Tecnicas de Concetracion de Parasitos

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Concentracion de parasitos por el metodo de sedimentacion y flotacion

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METODO DE SEDIMENTACION DE CHARLES

1.- Con el aplicador de madera se coloca aproximadamente 1 gr. de la materia fecal en el vaso de precipitado, se aaden 10 ml de solucin salina y se homogeniza.2.- Se filtra la suspensin a travs de la gasa colocada en el embudo, recogiendo el filtrado en el tubo cnico.3.- Se centrfuga la suspensin durante 1 min a 2000 rpm.4.- Se decanta el sobrenadantey se resuspende el sedimento con solucin salina, centrifugando, decantando y resuspendiendo las veces necesarias hasta que el sobrenadante sea claro.5.- Al ltimo sedimento se agregan 10 ml de solucin de formaldehdo al 10%, se mezcla y se deja reposar durante 10 min.6.- Se aaden despus 5 ml de ter, se tapan los tubos con tapones de caucho y se agitan enrgicamente durante 30 segundos.7.- Se centrfuga durante 2 minutos a 1500 rpm.8.- Despus de centrifugar se observan 4 capas:a)ter en la superficial,b)un tapn de restos fecales,c)formaldehdo,d)sedimento en el fondo del tubo, conteniendo los elementos parasitarios.9.- Se introduce la pipeta Pasteur hasta la capa d, se extrae con cuidado una gota del sedimento y se coloca en un portaobjetos.10.-Se le aade una gota de lugol y con uno de los ngulos del cubreobjetos, se homogeniza, cubrindolo con elmismo.11.-Se observa la preparacin en el microscopio con objetivos de 10X y 40X.

MTODO DE FLOTACION DE FAUST (ZnSO4)

1. Con un abatelenguas se toma aproximadamente 1 g de heces (el tamao de un cacahuate) y se deposita en un vasito que contenga de 10 a 15 ml de agua de la llave y se mezclan con un aplicador de madera.2. La suspensin se filtra a travs de una coladera o malla y se recibe el fltrado en un tubo de centrfuga de 14 ml. Se le adicionan 1-2 ml de ter. Se tapa con un tapon de hule y se agita vigorosamente. Se adiciona agua hasta que la muestra quede a 1cm por debajo del bordo superior del tubo.3. Se centrifugua por 45 segundos a 2500 rpm. Debe romperse a cualquier acmulo que pudiera haberse formado en la parte superior y se decanta el sobrenadante. 4. Se Aaden 2 a 3 ml de agua de la llave y se agita para resuspender el sedimento. Se resuspende nuevamente el sedimento, adicionando agua de la llave poco a poco, hasta que quede la muestra a 1 cm del borde superior del tubo. Se centrifuga de nuevo.5. Se decanta el sobrenadante y se agregan al sedimento 2 a 3 ml de sulfato de zinc (dens. 1.180. Lo cual equivale a 330 g de sulfato de zinc en 1 litro de agua), moviendo con un aplicador para resuspender. Se agrega ms sulfato de zinc hasta que llegue a unos 0.5 cm del borde superior del tubo. 6. Se centrifuga a 2300 rpm durante 2 min. y no debe sacarse el tubo de la centrfuga. 7. Sin sacar el tubo de la centrfuga, se recojen algunas gotas del material que flota en la superficie con una asa de platino (se debe cuidar que el asa no penetre demasiado bajo la superficie) o con una pipeta Pasteur. 8. Se depositan las gotas en un portaobjetos y se agrega una gota de lugol. Enseguida se completa la preparacin con un cubreobjetos.