TEMA 8

5/13/2018 TEMA 8 - slidepdf.com

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TEMA 8

PROCESOS

BÁSICOSENCITOLOGÍA

CITOPREPARACIÓN



PROCESOS BÁSICOS

EN CITOLOGÍA 1.-DEFINICIONES BÁSICAS.

2.-TIPOS DE MUESTRAS CITOLÓGICAS.

3.-TÉCNICA GENERAL DE PREPARACIÓNY COLORACIÓN CITOLÓGICA.

4.-FROTIS Y EXTENSIONES.

5.-TINCIONES ESPECIALES EN CITOLOGÍA.



8.1.-DEFINICIÓNES BÁSICAS

Citodiagnosis /Citodiagnóstico: Procedimientodiagnóstico basado en el examen de las célulasobtenidas en un exudado o trasudado. // Resultado de

este examen. Citogenética: Estudio de la estructura y función de

los cromosomas celulares.

Citología: Parte de la biología que estudia la célula. Citólogo/ga: Persona especializada en citología.




CITOPATOLOGÍA

PARTE DE LA ANATOMÍA PATOLÓGICA QUE,MEDIANTE DIVERSOS PROCEDIMIENTOS,

ESTUDIA ALTERACIÓNES MORFOLÓGICAS

DE ESTAS CÉLULAS.




CITODIAGNÓSTICO

Es el diagnóstico morfológico basado en

los caracteres microscópicos de célulasy componentes extracelulares, desprendidos de

los órganos espontáneamente u obtenidos por

procedimientos que, en general, son menosinvasivos que la biopsia.



OBJETIVOS DEL

CITODIAGNÓSTICO 1) Colaboración

en el diagnóstico y tipificación

de neoplasias malignas,mediante la evaluación de

las alteraciones de la morfologíadel núcleo, del citoplasma

y de las relaciones entre las células.



OBJETIVOS DEL

CITODIAGNÓSTICO 2) Diagnóstico específico

de algunas lesiones benignas,por ejemplo:

tumores benignos,

hiperplasias,

ciertas infecciones virales o micóticas.



OBJETIVOS DEL

CITODIAGNÓSTICO 3) Elección de pacientes

que deben ser estudiadosmás profundamente

en grupos de alto riesgo

para un tipo específico de cáncer.



OBJETIVOS DEL

CITODIAGNÓSTICO 4) En hematología,

examen cualitativo y cuantitativode los elementos figurados

de la sangre periférica(hemograma)

y de la médula ósea (mielograma).



VENTAJAS

SIMPLICIDAD

RAPIDEZ

POCO AGRESIVIDAD BAJO COSTE

± PERMITE IDENTIFICAR EN POCO TIEMPO LA

MAYORÍA DE LAS LESIONES ± PERMITE REALIZAR UN MUESTREO DE LALESIÓN MUCHO MÁS AMPLIO Y REITERADO

± PERMITE HACER UN SEGUIMIENTO DINÁMICO

DE LA CONDUCTA DE LAS LESIONES



2.-TIPOS DE MUESTRAS CITOLÓGICAS.

dependiendo de la cantidad de líquido que presenten

Método directo: se emplea cuando la muestra esrica en células, es decir, presenta muy poca cantidadde líquido por lo que el material colectado se colocadirectamente sobre un portaobjetos para realizar elfrotis, como ejemplos tenemos la punción aspiracióncon aguja fina, los raspados e improntas.

Método indirecto: en caso de que las muestrasobtenidas sean líquidas y para realizar el frotis habráque concentrar la población celular mediantecentrifugación, ejemplos son la orina y líquidos

procedentes de lavado.



Métodos de Obtención de la Muestra

1.-Por exfoliación forzada, mediante el frotamiento o raspado con diversosinstrumentos. Esta técnica es aplicada en piel y órganos fácilmenteaccesibles desde el exterior.

Una variante son las muestras obtenidas por cepillado a través deendoscópio.

2.-A través de líquidos emitidos de forma espontánea que trasportan loselementos descamados (esputo, orina, secreción mamaria, secreción nasal)

3.-A través de líquidos extraídos mediante mediante instr umentos de

exploración (endoscopia), con células en suspensión procedentes de zonasorgánicas internas (tracto respiratorio, tubo gastrointestinal, cavidadesserosas). Estos líquidos pueden proceder de acúmulos originadosespontáneamente en dichas zonas o ser el resultado de lavados hechoscon suero fisiológico.

4.-Por punción-aspiración con aguja fina (PAAF) de lesiones en órganos sin

acceso directo y que no tienen secreciónes espontánea.



ÓRGANOS MAS ESTUDIADOS

APARATO GENITAL FEMENINO ÁRBOL RESPIRATORIO

APARATO DIGESTIVO VÍAS URINARIAS Y PRÓSTATA PIEL CAVIDADES ORGÁNICAS

PERITONEAL PLEURAL PERICÁRDICA RAQUÍDEA

ARTICULAR



Tipos de muestras según su

procedencia Muestras procedentes de líquidos fisiológicos como por ejemplo sangre, orina líquido cefalorraquídeo, liquido pleural,liquido prostático, contenido gástrico«

Muestras procedentes de líquidos y fluidos patológicos, liquidode derrames, pleural, peritoneal, contenido de un quiste,expectoración bronquial, liquido procedente del lavado deesófago, estómago, colon«. Y las procedentes de citopunciones como por ejemplo la punción de médula ósea, lapunción hepática

Muestra procedentes de frotis legrados como por ejemplo elfrotis vaginal y el cepillado bronquial.

Piezas operatorias.



MUESTRAS QUE LLEGAN AL

LABORATORIO Frotis fi jados: lo constituyen aquellos frotis que han sido extendidos yfijados por el clínico inmediatamente después de la obtención de la muestra.Deben llegar al laboratorio adecuadamente identificadas con el nombre delpaciente y uniformemente extendidos, normalmente se fijan con cito spray,estos portas que ya llegan al laboratorio fijados están listos para proceder ala tinción rutinaria que se suele realizar al de papanicolau, ejemplos son lassecreciones de mama, las muestras procedentes de cepillados y otros tiposde muestras citológicas.

Frotis secados al aire: son frotis extendidos por el clínico inmediatamentedespués de la obtención de la muestra y secados al aire, estos frotis nofijados van destinados a ser teñidos con la tinción de Romanowsky.

Muestras no fi jadas ni secadas al aire: este tercer grupo incluye lasmuestras frescas que llegan a laboratorio generalmente en forma de fluidolíquido o semisólido, requiere mayor dedicación y habilidad.



El procesamiento de estas

muestras puede ser por: Extensión directa: es la técnica más rudimentaria especialmente útil paramuestras mucosas (esputo, líquido de aspecto mucoso, aspiradobronquial«)

Centrif ugación: es una técnica útil para muestras seromucosas y grandes

volúmenes de líquidos serosos (liquido quístico y procedentes de lavados).

Citocentrif ugación: esta técnica se hace con una centrifuga llamadacitospyn. Pequeñas alícuotas (cantidades iguales) de muestra líquida sehacen girar lateralmente sobre un porta para formar una monocapa decélulas. Es una técnica de gran utilidad y rapidez para la preparación de

muestras líquidas. Filtros de membrana: constituyen una técnica de concentración de células

en muestras líquidas de baja densidad celular (orina) ya que rescatanmayor número de células que la citocentrifugación. Estos filtros sonmembranas porosas de plástico cuyos poros van de 10 - 8 micras.



Extensión directa

Identificar dos o más portas con el nombre o número de ordendel enfermo.

Observar la muestra y anotar su aspecto microscópico.

Se seleccionan aquellas partes de la muestra que sonrepresentativas de la misma y ó las de apariencia patológica.

Se deben colocar las partes seleccionadas sobre un porta y

extenderlas con otro hasta conseguir frotis uniformes, tambiénse pude hacer con el asa de platino previamente esterilizada.

Los portas preparados pueden introducirse en la soluciónfijadora (caso de la tensión de Papanicolau) o se deja secar al

aire (si se van a teñir con Romanowsky).



centrif ugación Anotar el aspecto mucoso de la muestra.

Agitar la muestra para después resuspender las células quecontiene y verter igual cantidad en dos tubos de centrifuga.

Se centrifuga a una velocidad aproximada de 2000rpm, durante5 minutos, una vez centrifugado se decanta el sobrenadante,mezclar el sedimento con unas gotas de sobrenadante pararesuspender las células y depositar con una pipeta pasteaur una gota de este sedimento sobre un porta previamente

identificado.

Realizar una extensión directa con esta parte de la muestra ocitocentrifugarla.

Fijar rápidamente con la solución fijadora.



Filtros de membranaLos más utilizados son:

Tipo millipore (de acetato de celulosa). Filtros nucleopore (de policarbonato).

Se realiza una filtración con la muestra y posteriormente se examina el filtro.

En citología se usan sobre todo los filtros SM, cuyos poros van de 1 - 2 a 5 micras, cada cm2de superficie contiene millones de poros capilares que ocupan más del 80 % del volumen total.Este filtrado no necesita ningún fraccionamiento del líquido y no hay que extraer el sedimento ycolocarlo sobre el pota objetos; ello permite una estimación cuantitativa de las célulascancerosas en un volumen de líquido dado pero en cambio pueden haber superposicionescelulares molestas y la membrana filtrante experimentar una desecación rápida.

El líquido se filtra a la presión atmosférica o a una presión negativa de 25 mm de mercurio, unapresión negativa más fuerte no es aconsejable ya que podría deformar las células.

La fijación debe hacerse únicamente con alcohol etílico de 95º pues el alcohol absoluto, el éter o la acetona provocarían la disolución del filtro.

El filtro con la muestra sujeto con una pinza se coloca sobre un portaobjetos y se tiñe.



TOMA DE MUESTRAS EN CITOLOGIA

El principal objetivo de la "Toma de Muestras

en Citología" es obtener un número significativode células y otros elementos acompañantesque al ser evaluados "en conjunto", reflejen lacomposición del material a ser analizado.

Por ello son de primordial importancia el"método de muestreo" y la elección del "sitioadecuado de toma de muestra".



TOMA DE MUESTRAS EN CITOLOGIA

1.-RASPADO O ABRASIÓN

2.-SONDAJES-LAVADOS

3.-IMPRONTAS 4.-PUNCIÓN DE CAVIDADES CORPORALES

5.-TOMA DE MASAS SÓLIDAS

6.-HISOPADOS



1.-RASPADO ó ABRASION Materiales : se utilizan espátulas, portaobjetos, hojas de bisturí , espátula , etc. Indicaciones : esta metodología es recomendada para aquellos casos donde

predomina la superficie sobre la profundidad , tales como piel mucosas , conjuntivapalpebral*, bucal , vaginal , lesiones ulcerativas , etc.

* En las lesiones de tipo supurativo, se aconseja tomar la muestra de conjuntivapalpebral y ocular superior para evitar recolectar detritus celulares y otros elementos

que pudieren ser arrastrados por las lágrimas acumulándose en fondo de sacoconjuntival inferior.

Técnica : se procede a recolectar el material y se lo extiende sobre un portaobjetoslimpio y desengrasado procurando que la extensión sea lo más delgada posibleevitando la formación de grumos y capas densas .

Al tiempo de extraídas las muestras del animal vivo (excéresis quirúrgica, biopsia,

etc.) o como hallazgo de necropsia, comienzan a producirse en los tejidos losllamados "procesos de autólisis". Estos, se deben fundamentalmente, al cese de losfenómenos de oxigenación y nutrición que conducen, en forma irremediable, a laalteración de las estructuras biológicas . Este acontecimiento es particularmenteimportante en los órganos parenquimatosos con tejidos más nobles , como por ejemplo nervioso, hepático y renal.

Para detener dichos fenómenos autolíticos debe procederse entonces a la fijación.

Esta, debe interpretarse como un método histológico de preservación destinado aobtener preparaciones duraderas que mantengan



2.-SONDAJES-LAVADOS

Materiales: sondas , solución fisiológica , tubos pararecolección, portaobjetos.

Indicaciones : para recolectar por arrastre material deregiones de difícil acceso (cavidad nasal , tractorespiratorio inferior, urinario, etc.)

Técnica : consiste básicamente, en instilar una soluciónde lavado (solución fisiológica) y al recuperarla por aspiración obtener material por arrastre.



3.-IMPRONTAS

Materiales : ± portaobjetos limpios y desengrasados

Indicaciones:

± lesiones erosivas , ± TVT ± lesiones primarias de piel (pústulas) ± piezas quirúrgicas e intraoperatorias.

Técnica:

- Consiste simplemente en apoyar un portaobjetossobre la superficie a ser estudiada. Si ésta se hallaracubierta por sangre, suero u otra secreción, convienelavarla previamente con solución fisiológica . Esconveniente no utilizar antisépticos pues podríanafectar posterior tinción y morfología celular.



4.-PUNCION DE CAVIDADES CORPORALES

Materiales : Jeringas de 2,5 , 5 , 10 cc. ; agujas de diferentes medidas (2518 ,40112 , 50/12); tubos de recolección; portaobjetos.

Indicaciones: Cuando hay un diagnóstico clínico o por RX. y/o ECOGRAFICO decolecta líquida.

Técnica: ± CAVIDAD PLEURAL Tricotomía y antisepsia de la zona, previa placa de tórax. Sitio: del

4to. al 8vo. espacio intercostal a la altura de la articulación condrocostal. Realizar tunelización en piel y subcutáneo y abordar la cavidad por borde anterior de la costilla. Laaguja debe introducirse acoplada y en posición perpendicular al animal. Realizar pocasucción.

± CAVIDAD PERICARDICA Tricotomía y antisepsia de la zona. Sitio : entre 4to. y 5to.

espacio intercostal preferentemente del lado derecho. Lo ideal es realizarlo con monitoreocardíaco.

± CAVIDAD ABDOMINAL Tricotomía y antisepsia de la zona. Sitio : tomando comoreferencia la cicatriz umbilical, la punción se realiza dos cm. por detrás y dos cm. hacialateral de la línea media. Previa palpación para evitar punzar vejiga, hígado, bazo,intestino, etc. Debe realizarse tunelización en piel y sc. La jeringa se introduce acoplada.



5.-DE MASAS SÓLIDAS Materiales : en general similares a los utilizados para punción de cavidades

corporales.

Indicaciones: presencia de masas palpables en superficie y/o enprofundidad, sólidas ó quísticas.

Técnica: Inmovilizar la masa a ser susceptible de punción. Introducir laaguja con la jeringa acoplada directamente en la masa realizando una tomaen abanico (tres veces) ejerciendo en cada una de ellas presión negativa,tratando de obtener así una muestra representativa . En el caso de masassólidas el material, generalmente quedará contenido en la aguja. Retirar la

jeringa con la aguja acoplada, separar, tomar aire en la jeringa, acoplar nuevamente y depositar el material obtenido sobre un portaobjetos limpio . ± Para el supuesto de muestras con mucha sangre a veces es recomendable

introducir y reintroducir en abanico la aguja sola en la lesión. Una vez extraída,se acopla a la jeringa, se proyecta el material extraído sobre los portasrealizándose los extendidos como de costumbre .



6.-HISOPADOS

Materiales : hisopos limpios de buena calidad yportaobjetos.

Indicaciones : Sectores de difícil acceso comoaberturas naturales (orificio nasal, oído, prepucio,vagina, conjuntiva ), etc.

Técnica: Presionar ó topicar con el hisopo el áreaafectada. Una vez obtenida la muestra realizar losextendidos ya sea topicando con el extremo delhisopo varias veces en la parte central del

portaobjetos ó rotándolo sobre sí mismo.



Tipos de estudios citológicos

Citología vaginal: Citología de toma única del fondo vaginal ode cérvix uterino.

Citología triple toma (Wied): Cuando de forma protocolizadase toman muestras de fondo vaginal, cérvix uterino y de

endocérvix. Citología endometrial: Cuando por métodos de sondas ocánulas se realiza toma endouterina.

Citología de secreción: Cuando se obtiene material citológicopor medio de la expresión de una glándula o zona anatómica.

Citología de excreción. Cuando se realiza de residuosmetabólicos, como la orina. Citología por punción (PAAF). Cuando se obtiene material

citológico mediante punción con aguja de una lesiónhabitualmente no accesible externamente.

Impronta. Cuando se obtienen células por aproximación de untejido u órgano al portaobjetos.



Métodos de Obtención de la Muestra

1) Citología exfoliativa ± a) Muestra de mucosa cérvico-vaginal, por raspado con espátula de madera

± b) Muestra de líquido de una serosa aspirado con aguja, en caso de derrame(acumulación anormal de líquido) peritoneal, pleural o pericárdico

± c) Muestra de superficie del peritoneo por lavado en una intervención quirúrgicapara detectar metástasis

± d) Muestra de esputo, espontáneo o inducido, o de lavado broncoalveolar

± e) Muestra de orina obtenida por micción espontánea

2) Citología por aspiración con aguja fina ± a) Punción directa de lesiones superficiales palpables ± b) Punción de lesiones prof undas no palpables, dirigida por imágenes



CITOLOGÍA EXFOLIATIVA

TEMA 8

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