TULCÁN - ECUADOR AÑO: 2018 · 2019. 3. 13. · Muestras foliares de las diferentes regiones del...

UNIVERSIDAD POLITÉCNICA ESTATAL DEL CARCHI

TULCÁN - ECUADOR

AÑO: 2018

Contenido PROCEDIMIENTO ESPECÍFICO DE ENSAYO DETERMINACIÓN DE HUMEDAD EN MUETRAS

FOLIARES ....................................................................................................................................... 4

PROCEDIMIENTO ESPECÍFICO DE ENSAYO DETERMINACIÓN DE CENIZA Y MATERIA ORGÁNICA

EN MUESTRAS FOLIARES ............................................................................................................... 9

PROCEDIMIENTO ESPECÍFICO DE ENSAYO CALCINACIÓN Y DIGESTIÓN ÁCIDA DE MUESTRAS

FOLIARES ..................................................................................................................................... 14

PROCEDIMIENTO ESPECÍFICO DE ENSAYO DETERMINACÍON DE FÓSFORO EN MUESTRAS

FOLIARES. .................................................................................................................................... 19

PROCEDIMIENTO ESPECÍFICO DE ENSAYO DETERMINACÍON DE NITRÓGENO EN MUESTRAS

FOLIARES- MÉTODO DE KJELDAHL .............................................................................................. 30

PROCEDIMIENTO ESPECÍFICO DE ENSAYO DETERMINACIÓN DE K, Ca Y Mg EN MUESTRAS

FOLIARES ..................................................................................................................................... 39

PROCEDIMIENTO ESPECÍFICO DE ENSAYO DETERMINACIÓN DE Fe, Cu, Zn Y Mg EN MUESTRAS

FOLIARES ..................................................................................................................................... 49

PROCEDIMIENTO ESPECÍFICO DE ENSAYO OBTENCIÓN DEL EXTRACTO DE SUELO CON OLSEN

MODIFICADO ............................................................................................................................... 58

PROCEDIMIENTO ESPECÍFICO DE ENSAYO DETERMINACIÓN DE pH EN SUELOS ....................... 61

PROCEDIMIENTO ESPECÍFICO DE ENSAYO DETERMINACIÓN DE MATERIA ORGÁNICA Y

NITRÓGENO TOTAL EN SUELOS- MÉTODO DE WALKLEY BLACK ................................................. 68

PROCEDIMIENTO ESPECÍFICO DE ENSAYO DETERMINACIÓN DE FÓSFORO ASIMILABLE EN

SUELOS-MÉTODO OLSEN MODIFICADO ...................................................................................... 78

PROCEDIMIENTO ESPECÍFICO DE ENSAYO DETERMINACIÓN DE K, Ca Y Mg ASIMILABLES EN

SUELOS-MÉTODO OLSEN MODIFICADO ...................................................................................... 90

PROCEDIMIENTO ESPECÍFICO DE ENSAYO DETERMINACIÓN DETERMINACIÓN DE Fe, Cu, Zn y

Mn ASIMILABLES EN SUELOS – MÉTODO OLSEN MODIFICADO ............................................... 101

PROCEDIMIENTO ESPECÍFICO DE ENSAYO DETERMINACIÓN DE

HUMEDAD EN MUETRAS FOLIARES

1. OBJETO

Definir un procedimiento para la determinación de humedad en muestras

foliares.

2.ALCANCE

El presente procedimiento es aplicado por el Laboratorio de Suelos, Foliares y

Aguas para determinar humedad en muestras foliares.

3. ITEMS A ENSAYAR, PARAMETROS Y RANGOS DE APLICACIÓN

Muestras foliares de las diferentes regiones del Ecuador.

4. REFERENCIAS

4.1. Documentos utilizados en la elaboración

AOAC 930.04. Loss on Drying (Moisture) in Plants

5.GENERAL

5.1. Políticas

Todos los documentos elaborados, corno parte del SGC, deben ser

administrados por el Departamento de Calidad.

Todos los documentos se distribuyen en formato pdf.

Los documentos emitidos por el Laboratorio de Suelos, Foliares y

Aguas puede hacer referencia a otros documentos concretos,

indicando los apartados, no repitiendo su contenido.

5.2. Definiciones

Humedad. - Cantidad de agua presente en una muestra. Es la relación

entre el agua contenida en los poros de la muestra, o agua libre, en una

masa dada de material respecto a la masa de sólidos que constituyen la

muestra.

5.3. Abreviaturas

SGC: Sistema de Gestión de Calidad y Competencia Técnica.

basado en los requisitos de la norma NTE INEN ISO/IEC 17025.

DL: Director de Laboratorios

RC: Responsable de Calidad

RT: Responsable Técnico

A: Analista

NA: No aplica

ml: Mililitros

g: Gramo

5.4. Nivel de riesgo y calificación. Instrucciones de Seguridad

El presente procedimiento no requiere la utilización de sustancias

químicas peligrosas, sin embargo, es necesario el uso de mandil,

guantes y gafas de seguridad durante la realización de éste ensayo.

5.5 Responsabilidades

Cargo Responsabilidad Autoridad

RT Planificación de análisis Evaluar de los resultados de los análisis

A Ejecutar los análisis

6. DESCRIPCIÓN

6.1. Equipos, materiales y reactivos

6.1.1. Equipos

Balanza de precisión

Estufa de aire forzado

6.1.2. Materiales

Bandeja de aluminio con tapa

6.1.3. Reactivos

No aplica

6.1.4. Materiales de Referencia

No aplica

6.2 Condiciones Ambientales

El método de referencia no establece condiciones ambientales

específicas.

6.3. Identificación Ítems de Ensayo, Preparación y Verificaciones previas

a ser realizadas

Previo a la realización del ensayo, se deberá verificar que las bandejas de aluminio

se encuentren en buen estado y limpias.

6.4. Realización

Pesar la bandeja vacía en la balanza de precisión. Anotar el peso.

Colocar toda la muestra entregada por el usuario sobre la bandeja,

procurando no dejar absolutamente nada en la bolsa.

Pesar la bandeja con la muestra en la balanza de precisión. Anotar el peso.

Colocar la bandeja con la muestra en la estufa de aire forzado y secar la

muestra a una temperatura entre 60 y 70 ºC hasta peso constante (la

temperatura máxima de secado es de 70 ºC).

Una vez seca la muestra, retirarla de la estufa y dejarla enfriar por alrededor

de 30 minutos en un lugar seco, tapando las bandejas con sus respectivas

tapas.

Pesar la bandeja con la muestra seca y anotar el peso.

6.6. Tratamiento de Resultados. Incertidumbre asociada

6.6.1. Cálculos

Los pesos obtenidos se anotan en el formato PEE/SFA/35-FO01, y con

ellos se realiza el siguiente cálculo:

% 𝐻 PH + B − PS + B

PH + B − PB 𝑥 100

en dónde:

H: Humedad

PH+B: Peso en gramos de la muestra húmeda más bandeja.

PS+B: Peso en gramos de la muestra seca más bandeja.

P B: Peso en gramos de la bandeja.

6.6.2. Aseguramiento de la Calidad

Control de temperatura de estufas

6.6.3. Criterios de Aceptación o rechazo de los resultados

No aplica

6.6.4. Incertidumbre

Control de temperatura de estufas

6.6.5. Informe de Resultados

Los resultados de humedad serán expresados en porcentaje, y se reportarán

en el informe con 2 cifras decimales

7. ANEXOS

7.1. Anexo l. Registro de datos primarios de humedad en muestras

foliares

Fecha N°

Lab

HUMEDAD

Resp.

Peso

bandeja

vacía (g)

Peso

bandeja +

muestra

húmeda (g)

Peso

bandeja +

muestra

seca(g)

Peso

seco (g)

% H

PROCEDIMIENTO ESPECÍFICO DE ENSAYO DETERMINACIÓN DE CENIZA

Y MATERIA ORGÁNICA EN MUESTRAS FOLIARES

1. OBJETO

Definir un procedimiento para la determinación de ceniza y materia orgánica en

muestras foliares.

2.ALCANCE


Aguas para determinar ceniza y materia orgánica en muestras foliares.



4. REFERENCIAS


AOAC 930.05. Ash of Plants

5. GENERAL

5.1. Políticas







5.2. Definiciones

Calcinación: Es un proceso térmico mediante el cual se elimina la materia

orgánica de una muestra.

5.3. Abreviaturas






A: Analista

NA: No aplica

g: Gramo


El presente procedimiento no requiere la utilización de sustancias

químicas peligrosas, sin embargo, es necesario el uso de mandil, guantes

y gafas de seguridad durante la realización de éste ensayo.





6. DESCRIPCIÓN


6.1.1. Equipos

Balanza analítica

Mufla

6.1.2. Materiales

Crisol de porcelana tarado

Pinzas para crisol de 60 cm de longitud

Desecador

6.1.3. Reactivos

No aplica


No aplica



específicas.


a ser realizadas

Previo a la realización del ensayo, se deberá verificar que los crisoles se

encuentren tarados.

Numerar los crisoles en su base con lápiz, no utilizar esferográfico ni

marcador, caso contrario la identificación se borrará al momento de la

calcinación.

6.4. Realización

Pesar el crisol tarado vacío en la balanza analítica. Anotar el peso.

Pesar sobre el crisol 1g de muestra en la balanza analítica. Anotar el peso.

Colocar el crisol con la muestra en la mufla fría y subir gradualmente la

temperatura hasta 450ºC ± 5ºC, y mantener esa temperatura hasta que las

muestras se transformen en cenizas de coloración blanquecina o gris.

Apagar la mufla y esperar hasta que la temperatura baje hasta 120ºC

aproximadamente.

Retirar los crisoles de la mufla, colocarlos en un desecador y esperar hasta

que éstos se enfríen.

Pesar el crisol con la muestra calcinada en la balanza analítica. Anotar el

peso.


6.5.1. Cálculos

Los pesos obtenidos se anotan en el cuaderno correspondiente a "Cenizas y

MO Foliares", y con ellos se realiza el siguiente cálculo:

a) Cálculo para obtener el porcentaje de cenizas

% 𝐶 = 𝑃𝐶𝑧+𝐶 𝑥 𝑃𝑐

𝑃𝑚 𝑥 100

En dónde:

Cz = Ceniza

PCz+C = Peso en gramos de la muestra calcinada más el crisol.

Pc = Peso en gramos del crisol.

PM = Peso en gramos de la muestra

b) Cálculo para obtener el porcentaje de materia orgánica

% 𝑀𝑂 = 100 − % 𝐶𝑧

En dónde:

% Cz = Porcentaje de ceniza obtenido


El control de calidad interno incluye efectuar un duplicado cada 15 muestras.


Los criterios de aceptación y rechazo del aseguramiento de calidad se

describen en la siguiente tabla:

Actividad

Criterio de

aceptación y

rechazo

Acción si no

cumple Frecuencia Responsable

Corridas con

estándar de

referencia

≤5% Repetir el

ensayo

Al inicio de

los análisis RT/A

Para gestionar como trabajo de ensayo no-conforme, se debe aplicar el

procedimiento PGC/LA/08.


No se ha calculado la incertidumbre asociada para éste método de ensayo.


Los resultados de cenizas y materia orgánica serán expresados en

porcentaje, y se reportarán en el informe con 2 cifras decimales

7. ANEXOS

No aplica

PROCEDIMIENTO ESPECÍFICO DE ENSAYO CALCINACIÓN Y DIGESTIÓN

ÁCIDA DE MUESTRAS FOLIARES

1. OBJETO

Definir un procedimiento para la calcinación y digestión ácida de muestras

foliares, a fin de mineralizar los nutrientes presentes en la misma para su

posterior análisis.

2. ALCANCE

El presente procedimiento es aplicado por el Laboratorio de Suelos, Foliares

y Aguas para digestar las muestras foliares previo al análisis de fósforo (P),

potasio (K), calcio (Ca), magnesio (Mg), hierro (Fe), cobre (Cu), zinc (Zn),

manganeso (Mn) y azufre (S).

3. TEMS A ENSAYAR, PARÁMETROS Y RANGOS DE APLICACIÓN


4. REFERENCIA No aplica.

5. GENERAL

Los métodos de digestión ácida facilitan la disgregación de las estructuras

cristalinas, hecho que permite determinar la cantidad total de determinados

elementos presentes en las muestras.

Existen varios métodos de digestión ácida en función a los ácidos utilizados

y etapas de calentamiento. En general, el método consiste en hacer

reaccionar la muestra con una serie de sustancias con poder oxidante, como

el ácido nítrico y el peróxido de hidrógeno, calentando dichas mezclas en una

plancha térmica. Otras rutas de digestión emplean ácidos más fuertes como

el ácido fluorhídrico o el ácido perclórico, con el fin de disgregar compuestos

de gran resistencia.

En el presente método se busca eliminar la materia orgánica mediante

calcinación en la mufla, para luego digestar las cenizas con ácido clorhídrico.

5.1. Políticas

Todos los documentos elaborados, como parte del SGC, deben ser





indicando los apartados, no repitiendo su contenido

5.2. Definiciones

Calcinación.- Es el proceso termal mediante el cual se destruye la

materia orgánica de una muestra determinada, oxidándola hasta

convertirla en CO2 y H2O.

Digestión.- En química, digestión es el proceso de someter a la

materia orgánica presente en una muestra a la acción de ácidos o

bases fuertes.

5.3. Abreviaturas

SGC: Sistema de Gestión de Calidad y Competencia Técnica,





A: Analista

NA: No aplica

g: Gramo

mL:Mililitro


El presente procedimiento requiere la utilización de sustancias químicas

peligrosas como el ácido clorhídrico, razón por la cual es necesario el uso

de mandil, guantes, gafas de seguridad, mascarilla contra vapores ácidos

y solventes orgánicos y sorbona durante la manipulación de ésta

sustancia.

5.5. Responsabilidades


RT Planificación de análisis Evaluar los resultados de los

análisis


6. DESCRIPCIÓN


6.1.1. Equipos

Balanza analítica

Mufla

Plancha de calentamiento

Sorbona

6.1.2. Materiales

Crisoles de porcelana

Embudos

Balón de 100 mi

Pipetas automáticas de 10 mi

Puntas para pipeta

Papel filtro

Policía

6.1.3. Reactivos

Ácido clorhídrico concentrado

Ácido clorhídrico 1:1

6.1.4. Materiales de referencia

No aplica

6.2. Condiciones Ambientales


específicas.

6.3. Identificación Items de Ensayo, Preparación y Verificaciones

previas a ser realizadas

6.4. Realización

Pesar 1 g de muestra sobre un crisol de porcelana tarado en la balanza

analítica, identificando los crisoles con lápiz. Anotar el peso.

Colocar el crisol con la muestra en la mufla fría y subir gradualmente la

temperatura hasta 450ºC ± 5ºC, y mantener esa temperatura hasta que

las muestras se transformen en cenizas de coloración blanquecina o

gris.

Apagar la mufla y esperar hasta que la temperatura baje hasta 120ºC

aproximadamente.

Retirar los crisoles de la mufla, colocarlos en un desecador y esperar

hasta que éstos se enfríen.

Agregar al crisol de porcelana 4 mL de ácido clorhídrico concentrado.

Adicionar al crisol 1 mL de agua tipo l.

Digestar lentamente las cenizas sobre la plancha de calentamiento hasta

sequedad.

Retirar los crisoles de la plancha y esperar aproximadamente 30 min

hasta que éstos se enfríen.

Agregar 4 mL de ácido clorhídrico 1:1

Dejar en reposo durante 2 horas.

Filtrar el contenido del crisol recogiendo el filtrado en un balón aforado

de 100 mL.

Enjuagar cuidadosamente el crisol y el papel filtro con agua tipo I de 4 a

5 veces, frotando las paredes del crisol con ayuda de un policía.

Aforar a 100 mL con agua tipo I y homogenizar.

Con ésta solución obtenida, se procede a determinar el fósforo (P),

potasio (K), calcio (Ca), magnesio (Mg), hierro (Fe), cobre (Cu), zinc

(Zn), manganeso (Mn) y azufre (S).

6.5. Método de registro y datos a ser registrados

No registra


6.6.1. Cálculos

No aplica

6.6.2. Aseguramiento de la de Calidad

No aplica


No aplica


No aplica

6.6.5. Informe de resultados

No aplica

7. ANEXOS

7.1. Anexo l. Preparación de la solución de ácido clorhídrico 1:1

Colocar en un vaso de precipitación de 2000 mL 500 mL de agua tipo l.

Adicionar al vaso de precipitación lentamente 500 mL de ácido clorhídrico

concentrado, controlando la temperatura con un baño de agua fría.

Mezclar y esperar hasta que la solución se enfríe.

Almacenar la solución en un frasco limpio y bien identificado.

PROCEDIMIENTO ESPECÍFICO DE ENSAYO DETERMINACÍON DE

FÓSFORO EN MUESTRAS FOLIARES.

1. OBJETO

Definir un procedimiento para la determinación de fósforo (P) en muestras

foliares.

2.ALCANCE


Aguas para determinar P en muestras foliares a partir de la solución madre

preparada de acuerdo al procedimiento de digestión



4. REFERENCIAS


AOAC 931.01. Phosphorus in Plants

5.GENERAL

El presente método cuantifica el fósforo mediante espectrofotometría UV YIS,

mediante la formación ele un complejo coloreado "azul de molibdeno" que se

forma por la reacción del fósforo con solución sulfomolíbdica en presencia de

ácido ascórbico, mismo que se mide espectrofotométricamente mediante una

curva ele calibración elaborada con soluciones de fósforo de concentraciones

conocidas

5.1. Políticas







5.2. Definiciones

Métodos espectrofotométricos: Es un conjunto de técnicas

instrumentales que permite comparar la radiación absorbida o transmitida

por una solución que contiene una cantidad desconocida de analito, vs. una

gama de soluciones que contienen una cantidad conocida del mismo

analito.

Longitud de onda: Es la distancia real recorrida por la onda, es decir, es

la distancia desde el inicio de un ciclo completo de una onda hasta su final.

La longitud de onda se la representa con la letra griega A, y su unidad

dentro del SI es el metro (m), sin embargo, para aplicaciones analíticas

espectrofotométricas se utiliza el submúltiplo nanómetro (nm).

Transmitancia: La transmitancia óptica se define como la fracción de luz

incidente, a una longitud de onda específica, que pasa a través de una

muestra. Su expresión matemática es:

𝑇 = 𝑙

𝑙𝑜

donde lo es la intensidad del rayo incidente, e l es la intensidad de la luz que

viene

de la muestra.

La transmitancia de una muestra está normalmente dada porcentualmente,

definida como:

𝑇 % = (𝑙

𝑙𝑜

) 𝑥 100%

Absorbancia: En espectroscopía, la absorbancia [(Aʎ es definida corno:

𝐴ʎ = −𝑙𝑜𝑔10 𝑇

Donde T, es la transmitancia.

5.3. Abreviaturas






A: Analista

NA: No aplica

ml: Mililitro

g: Gramo

l: Litro

ppm: Partes por millón

Aʎ: Absorbancia

T: Transmitancia

ʎ: Longitud de onda

nm: Nanómetros


El presente procedimiento utiliza sustancias químicas peligrosas, como el

ácido sulfúrico y la solución de hidróxido de sodio concentrada, por lo que

es indispensable la utilización del equipo de protección personal completa

(mandil, guantes, gafas y respirador con doble filtro para ácidos y vapores

orgánicos) y la sorbona cuando se manejen dichas sustancias.

La preparación y manipulación de la solución sulfomolíbdica que se utiliza

durante el ensayo, deberá realizarse con guantes.

Durante la preparación de la solución sulfornolíbdica la temperatura de la

solución se elevará por efecto de la disolución del ácido sulfúrico

concentrado. Para ello, se deberá controlar la temperatura con un baño

de agua fría.





6. DESCRIPCIÓN


6.1.1. Equipos

Espectrofotómetro UY-YIS

Balanza analítica Scientech, código SFA/EM/030 o similar

Estufa

Baño María

Vortex

Sorbona

6.1.2. Materiales

Cápsula de porcelana

Balón aforado de 50, 100, 200 y 1000 ml.

Pipetas volumétricas de 1, 2, 4, 5, 10y 20 mi

Tubo de ensayo

Gradilla

Pipeta automática de 10 ml.

Puntas para pipetas de 10ml.

6.1.3. Reactivos

Molibdato de amonio

Ácido sulfúrico concentrado

Ácido ascórbico

Fosfato diácido de potasio

Agua tipo 1



específicas.

Las condiciones ambientales se controlan de acuerdo a lo

establecidos en el Instructivo INT/SFA/01


a ser realizadas

Para la realización del presente ensayo se debe haber obtenido previamente

la solución madre de la muestra foliar de acuerdo a la metodología descrita

en el INT/SFA/34.

A fin de evitar cualquier contaminación cruzada, es indispensable lavar muy

bien con jabón libre de fósforo el material de vidrio a utilizarse en el ensayo,

cepillando correctamente cada utensilio, para posteriormente secarlo en la

estura a 105 ºC.

Utilizar agua tipo I tanto para la preparación de las soluciones y estándares

como para la realización del ensayo.

6.4. Realización

De la solución madre preparada, realizar la dilución respectiva de acuerdo a

la concentración de fósforo que tenga la muestra. Generalmente una dilución

de 1/20 es apropiada, por lo tanto, colocar 5 ml de la solución madre en un

balón de 100 ml con una pipeta volumétrica, aforar a 100 ml con agua tipo I

y homogenizar la solución.

Colocar 5 ml de la dilución en un tubo de ensayo con ayuda de una pipeta

volumétrica.

Adicionar al tubo de ensayo 2 ml de ácido ascórbico al 1 % y 1 ml de solución

sulfomolíbdica con pipetas volumétricas o pipeta automática.

Agitar la mezcla contenida en el tubo alrededor de 5 segundos en el vortex.

Colocar la mezcla en un bailo maría a 80ºC ± 3ºC por 10 minutos.

Enfriar en un baño de agua fría durante 10 minutos aproximadamente.

Desarrollar el color a los estándares y al blanco ele la misma manera que se

hizo para las muestras.

Cargar en el Espectrofotómetro de UV-VIS el método para fósforo en

foliares, mismo que debe estar a una longitud de onda de 882 nm.

Realizar la curva ele calibración, encerando el equipo con el blanco, e

ingresando como cero de la curva al blanco.

Leer las absorbancias de las muestras.


6.6.1. Cálculos

Para obtener la concentración del P en las muestras foliares en

porcentaje, se deberá realizar los siguientes cálculos:

% 𝑃 = 𝐿𝑒𝑐𝑡. 𝑥 𝑉𝑚𝑎𝑑𝑟𝑒 𝑥 𝐹𝑑

𝑃𝑚 𝑥 10000

En dónde:

Lect. = Lectura en ppm de P que se obtiene del espectrofotómetro UV-VIS.

Vmadre = Volumen en mi de la solución madre.

Fd = Factor de dilución respectivo.

Pm = Peso de la muestra en gramos.

10000 = Factor para convertir los ppm a porcentaje.

Los resultados así obtenidos, se anotan en el cuaderno correspondiente a

"Datos Fósforo de Foliares", en el cual se deberá asentar la sumilla del analista

responsable del análisis

6.6.2 . Aseguramiento de la Calidad

El control de calidad interno incluye efectuar una muestra control (MRC) cuya

concentración de P sea conocida al inicio de cada análisis.




Actividad

Criterio de

aceptación y

rechazo

Acción si no


Corridas con

estándar de

referencia

≤5% Repetir el

ensayo

Al inicio de

los análisis RT/A




Los resultados de P serán expresados en porcentaje, y se reportarán en el

informe con 2 cifras decimales

7. ANEXOS

7.1. Anexo I: Elaboración de la solución sulfomolíbdica.

7.2. Anexo II: Elaboración de la solución de ácido ascórbico al

1%.

7.3. Anexo III: Elaboración de estándares para la curva de

calibración.

7.4. Anexo IV: Registro de datos primarios de cenizas, materia

orgánica, nitrógeno, fósforo, azufre y boro en muestras foliares.

Anexo I

ELABORACIÓN DE LA SOLUCIÓN SULFOMOLÍBDICA

Pesar en la balanza analítica 25 g de molibdato de amonio en un vaso

de precipitación.

Trasvasar cuantitativamente el molibdato de amonio a un balón de 1 l.

Adicionar al balón aproximadamente 500 ml de agua tipo l.

Añadir lentamente 270 ml de ácido sulfúrico concentrado G. R.,

enfriando la solución con un baño de agua fría.

Una vez que la mezcla contenida en el balón esté completamente fría,

aforar con agua tipo I y homogenizar.

Almacenar la solución en un frasco ámbar perfectamente limpio y bien

etiquetado.

NOTA: Esta solución es sensible al calor y a la luz, sin embargo, si es

almacenada en un frasco ámbar y en refrigeración se conserva durante

varios meses sin deteriorarse.

Anexo II

ELABORACIÓN DE LA SOLUCIÓN DE ÁCIDO ASCÓRBICO AL 1 %

Pesar 1g de ácido ascórbico en la balanza analítica sobre papel

aluminio.

Transferir cuantitativamente el ácido ascórbico a un balón aforado de

100 ml, mismo que debe estar cubierto con papel aluminio para evitar

que el ácido ascórbico se descomponga por acción de la luz.

Adicionar aproximadamente 60 ml de agua tipo al balón y disolver el

ácido ascórbico.

Aforar con agua tipo I y homogenizar la solución.

NOTA: Este reactivo es inestable y no se puede almacenar, por tal motivo,

se lo debe preparar el mismo día en que se va a realizar el análisis de P. Por

lo tanto, antes de preparar el reactivo, es necesario calcular el volumen que

se requiere para analizar la serie de muestras, tomando en consideración los

puntos de la curva, el blanco y las posibles diluciones.

Anexo III

ELABORACIÓN DE ÉSTÁNDARES PARA LAS CURVAS DE

CALIBRACIÓN

a) Elaboración de la solución madre de 1000 ppm de P

En caso de que no se disponga de una solución comercial de 1000 ppm

de P, proceder como sigue:

Pesar aproximadamente 6 g de fosfato monobásico de potasio

(KH2PO4) en una cápsula de porcelana.

Secar el fosfato monobásico de potasio en la estufa a 105 ºC por 2

horas.

Enfriar el fosfato monobásico de potasio en un desecador por 1 hora.

Pesar en la balanza analítica 4.394 g de fosfato monobásico de potasio

sobre papel aluminio.

Trasvasar cuantitativamente el fosfato monobásico de potasio a un

balón aforado de 1 l.

Disolver el fosfato monobásico de potasio con agua destilada tipo 1,

aforar y homogenizar la solución.

Almacenar la solución madre en un frasco plástico perfectamente limpio

y bien etiquetado en refrigeración.

b) Elaboración de la solución estándar de 50 ppm de P

Colocar 5 ml de la solución madre de 1000 ppm de P en un balón

aforado de 100ml con una pipeta volumétrica.

Aforar el balón a 100 ml con agua tipo I y homogenizar la solución.

Almacenar la solución estándar en un frasco plástico perfectamente

limpio y bien etiquetado.

c) Elaboración de los estándares P

Colocar en balones aforados de 100 ml perfectamente limpios, la

siguiente cantidad de solución estándar de 50 ppm de P con la ayuda

de pipetas volumétricas:

N° Estándar Concentración del

estándar (ppm)

Volumen de solución estándar

de 50 ppm de P en ml

1 0.0 0

2 0.5 1

3 2.0 4

4 6.0 12

5 10.0 20

6 15.0 30

Aforar el balón a 100 ml con agua destilada y homogenizar la solución.

Almacenar las soluciones estándar en frascos plásticos perfectamente

limpios y bien etiquetados.

PROCEDIMIENTO ESPECÍFICO DE ENSAYO DETERMINACÍON DE

NITRÓGENO EN MUESTRAS FOLIARES- MÉTODO DE KJELDAHL

1. OBJETO

Definir un procedimiento para la determinación de nitrógeno (N) en muestras

foliares.

2.ALCANCE


Aguas para determinar N en muestras foliares.



4. REFERENCIAS


AOAC 978.04. Nitrogen (Total) (Crude Protein) in Plants

5.GENERAL

La determinación del nitrógeno total por el método de Kjeldhal se basa en la

conversión de los compuestos nitrogenados reactivos a sulfato de amonio

mediante la mineralización de la muestra con ácido sulfúrico concentrado, en

presencia de un alto contenido de sulfato potásico, con objeto de elevar el

punto de ebullición de la mezcla, y selenio como catalizador.

Posteriormente, se produce la liberación del ion amonio a partir del sulfato de

amonio mediante la adición de una solución de hidróxido de sodio

concentrado, mismo que es recogido sobre una solución indicadora con ácido

bórico, que luego es valorada por retroceso.

5.1. Políticas







5.2. Definiciones

Retrotitulación. - Es un procedimiento donde el exceso de solución

patrón utilizada para consumir un analito se determina mediante titulación

con una segunda solución patrón.

5.3. Abreviaturas






A: Analista

NA: No aplica

ml: Mililitros

g: Gramo

l: Litro



ácido sulfúrico y la solución de hidróxido de sodio concentrada, por lo que

es indispensable la utilización del equipo de protección personal completa


orgánicos) y la sorbona cuando se manejen dichas sustancias.

Tener precaución al manipular los tubos Kjeldhal calientes luego de la

destilación, protegiéndose las manos con guantes de nitrilo y guantes de

calor, y lomando el tubo con ayuda de una pinza.

Los residuos del tubo Kjeldahl deben ser depositados en un recipiente

adecuado para su posterior eliminación.





6. DESCRIPCIÓN


6.1.1. Equipos

Balanza analítica


Digestor y destilados Kjeldhal

6.1.2. Materiales

Tubos Kjeldhal

Papel celofán de 4 x 5 cm o papel aluminio

Dispensador de 25 ml

Núcleos de ebullición

Pinza para tubo Kjeldhal

Erlenmeyer de 250 ml

Bureta digital de 50 ml

Bureta clase A de LOO mi con llave de teflón

Balón aforado de 1 y 21

Vasos plásticos de precipitación de 600 y 1000 ml

6.1.3. Reactivos

Ácido sulfúrico concentrado

Solución de hidróxido de sodio al 40%

Solución de hidróxido de sodio al 15%

Solución de hidróxido de sodio 0.1 N

Solución de ácido sulfúrico 0.1 N

Indicador rojo de metilo

Indicador verde de bromocresol

Etanol absoluto

Sulfato de potasio

Sulfato de cobre

Selenio



específicas.


a ser realizadas

Antes de utilizar el digestor Kjeldhal, verificar que la solución de hidróxido de

sodio en dónde se recogen los vapores no se encuentre saturada, y que el

agua del reservorio de la bomba y del frasco de recolección este limpia

Procurar mantener un flujo de agua de enfriamiento apropiado en el digestor,

si éste es muy bajo podría ocasionar daños en el equipo.

Antes de utilizar el destilador Kjeldhal, verificar que el frasco de hidróxido de

sodio conectada al destilador contenga la solución al 40%, que la llave de

agua del flujo de enfriamiento este abierta, y que el frasco de agua destilada

este por lo menos hasta las tres cuartas partes del recipiente.

Lavar los tubos Kjeldhal inmediatamente después de utilizarlos, y

homogenizarlos con agua destilada luego de lavados.

6.4. Realización

Pesar en la balanza analítica 0.4 g de muestra sobre papel celofán o sobre

papel aluminio.

Si se utiliza papel celofán, encerrar la muestra dentro del papel enrollando

entre sí las cuatro puntas del mismo, y colocar ésta bolsita dentro de los

tubos Kjeldhal. Si se utiliza papel aluminio, adherir el papel conteniendo la

muestra a una varilla y colocar toda la muestra en el fondo del tubo Kjeldhal.

Adicionar l pastilla Kjeldahl más 20 ml de ácido sulfúrico concentrado.

Colocar el tubo en el digestor Kjeldhal.

Encender el scrubber y luego el digestor Kjeldhal. Programar éste ultimo de

la siguiente manera: 250º C por 10 minutos, 300º C por 5 minutos, y 420º C

por 45 minutos.

Dejar enfriar los tubos una vez finalizada la digestión.

Colocar en un erlenmeyer de 250 ml, 50 ml de ácido bórico al 4% con la

ayuda de una probeta, y 4 o 6 gotas del indicador rojo de tashiro.

Antes de iniciar la destilación, verificar la existencia de hidróxido de sodio

al 40% y asegurarse que el contenido de agua destilada tipo I esté en un

nivel apropiado.

Colocar el tubo Kjeldhal en el destilador, abrir la llave del agua de

enfriamiento y programar al equipo para que suministre 70 ml de hidróxido

de sodio al 40% y destile por el lapso de 4 minutos, con un tiempo de

depuración de 5 segundos a una temperatura de 100º C.

Colocar el erlenmeyer con ácido bórico al 4% en el destilador, a fin de

recoger el amoniaco que se desprenderá durante la destilación.

Accionar el botón rundel equipo.

Una vez concluida la destilación, retirar el erlenmeyer y titular el contenido

del mismo con solución de ácido clorhídrico 0.1 N hasta un viraje de color

verde azulado a rosado.

Por cada serie de muestras analizadas se deberá correr una muestra

control y un blanco para encontrar el valor del factor de corrección del

ácido utilizado. El blanco consiste en colocar 50 ml de ácido bórico al 4%

en un erlenmeyer y titularlo con la solución de ácido clorhídrico 0.1 N

utilizando rojo de Tashiro como indicador. El ácido bórico al 4% y el ácido

clorhídrico 0.1 N utilizados en el blanco deberán ser los mismos que se

utilicen en el análisis de las muestras.


6.6.1. Cálculos

Los pesos obtenidos se anotan en el formato PEE/SFA/35-FO01, y con

ellos se realiza el siguiente cálculo:

𝑁 = (VHCl Muestra − VHCl Blanco )𝑥 𝑁HCl 𝑥14,01

MMuestra 𝑋10

Los resultados así obtenidos, se anotan en el formato PEE/SFA/36-FO01



concentración de N sea conocida al inicio de cada análisis.




Actividad

Criterio de

aceptación y

rechazo

Acción si no


Corridas con

estándar de

referencia

≤5% Repetir el

ensayo

Al inicio de

los análisis RT/A




Los resultados de N serán expresados en porcentaje, y se reportarán en el

informe con 2 cifras decimales

7. ANEXOS

7.1. Anexo I: Elaboración de ácido bórico al 4%

7.2. Anexo II: Elaboración del indicador Rojo de Tashiro.

7.3. Anexo III: Elaboración de la solución NaOH al 20%.

7.4. Anexo IV: Elaboración de la solución NaOH al 40%

7.5. Anexo V: Elaboración de la solución de HCl 0.1 N

7.6. Anexo VI: Registro de datos primarios de cenizas, materia

orgánica, nitrógeno, fósforo, azufre y boro en muestras foliares.

Anexo I

ELABORACIÓN DEL ÁCIDO BÓRICO AL 4%

Pesar en la balanza analítica 80 g de ácido bórico en un vaso de

precipitación.

Calentar aproximadamente 1500 ml el agua destilada tipo I a 60º C,

añadir el ácido bórico, agitar hasta su completa disolución.

Trasvasar cuantitativamente a un balón de 2 1, una vez frío aforar.

Almacenar a temperatura ambiente.

Anexo II

ELABORACIÓN DEL INDICADOR ROJO DE TASHIRO

Disolver 0.1 g de rojo de metilo en etanol absoluto y aforar a 100 ml.

Disolver 0.1 g de verde de bromocresol en etanol absoluto y aforar a

100 ml.

Mezclar una parte de la solución de rojo de metilo con tres partes de la

solución de verde de bromocresol y homogenizar la solución.

Almacenar el indicador en un frasco ámbar perfectamente limpio y bien

etiquetado.

Anexo III

ELABORACIÓN DE LA SOLUCIÓN DE NaOH AL 20%

(Solución para recoger los gases de digestión)

Pesar 400 g de NaOH en la balanza de precisión sobre un vaso de

precipitación de 1000 ml.

Adicionar aproximadamente 900 ml de agua destilada y disolver el

NaOH, controlando la temperatura con un baño de agua fría.

Transferir cuantitativamente la solución contenida en el vaso a un balón

de 2000 ml.

Enfriar, aforar con agua destilada y homogenizar la solución.

Almacenar la solución que no se haya utilizado en un frasco plástico

perfectamente limpio y bien etiquetado.

Anexo IV

ELABORACIÓN DE LA SOLUCIÓN DE NaOH AL 40%

(Solución para dosificar en el momento de la destilación)

• Pesar 800 g de NaOH en la balanza de precisión sobre un vaso plástico

ele precipitación de 2000 ml.

• Adicionar aproximadamente 1500 ml de agua destilada y disolver el

NaOH, controlando la temperatura con un baño de agua fría.

• Transferir cuantitativamente la solución contenida en el vaso a un balón

de 2000 ml.

• Enfriar, aforar a 2000 ml con agua destilada y homogenizar la solución.

Anexo V

ELABORACIÓN DE LA SOLUCIÓN DE HCI 0.1 N

Colocar aproximadamente 100 ml de agua tipo I en un balón de 2000ml

Adicionar 16.58 ml de ácido clorhídrico concentrado.

Aforar a 2000 ml con agua destilada y homogenizar la solución.

Valorar la solución con hidróxido de sodio para encontrar la normalidad

real del ácido.

Guardar la solución en un frasco perfectamente limpio y etiquetado.

PROCEDIMIENTO ESPECÍFICO DE ENSAYO DETERMINACIÓN DE K, Ca Y

Mg EN MUESTRAS FOLIARES

1. OBJETO

Definir un procedimiento para la determinación de potasio (K), calcio (Ca) y

magnesio (Mg) en muestras foliares.

2.ALCANCE

El presente procedimiento es aplicado por el Laboratorio de Suelos, Foliares y Aguas

para determinar K, Ca y Mg en muestras foliares a partir de la solución madre preparada

de acuerdo al procedimiento PEE/SFA/34.



4. REFERENCIAS


PGC/LA/01, Procedimiento General para la Gestión de la

Documentación

AOAC 975.03. Metals in Plants and Pet Foods

4.2. Documentos a utilizar conjuntamente con el presente procedimiento

INT/SFA/02, instructivo "Uso y verificación de equipo de absorción atómica".

PEE/SFA/34, Procedimiento Especifico de Ensayo "Calcinación y Digestión

Acida de Muestras Foliares"

PEE/SFA/38-FO01, Registro de datos primarios de análisis de metales en

muestras foliares

5.GENERAL

5.1. Políticas




Los documentos emitidos por el Laboratorio de Suelos, Foliares y Aguas

puede hacer referencia a otros documentos concretos, indicando los

apartados, no repitiendo su contenido.

5.2. Definiciones

Métodos espectrofotométricos: Es un conjunto de técnicas instrumentales

que permite comparar la radiación absorbida o transmitida por una solución

que contiene una cantidad desconocida de analito, vs. una gama de soluciones

que contienen una cantidad conocida del mismo analito.

Absorción atómica: Es un método instrumental que esta basado en la

atomización del analito en matriz líquida, utilizando un nebulizador para crear

una niebla de la muestra y un quemador con forma de ranura que da una llama,

en donde la muestra es desolvatada y expuesta a una energía a una

determinada longitud de onda emitida ya sea por una lámpara de cátodo hueco

construida con el mismo analito a determinar o una lámpara de descarga de

electrones.

Longitud de onda: Es la distancia real recorrida por la onda, es decir, es la

distancia desde el inicio de un ciclo completo de una onda hasta su final. La

longitud de onda se la representa con la letra griega ʎ, y su unidad dentro del

SI es el metro (m), sin embargo para aplicaciones analíticas


5.3. Abreviaturas

SGC: Sistema de Gestión de Calidad y Competencia Técnica. basado en los requisitos de la norma NTE INEN ISO/IEC 17025.




A: Analista

NA: No aplica

ml: Mililitro

g: Gramo

l: Litro


Aʎ: Absorbancia


nm: Nanómetros



ácido clorhídrico concentrado, por lo que es indispensable la utilización del

equipo de protección personal completa (mandil, guantes, gafas y respirador

con doble filtro para ácidos y vapores orgánicos) y la sorbona cuando se

manejen dichas sustancias.





6. DESCRIPCIÓN


6.1.1. Equipos

Espectrofotómetro de absorción atómica


Sorbona

Vortex

6.1.2. Materiales


Pipetas volumétricas de 1, 2, 5, 10, 15 y 20 ml

Tubos de ensayo

Gradilla

Dispensador automático de 25 ml

Pipeta automática de 1 – 0 ml

Pipeta automática de 100 - 1000 µI

Puntas para pipetas de 1000 µI y 10 ml

6.1.3. Reactivos

Oxido de lantano G.R.

Ácido clorhídrico concentrado G.R.

Estándar comercial de 1000 ppm de K

Estándar comercial de 1000 ppm de Ca

Estándar comercial de 1000 ppm de Mg

Agua tipo 1



específicas.



6.3. Identificación Ítems de Ensayo, Preparación y Verificaciones previas a

ser realizadas

Para la realización del presente ensayo se debe haber obtenido previamente la

solución madre de la muestra foliar de acuerdo a la metodología descrita en el

INT/SFA/34.

Antes de comenzar con la realización del presente procedimiento, se debe

preparar la solución de óxido de lantano tal como se indica en el Anexos I y

los estándares en el anexo ll.



6.4. Realización

Para Ca y K realizar una dilución 1/20, colocar 5ml de la solución madre

preparada mediante el PEE/SFA/34, 4 ml de H:Cl 1:1 y 10 ml de óxido de

lantano en un balón de 100 ml y aforar con agua tipo 1 y Para Mg realizar una

dilución 1/100, colocar 1 ml de la solución madre preparada mediante el

PEE/SFA/34, 4 ml de H:Cl 1:1 y 10 ml de óxido de lantano en un balón de 100

ml y aforar con agua tipo 1.

Mezclar bien en el vortex.

Colocar la lámpara y cargar en el software del espectrofotómetro de absorción

atómica el método del elemento a determinar.

Encender el quemador y encerar el equipo con el blanco.

Realizar la curva de calibración en el equipo, ingresando como cero el blanco.

Leer las absorbancias de las muestras y determinar la concentración del analito

en %.

6.5. Método de Registro y Datos a ser registrados

El resultado se reporta de forma directa en el formato PEE/SFA/38-FO01


6.6.1. Cálculos

Para obtener la concentración del K, Ca y Mg en las muestras foliares en

porcentaje, se deberá realizar los siguientes cálculos:

% 𝐾, 𝐶𝑎 ó 𝑀𝑔 = 𝐿𝑒𝑐𝑡. 𝑥 𝑉𝑚𝑎𝑑𝑟𝑒 𝑥 𝐹𝑑

𝑃𝑚 𝑥 10000

En dónde:

Lect. = Lectura en ppm de K, Ca y Mg, según el caso, que se obtiene del

espectrofotómetro de absorción atómica.


Fd = Factor de dilución en caso de que exista.


10000 = Factor para convertir los ppm a porcentaje.

Los resultados así obtenidos, se anotan en el formato PEE/SFA/37-FO01.



concentración de K, Ca y Mg sea conocida al inicio de cada análisis.


Los criterios de aceptación y rechazo del aseguramiento de calidad se describen

en la siguiente tabla:

Actividad

Criterio de

aceptación y

rechazo

Acción si no


Corridas con

estándar de

referencia

≤5% Repetir el

ensayo

Al inicio de

los análisis RT/A




Los resultados de K, Ca y Mg serán expresados en porcentaje, y se reportarán

en el informe con 2 cifras decimales

7. ANEXOS

7.1. Anexo I: Preparación de la solución de óxido de lantano al 1 %.

7.2. Anexo II: Elaboración de estándares para las curvas de

calibración.

7.3. Anexo III: Registro de datos primarios de análisis de metales en

muestras foliares.

Anexo I

PREPARACIÓN DE LA SOLUCIÓN DE ÓXIDO DE LANTANO AL 1 %.

Pesar 23.456 g de óxido de lantano en la balanza analítica sobre una

cápsula de porcelana.

Trasvasar cuantitativamente el óxido de lantano a un balón de 21.

Añadir aproximadamente 100 ml de agua tipo l.

Añadir lentamente 100 ml de ácido clorhídrico concentrado, enfriando la

solución con un baño de agua fría. Este procedimiento realizarlo en

sorbona.

Agitar la mezcla hasta que el óxido de lantano esté totalmente disuelto.


Almacenar la solución en un frasco de vidrio perfectamente limpio y bien

etiquetado.

Anexo II

ELABORACIÓN DE ÉSTÁNDARES PARA LAS CURVAS DE CALIBRACIÓN

a) Elaboración de los estándares para K

Preparar 200 ml de una solución madre de 200 ppm de K de la siguiente

manera:

Tornar 40 ml de estándar de K de 1000 ppm con pipeta volumétrica y aforar

a 200 ml con agua tipo l.

b) Elaboración de los estándares para Ca

Preparar 200 ml de una solución madre de 100 ppm de Ca de la siguiente

manera:

Tomar 20 ml de estándar de Ca de 1000 ppm con pipeta volumétrica y

aforar a 200 ml con agua tipo l.

c) Elaboración de los estándares para Mn

Preparar 200 ml de solución madre de 10 ppm de Mg de la siguiente

manera:

Tomar 2 ml de estándar de Mg de 1000 ppm con pipeta volumétrica y aforar

a 200 ml con agua tipo l.

Preparación de Mix

Metal ml de sol.

Madre

Concentración

ppm

Volumen

de aforo

MIX 1

K 4 4

200ml Ca 2 1

Mg 4 0.2

Metal ml de sol.

Madre

Concentración

ppm

Volumen

de aforo

MIX 2

K 10 10

200ml Ca 6 3

Mg 10 0.5

Metal ml de sol.

Madre

Concentración

ppm

Volumen

de aforo

MIX 1

K 20 20

200ml Ca 12 6

Mg 16 0.8

Metal ml de sol.

Madre

Concentración

ppm

Volumen

de aforo

MIX 1

K 40 40

200ml Ca 18 9

Mg 20 1

Colocar 8 ml de HCI 1: 1 y 20 mL de óxido de lantano al l %, aforar los

balones a 200 ml con agua tipo 1 y homogenizar las soluciones



PROCEDIMIENTO ESPECÍFICO DE ENSAYO DETERMINACIÓN DE Fe, Cu, Zn

Y Mg EN MUESTRAS FOLIARES

1. OBJETO

Definir un procedimiento para la determinación de hierro (Fe), cobre (Cu), zinc (Zn)

y manganeso (Mn) en muestras foliares.

2.ALCANCE

El presente procedimiento es aplicado por el Laboratorio de Suelos, Foliares y Aguas

para determinar (Fe), (Cu), (Zn) y (Mn)en muestras foliares a partir de la solución

madre preparada de acuerdo al procedimiento PEE/SFA/34.



4. REFERENCIAS


AOAC 975.03. Metals in Plants and Pet Foods

5.GENERAL

5.1. Políticas







5.2. Definiciones

Métodos espectrofotométricos: Es un conjunto de técnicas instrumentales

que permite comparar la radiación absorbida o transmitida por una solución

que contiene una cantidad desconocida de analito, vs. una gama de soluciones

que contienen una cantidad conocida del mismo analito.

Absorción atómica: Es un método instrumental que esta basado en la

atomización del analito en matriz líquida, utilizando un nebulizador para crear

una niebla de la muestra y un quemador con forma de ranura que da una llama,

en donde la muestra es desolvatada y expuesta a una energía a una

determinada longitud de onda emitida ya sea por una lámpara de cátodo hueco

construida con el mismo analito a determinar o una lámpara de descarga de

electrones.

Longitud de onda: Es la distancia real recorrida por la onda, es decir, es la

distancia desde el inicio de un ciclo completo de una onda hasta su final. La

longitud de onda se la representa con la letra griega ʎ, y su unidad dentro del

SI es el metro (m), sin embargo para aplicaciones analíticas


5.3. Abreviaturas






A: Analista

NA: No aplica

ml: Mililitro

g: Gramo

l: Litro


Aʎ: Absorbancia


nm: Nanómetros



ácido clorhídrico concentrado por lo que es indispensable la utilización del



manejen dichas sustancias.





6. DESCRIPCIÓN


6.1.1. Equipos

Espectrofotómetro de absorción atómica

6.1.2. Materiales


Pipetas volumétricas de 1, 2, 4, 5, 10y 20 mi

6.1.3. Reactivos

Estándar comercial de 1000 ppm de Fe

Estándar comercial de 1000 ppm de Cu

Estándar comercial de 1000 ppm de Zn

Estándar comercial de 1000 ppm de Mn

Agua tipo 1


SFA/MRC007, Tomate Leaves NlST 1573a, Foliares.

SFA/MRCO08, Apple Leaves NIST 1515, Foliares.



específicas.




ser realizadas


la solución madre de la muestra foliar de acuerdo a la metodología descrita en

el INT/SFA/34.



6.4. Realización

Colocar la lámpara y cargar en el software del espectrofotómetro de absorción

atómica el método del elemento a determinar.


Realizar la curva de calibración en el equipo, ingresando como cero el blanco.

Leer las absorbancias de las muestras directamente de la solución madre y

determinar la concentración del analito en ppm.

NOTA: En caso de que se deba realizar una dilución en alguna muestra, utilícese el

blanco como solvente y considérese el factor de dilución respectivo.


Los datos se registran en el formato PEE/SFA/38-FO01


6.6.1. Cálculos

Para obtener la concentración del Fe, Cu, Zn y Mn en las muestras foliares

en ppm, se deberá realizar los siguientes cálculos:

% 𝐹𝑒, 𝐶𝑢, 𝑍𝑛 ó 𝑀𝑛 = 𝐿𝑒𝑐𝑡. 𝑥 𝑉𝑚𝑎𝑑𝑟𝑒 𝑥 𝐹𝑑

𝑃𝑚

En dónde:

Lect. = Lectura en ppm de Fe, Cu, Zn y Mn, según el caso, que se obtiene del

espectrofotómetro de absorción atómica.


Fd = Factor de dilución en caso de que exista.


Los resultados así obtenidos, se anotan en el formato PEE/SFA/37-FO01.



concentración de Fe, Cu, Zn y Mn sea conocida al inicio de cada análisis.




Actividad

Criterio de

aceptación y

rechazo

Acción si no


Corridas con

estándar de

referencia

≤5% Repetir el

ensayo

Al inicio de

los análisis RT/A


procedimiento PGC/LA/08.




Los resultados de Fe, Cu, Zn y Mn serán expresados en porcentaje, y se

reportarán en el informe con 2 cifras decimales

7. ANEXOS

7.1. Anexo I: Elaboración de estándares para las curvas de

caibración.

7.2. Anexo II: Registro de datos primarios de metales en muestras

foliares.

Anexo I

ELABORACIÓN DE ÉSTÁNDARES PARA LAS CURVAS DE CALIBRACIÓN

a) Elaboración de los estándares para Fe

Preparar 100 ml de una solución madre de 40 ppm de Fe de la siguiente

manera:

Tornar 4 ml de estándar de Fe de 1000 ppm con pipeta volumétrica y


b) Elaboración de los estándares para Cu

Preparar 100 ml de una solución madre ele 5 ppm de Cu ele la siguiente

manera:

Tomar 0.5 ml de estándar de Cu ele 1000 ppm con pipeta volumétrica y


e) Elaboración ele los estándares para Zn

Preparar 100 ml de solución madre ele I O ppm de Zn de la siguiente

manera:

Tomar 1 ml de estándar de Zn de 1000 ppm con pipeta volumétrica y


d) Elaboración de los estándares para Mn

Preparar 100 ml de solución madre de 40 ppm de Mn de la siguiente

manera:

Tomar 4 ml de estándar de Mn de 1000 ppm con pipeta volumétrica y


Preparación de Mix

Metal

ml de

sol.

Madre

Concentración

ppm

Volumen

de aforo

MIX 1

Cu 2 0.05

200ml Mn 1 0.2

Fe 2 0.4

Zn 4 0.2

Metal

ml de

sol.

Madre

Concentración

ppm

Volumen

de aforo

MIX 2

Cu 8 0.2

200ml Mn 2 0.4

Fe 10 2.0

Zn 8 0.4

Metal

ml de

sol.

Madre

Concentración

ppm

Volumen

de aforo

MIX 3

Cu 20 0.5

200ml Mn 10 2.0

Fe 20 4.0

Zn 16 0.8

Metal

ml de

sol.

Madre

Concentración

ppm

Volumen

de aforo

MIX 4

Cu 40 1.0

200ml Mn 20 4.0

Fe 40 8.0

Zn 20 1.0

Colocar 8 ml de HCI 1: 1

Aforar los balones a 200 ml con agua tipo I y hornogenizar las soluciones.



PROCEDIMIENTO ESPECÍFICO DE ENSAYO OBTENCIÓN DEL EXTRACTO

DE SUELO CON OLSEN MODIFICADO

1. OBJETO

Definir un procedimiento para obtener el extracto de suelo utilizando como solución

extractora Olsen modificado.

2. ALCANCE


Aguas para la obtención del extracto de suelo, mismo que servirá únicamente para

la determinación de P, K, Ca, Mg, Fe, Cu, Zn y Mn asimilables.

3. ITEMS A ENSAYAR, PARÁMETROS Y RANGOS DE APLICACIÓN

Suelos agrícolas de las diferentes regiones del Ecuador

4. REFERENCIAS

4.1 Documentos utilizados en la elaboración

Metodología Unificada de la Red de Laboratorios de Suelos del Ecuador,

Catalogo INIAP cuarta aproximación Quito-2009.

5. GENERAL

5.1 Políticas







5.2 Definiciones

Olsen. - Solución extractora para suelos alcalina compuesta por bicarbonato

de sodio y EDTA, ajustada a un pH de 8.5.

5.3 Abreviaturas

SGC: Sistema de Gestión de Calidad y Competencia Técnica, basado en los

requisitos de la norma NTE INEN ISO/lEC 17025.




A: Analista

mg: miligramos

Kg: kilogramos

mi: mililitros

NA: No aplica

5.4 Nivel de riesgo y calificación. Instrucciones de Seguridad

El presente procedimiento requiere la utilización de sustancias químicas

peligrosas, por lo que es necesario el uso de mandil, guantes y gafas de

seguridad durante la realización de éste ensayo.


Cargo Responsabilidades Autoridad

RT Planificación de análisis Evaluar y supervisar la preparación

A Ejecutar la preparación

6. DESCRIPCIÓN


6.1.1. Equipos



Plancha de calentamiento-agitador código SFNEA/052 o similar

Potenciómetro código SFA/EM/037 o similar

Agitador Orbital código SFA/EA/006 o similar

6.1.2. Materiales



Balón aforado de 2 1

Barras para agitador magnético

Vasos de precipitación de 100 ml

Papel filtro cualitativo

6.1.3. Reactivos

Bicarbonato de sodio

EDTA

Hidróxido de sodio

Ácido Acético

Agua tipo I

Carbón activado

6.2. Condiciones ambientales


específicas. Se considera las condiciones definidas por los equipos

utilizados.

6.4. Realización

Pesar 2.5 g de suelo en un erlenmeyer de 125 ml.

Añadir 25 ml de solución extractante de Olsen modificado con un

dispensador.

Agitar en el agitador orbital por 10 minutos a 400 rpm.

Filtrar a través de un papel filtro cualitativo, recogiendo el filtrado en un

vaso de precipitación de 100 ml.

Con éste extracto proceder a cuantificar P, K, Ca, Mg, Fe, Cu. Zn y Mn

mediante los respectivos métodos de ensayo.

6.5 Método de Registro y Datos a ser Registrados

NA

6.6 Tratamiento de Resultados. Incertidumbre asociada

6.6.1. Cálculos

NA

6.6.2. Aseguramiento de la calidad

NA

7. ANEXOS

7.1. Anexo 1: Elaboración de la solución extractora de Olsen modificado

Pesar en una cápsula de porcelana 84.6 g de bicarbonato de sodio

(NaHCO3) y 7.44 g de EDTA.

Trasvasar cuantitativamente la mezcla de reactivos a un balón aforado

de 2l.

Disolver los reactivos con agua destilada tipo I y llenar de agua el balón

hasta cerca de la línea de aforo.

Ajustar el pH a 8.5 disolviendo lentejas de hidróxido de sodio con ayuda

de agitación magnética.


PROCEDIMIENTO ESPECÍFICO DE ENSAYO DETERMINACIÓN DE pH EN

SUELOS

1. OBJETO

Establecer los lineamentos técnicos para la determinación de pH en muestra de suelos

agrícolas.

2.ALCANCE

El presente procedimiento es de aplicación para la determinación de pH en suelos

agrícolas de cualquier tipo.


Suelos agrícolas de las diferentes regiones del Ecuador en un rango entre 4 - 1 0 u pH.

4. REFERENCIAS


PGC/LA/01, Procedimiento General "Gestión de la Documentación".

EPA 9045 D.

Metodología unificada Red de laboratorios de Suelos del Ecuador, Catálogo

INIAP cuarta aproximación Quito-2009.

5.GENERAL

5.1. Políticas







5.2. Definiciones

pH.- Es una medida de la acidez o alcalinidad de una disolución. Se define

como el logaritmo negativo en base I O de la actividad de los iones hidrógeno

(H+).

Muestras de control interno. - Analito con concentraciones conocidas

5.3. Abreviaturas

SGC: Sistema de Gestión de Calidad y Competencia Técnica. basado en los

requisitos de la norma NTE INEN ISO/IEC 17025.




NA: No aplica

ml: Mililitros

g: Gramo


El presente procedimiento no requiere la utilización de sustancias químicas

peligrosas, sin embargo, es necesario tomar las precauciones debidas para

la manipulación como uso de guantes y de mandil.





6. DESCRIPCIÓN


6.1.1. Equipos

Balanza analítica Scientech, código SFNEM/030 o similar

Potenciómetro de mesa Mettler Toledo/Seven Multi código SFA/ EM/025 o

similar

Electrodos de vidrio

6.1.2. Materiales

Vasos plásticos de 50 ml

Varillas de agitación de vidrio

Papel absorbente

Agua destilada tipo I

6.1.3. Reactivos

Soluciones buffer pH: 4-7 y 10.


Se cuenta con material de referencia Código SFA/MRC005, con valor de

propiedad de 5,68 unidades de pH.


El método de referencia no establece condiciones ambientales específicas.

Se considera las condiciones definidas en las soluciones buffer que está en un

rango de 5 a 50 ºC.

Las condiciones ambientales se controlan de acuerdo a lo establecidos en el

Instructivo INT/SFA/01

6.3. Identificación Ítems de Ensayo, Preparación y Verificaciones previas a ser

realizadas

Preparación de la muestra es realizado de acuerdo al instructivo lNT/SFA/29

"Tratamiento de Muestras de Suelos".

La identificación de la muestra debe mantener los criterios establecido en el

instructivo INT/SFA/09

La balanza analítica y potenciómetro deben ser preparados y verificados de

acuerdo a Jo indicado en sus respectivos instructivos de uso.

6.4. Realización

Pesar 10 g de suelo en el vaso plástico de 50 ml

Agregar 25 ml de agua tipo l.

Mezclar manualmente durante 5 minutos con ayuda de una varilla de agitación.

Dejar en reposo durante 60 minutos aproximadamente.

Agitar enérgicamente con la varilla de vidrio la suspensión, lavar el electrodo con

agua destilada, introducir en la zona media del sobrenadante (cuidando de no

apoyar el electrodo en las paredes) y realizar la medición. Lavar el electrodo con

agua destilada antes de cada medición.

El equipo corrige variaciones de temperatura


El resultado se genera por lectura directa de potenciómetro y se registran los datos

obtenidos en el formato PEE/SFA/06-FOOI.


6.6.1. Cálculos

Los resultados se reportan de la medida directa del equipo y corregidos a 25ºC.


Los controles de calidad del método se realizan utilizando las siguientes actividades:

Lectura de estándar a partir de 15 muestras leídas.

Corridas con una muestra control interno.

Corridas con estándar de referencia

lnterlaboratorios


Los criterios de aceptación y rechazo del aseguramiento de calidad se describen en la

siguiente tabla:

Actividad Criterio de aceptación y rechazo

Acción si no cumple

frecuencia Responsable

Corridas con una

muestra control

interno

≤ 5%

Verificar la

calibración del

electrodo si

persiste registrar

como trabajo de

ensayo no

conforme

Según el

Programa de

aseguramiento

de calidad de

los ensayos

RT Corridas con

estándar de

referencia

6,98 – 7,02

Unidades

de pH

Verificar la

calibración del

electrodo si

persiste registrar

como trabajo de

ensayo no

conforme

Interlaboratorios Z-score ≤ 2

Registrar como

trabajo de ensayo

no conforme

Para gestionar como trabajo de ensayo no-conforme, se debe aplicar el procedimiento

PGC/LA/08.


Se estima de acuerdo a lo establecido en el procedimiento PGT/LA/04


Los resultados se expresan en valor de pH, y se reportan en el informe con dos cifras

decimales.

7. ANEXOS

7.1. Anexo l. Registro de datos primarios de pH en muestras de suelo

Fecha N°

Lab

pH Resp. Fecha N°

Lab

pH Resp. Fecha N°

Lab

pH Resp.

PROCEDIMIENTO ESPECÍFICO DE ENSAYO DETERMINACIÓN DE MATERIA

ORGÁNICA Y NITRÓGENO TOTAL EN SUELOS- MÉTODO DE WALKLEY

BLACK

1. OBJETO

Definir un procedimiento para determinar el carbono orgánico existente en una

muestra de suelo, para posteriormente calcular la cantidad de materia orgánica y

nitrógeno total presente en la muestra.

2. ALCANCE


Aguas para la determinación de la materia orgánica y nitrógeno total en muestras

de suelo.



4. REFERENCIAS


PGC/LA/01, Procedimiento General "Gestión de la Documentación".

PAGE, A.L.; MILLER, R.H. y KEENEY, D. ED. 1982. Methods of Soil

analysis. Part II. Chemical and Microbiological properties. 2 end. Edition.

Madison WIS. American Society of Agronomy Inc. VT (Agronomy 9). pp.

4.2. Documentos a utilizar conjuntamente con el PG

INT/SFA/06 Instructivo "Uso y Verificación de Balanza"

INT/SFA/29 Instructivo "Tratamiento de Muestras de Suelos"

PEE/SFA/09-FO01 Registro de datos primario de Materia Orgánica y

Nitrógeno Total en muestras de suelos.

5. GENERAL

La materia orgánica del suelo es una mezcla heterogénea de residuos orgánicos de

vegetales o animales en cualquier grado de descomposición. El humus es una

mezcla compleja de sustancias coloidales y de formas inertes cercanas al C

elemental, como carbón, hulla o grafito que ocasionalmente se encuentran

presentes en cantidades apreciables.

Para analizar la materia orgánica en los suelos se puede utilizar métodos directos

basados en el proceso de combustión, en los cuales se mide cuantitativamente el

CO2 desprendido y métodos indirectos, donde la materia orgánica del suelo puede

ser tratada con una mezcla de K2Cr2O7 y H2SO4, de acuerdo con la siguiente

ecuación química:

2 Cr2O7 2- + 3C0 + 16H+ = 4Cr3+ + 3CO2 + 8H2O

Después de la reacción, el Cr2O7 2- reducido puede medirse por volumetría con una

retrotitulación con la sal de Mohr para cuantificar la cantidad de ion dicromato no

reducido, y posteriormente, conocer por diferencia la cantidad de ion dicromato que

reaccionó, y con ello el contenido de carbono orgánico en la muestra.

5.1. Políticas







5.2. Definiciones

Reacción de óxido-reducción (redox).- Reacción química en la cual existe

una transferencia de electrones entre los reactivos, dando lugar a un cambio

en los estados de oxidación de los mismos con respecto a los productos.

Retrotitulación. - Es un procedimiento donde el exceso de solución patrón

utilizada para consumir un analito se determina mediante titulación con una

segunda solución patrón.

5.3 Abreviaturas

SGC: Sistema de Gestión de Calidad y Competencia Técnica, basado en los

requisitos de la norma NTE INEN ISO/lEC 17025.




A: Analista

mg: miligramos

g: Gramos

ml: mililitros

l: Litro

N: Normalidad

MO: Materia Orgánica

NA: No aplica

5.4 Nivel de riesgo y calificación. Instrucciones de seguridad


ácido, sulfúrico concentrado y el dicromato de potasio, por lo que es

indispensable la utilización del equipo de protección personal completo


orgánicos).

La reacción de oxidación conlleva el desprendimiento de vapores ácidos

y tóxicos, por lo que ésta debe desarrollarse dentro de una campana de

extracción de gases.

La reacción de oxidación es exotérmica, por lo que se recomienda tener

mucho cuidado al manipular el erlenmeyer en dónde se lleva a cabo la

reacción, por si existe alguna rotura.





6. DESCRIPCIÓN


6.1.1. Equipos

Balanza analítica


Agitador magnético

6.1.2. Materiales



Balón aforado de 1 l

Pipeta volumétrica de 10 ml

Bureta de 50 ml

Soporte universal

Pinza de bureta

Espátula


Desecador


6.1.3. Reactivos

Solución de dicromato de potasio (K2Cr2O7) 1 N

Ácido Sulfúrico (H2SO4) concentrado grado técnico y grado reactivo

Solución de sal de Mohr (Fe(NH4)2(SO4)2-6H2O) 0,5 N

Ácido ortofosfórico concentrado

Solución de difenilamina 1%

Agua tipo I


No aplica



específicas.

6.4 Realización

Pesar 0.5 g de suelo en un erlenmeyer de 250 ml. Para suelos cuyas

características físicas conllevan a sospechar que poseen abundante

materia orgánica (suelos negruzcos), se pesará 0.1 g.

Añadir 5 ml de la solución de dicromato de potasio 1N, y mezclar el

suelo con la solución mediante movimientos giratorios leves, tratando

de que la muestra no se quede pegada en las paredes.

Añadir 12.5 ml de ácido sulfúrico grado técnico, y mezclar suavemente

con movimientos giratorios, evitando que las partículas de suelo se

peguen en las paredes y queden fuera del contacto del oxidante.

Dejar en reposo 30 minutos.

Añadir 100 ml de agua destilada.

Adicionar 5 ml de ácido ortofosfórico concentrado.

Agregar 3 gotas de indicador difenilamina.

Titular con la solución de sal de Mohr 0.5 N hasta que el color de la

solución cambie a verde botella.

Simultáneamente realizar un blanco, el cual se prepara de la misma

manera que se indica en los puntos anteriores, pero sin muestra,

mismo que servirá para calcular la verdadera normalidad de la sal de

Mohr

Nota: Cuando al final de la valoración de una muestra se ha gastado menos de 1.0

ml o más ml que el valor utilizado para titular la muestra control y los blancos, es

conveniente repetir el análisis de esa muestra utilizando mayor o menor peso de

muestra según sea el caso; o en su defecto, cuando luego de adicionarle la solución

de dicromato de potasio y el ácido sulfúrico concentrado a la muestra, se aprecie a

simple vista un color verde intenso, se debe añadir de 2 a 4 ml más de dicromato

de potasio.


El resultado se genera por volumetría y se registran los datos obtenidos en

el formato PEE/SFA/09-FO01


6.6.1. Cálculos

Cálculo para determinar la normalidad de la solución de la Sal de Mohr:

𝑁𝐹𝑒𝑆𝑂4 =5 𝑚𝑙 𝐾2𝐶𝑟2𝑂7

𝑚𝑙 𝑑𝑒 (𝐹𝑒(𝑁𝐻4)2(𝑆𝑂4)2. 6𝐻2𝑂 𝑔𝑎𝑠𝑡𝑎𝑑𝑜𝑠 𝑒𝑛 𝑒𝑙 𝑏𝑙𝑎𝑛𝑐𝑜

Cálculo para determinar el % de carbono orgánico

Es conocido que este método no oxida todo el carbono orgánico presente en

la muestra, sino que solo oxida el 77 %. Por tal motivo, para compensar el

porcentaje de carbono no oxidado, es necesario utilizar dentro de los cálculos

el factor 1.3, mismo que proviene de la relación 1/0.77. Así tenemos:

% 𝐶 𝑜𝑟𝑔 =(𝐵 − 𝑀)𝑥 𝑁 𝑥 0,003 𝑥 1,3 𝑥 100

𝑃𝑀=

(𝐵 − 𝑀)𝑥 𝑁 𝑥 0,39

𝑃𝑀

En donde:

B = Volumen en ml de sal de Mohr gastado en el blanco

M = Volumen en ml de la sal de Mohr gastado en la muestra

N = Normalidad de la sal de Mohr

0,003 = Peso en gramos de un miliequivalente de carbono

1,3 = Factor de eficiencia de oxidación del carbono orgánico

100 = Factor de conversión a porcentaje

PM = Peso de la muestra en gramos

Cálculo para determinar el % de materia orgánica

El Carbono es el principal elemento de materia orgánica del suelo, por tal

razón el contenido de carbono orgánico es expresado como la materia

orgánica presente en un suelo cuando se multiplica por el factor de Van

Bemmelen de 1.724. Este valor asume que la materia orgánica presente en

el suelo confiere un 58% de C orgánico. Así tenemos:

% MO = % C orgánico x 1,724

Cálculo para determinar el % de nitrógeno total:

%𝑁 =𝑀𝑂

20

En donde:

MO= Porcentaje de materia orgánica

6.6.2. Aseguramiento de la calidad

Los controles de calidad del método se realizan utilizando las siguientes

actividades:

Un duplicado cada 15 muestras.

Lectura del control interno al inicio de los análisis

6.6.3. Criterios de aceptación y rechazo


describen en la siguiente tabla


procedimiento PGC/LN08


No aplica

Actividad Criterio de

aceptación y

rechazo

Acción

sino

cumple

Frecuencia Responsable

Duplicado de

muestra

± 2% Repetir el

análisis

Cada 15

muestras RT/A

Lectura del

control interno

1.5 – 2.5 ±10 % Repetir el

análisis

Al inicio de

los análsis

6.6.5. Informe de resultados

Los resultados de MO y N total serán expresados en %, y se reportarán en el

informe con 2 cifras decimales. Adicionalmente se colocará en el informe de

resultados el cuadro de interpretación indicado en el Anexo V.

7. ANEXOS

7.1. Anexo I: Preparación de la solución de dicromato de potasio (K2Cr2O7) 1 N

Pesar en una cápsula de porcelana aproximadamente 50 g de K2Cr2O7

grado reactivo.

Colocar la cápsula de porcelana con el K2Cr2O7 en una estufa a 105 ºC

por 2 horas.

Sacar el K2Cr2O7 de la estufa y dejar enfriar en un desecador por 1 hora.

Pesar en papel aluminio 49.04 g de K2Cr2O7 con una balanza analítica.

Trasvasar cuantitativamente el K2Cr2O7 pesado a un balón aforado de 1

L.

Disolver totalmente el K2Cr2O7 contenido en el balón con agua TIPO I,


Guardar la solución de K2Cr2O7 en un frasco ámbar perfectamente limpio

y etiquetado.

7.2. Anexo II: Preparación de la solución de la sal de Mohr (Fe(NH4)2

(SO4)2.6H2O) 0.5 N.

Pesar en papel aluminio 196.05 g de (Fe(NH4)2 (SO4)2.6H2O) con una

balanza analítica.

Trasvasar cuantitativamente el (Fe(NH4)2 (SO4)2.6H2O) pesado a un balón

aforado de 1 l.

Disolver el (Fe(NH4)2 (SO4)2.6H2O) con aproximadamente 500 ml de agua.

Agregar 15 ml de H2SO4 concentrado y mezclar.

Adicionar agua destilada hasta la línea de aforo y dejar enfriar la solución.

Aforar y homogenizar la solución.

NOTA: Ésta solución se la puede almacenar máximo una semana, razón por la cual

es preferible preparar la cantidad necesaria para cada serie de muestras.

7.3. Anexo III: Preparación de la solución indicadora de difenilamina 1 %

Pesar en una cápsula de porcelana 0.5 g de difenilamina.

Disolver la difenilamina en 100 ml de ácido sulfúrico concentrado.

Agregar la mezcla anterior a 20 ml de agua destilada y homogenizar la

solución.

Guardar la solución indicadora en un frasco ámbar.

7.4. Anexo IV: Cuadro de Interpretación de la MO y N total

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS - REGIÓN COSTA

PARÁMETROS MO * (%) N*(%)

BAJO < 3.1 0-0.15

MEDIO 3.1 – 5.0 0.16 – 0.3

ALTO >5.0 >0.31

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS - REGIÓN SIERRA

PARÁMETROS MO * (%) N*(%)

BAJO < 1.0 0-0.15

MEDIO 1 – 2.0 0.16 – 0.3

ALTO >2.0 >0.31

7.5. Anexo VI: Registro de datos primario de Materia Orgánica y Nitrógeno Total en

muestras de suelos Fecha No.

Lab. Peso muestra (g)

Vol adicional dicromato (mL.)

Vol inicial bureta (mL)

Vol titulante (mL)

Cont K

MO (%)

N (%)

Resp.

PROCEDIMIENTO ESPECÍFICO DE ENSAYO DETERMINACIÓN DE FÓSFORO

ASIMILABLE EN SUELOS-MÉTODO OLSEN MODIFICADO

1. OBJETO

Definir un procedimiento para cuantificar fósforo (P) asimilable en muestras de

suelo.

2. ALCANCE


Aguas para cuantificar P asimilable utilizando el extracto de suelo obtenido mediante

procedimiento Olsen modificado



4. REFERENCIAS


PGC/LA/01, Procedimiento General "Gestión ele la Documentación".


5. GENERAL

El fósforo es esencial en todas las formas de vida conocidas, dado que constituye

un elemento clave en muchos procesos fisiológicos y bioquímicos. Se trata de un

componente presente en todas las células de todos los organismos vivos. El fósforo

aparece en estructuras complejas de ADN y ARN que, al contener y codificar la

información genética, controlan todos los procesos biológicos en las plantas.

Además, el fósforo es un componente fundamental del sistema de transporte de

energía en todas las células.

El fósforo desempeña un papel fundamental en la fotosíntesis, proceso por el que

las plantas absorben la energía del sol para sintetizar moléculas de carbohidratos,

es decir, de azúcares, que son transportados a los órganos de almacenamiento de

las plantas. Este proceso es esencial para todas las formas de vida y constituye el

primer paso en la cadena para producir alimentos, piensos y fibras.

Las raíces de las plantas absorben el fósforo del agua presente en el suelo y que

se denomina solución acuosa del suelo. Sin embargo, los compuestos de fósforo no

son muy solubles y, como consecuencia, la cantidad de fósforo que la planta puede

tomar de la solución acuosa del suelo tiende a ser mucho menor de la que necesita,

especialmente cuando la planta se encuentra en un periodo de fuerte crecimiento.

La carencia de fósforo afecta no solo al crecimiento de la planta y al desarrollo y

rendimiento de la cosecha, sino también a la calidad del fruto y a la formación de

las semillas. Asimismo, la carencia de fósforo puede retrasar la maduración de las

cosechas, con lo que se retrasa la recolección y se pone en riesgo la calidad del

producto.

El presente método cuantifica el fósforo asimilable mediante espectrofotometría UV-

YIS, partiendo del extracto de suelo obtenido con Olsen modificado. El fósforo es

determinado indirectamente por la formación de un complejo coloreado "azul de

molibdeno" que se forma por la reacción del fósforo con solución sulfomolíbdica en

presencia de ácido ascórbico, mismo que se mide espectrofotométricamente

mediante una curva de calibración elaborada con soluciones de fósforo de

concentraciones conocidas.

5.1. Políticas







5.2. Definiciones

Métodos espectrofotométricos: Es un conjunto de técnicas

instrumentales que permite comparar la radiación absorbida o transmitida

por una solución que contiene una cantidad desconocida de analito, vs.

una gama de soluciones que contienen una cantidad conocida del mismo

analito.

Longitud de onda: Es la distancia real recorrida por la onda, es decir, es

la distancia desde el inicio de un ciclo completo de una onda hasta su final.

La longitud de onda se la representa con la letra griega λ, y su unidad

dentro del SI es el metro (m), sin embargo, para aplicaciones analíticas


Transmitancia: a transmitancia óptica se define como la fracción de luz

incidente, a una longitud de onda específica, que pasa a través de una

muestra. Su expresión matemática es:

𝑇 =𝐼

𝐼0

Donde I0 es la intensidad del rayo incidente, e I es la intensidad de la luz

que viene de la muestra.

La transmitancia de una muestra está normalmente dada

porcentualmente, definida como:

𝑇% = (𝐼

𝐼0) 𝑥100%

5.3. Abreviaturas

SGC: Sistema de Gestión de Calidad y Competencia Técnica, basado en

los requisitos de la norma NTE INEN ISO/lEC 17025.




NA: No aplica

g: Gramos

ml: Mililitro

l: Litro


Aλ: Absorbancia

T: Transmitancia

λ: Longitud de onda

Nm: Nanómetros

P: Fósforo

5.4. Nivel de riesgo y calificación. Instrucciones de seguridad


ácido sulfúrico concentrado, por lo que es indispensable la utilización del



maneje dicha sustancia.

La preparación y manipulación de las soluciones "A" y "B" que se utilizan

durante el ensayo, deberán realizarse con guantes.

Durante la preparación del reactivo "A", la temperatura de la solución se

elevará por efecto de la disolución del ácido sulfúrico concentrado. Para ello,

se deberá controlar la temperatura con un baño de agua fría





6. DESCRIPCIÓN


6.1.1. Equipos

Espectrofotómetro UV-Vis

Balanza analítica

Estufa

Agitador magnético

Vortex

Potenciómetro

Sorbona

6.1.2. Materiales


Balón aforado de 50, 100, 200, 250, 500, 1000 y 2000 mJ.


Bureta de 50 ml

Tubos de ensayo

Gradillas

Pipeta automática de 1000 µl

Pipeta automática de 10 ml

Puntas para pipetas de 1000 µl y 10 ml

Vasos de precipitación de 100 ml

Papel aluminio

6.1.3. Reactivos

Tartrato de potasio y antimonio

Molibdato de amonio

Ácido sulfúrico concentrado G.R.

Ácido ascórbico

Goma de acacia ó arábiga

Fosfato monobásico de potasio P.A. o solución comercial para

espectrofotometría de 1000 ppm de P


EDTA

Hidróxido de sodio P.A.

Agua tipo I


El método de referencia no establece condiciones ambientales específicas.


ser realizadas


el extracto de suelo de acuerdo a la metodología descrita en el PEE/SFA/04.

Antes de comenzar con la realización del presente procedimiento, se debe

preparar el reactivo "B" tal como se indica en el Anexo ll.

A fin de evitar cualquier contaminación cruzada, es indispensable lavar muy

bien con jabón libre de fósforo el material de vidrio a utilizarse en el ensayo,

cepillando correctamente cada utensilio, para posteriormente secarlo en la

estufa a 105 ºC.

Para la realización del presente ensayo se deberá ocupar agua tipo I, tanto

para la preparación de las soluciones, como para el análisis.

Verificar de acuerdo al instructivo INT/SFA/13, Instructivo "Uso y Verificación

de Equipo UV-Vis".

6.4. Realización

Elaborar los estándares de 1 - 2.5 - 5 - 7 .5 y 10 ppm de P para la curva de

calibración, tal como se detalla en el Anexo IV.

Colocar en un tubo de ensayo 4 ml de agua tipo I con una pipeta automática.

Añadir 5 ml del reactivo "B" preparado tal como se indica en el Anexo II con

una pipeta automática. Si la mezcla del agua con el reactivo "B" da coloración

azul, desechar ese ensayo y volver a realizarlo, puesto que una coloración

azul antes de añadir la muestra significa contaminación. La mezcla agua y

reactivo "B" debe ser perfectamente transparente.

Adicionar en el tubo de ensayo 1 ml del extracto de suelo con una pipeta

automática.

Agitar la mezcla contenida en el tubo en el vortex.

Dejar reposar una hora sin exponer las soluciones a la luz directa.

Proceder de la misma manera con todos los puntos de la curva de

calibración, realizando adicionalmente un blanco de la misma forma

utilizando la solución de Olsen modificado.

Cargar en el Espectrofotómetro de UV-VIS el método para fósforo en suelos,

mismo que debe estar a una longitud de onda de 882 nm.

Realizar la curva de calibración, encerando el equipo con el blanco, e

ingresando como cero de la curva al blanco.

Leer las absorbancias de las muestras.


El resultado se registra en el formato PEE/SFA/11-FO01 Registro de datos

primario de fósforo asimilable en muestras de suelos


6.6.1. Cálculos

Para obtener la concentración de P en ppm de las muestras de suelo, se

deberá considerar el factor de dilución de 10, proveniente de la relación 25

ml de extractante / 2.5 g de muestra de suelo utilizada para obtener el

extracto de suelo. Para esto se puede proceder de las dos maneras

siguientes:

Correr la curva de calibración ingresando en el equipo las

concentraciones de 1 - 2.5 - 5 - 7.5 y 10 ppm, y luego multiplicar los

resultados obtenidos del espectrofotómetro por 10.

Correr la curva de calibración ingresando en el equipo las

concentraciones de 10 - 25 - 50 - 75 y 100 ppm, con la finalidad de reportar

directamente el valor proporcionado por el espectrofotómetro.



actividades:

• Corridas con una muestra control interno.

• Curva de calibración.




Actividad

Criterio de

aceptación y

rechazo

Acción si no cumple Frecuencia Responsable

Corridas con

una muetra

control

interno

± 20% en

valor

aproximado

de 100 ppm

Verificar la calibración del

UV- VIS.

Cada grupo

de análisis RT/A

Curva de

calibración R2 ≥ 0,995

Quitar un punto de

calibración hasta que la

curva se ajuste y mínimo

con 3 puntos de

calibración, si no cumple

volver a calibrar.


procedimiento PGC/LN08


No aplica

7. ANEXOS

7.1 Anexo I: Preparación del reactivo "A".

• Pesar en una cápsula de porcelana aproximadamente 1.5 g de tartrato

de potasio y antimonio.

• Secar en la estufa a 105 ºC el tartrato de potasio y antimonio contenido

en la cápsula de porcelana por 2 horas.

• Enfriar el tartrato de potasio y antimonio en un desecador por 1 hora.

• Pesar en la balanza analítica 1 g de tartrato de potasio y antimonio


• Trasvasar cuantitativamente el tartrato de potasio y antimonio un balón

de 1 l.

• Disolver el tartrato de potasio y antimonio contenido en el balón con

aproximadamente 400 ml de agua tipo l.

• Añadir lentamente 165 ml de ácido sulfúrico concentrado G. R.,

enfriando la solución con un baño de agua fría.

• Pesar en la balanza analítica 7.5 g de molibdato de amonio en un papel

aluminio.

• Trasvasar cuantitativamente el molibdato de amonio a un vaso de

precipitación de 400 ml.

• Disolver el molibdato de amonio con aproximadamente 300 ml de agua

tipo I.

• Una vez que la mezcla de ácido sulfúrico y tartrato esté completamente

fría, adicionar la solución de molibdato.

• Aforar con agua tipo 1 y homogenizar la solución.

• Almacenar la solución en un frasco ámbar perfectamente limpio y bien

etiquetado.

NOTA: Esta solución es sensible al calor y a la luz, sin embargo, si es

almacenada en un frasco ámbar y en refrigeración se conserva durante varios

meses sin deteriorarse.

7.2 Anexo II: Preparación del reactivo "B".

• Pesar 1 g de ácido ascórbico en la balanza analítica sobre papel

aluminio.

• Pesar 1 g de goma arábiga en la balanza analítica sobre papel

aluminio.

• Transferir cuantitativamente tanto el ácido ascórbico como la goma

arábiga a un balón aforado de 1 l, mismo que debe estar cubierto con

papel aluminio para evitar que el ácido ascórbico se descomponga por

acción de la luz.

• Adicionar al balón 150 ml del reactivo "A" preparado tal como se indica

en el Anexo l.

• Disolver el ácido ascórbico y la goma arábiga en el reactivo "A" con

ayuda de agitación magnética.

• Aforar con agua tipo l y homogenizar la solución.

NOTA: El reactivo "B" es inestable y no se puede almacenar, por tal motivo, éste

reactivo se lo prepara el mismo día en que se va a realizar el análisis de P. Por lo

tanto, antes de preparar el reactivo "B", es necesario calcular el volumen que se

requiere para analizar la serie de muestras, tomando en consideración los puntos

de la curva, el blanco y las posibles diluciones.

7.3 Anexo III: Preparación de la solución extractora de Olsen modificado.

• Pesar en una cápsula de porcelana 84 g de bicarbonato de sodio


• Trasvasar cuantitativamente la mezcla de reactivos a un balón aforado de

2 l.

• Disolver los reactivos con agua destilada tipo I y llenar de agua el balón


• Ajustar el pH a 8.5 disolviendo lentejas de hidróxido de sodio con ayuda

de agitación magnética.

• Aforar con agua tipo l y homogenizar la solución.

7.4 Anexo IV: Elaboración de estándares para la curva de calibración.

a) Elaboración de la solución madre de 1000 ppm de P

En caso de que no se disponga de una solución comercial de 1000 ppm de P.

proceder como sigue:

• Pesar aproximadamente 6 g de fosfato monobásico de potasio

(KH2P04) en una cápsula de porcelana.

• Secar el fosfato monobásico de potasio en la estufa a 105 ºC por 2

horas.

• Enfriar el fosfato monobásico de potasio en un desecador por 1 hora.

• Pesar en la balanza analítica 4.394 g de fosfato monobásico de potasio


• Trasvasar cuantitativamente el fosfato monobásico de potasio a un

balón aforado de 1 l.

• Disolver el fosfato monobásico de potasio con agua destilada tipo 1,


• Almacenar la solución madre en un frasco plástico perfectamente

limpio y bien etiquetado en refrigeración.

b) Elaboración de la solución estándar de 10 ppm de P

• Colocar 2.5 ml de la solución madre de 1000 ppm de P en un balón

aforado de 250 ml con una pipeta automática.

• Aforar el balón a 250 ml con solución extractora de Olsen modificado y

homogenizar la solución.

• Almacenar la solución estándar en un frasco plástico perfectamente limpio

y bien etiquetado en refrigeración.

c) Elaboración de los estándares de 1 - 2.5 - 5 y 7.5 ppm de P

• Colocar en balones aforados de 50 ml perfectamente limpios, la siguiente

cantidad de solución estándar de 10 ppm de P con la ayuda de una bureta

de 50 ml:

No. Estándar Concentración del

estándar (ppm)

Volumen de solución estándar

de 10 ppm de P en ml.

1 1 5

2 2.5 12.5

3 5 25

4 7.5 37.5

• Aforar el balón a 50 ml con solución extractora de Olsen modificado y

homogenizar la solución.

• Almacenar las soluciones estándar en frascos plásticos perfectamente

limpios y bien etiquetados en refrigeración.

7.5 Anexo V: Cuadro de Interpretación del P.

REGIÓN COSTA Y SIERRA

PARÁMETRO P (ppm)

BAJO 0 - 10

MEDIO 11 – 20

ALTO >21

7.6 Anexo VI: Registro de datos primarios de fosforo asimilable en muestra

de suelo.

No. Lab. Concentración (ppm) Abs

PROCEDIMIENTO ESPECÍFICO DE ENSAYO DETERMINACIÓN DE K, Ca Y

Mg ASIMILABLES EN SUELOS-MÉTODO OLSEN MODIFICADO

1. 0BJETO

Definir un procedimiento para cuantificar K, Ca y Mg asimilables en muestras de

suelo.

2. ALCANCE


Aguas para cuantificar K, Ca y Mg asimilables utilizando el extracto de suelo

obtenido mediante Olsen modificado


Analito Rango (cmol/kg)

Potasio 0,32 – 1,28

Calcio 3,12 – 12,50

Magnesio 0,62 – 2,50

4. REFERENCIAS



INIAP cuarta aproximación Quito-2009.

5. GENERAL

El potasio (K), calcio (Ca) y magnesio (Mg) son macronutrientes, es decir son

elementos que son requeridos en grandes cantidades por las plantas. El potasio

tiene un rol muy importante, aumenta la resistencia a enfermedades y sequía, ayuda

en la actividad enzimática, en la fotosíntesis, en el balance de agua, y en el

crecimiento meristemático, favoreciendo la fructificación, la maduración y el

desarrollo de los frutos. El calcio estimula el desarrollo de las raíces y de las hojas,

interviene en la activación de varios sistemas de enzimas, y ayuda a neutralizar los

ácidos orgánicos de la planta. Por otra parte el magnesio está muy asociado con el

calcio y el potasio, favorece la absorción del fósforo, participa como activador

enzimático, y es el elemento constituyente principal de la molécula de clorofila,

fundamental en la fotosíntesis.

El presente método cuantifica el K, Ca y Mg asimilables mediante

espectrofotometría de absorción atómica, partiendo del extracto de sucio obtenido

con Olsen modificado.

5.1. Políticas







5.2. Definiciones

• Métodos espectrofotométricos: Es un conjunto de técnicas instrumentales que

permiten comparar la radiación absorbida o transmitida por una solución que

contiene una cantidad desconocida de analito, vs. una gama de soluciones que

contienen una cantidad conocida del mismo analito.

• Absorción atómica: Es un método instrumental que esta basado en la

atomización del analito en matriz líquida, utilizando un nebulizador para crear una

niebla de la muestra y un quemador con forma de ranura que da una llama, en

donde la muestra es desolvatada y expuesta a una energía a una determinada

longitud de onda emitida ya sea por una lámpara de cátodo hueco construida con el

mismo analito a determinar o una lámpara de descarga de electrones.

• Longitud de onda: Es la distancia real recorrida por la onda, es decir, es la

distancia desde el inicio de un ciclo completo de una onda hasta su final. La longitud

de onda se la representa con la letra griega A, y su unidad dentro del SI es el metro

(m), sin embargo, para aplicaciones analíticas espectrofotométricas se utiliza el

submúltiplo nanómetro (nm).

5.3. Abreviaturas

SGC: Sistema de Gestión de Calidad y Competencia Técnica, basado en los requisitos de la norma NTE INEN ISO/IEC 17025.




NA: No aplica

g: Gramos

mL: Mililitro

L: Litro


cmol/kg: centimol por kilogramo

Aλ: Absorbancia

λ: Longitud de onda

nm: Nanómetros


El presente procedimiento utiliza sustancias químicas peligrosas, por lo que es

indispensable la utilización del equipo de protección personal completo (mandil,

guantes, gafas y respirador con doble filtro para ácidos y vapores orgánicos) y

Sorbona cuando se maneje dicha sustancia.



RT Planificación de análisis Evaluar resultados de los

análisis


6. DESCRIPCIÓN

6.1 Equipos, materiales y reactivos

6.1.1. Equipos

Espectrofotórnetro de absorción atómica

Balanza analítica

Agitador magnético

Vortex

Potenciómetro

Sorbona

6.1.2 Materiales

Balón aforado de 50, 100, 200 y 2000 mL

Pipetas volumétricas de l, 2, 4, 5, 10 y 20 mL

Dispensador automático de 25 mL

Tubos de ensayo

Gradillas

Pipeta automática de 100 - 1000 µl

Pipeta automática de l - 10 mL

Puntas para pipetas de 1000 µl y 10 mL

Papel aluminio

6.1.3 Reactivos

Oxido de lantano G.R.

Ácido clorhídrico concentrado G.R.

Estándar comercial de 1000 ppm de K

Estándar comercial de 1000 ppm de Mg

Estándar comercial de 1000 ppm de Ca


EDTA

Hidróxido de sodio G.R.

Agua tipo I

6.2 Condiciones ambientales


específicas. Se considera las condiciones en los manuales de los

equipos de absorción atómica entre 10-35°C.

La identificación de la muestra debe mantener los criterios

establecidos en el instructivo INT/SFA/09

Verificar de acuerdo al instructivo INT/SFA/02, Instructivo "Uso y

Verificación de Equipo de Absorción Atómica".

6.4. Realización

Elaborar el blanco y los siguientes estándares de acuerdo a lo indicado

en el Anexo III:

Para K: 12.5 - 25.0- 37.5 y 50.0 ppm

Para Ca: 62.5 - 125.0 - 187.5 y 250 ppm

Para Mg: 7.5 - 15 - 22.5 y 30.0 ppm

Colocar en un tubo de ensayo 1 mL del extracto de suelo con una

pipeta automática.

Añadir 9 mL de agua tipo I y 15 mL de óxido de lantano al 1 %.

Agitar la mezcla contenida en el tubo con el vortex.

Colocar la lámpara y cargar en el software del espectrofotómetro de

absorción atómica el método del elemento a determinar.


Realizar la curva de calibración en el equipo, ingresando como cero el

blanco.

Leer las absorbancias de las muestras y determinar la concentración

del analito en ppm.

NOTA: En caso de que se deba realizar una dilución en alguna muestra, utilícese el

blanco como solvente y considérese el factor de dilución respectivo.


6.6.1. Cálculos

Para obtener la concentración del K, Ca y Mg en las muestras de suelo en

cmol/kg, que es igual a meq/100 mL, se deberá considerar los siguientes factores:

Factor de dilución 1:

Éste factor de dilución proviene de la relación 25 mL de extractante / 2.5

g de muestra de suelo utilizada para obtener el extracto de suelo. Es igual

a 10

Factor de dilución 2:

Éste factor de dilución proviene de la dilución de la muestra con agua y

con óxido de lantano (25 mL total/ 1 mL de alícuota), el mismo que es

igual a 25.

Factor para convertir los ppm en meq/100 mL:

Los datos que se obtienen del espectrofotómetro de absorción atómica se

encuentran en ppm, es decir en mg/1, y para convertir ésta unidad a

meq/100 mL se realizan los siguientes cálculos de conversión:

Para K:

1𝑚𝑔𝐾

𝑙𝑥

1𝑙

1000𝑚𝑙𝑥

1𝑚𝑒𝑞𝐾

39𝑚𝑔𝑘𝑥

100𝑚𝑙

100𝑚𝑙= 0,00256

𝑚𝑒𝑞𝐾

100𝑚𝑙

Para Ca:

1𝑚𝑔𝐾

𝑙𝑥

1𝑙

1000𝑚𝑙𝑥

1𝑚𝑒𝑞𝐾

20𝑚𝑔𝑘𝑥

100𝑚𝑙

100𝑚𝑙= 0,005

𝑚𝑒𝑞𝐶𝑎

100𝑚𝑙

Para Mg

1𝑚𝑔𝐾

𝑙𝑥

1𝑙

1000𝑚𝑙𝑥

1𝑚𝑒𝑞𝐾

12𝑚𝑔𝑘𝑥

100𝑚𝑙

100𝑚𝑙= 0,00833

𝑚𝑒𝑞𝑀𝑔

100𝑚𝑙

Cálculo para determinar la concentración de K, Ca y Mg en la muestra de

suelo:

Tomando en consideración los factores antes expuestos, para calcular la

concentración de K, Ca y Mg asimilables en las muestras de suelo, se puede

proceder de las dos maneras siguientes:

a) Correr la curva de calibración ingresando en el equipo las

concentraciones de 12.5 -25.0 - 37.5 y 50 ppm para K; 62.5 - 125.0 -

187.5 y 250 ppm para Ca y 7.5 - 15.0 - 22.5 y 30.0 ppm para Mg, y

luego multiplicar los resultados obtenidos del espectrofotómetro por

los siguientes factores:

Para K = 0.0256, que resulta de multiplicar el factor de dilución y el

factor de conversión de unidades (10 x 0.00256)

Para Ca = 0.05, que resulta de multiplicar el factor de dilución y el

factor de conversión de unidades (10 x 0.005)

Para Mg = 0.0833, que resulta de multiplicar el factor de dilución y el

factor de conversión de unidades (10 x 0.00833).

b) Correr la curva de calibración ingresando en el equipo las

concentraciones de 0.32 - 0.64-0.96 y 1.28 meq/ 100 m1 para K; 3. J 2 -

6.25 - 9.38 y 12.50 meq/100 mL para Ca y 0.62 - 1.25 - 1.87 y 2.50

meq/ 100 mL para Mg, con la finalidad de reportar directamente el valor

proporcionado por el espectrofotómetro.

Los resultados así obtenidos, se anotan en el cuaderno correspondiente

a "Datos Metales", en el cual se deberá asentar la sumilla del analista

responsable del análisis. Posteriormente, los resultados deberán anotarse

tanto física como electrónicamente en el "Registro de Resultados de

Muestras de Suelo".

6.6.2 Aseguramiento de la Calidad


actividades:

Corridas con una muestra control interno.

Medida de estándar

Curva de calibración.

6.6.3 Criterios de Aceptación o rechazo de los resultados




aceptación y

rechazo

Acción si no

cumple


Corridas con

una muestra

control interno

±20% para

cada metal

Verificar la

calibración del

equipo de

absorción

atómica

Cada grupo de

análisis

RT/A

Medida de

estándar

Leer un

estándar cada

15 muestras,

±20% de su

valor teórico

Volver a

realizar la

curva de

calibración.

Curva de

calibración

R2≥0,99 Quitar un punto

de calibración

hasta que la

curva se ajuste

y mínimo con 3

puntos de

calibración, si

no cumple

volver a

calibrar.


No aplica


Los resultados de K, Ca y Mg asimilables serán expresados en cmol/kg

(cmol/kg = meq/ 100 mL), y se reportarán en el informe con 2 cifras

decimales. Adicionalmente se colocará en el informe de resultados el cuadro

de interpretación indicado en el Anexo IV.

7. Anexos

7.1 Preparación de la solución de óxido de lantano al 1%

Pesar 23.456 g de óxido de lantano en la balanza analítica sobre una

cápsula de porcelana.

Trasvasar cuantitativamente el óxido de lantano a un balón de 2 L.

Añadir aproximadamente 100 mL de agua tipo l.

Añadir lentamente 100 mL de ácido clorhídrico concentrado, enfriando

la solución con un baño de agua fría. Este procedimiento realizarlo en

sorbona.

Agitar la mezcla hasta que el óxido de lantano esté totalmente disuelto.


Almacenar la solución en un frasco de vidrio perfectamente limpio y

bien etiquetado.

7.2 Preparación de la solución extractora de Olsen modificado.

Pesar en una cápsula de porcelana 84,6 g de bicarbonato de sodio

(NaHCO3) y 7,44 g de EDTA.


de 2 l.



Ajustar el pH a 8.5 disolviendo lentejas de hidróxido de sodio con


Aforar con agua tipo l y homogenizar la solución.

7.3 Elaboración de estándares para las curvas de calibración

a) Elaboración del blanco

Colocar en un tubo de ensayo de 25 mL perfectamente limpio l mL de

solución

extractora de Olsen modificado con una pipeta automática.

Añadir 4 ml de óxido de lantano al 1% con un dispensador automático.

Añadir 20 ml de agua tipo I y homogenizar la solución en el vortex.

b) Elaboración de la solución madre para todos los metales

Preparar 200 mL de solución madre de la siguiente manera: Tomar 10

mL de estándarde K de 1000 ppm con pipeta volumétrica; tomar 50

mL de estándar de Ca de 1000 ppm con pipeta volumétrica y tomar 65

mL de estándar de Mg de 1000 ppm con pipeta volumétrica, aforar con

la solución Olsen modificado.

c) Elaboración de los estándares para todos los elementos

Colocar en balones aforados de 100 mL perfectamente limpios, la

siguiente cantidad de solución madre con la ayuda de pipetas

volumétricas:

No.

Estándar

Concentración

del estándar de

K (cmol/kg)

Concentración

del estándar de

Ca (cmol/kg)

Concentración

del estándar de

Mg (cmol/kg)

Volumen de

solución

madre en mL

1 0 0 0 0

2 0,32 3,12 0,62 25

3 0,64 6,25 1,25 50

4 0,96 9,38 1,87 75

5 1,28 12,50 2,50 0

Aforar los balones a 100 mL con solución extractora de Olsen

modificado y homogenizar las soluciones.

El estándar 1 es el blanco de calibración de la curva.

El estándar 5 es la misma solución madre para todos los metales.


limpios y bien etiquetados en refrigeración, por un tiempo máximo de

un mes.

d) Elaboración de los estándares para todos los elementos

Colocar en un tubo de ensayo de 25 mL perfectamente limpio l mL

de cada estándar con una pipeta automática.

Añadir 4 mL de óxido de lantano al 1 % con un dispensador

automático.

Añadir 20 mL de agua tipo I y homogenizar la solución.

7.4 Cuadro de interpretación del K, Ca y Mg

Región Costa y Sierra

Parámetro Fe (ppm) Mn (ppm) Cu (ppm) Zn (ppm)

Bajo 0- 20 0 - 5 0 - 1 0 -3

Medio 21 - 40 6 - 15 1,1 - 4 3,1 - 6

Alto > 41 > 16 > 4,1 > 6,1

Fecha No. Lab

MACROELEMENTOS MICROELEMENTOS

K Ca Mg Fe Cu Zn

Diluc. Conc. (cmol/Kg)






PROCEDIMIENTO ESPECÍFICO DE ENSAYO DETERMINACIÓN

DETERMINACIÓN DE Fe, Cu, Zn y Mn ASIMILABLES EN SUELOS – MÉTODO

OLSEN MODIFICADO

1. OBJETO

Definir un procedimiento para cuantificar Fe, Cu, Zn y Mn asimilables en muestras

de suelo.

2. ALCANCE


Aguas para cuantificar Fe, Cu, Zn y Mn asimilables utilizando el extracto de suelo.


Analito Rango (mg/kg)

Cobre 7,50 – 30,00

Hierro 125,0 – 500,0

Manganeso 7,50 – 30,00

Zinc 5,00 – 20,00

4. REFERENCIA

Suelos agrícolas de las diferentes regiones del Ecuador en un rango de:


• Metodología Unificada de la Red de Laboratorios de Suelos del Ecuador,

Catálogo INIAP cuarta aproximación Quito-2009.

5. GENERAL

Todos los documentos elaborados, como parte del SGC, deben ser administrados

por el Departamento de Calidad.


Los documentos emitidos por el Laboratorio de Suelos, Foliares y Aguas puede

hacer referencia a otros documentos concretos, indicando los apartados, no

repitiendo su contenido.

5.2. Definiciones

• Métodos espectrofotométricos: Es un conjunto de técnicas

instrumentales que permiten comparar la radiación absorbida o

transmitida por una solución que contiene una cantidad desconocida de

analito, vs. una gama de soluciones que contienen una cantidad conocida

del mismo analito.

• Absorción atómica: Es un método instrumental que está basado en la

atomización del analito en matriz líquida, utilizando un nebulizador para

crear una niebla de la muestra y un quemador con forma de ranura que

da una llama, en donde la muestra es desolvatada y expuesta a una

energía a una determinada longitud de onda emitida ya sea por una

lámpara de cátodo hueco construida con el mismo analito a determinar o

una lámpara de descarga de electrones.

• Micronutrientes: Elementos que la planta absorbe en pequeñas

cantidades.

5.3 Abreviatura

SGC: Sistema de Gestión de Calidad y Competencia Técnica, basado en los requisitos de la norma NTE INEN ISO/IEC 17025.




A: Analista

NA: No aplica

Kg: Kilogramos

mL: Mililitro


• El presente procedimiento requiere la utilización de sustancias químicas

peligrosas, por lo que es necesario el uso de mandil, guantes, mascarilla

y gafas de seguridad durante la realización de éste ensayo.

• El tanque de acetileno debe ser cambiado cuando la presión llegue a 100

psi para evitar que la acetona llegue a dañar el quemador.



RT Planificación de análisis Evaluar resultados de los

análisis


6. DESCRIPCIÓN

6.1 Equipos, materiales y reactivos

6.1.1. Equipos

Espectrofotórnetro de absorción atómica

Plancha de calentamiento

Balanza analítica

Agitador orbital

Vortex

Potenciómetro

6.1.2 Materiales

Balón aforado de 200, 1000 y 2000 mL

Pipetas volumétricas de 2, 3, 50 y100 mL

Tubos de ensayo

Gradillas

Papel aluminio

6.1.3 Reactivos

Estándar comercial de 1000 ppm de Fe

Estándar comercial de 1000 ppm de Cu

Estándar comercial de 1000 ppm de Zn

Estándar comercial de 1000 ppm de Mn


EDTA

Hidróxido de sodio G.R.

Agua tipo I

6.1.4 Materiales de Referencia

Se cuenta con material de referencia código SFA/MRI002

6.2 Condiciones ambientales


específicas. Se considera las condiciones en los manuales de los

equipos de absorción atómica entre 10-35°C.

6.4 Realización

Elaborar los siguientes estándares de acuerdo a lo indicado en el Anexo ll:

Para Fe: 12.5 - 25.0 - 37.5 y 50.0 ppm

Para Zn: 0.5 - 1.0 - 1.5 y 2.0 ppm

Para Cu: 0.75 - 1.50 - 2.25 y 3.00 ppm

Para Mn: 0.75 - 1.50 - 2.25 y 3.00 ppm

• Encender la lámpara y cargar en el software del espectrofotómetro de

absorción atómica el método del elemento a determinar.

• Encender el quemador y encerar el equipo con el blanco, que es solución

extractora de Olsen modificado.

• Realizar la curva de calibración en el equipo tomando como cero de la curva

el blanco.

• Leer las absorbancias de las muestras y determinar la concentración del

analito en mg/kg.

NOTA: En caso de que se deba realizar una dilución en alguna muestra, utilícese

la solución extractora de Olsen modificado como solvente.


6.6.1. Cálculos

a) Correr la curva de calibración ingresando en el equipo las

concentraciones de 12.5 - 25.0 - 37.5 y 50.0 ppm para Fe; 0.5 - 1.0 -

1.5 y 2.0 ppm para Zn; 0.75 - 1.50 - 2.25 y 3.00 ppm para Cu y 0.75 -

1.50 - 2.25 y 3.00 ppm para Mn, y luego multiplicar los resultados

obtenidos del espectrofotómetro por el factor de dilución de 10, que

resulta de la preparación del extracto de suelos con Olsen modificado

b) Correr la curva de calibración ingresando en el equipo las

concentraciones de 125 - 250 - 375 - 500 ppm para Fe; 5 - 10 - 15 - 20

ppm para Zn; 7.5 - 15.0 - 22.5 - 30.0 para Cu: y 7.5 - 15.0 - 22.5 - 30.0

para Mn, con la finalidad de reportar directamente el valor

proporcionado por el espectrofotómetro.

Los resultados se reportan de la medida directa del equipo.



actividades:

• Corridas con una muestra control interno.

• Medida de estándar

• Curva de calibración.





aceptación y

rechazo

Acción si no

cumple


Corridas con

una muestra

control interno

±20% para

cada metal

Verificar la

calibración del

equipo de

absorción

atómica

Cada grupo de

análisis RT/A

Medida de

estándar

Leer un

estándar cada

15 muestras,

±20% de su

valor teórico

Volver a

realizar la

curva de

calibración.

Curva de

calibración

R2≥0,99 Quitar un punto

de calibración

hasta que la

curva se ajuste

y mínimo con 3

puntos de

calibración, si

no cumple

volver a

calibrar.


No aplica


Los resultados en mg/kg, y se reportan en el informe con dos cifras decimales para

Cu, Mn y Zn y con una cifra decimal para Fe.

7. ANEXOS

7.1 Preparación de la solución extractora de Olsen modificado.

Pesar en una cápsula de porcelana 84,6 g de bicarbonato de sodio



de 2 l.



Ajustar el pH a 8.5 disolviendo lentejas de hidróxido de sodio con


Aforar con agua tipo l y homogenizar la solución.

7.2 Elaboración de estándares para la curva de calibración

a) Elaboración de la solución madre para todos los metales

• Preparar 1000mL de solución madre de la siguiente manera:

Tomar 50mL de estándar de Fe de 1000 ppm con pipeta

volumétrica; tomar 2 ml de estándar de Zn de 1000 ppm con pipeta

volumétrica; tomar 3 mL de estándar de Cu de 1000 ppm con

pipeta volumétrica y tomar 3 mL de estándar de 1000 ppm de Mn

con pipeta volumétrica, aforar con agua tipo I.

b) Elaboración de los estándares para todos los elementos

• Colocar en balones aforados de 200 mL

• perfectamente limpios, la siguiente cantidad de solución madre

con la ayuda de pipetas volumétricas:

No.

Estándar

Concentración

del estándar

de Fe (ppm)

Concentración

del estándar

de Zn (ppm)

Concentración

del estándar

de Cu (ppm)

Concentración

del estándar

de Mn (ppm)

Volumen

de

solución

madre en

mL

1 0 0 0 0 0

2 12,5 0,5 0,75 0,75 50

3 25,0 1,0 1,50 1,50 100

4 37,5 1,5 2,25 2,25 150

5 50,0 2,0 3,00 3,00 0

• Aforar los balones a 200 mL con solución extractora de Olsen

modificado y homogenizar las soluciones.

• El estándar les el blanco de calibración de la curva (solución

Olsen modificado)

• El estándar 5 es la misma solución madre para todos los metales.

• Almacenar las soluciones estándar en frascos plásticos

perfectamente limpios y bien etiquetados en refrigeración, por un

tiempo máximo de un mes.

TULCÁN - ECUADOR AÑO: 2018 · 2019. 3. 13. · Muestras foliares de las diferentes regiones del...

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