torundas

Fecha emisin: 04.08.2008 Revisin: 1

PROCEDIMIENTO RECUENTO DE MICROORGANISMOS EN SUSPENCIN POR

METODO DE TORUNDA EN SUPERFICIE Fecha revisin: 26.11.2008

Seccin Microbiologa de Alimentos

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1. OBJETIVO Conocer la carga microbiana en una superficie determinada en un volumen conocido de lquido. 2. CAMPO DE APLICACIN Y ALCANCE Aplicar a muestras de hisopado de superficie recepcionadas en la Seccin Microbiologa de Alimentos. 3. FUNDAMENTO Es un procedimiento de lavado con torunda (hisopado) de un rea conocida de la superficie a investigar, limitada por una plantilla. Los microorganismos recogidos por la torunda se recuperan en un volumen conocido de lquido con el que se realiza el recuento bacteriano. 4. REFERENCIAS 4.1 Microbiologa prctica de los alimentos, Roberts D., Hooper W., Greenwood M.,

Editorial Acribia, 1995. 4.2 Compendium of Methods for the Microbiological Examination of foods. Fourth edition,

APHA 2001.Capltulo 3.51 5. TERMINOLOGA No Aplica





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6. MATERIALES, INSUMOS Y EQUIPOS 6.1 Materiales 6.1.1 Plantilla de aluminio de 25 cm2 estril 6.1.2 Trula estril de algodn no absorbente de 0,5 cm de dimetro por 2 cm de largo

sobre un aplicador de madera de 12 a 15 cm de largo 6.1.3 Trulas estriles de alginato de calcio o rayn tambin pueden ser usadas 6.1.4 Placas Petri 6.1.5 Pipetas estriles de 1 y 5 mL 6.2 Reactivos y medios de cultivo 6.2.1 Solucin de hexametafosfato de sodio al 1%, sodio glicerolfosfato o citrato de sodio

cuando se utilicen trulas de alginato de calcio las cuales sus fibras son solubles en estas soluciones acuosas.

6.2.2 Medio de transporte si se requiere 6.2.3 Frasco pequeo con tapa de rosca y con 5 perlas de vidrio de 3 mm de dimetro con

10 mL de Diluyente de mxima recuperacin (MRD) o solucin Ringer al cuarto de concentracin estril.

6.2.4 Si se utilizan trulas de alginato de calcio, se requieren frascos de 7 a 10 cm de largo con 4,5 mL del buffer de enjuague.

NOTA: si se muestrea superficies que han sido higienizadas, se debe usar diluyente con algn neutralizante como: 0,05 % de tiosulfato de sodio que neutraliza el cloro; 0,5% polisorbato (Tween 80) ms 0,07% de lecitina de soya, neutralizando el polisorbato los compuestos fenlicos y la lecitina los amonios cuaternarios

6.2.5 Agar Plate Count u otro medio de cultivo apropiado segn los microorganismos de

inters 6.3 Equipos 6.3.1 Incubadora regulada a 35C 1C





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7. DESARROLLO 7.1 Toma de muestra: 7.1.1 Abrir aspticamente el contenedor estril con la trula, tomar la trula por la parte

apical del aplicador de madera, cuidando de no tocar ninguna parte que ser insertada en el frasco.

7.1.2 Abrir el frasco con el diluyente en forma asptica. 7.1.3 Sumergir una torunda o trula de algodn en una alcuota de 10 mL de diluyente (MRD

o lquido de Ringer al cuarto de concentracin) contenido en un frasco pequeo o tubo de tapa rosca, que contiene de 5 perlas de vidrio pequeas (3 mm de dimetro).

7.1.4 Si se utilizan trulas de alginato de calcio sumergir la trula en un alcuota de 4,5 mL de la solucin buffer de enjuague.

7.1.5 Si se han utilizado higienizantes para limpiar la superficie, el diluyente debe contener algn neutralizante de los mencionados en la NOTA en el punto 6.

7.1.6 Escurrir el exceso de lquido de la torunda apretndola contra la pared del frasco o tubo y mantener firmemente la plantilla estril sobre la superficie a muestrear

7.1.7 Frotar con la cabeza de la trula en un ngulo de 30, toda la zona de muestreo (25 cm2) girndola en tres direcciones para aumentar al mximo su capacidad de recoger microorganismos.





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7.1.8 Romper la torunda, y el extremo algodonoso dejarlo caer en los 10 mL o 4,5 mL de

diluyente contenido en el frasco, envase o tubo.

7.1.9 Tomar una segunda torunda y repetir la frotacin del rea como antes.





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7.1.10 Para el muestreo de superficie de utensilios como cuchillos, cucharas, cucharones, etc,

humedecer la trula y muestrear en forma suave y firme 3 veces por la superficie.

7.1.11 Romper la torunda y dejar caer la porcin algodonosa en el mismo frasco o tubo de

diluyente. 7.1.12 Tapar el frasco con la muestra y poner en contenedor refrigerado para enviar al

laboratorio. 7.1.13 Analizar dentro de las 24 horas despus de la toma de muestra. 7.2 Siembra: 7.2.1 Agitar enrgicamente el frasco o tubo que contiene las torundas y las perlas de vidrio

hasta que las torundas se deshilachen dando fibras de algodn, haciendo 50 ciclos completos de 15 cm en 10 segundos, golpeando la palma de la otra mano al trmino de cada ciclo. Grupos de frascos o tubos pueden ser agitados al mismo tiempo.

7.2.2 Utilizando el mtodo de recuento en placa PRT-712.02-023 realice la siembra y cuente los microorganismos en suspensin. Para ello siembre 1 y 0,1 mL o diluciones si fuera necesario de la muestra agitada previamente con el diluyente.

7.2.3 Incubar 48 horas a 35C 1C. 7.2.4 Cuando otro tipo de microorganismo es buscado aada el respectivo agar selectivo/

diferencial e incube conforme a las condiciones requeridas.





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7.3 Clculo: 7.3.1 Efectuar la lectura y registrar los datos en el registro RG-712.00-101 Registro

Recuento microorganismos en superficie. Mtodo de torunda. 7.3.2 Realizar el clculo segn la siguiente frmula:

10 x N / 25 microorganismos por cm2 7.3.3 Para las superficies irregulares en donde no se puede calcular un rea, los resultados se

pueden registrar en base a todo el sitio de muestreo en lugar de un rea de medida. 7.4 Informe de resultados: 7.4.1 Informar los resultados como N de microorganismos por cm2 7.5 Interpretacin de resultados: 7.5.1 Conforme a la U.S. Public Health Service se recomienda que la limpieza adecuada y

la sanitizacin de equipamientos para servicios de alimentos no debe ser mayor a 100 colonias por utensilio o rea de superficie del equipamiento muestreado.

7.5.2 La interpretacin de resultados en reas que no pueden ser medidas debern estar

basadas en los datos histricos obtenidos cuando las reas han sido sometidas a limpieza y sanitizacin. Generalmente los niveles de microorganismos no deberan exceder ms que unas pocas colonias y en muchos casos el tipo de microorganismos puede ser ms significativo que slo el nmero.





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7.5.3 La Organizacin Mundial de la Salud tiene la siguiente clasificacin e interpretacin de

recuentos aerobios mesfilos (RAM) en controles de superficies. 1983. VPH 83.42.

N COLONIAS DESIGNACION INTERPRETACION

9900 44

MMAALLOO

WHO / 1983 VPH 83.42





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7.5.4 La Comunidad Econmica Europea cuenta con el siguiente estndar:

N DE MICROORGANISMOS INTERPRETACION

< 1 colonia / cm 2 Excelente De 2 a 10 colonias / cm 2 Bueno 11 ms colonias / cm 2 Limpiar la superficie inmediatamente.

NIVEL DE

NIVEL N ufc/100 cm 2 Muy bajo riesgo < 10Riesgo moderado >10 < 100

Alto nivel de riego > 100 < 1000 Muy alto nivel de riego >1000

European Standard CEN/TC 243/W G2 (1993)





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8. REGISTROS

Identificacin del registro

Almacenamiento Proteccin Recuperacin Tiempo retencin y disposicin

Registro Recuento microorganismos en superficie. Mtodo de torunda RG-712.00-101

Archivador rotulado Registros e informes de muestras Bioterio y Hetertrofos

Acceso restringido al personal de la Seccin de Microbiologa Alimentos

Papel 5 aos y eliminado en trozos a en basura normal

9. TABLA DE MODIFICACIONES Revisin N Pg.

Modificada Motivo del cambio Fecha Aprobacin

0 1 Se actualiz en el encabezado el numero de revisin 0 por revisin 1 y se actualiz la fecha de revisin.

0 1 Se agreg en el punto 4. REFERENCIA el numeral 4.2

0 2 Se complet el numeral 6.2 y la NOTA.

0 2 Se cambi el orden de los numerales y se agregaron los numerales 6.3 y 6.4 ,6.7, 6.9 y 6.10

0 2 Se agregaron los numerales 7.1.2, 7.1.3 71.5 cambiando el orden de stos.

0 2 En el numeral 7.1.3 se cambi 0,05% de tiosulfato de sodio para neutralizarlos por: algn neutralizante de los mencionados en la NOTA en el punto 6.





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Revisin N Pg.

Modificada Motivo del cambio Fecha Aprobacin

0 2 En el numeral 7.1.4 se agreg: ... con la cabeza de la trula en un ngulo de 30,....( 25 cm2 )...

0 3 Se agregaron los numerales 7.1.10, 7.1.12 y 7.1.13

En el numeral 7.2.1 se agreg:... , haciendo 50 ciclos completos de 15 cm en 10 segundos, golpeando la palma de la otra mano al trmino de cada ciclo. Grupos de frascos o tubos pueden ser agitados al mismo tiempo.

0 3 En el numeral 7.2.2 se agreg:...Para ello siembre 1 y 0,1 mL o diluciones si fuera necesario de la muestra agitada previamente con el diluyente

0 3 Se agregaron los numerales 7.2.3 y 7.2.4

0 3 Se agreg el numeral 7.3.3 0 3 Se agreg el punto 7.5 y sus

numerales 7.5 1 y 7.5 2

10. ANEXOS 10.1 Anexo N 1 Registro Recuento microorganismos en superficie. Mtodo de torunda RG-

712.00-101.

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