ANLISIS Y CUANTIFICACIN DE AMINOCIDOSReaccin de la ninhidrina (espectrofotomtrica)Reaccin con o-ftalaldehdo (Fluorimtrica) Cromatografa deintercambio catinicoActualmente: HPLC

Cromatografa en capa fina (aminocidos)

PURIFICACIN Y AISLAMIENTO DE PROTENAShttp://www.accessexcellence.org/AB/GG/cellBreak1.html

CENTRIFUGACIN ISOPCNICAhttp://www.accessexcellence.org/AB/GG/cellBreak1.html

SEPARACIN Y PURIFICACIN DE PROTENASSe basa en la diferente:

Solubilidad

Tamao

Carga elctrica

Densidad

Afinidad por otras molculas

SEPARACIN DE PROTENASCROMATOGRAFA EN COLUMNALas diferentes protenas se retrasan segn sus interacciones con la matriz, de acuerdo a su carga, hidrofobicidad, tamao o unin a grupos qumicoshttp://www.accessexcellence.org/AB/GG/cellBreak1.html

A: CROMATOGRAFA DE INTERCAMBIO INICO(Ej: intercambio catinico)Las protenas se separan segn su carga a un pH determinado

B: CROMATOGRAFA DE FILTRACIN O EXCLUSIN MOLECULARLas protenas se separan segn su tamao

C: CROMATOGRAFA DE AFINIDADLas protenas se separan en funcin de la especificidad de unin a un ligando. En este ejemplo el ligando es la glucosa y se separan aquellas protenas que se unen a ella. Las protenas de inters se eluyen aadiendo un exceso de ligando libre.

ELECTROFORESIS EN ACETATO DE CELULOSA

ELECTROFORESIS EN GEL ELECTROFORESIS EN GEL:Tras aplicar un campo elctrico las protenas migran en funcin del tamao y de la carga(solubiliza protenas)Electroforesis en SDS-PAGEhttp://www.accessexcellence.org/AB/GG/cellBreak1.html

Ejemplo de anlisis de protenas por SDS-PAGE en cada paso de una purificacin. En el ltimo paso hay una nica banda, lo que indica que tenemos la protena de inters completamente purificada

ISOELECTROENFOQUEEs un tipo de electroforesis en gel con anfolitos que crean un gradiente de pH. Cada protena migra hasta su punto isoelctrico.http://www.accessexcellence.org/AB/GG/cellBreak1.html

Ejemplo de SDS-PAGE teido con azul de CoomassieMarcador de PMMarcador de PM

GELES BIDIMENSIONALES (2D)Primero isoelectroenfoque y luego SDS-PAGE

Ejemplo de gel bidimensional

SEPARACIN Y PURIFICACIN DE PROTENASSe basa en la diferente:

Solubilidad

Tamao

Carga elctrica

Densidad (centrifugacin)

Afinidad por otras molculas

FRACCIONAMIENTO POR DISMINUCIN DE LA SOLUBILIDAD(Voet)(p.e. sulfato de amonio)

(Voet)