNA ANTINEUMOCÓCICA CONJUGADA 13-VALENTE.

Esta vacuna ha incrementado los serotipos 1, 3, 5, 6A, 7F y 19A a la heptavalente.

(BERMUDEZ.O, 2008)

30

En relación a la decavalente, la inclusión del serotipo 6A, pero sobre todo el 3 y el 19A,

ofrecerá un gran beneficio especialmente en países en vías de desarrollo, donde el 19A tenga

un papel significativo. (BERMUDEZ.O, 2008)

El estudio de esta vacuna se basa en estudios de inmunidad y de no inferioridad frente a la

heptavalente, así como de seguridad y de compatibilidad con el resto de vacunas que se

administran en el calendario. Se comparó la inmunidad utilizando el test de ELISA para cada

serotipo de neumococo. (BERMUDEZ.O, 2008)Se comprobó una adecuada respuesta, con

elevación de los diferentes anticuerpos para los 13 serotipos incluidos.

Se comprobó una repuesta inmunitaria adecuada para todos los antígenos de la vacuna

combinada sin diferencias significativas entre los que recibieron la vacuna 13-valente.

(BERMUDEZ.O, 2008)

2.13.4.- VACUNA CONJUGADA DE 10 SEROTIPOS (PCV)

La vacuna pcv 10 fue introducida en el calendario básico de vacunación infantil 2010. La

vacuna PCV 10 es una vacuna conjugada frente a Streptococcus pneumoniae de los serotipos

1, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19F y 23F. Está constituida por polisacáridos de los serotipos

neumocócicos mencionados unidos covalentemente (conjugados) con proteína D de

Haemophilus influenzae. (TROYA.H, 2014).

La vacuna PCV 10 está indicada para la inmunización activa frente a enfermedad

invasora, neumonía y otitis media aguda causada por S. pneumoniae en lactantes y niños a

partir de las 6 semanas hasta los 10 años de edad. (TROYA.H, 2014).

El perfil de seguridad favorable de la PCV7 está bien establecido. Varios estudios han

revelado que la PCV10 y la PCV13 tienen perfiles de seguridad similares a los de la PCV7 en

lactantes y niños pequeños. (TROYA.H, 2014).

Cuando se considere apropiada la inmunización con una PCV y la PPV23 en una persona

inmunodeficiente de edad más de 2 años, la PCV debe administrarse siempre antes para

evitar la inducción de hiporeactividad, dejando un intervalo de al menos 2 meses hasta la

administración de la PPV23 de refuerzo. (TROYA.H, 2014).

31

La OMS recomienda la inclusión de las PCV en los programas de inmunización infantil de

todo el mundo. En particular, los países con una alta mortalidad infantil (es decir, una tasa de

mortalidad de los menores de 8 años > 50 muertes/1000 nacimientos) deberían conceder gran

prioridad a la introducción de estas PCV con múltiples componentes. OMS. (2013).

32

CAPITULO III

METODOLOGIA

3.1.- TIPO DE INVESTIGACION

El diseño de este estudio es descriptivo de corte transversal, realizado en 91 niños de 7 a

9 años vacunados contra el neumococo en la escuela Plinio Robalino Cruz durante el 2014.

A los cuales se realizó encuestas y se extrajo 5 cc de sangre para obtener suero para

realizar determinación de IgG contra Neumococo, la muestra se trasladó conservando la

cadena de frio al laboratorio de Genética de la Facultad de Ciencias Médicas donde se

procesó la muestra mediante técnica de ELISA en el Equipo ELISYS Uno.

3.2.- NIVELES DE INVESTIGACION

Este estudio tendrá un nivel descriptivo de corte transversal.

3.3.- TECNICAS E INSTRUMENTOS DE INVESTIGACION

El procedimiento de toma de muestra y técnica ELISA se realizó aplicando normas

Bioéticas, controles de calidad, calibraciones para determinar el nivel de distancia de la

longitud focal del lente de dicho equipo en el Laboratorio de Genética de la Facultad de

Ciencias Médicas.

3.4.- UNIVERSO Y MUESTRA

3.4.1.- UNIVERSO

Para la realización de la investigación sobre “DETERMINACIÓN DE NIVELES DE

ANTICUERPOS IGG CONTRA NEUMOCOCO EN NIÑOS DE 7 A 9 AÑOS

VACUNADOS CONTRA NEUMOCOCO MEDIANTE TECNICA DE ELISA EN LA

ESCUELA PLINIO ROBALINO CRUZ DURANTE EN EL AÑO 2014.” se tomó como

universo a todos los niños de la edad de 7 a 9 años de la escuela Plinio Robalino Cruz

vacunados contra neumococo de la ciudad de Quito.

33

3.4.2.- MUESTREO

La muestra fue entre 91 niños y niñas.

3.4.2.1.- CRITERIOS DE INCLUSIÓN

Tener una edad entre 7 a 9 años

Ser estudiante de la escuela Plinio Robalino Cruz.

3.4.2.2.- CRITERIOS DE EXCLUSIÓN

Tener enfermedad viral aguda con alguna patología que origine inmunodepresión.

3.5.- TÉCNICA E INSTRUMENTO DE RECOLECCIÓN DE DATOS

3.5.1.- TECNICA

Se utilizó Kit comercial E-DG-96 para Neumococo IgG ELISA Inmunoensayo

enzimático para la determinación cuantitativa de anticuerpos anti neumococo en suero y

plasma humanos, Marca ZENTECH Kit ELISA (PCP).

3.5.2.- PROCEDIMIENTO DE LA TECNICA DE ELISA (INSERTO DEL KIT E-DG-

96 PARA NEUMOCOCO IgG PARA TÉCNICA DE ELISA)

1. Pipetee 100 µL de cada Estándar y muestra en cada pocillo respectivo de la Placa de 96

pocillos.

2. Cubra la placa con un folio adhesivo. Incube 60 min a 18-25 °C.

3. Remueva el folio adhesivo. Descargue la solución de incubación.

4. Lave la placa con 300 µL de Solución Buffer de Lavado diluida. Remueva el exceso de

solución golpeando cuidadosamente la placa invertida sobre una toalla de papel.

5. Pipetee 100 µL de Conjugado Enzimático en cada pocillo.

34

6. Cubra la placa con un nuevo folio adhesivo. Incube 30 min a 18-25 °C.

7. Remueva el folio adhesivo. Descargue la solución de incubación.

8. Lave la placa con 300 µL de Solución Buffer de Lavado diluida. Remueva el exceso de

solución golpeando cuidadosamente la placa invertida sobre una toalla de papel.

9. Para la adición del substrato y solución de parada utilice, de ser posible, una pipeta de 8

canales. La adición de substrato y solución de parada debe llevarse a cabo en intervalos de

tiempo iguales. Evite la formación de burbujas pipeteando con sobre volumen.

10. Pipetee 100 µL de Solución de Substrato TMB en cada pocillo.

11. Incube 20 min a 18-25 °C en la oscuridad (sin el folio adhesivo).

12. Detenga la reacción del substrato añadiendo 100 µL de Solución de Parada TMB en

cada pocillo.

13. Mezcle el contenido brevemente agitando cuidadosamente la placa. El color cambia de

azul a amarillo.

14. Mida la densidad óptica con un fotómetro a 450 nm (Longitud de onda de referencia:

600-650 nm) dentro de los 60 min de haber agregado la Solución de Parada.

3.6.- TIPOS DE ANÁLISIS

El análisis que se utilizará para la elaboración de esta investigación será de tipo

cuantitativo mediante estadística descriptiva con tablas, gráficos medidas de tendencia central

promedios, medianas, porcentajes y medidas de dispersión con desvíos estándar, análisis de

cuadrados.

3.7.- CONSIDERACIONES ÉTICAS

Para la toma de muestras de sangre se contó con consentimiento informado de ser

vacunados contra neumococo, bajo normas de manejo ético, moral y profesional.

35

CAPITULO VI

4.1.- RESULTADOS

TABLA Nº3 DISTRIBUCIÓN DE NIÑOS SEGÚN SEXO

Fuente: Base de datos según encuestas realizadas

Elaborado por: Doris Sandoval 2015

GRÁFICO Nº 1: DISTRBUCIÓN DE NIÑOS SEGÚN SEXO



Se visualiza que el sexo más frecuente fue el masculino con 51,65% y femenino con

el 48,35, aunque no hubo diferencia estadísticamente significativa.

48,35

51,65

FEMENINO MASCULINO

SEXO

DISTRIBUCION DE NIÑOS SEGUN SEXO

SEXO FRECUENCIA PORCENTAJE

FEMENINO 44 48,35

MASCULINO 47 51,65

Total general 91 100,00

36

TABLA Nº4 DISTRIBUCIÓN DE NIÑOS DE 7 A 9 AÑOS DE EDAD

AÑOS FRECUENCIA PORCENTAJE

EDAD FRECUENCIA PORCENTAJE

7 7 7,69

8 63 69,23

9 21 23,08




GRÁFICO Nº2 DISTRIBUCIÓN DE NIÑOS SEGÚN EDAD DE 7 A 9 AÑOS



Un 69,23 % de Niños tienen 8 años siendo el grupo más frecuente seguido de los

de 9 años con el 23,08 % y seguido de los de 7 años con 7,69 %. No se encontró diferencia

estadísticamente significativa entre los grupos de edad.

7,69

69,23

23,08

0

10

20

30

40

50

60

70

80

7 8 9

PO

RC

ENTA

JE

AÑOS

DISTRIBUCION DE NIÑOS SEGUN EDAD

37

TABLA Nº5 DISTRIBUCIÓN DE NIÑOS SEGÚN GRADO DE ESCOLARIDAD

GRADO FRECUENCIA PORCENTAJE

CUARTO 63 69,23

QUINTO 21 23,08

TERCERO 7 7,69




GRÁFICO Nº3 DISTRIBUCIÓN DE NIÑOS SEGÚN GRADO DE ESCOLARIDAD



Se observa que el grado que más aportó a la muestra fue el cuarto de básica con el

69,23%, seguido de quinto con 23,08% de los niños y el tercero de basica con el 7.69%

siendo el grado que menos aportó.

69,23

23,08

7,69

0 10 20 30 40 50 60 70 80

CUARTO

QUINTO

TERCERO

DISTRIBUCION SEGUN GRADO QUE CURSAN LOS NIÑOS

38

TABLA Nº6 DISTRIBUCIÓN DE NIÑOS SEGÚN DIAGNOSTICO DE

ENFERMEDAD NEUMOCOCICA POR ENCUESTAS




ENFERMEDAD NEUMOCOCICA



Se reporta que el 96 % no tiene antecedente de infección de Neumococo pero el 4

% si, lo que demuestra que la bacteria está circulando en la ciudad de Quito.

96%

4%

DISTRIBUCION DE NIÑOS SEGUN DIAGNOSTICO DE ENFERMEDAD NEUMOCOCICA

NO

SI

DIAGNOSTICO

de

NEUMOCOCO

FRECUENCIA PORCENTAJE

NO 88 96

SI 3 4


39

TABLA Nº7 DISTRIBUCIÓN DE NIÑOS POR ANTECEDENTES FAMILIARES

DE ENFERMEDAD NEUMOCÓSICA MEDIANTE ENCUESTAS

ANTECEDENTE

FAMILIAR DE

ENFERMEDAD DE

NEUMOCOCICA


NO 79 86,81

SI 12 13,19




GRÁFICO Nº 5 DISTRIBUCIÓN DE NIÑOS POR ANTECEDENTES FAMILIARES

DE ENFERMEDAD NEUMOCÓSICA MEDIANTE ENCUESTAS



Se reportó que el 13,19% de niños tenían antecedente familiar de enfermedad

neumococica, sea otitis media, neumonía o laringitis y 86,81 no reportaron antecedente

familiar.

86,81 13,19

NO SI PO

RC

ENTA

JE

ANTECEDENTE

DISTRIBUCION SEGUN ANTECEDENTE FAMILIAR DE ENFERMEDAD NEUMOCOCICA

EN NIÑOS

40

TABLA Nº8 DISTRIBUCIÓN DE NIÑOS CON APLICACIÓN DE VACUNA

CONTRA NEUMOCOCO

VACUNA CONTRA

EL NEUMOCOCO FRECUENCIA PORCENTAJE

SI 63 69,23

NO 28 30,77





CONTRA NEUMOCOCO



Según la información dada por los padres se establece que el 69% fue vacunado

contra el neumococo y el 31 % no refiere haber sido vacunado contra esta bacteria.

69%

31%

DISTRIBUCION SEGUN TENER VACUNA CONTRA NEUMOCOCO EN NIÑOS

NO

SI

41

TABLA Nº9 NÚMERO DE DOSIS DE VACUNA EN NIÑOS CONTRA

NEUMOCOCO

NUMERO DE

DOSIS


0 12 13,19

1 59 64,84

2 12 13,19

3 7 7,69

4 1 1,10




GRÁFICO Nº 7 NÚMERO DE DOSIS DE VACUNA EN NIÑOS CONTRA

NEUMOCOCO



Se observa que el 64,84 % de los niños recibieron por lo menos una dosis de vacuna

contra el neumococo y solo el 7,69 % alcanzaron tres dosis, lo cual indica que no se

64,84

13,19

13,19

7,69

1,10

0,00 10,00 20,00 30,00 40,00 50,00 60,00 70,00

1

0

2

3

4

DISTRIBUCION SEGUN NUMERO DE DOSIS DE VACUNA RECIBIDO POR NIÑOS

42

cumplieron con las dosis recomendadas por el esquema nacional de inmunizaciones del

Ecuador que requiere tener 4 dosis hasta los 6 años.


TECNICA DE ELISA PARA NEUMOCOCO IgG

RESULTADO DE IgG FRECUENCIA PORCENTAJE

Negativo 16 17,58

Positivo 75 82,42


Fuente: Base de datos por resultados del equipo de Elisa



TECNICA DE ELISA PARA NEUMOCOCO IgG



El 82 % de los niños presentaron presencia de IgG contra neumococo, lo que nos indica un

buen nivel de respuesta inmune con producción de anticuerpos contra esta enfermedad.

18%

82%

DISTRIBUCION SEGUN RESULTADO DE IgG EN NIÑOS

negativo

positivo

43

TABLA Nº 11 DISTIRIBUCIÓN DE NIÑOS SEGÚN RESULTADO DE IgG Y

NUMERO DE DOSIS



GRÁFICO Nº 9 DISTIRBUCIÓN DE NIÑOS SEGÚN RESULTADO DE IgG Y

NUMERO DE DOSIS

20,3 33,3

0 0 0

79,7 66,7

100 100 100

0

20

40

60

80

100

0 1 2 3 4

PO

RC

ENTA

JE

NUMERO DE DOSIS

DISTRIBUCION SEGUN RESULTADO DE IgG EN NIÑOS y NUMERO DE DOSIS DE VACUNA

Negativo Positivo

INTER

PRET

ACIO

N

NUMERO DOSIS

Tota

l

gene

ral

0 1 2 3 4

FRE

CUE

NCI

A

POR

CEN

TAJ

E

FRE

CUE

NCI

A

POR

CEN

TAJ

E

FRE

CUE

NCI

A

POR

CEN

TAJ

E

FRE

CUE

NCI

A

POR

CEN

TAJ

E

FRE

CUE

NCI

A

POR

CEN

TAJ

E

Negati

vo 12 20,3 4 33,3 0 0 0 0 0 0 14

Positiv

o 47 79,7 8 66,7 12 100 7 100 1 100 86

Total

general 59

100,

0 12

100,

0 12 100 7 100 1 100 100

44



Se encontró que el 20,3 % no tienen presencia de IgG contra Neumococo de los que no

tuvieron vacuna y el 33,3 % no tienen presencia de IgG contra Neumococo de los que

tuvieron una dosis, con dos dosis o más sube a 100 % los niños que presentaron presencia

de anticuerpo IgG contra Neumococo.

4.2.- DISCUSIÓN

El presente trabajo describe los resultados obtenidos durante un estudio transversal

llevado a cabo en 91 niños de la Escuela Plinio Robalino Cruz, interesados a conocer la

protección que brinda la vacuna contra el neumococo; que es una enfermedad infecciosa lo

cual se visualiza que el sexo más frecuente fue el masculino con 51,65% y femenino con el

48,35; aunque no hubo diferencia estadísticamente significativa.

El 69,23 % de Niños tienen 8 años siendo el grupo de edad más frecuente seguido de los

de 9 años con el 23,08 % y por último los de 7 años con 7,69 %. No se encontró diferencia

estadísticamente significativa entre los grupos de edad y resultado de Elisa.

Se observa que el grado que más aporto a la muestra fue el cuarto de básica con el

69,23%, seguido de quinto con 23,08% de los niños y el tercero de básica con 7,69%.

Se reporta que el 96 % no tiene antecedente de infección de Neumococo pero el 4 % si lo

tiene, lo que demuestra que la bacteria está circulando en la ciudad de Quito. Según la

Asociación Española de Pediatría esta bacteria coloniza la nasofaringe del 25-80 % de los

niños menores de 10 años y causa dos formas de enfermedad: invasiva (meningitis, sepsis,

neumonía bacteriana y otras) y no invasiva, como la otitis media y la sinusitis. Asociación

Española de Pediatría (AEP, 2014)

Según la información dada por los padres se establece que el 69,23% fue vacunado contra

el neumococo y el 30,77 % no refiere haber sido vacunado contra esta bacteria.

Se observa que el 64,84 % de los niños recibieron por lo menos una dosis de vacuna

contra el neumococo y solo el 7,69 % alcanzaron tres dosis, lo cual indica que no se

cumplieron con las dosis recomendadas por el esquema nacional de inmunizaciones del

Ecuador que requiere tener 4 dosis hasta los 6 años.

45

Similar a lo reportado por la Secretaría de Salud de España que indica que después de tres

dosis todos los niños desarrollaron anticuerpos frente a los serotipos contenidos en la vacuna,

siendo efectiva en el 97% contra enfermedad invasiva frente a los serotipos incluidos en la

vacuna y en el 89% frente a la enfermedad causada por todos los serotipos, aun los no

incluidos en la vacuna. Frente a la neumonía y la otitis media aguda es menos efectiva. (AEP,

2014)

4.3.- CONCLUSIONES

El 82,42 % de los niños presentaron presencia de IgG contra neumococo, lo que nos

indica un buen nivel de respuesta inmune con producción de anticuerpos contra esta

enfermedad.

Se encontró que el 20,3 % no tienen presencia de IgG contra Neumococo (los que no

tuvieron vacuna) y el 33,3 % no tienen presencia de IgG contra Neumococo (los que

tuvieron una dosis), con dos dosis o más sube a 100 % los niños que presentaron presencia

de anticuerpo IgG contra Neumococo.

4.4.- RECOMENDACIÓNES

Realizar más investigaciones de seroconversión de IgG contra Neumococo en el resto del

país; ya que en el último año de investigación fue en el año 2003 como se observa en la tabla

N°1

Establecer la realización de estudios periódicos en la vigilancia seroepidemiológica de

Neumococo en el país; puesto que no hay muchos datos estadísticos en el Ecuador de casos

de neumococo; apenas existen 2 estudios uno en el año 2003 y otro en el año 2008. (MSP,

2008)

Concientizar mediante trípticos a los padres de familia, a vacunar a sus hijos con el

número de dosis necesarias para que sus hijos estén protegidos de cualquier contagio.

46

CAPITULO V

LA PROPUESTA

5.1.- JUSTIFICACION DEL ESTUDIO REALIZADO

Tomando en cuenta los resultados de este estudio que establecen que el 30.77% de niños

no fueron vacunados por ello no adquirieron inmunidad, el 64,84 solo adquirió solo una dosis

y el 17,58 no está inmunizado, el presente trabajo pretende dar a conocer que no se colocaron

las 4 dosis que es establecido por el Ministerio de Salud Pública, que el neumococo puede

ser una causa de muerte de niños en nuestro país así como también concientizar acerca de las

consecuencias que puede provocar el no vacunar responsablemente a sus niños.

5.2.- OBJETIVO

Concientizar a los padres de familia de la importancia de llevar a los niños a los centros de

salud y que sepan a cerca de las consecuencias que puede causar el patógeno del neumococo

y las causas que pueden producir cuando no son vacunados.

5.3.- BENEFICIARIOS

5.3.1.- DIRECTOS

NIÑOS.- Como primer beneficiario directo tenemos a los niños, debido a que se trata

de su salud y de los daños que puede producir al no ser inmunizados. Daños como

neumonía, endocarditis, meningitis neumocócica y hasta la muerte.

PADRES DE FAMILIA.- Los padres de familia son beneficiarios directos porque

ellos ven por la salud de sus hijos ya que con una buena información correcta

podemos evitar vistas inesperadas a los hospitales.

47

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epidemiologica&Itemid=50

ANEXOS

ANEXO N°1.- RECURSOS Y COSTOS

RECURSOS HUMANOS CANTIDAD

INVESTIGADOR 1

TUTOR 1

TOTAL 2

MATERIALES DE

OFICINA CANTIDAD

COSTO

POR

UNIDAD

COSTO

TOTAL

ENCUESTAS 100 0.02 2.00

CONCENTIMIENTO

INFORMADO 100 0.02 2.00

ESFEROGRAFICOS 4 0.45 1.80

51

CARPETAS 2 0.30 0.60

CORRECTOR 1 1.75 1.75

RESMA DE PAPEL 3 3.85 11.55

DERMOGRAFICOS 2 1.50 3.00

MATERIALES DE

LABORATORIO

ALGODÓN 1 10.69 10.69

ALCOHOL 1 LIBRO 5.27 5.27

CURITAS 100 1.58 3.16

TUBOS DE ENSAYO 10 ml 100 11.68 11.68

JERINGUILLAS 100 10.69 10.69

TORNIQUETE 1 1.50 1.50

KIT DE ELISA PARA

NEUMOCOCO 1 380.00 380.00

EPENDOR 100 5.00 5.00

MATERIALES

TECNOLOGICOS

INTERNET 40 HORAS 0.50 20.00

IMPRESORA 1 250.00 250.00

RECARGA DE CARTUCHO 2 3.75 7.50

TOTAL 728.19

52

ANEXO N°2.- FORMULARIO PARA PADRES DE FAMILIA


CATEDRA DE GENETICA E INMUNOLOGIA

Fecha……………………………..

FORMULARIO DE CONSENTIMIENTO INFORMADO DE TESIS

DETERMINACIÓN DE ANTICUERPOS IGG CONTRA NEUMOCOCO

Estamos invitando a usted y otras personas de su comunidad a participar de un proyecto de

investigación científica que permitirá entender mejor la enfermedad por NEUMOCOCO en

niños escolares y su prevención, para la cual llenará una encuesta y se le obtendrá una

muestra de sangre de 5 ml por técnica de venopunción.

La información obtenida es confidencial y anónima por ende en ningún lugar se le hará

público el nombre de los niños participantes, ni sus características ni los resultados obtenidos

en dicho estudio. Solo serán publicados datos generales para el estudio de la tesis.

Su participación será muy agradecida y contribuirá a la prevención contra el Neumococo. Si

usted acepta participar de este estudio, le agradeceremos que preste su conformidad por

escrito completando y firmando dicho Formulario.

53

Yo, ……………………………………………………………………………………………...

acepto que a mi hijo puedan hacer dicha toma de muestra de sangre de 5 cc y proveer

información general para el proyecto explicado arriba, de cuyos objetivos fui informado.

Nombre y apellido N° C.I Firma

ANEXO N°3.- HOJA DE ENCUESTA A LOS PADRES DE FAMILIA


CATEDRA DE GENETICA E INMUNOLOGIA

ENCUESTA DE TESIS DETERMINACIÓN DE NIVELES DE ANTICUERPOS IGG

CONTRA NEUMOCOCO MEDIANTE TÉCNICA DE ELISA EN EL

LABORATORIO DE GENETICA E INMUNOLOGIA UCE 2015.

FECHA: _______________________

NOMBRE: ____________________________ CODIGO: _________

EDAD: ___________

Marcar con una x la respuesta

Sexo: masculino____ femenino____

En qué grado está el niño 1___ 2___ 3___ 4___ 5___ 6___ 7___ 8___

Ha sido diagnosticado de padecer de infección de NEUMOCOCO: si___ no___

Ha padecido alguna vez de enfermedad de NEUMONIA: si___ no___

54

Cuantos dormitorios tiene en su casa sin incluir cocina ni sala: 1__ 2__ 3__ 4__ 5__

Con cuantas personas vive: 1___ 2___ 3___ 4___ 5___ o más ___

Ha recibido vacuna contra el NEUMOCOCO: si___ no___

Cuantas dosis ha recibido: 0___ 1___ 2___ 3___ 4___ 5___ o más ___

Resultado de prueba de Elisa para NEUMOCOCO IgG: Positivo___ Negativo___

55

ANEXO N°4

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