Universidad Nacional de Ingeniera Recinto Universitario Pedro Arauz Palacios

UNI-RUPAP

Facultad de Tecnologa de la Construccin FTC

Departamento de Hidrulica y Medio Ambiente

Ingeniera Sanitaria II

Prctica de Laboratorio de Microbiologa

Tcnicas de anlisis bacteriolgico en aguas"

Fecha de prctica: lunes, 02 de junio de 2014

Docente de Prctica: Msc. Lic Elda Escobar V.

Integrantes:

Karen Tatiana Mairena Castro 2010-

Marylin Juniett Palacios Cruz 2010-

Noel Omar Silva Hernndez 2010-33835

Axel Ariel Sequeira Gutirrez 2010- 33422

Lunes, 09 de junio de 2014

Managua-Nicaragua

I. Introduccin

Dentro de las necesidades bsicas, y quizs una de las ms importantes que requiere toda poblacin, est relacionada con el acceso al agua de buena calidad, es decir, al agua potable. Es as como el agua, su accesibilidad y su calidad han comenzado a condicionar directamente el tipo de vida de una comunidad y por lo tanto su calidad de vida.

Directamente asociado a la salud est el consumo, calidad y disponibilidad del agua. Estos

tres componentes, separada o conjuntamente, han determinado una gran cantidad de

problemas de salud que afectan a vastos sectores de la poblacin mundial.

Un ejemplo de esto lo da el hecho que, aproximadamente, el 40% de la poblacin mundial sufre en la actualidad por falta de agua, y se ha comprobado que en los pases del tercer mundo o en vas de desarrollo, ms del 80% de las enfermedades tienen su origen en esta carencia o en las condiciones insalubres del agua que utilizan.

La evaluacin rutinaria del agua en busca de microorganismos patgenos, como Salmonella spp y Shigella spp puede ser difcil de realizar ya que el nmero de estas bacterias es relativamente escaso, por lo que se tiene que recurrir a pruebas bacteriolgicas del agua potable que demuestren la presencia de microorganismos indicadores que siempre estn presentes en materia fecal, fcil de demostrar y que sirva de gua para conocer el grado de contaminacin fecal.

El grupo Coliformes ha sido adoptado como el indicador de contaminacin fecal ms digno de confianza. El microorganismo indicador ms comnmente utilizado es Escherichia coli, considerando la OMS preferible emplear la expresin Coliforme fecal que comprende un nmero ligeramente mayor de variedades, todas ellas de claro origen fecal e indicadores de contaminacin fecal reciente.

Su creciente degradacin por disminucin de su calidad implica la reduccin del nmero de usos que

se le da; es por ello, lo que se hace necesario la realizacin de estudios que permitan determinar la

calidad de esa agua. Los anlisis que se pueden realizar al agua para controlar su calidad son: fsicos,

qumicos y microbiolgicos, en esta ocasin se har una determinacin microbiolgica a travs de

exmenes bacteriolgicos entre los ms comunes son:

1. El Mtodos de fermentacin de tubos mltiples 2. El mtodo de filtro de membrana

Siendo el de mtodo usado en la prctica el de fermentacin de tubos mltiples, consistiendo en

determinar el nmero estimado de coliformes totales y fecales en todo tipo de agua.

II. Objetivos

Describir la metodologa analtica para la estimacin de la densidad bacteriana de coliformes totales y coliformes fecales por la tcnica de fermentacin en tubos mltiples.

Evaluar la calidad del agua en base a resultados obtenidos.

III. Principio del mtodo:

TECNICA DE FERMENTACIN DE TUBOS MULTIPLES

El mtodo de fermentacin en tubos mltiples determina la presencia y el nmero de

bacterias coliformes mediante la siembra de una serie de porciones de un volumen

determinado de muestra en tubos que tienen un medio favorable de cultivo. El mtodo se

basa en leyes de probabilidades y se utiliza para obtener una estimacin del nmero de

bacterias en una muestra que se expresa como el nmero ms probable (NMP). La

determinacin del NMP de coliformes en una muestra se efecta a partir de las tcnicas de

los tubos mltiples. Esta se basa en el principio de que las bacterias presentes en una

muestra pueden separarse una de otras por agitacin, resultando una suspensin de

bacterias individuales, uniformemente distribuidas en ella.

La precisin del mtodo depende del nmero de tubos utilizados, pudiendo ser de tres o

cinco series de tubos por dilucin. La densidad bacteriana puede calcularse mediante una

frmula o por medio de la tabla que utiliza el nmero de tubos positivos en las diluciones

mltiples.

Las muestras que pueden utilizarse para la determinacin de coliformes, incluyen: agua dulce (potable o no), agua salada, lodos, sedimentos, fangos y alimentos (carnes y leche).

La prueba estndar para detectar bacterias coliformes consta bsicamente de dos fases: la

prueba presuntiva y la prueba confirmatoria, aunque suele realizarse una tercera

denominada prueba completa.

1. Materiales y equipos

Caldo de lactosa

Medio EC

Medio verde brillante bilis de buey

Frasco esterilizados para muestreo

Gradillas

Tubos de ensayo

Tubos durhman

Agua de dilucin

Pipetas de 10,5 y 1 ml

Mecheros de bunsen

Asa de inoculacin

Incubadoras (37.5 Y 44.5 C)

2. Mtodo El mtodo consta de dos etapas: Prueba presuntiva y prueba confirmativa

1.- Prueba Presuntiva:

Para su determinacin se utiliza un medio lquido lactosado, pudiendo ser Caldo Lauril

Triptosa (CLT), Caldo Lactosa (CL) o Caldo Mac Conkey1

(CMC). Si el medio se ha refrigerado despus de su esterilizacin, se debe de incubar de un da a otro a 35C antes de utilizarlo, rechazando aquellos tubos que muestren crecimiento, burbujas o ambas cosas.

Todos los tubos se preparan con 10 ml del medio elegido (en el caso del presente trabajo se utiliza el CMC), de la siguiente forma: 3 tubos a doble concentracin del medio y 6 tubos a simple concentracin del medio. Cada tubo debe llevar una campana Durham (tubo de vidrio invertido).

Se siembra con pipetas estriles:

10 ml de la muestra inicial a tubos de doble concentracin, por triplicado.

1 ml de la muestra inicial a tubos de simple concentracin, por triplicado.

0,1 ml de la muestra inicial a tubos de simple concentracin, por triplicado.

En la figura 1 se indica el procedimiento para la realizacin de las diluciones. Cuando se

trabaja con una muestra de calidad desconocida, se debern sembrar ms series de tubos

(ms diluciones), para asegurarse de tener alguna serie con todos los resultados negativos.

En dicho caso, la metodologa para la realizacin de las diluciones es la misma que la

explicada para bacterias hetertrofas totales (figura 2).

Los tubos sembrados se incuban a 35 0,5 C durante 24 2 horas. El desarrollo de bacterias que atacan la lactosa con produccin de gas se evidencia por el viraje de color del medio de cultivo (el viraje de color violeta a amarillo indica la acidez producida en el medio) o por la acumulacin de gas en la campana de Durham. En caso que sta reaccin no se produzca, se deben de re incubar aquellos tubos negativos, para luego volver a examinar al final de 48 3 horas. Registrar luego, la presencia o ausencia de gas o cido. La aparicin de dichas reacciones, constituye una presunta reaccin positiva, por ello, como existen algunas bacterias Gram positivas que son capaces de producir esta reaccin, ste resultado debe confirmarse. En las pruebas posteriores, a estos tubos se los denominar tubos primarios.

Durante nuestro laboratorio se prepararon dos gradillas con: 5y 15 tubos que contienen 10

ml de caldo lactosa, los cuales se identificaron anotando, lugar, volumen y fecha; d los

cuales se dispusieron de la siguiente manera:

Gradilla con 15 tubos:

Serie 1: para sembrar 10ml de muestra

Serie 2: para sembrar 1 ml de muestra

Serie 3: para sembrar 0.1 ml de muestra

La primera serie de 5 tubos (tanto para 5 como para 15), se sembraron con 10 ml de muestra

de agua, usando la pipeta estril de 10 ml.

Se tomaron 10 ml de muestra en la pipeta y se aadieron 1 ml a cada uno de los tubos de

la serie, el ml restante se agreg al tubo que contena 9 ml de agua de dilucin (10-1

Se agito bien el agua y luego se tom 5 ml de muestra que estaba en el tubo de dilucin y

se agreg 1ml a cada uno de los tubos de la 3 serie.

Prueba confirmatoria

En esta fase se confirma la presencia o ausencia de coliformes totales, mediante el cultivo

en Caldo Lactosa Verde Brillante Bilis (CLVBB)2, como as tambin de coliformes fecales,

utilizando Caldo EC3. Ambas preparaciones se colocan en tubos de ensayo, con una

Campana Durham invertida en cada uno. Dichos medios son selectivos, pues inhiben

notablemente el crecimiento de la flora acompaante indeseable.

A la fase de confirmacin se llevan todos los tubos primarios positivos en los que haya aparecido cualquier cantidad de gas o de crecimiento cido dentro de las 24-48 horas de incubacin, como as tambin, aquellos tubos que antes de las 24 horas, presentaron positividad (sin esperar que el tiempo se complete). Si hay otros tubos primarios con crecimiento cido despus de las 48 horas de incubacin, tambin se llevarn a la fase confirmatoria.

Para confirmar la presencia de coliformes totales, a partir de tubos positivos primarios, se inocula una porcin de cada uno de ellos con un ansa estril en tubos con CLVBB. Se incuban durante 48 3 horas a 35 0,5C. La formacin de cualquier cantidad de gas en la campana Durham despus del tiempo de incubacin constituye un resultado positivo en la fase confirmatoria, la produccin de turbidez no indica resultado positivo.

Calcular el valor del NMP a partir de los tubos positivos.

La confirmacin de la presencia de coliformes de origen fecal permite diferenciar entre los

coliformes de origen fecal y los procedentes de otras fuentes. El procedimiento consiste en

inocular (con ansa) una porcin de los tubos primarios positivos en tubos con caldo EC. Los

tubos sembrados se incuban en un bao de agua (ver Fig.3) incubacin a 44,5 0,2C

durante 24 2 horas (prueba a alta temperatura). Depositar todos los tubos en el bao

antes de que transcurran los 30 minutos de la inoculacin y mantenerlos lo suficientemente

profundos, como para que el agua del bao est a un nivel superior al que tiene el medio

en los tubos. Se considera como reaccin positiva la aparicin de gas a las 24 horas o

menos de incubacin. La falta de gas constituye un resultado negativo, que indica que el

origen de los microorganismos no es el aparato digestivo de los animales de sangre

caliente.

Calcular el valor del NMP a partir de los tubos positivos.

Fig. 3: Bao de Agua

Nota: Para aplicar la tcnica de fermentacin en tubo mltiple en muestras slidas o semislidas,

stas se deben de preparar de la siguiente manera: se pesa la muestra y diluye en un

lquido de dilucin hasta conseguir una de 10-1. Por ejemplo, se aaden 50 g de muestra en

una jarra mezcladora estril de 450ml de tampn de fosfato estril o de agua de dilucin

con peptona al 1%, y mezclar durante 1 a 2minutos a baja velocidad (800 rpm). Preparar

las diluciones decimales correspondientes del homogeneizado resultante lo antes posible

para reducir al mnimo la sedimentacin.

Recuentos

La cuantificacin clsica de las bacterias coliformes se realiza por medio del mtodo estadstico denominado Nmero ms Probable (NMP). Se basa en el concepto de que una o ms bacterias inoculadas en un medio de cultivo adecuado, darn origen a una poblacin que se evidenciar dando un resultado positivo. En el caso de las coliformes este resultado consiste en la aparicin de turbidez en el medio y/o gas en la campana Durham.

Como las bacterias en el agua no se distribuyen en forma homognea por lo que al sembrar una serie de tubos con porciones de una misma muestra o dilucin, habr series en las que todos los tubos darn resultados positivos, otros negativos y otras en las que los resultados sern positivos y negativos.

Para obtener resultados vlidos, se debern sembrar alcuotas apropiadas de la muestra para lograr que la primera serie de tubos (inoculados con la menor dilucin), presente resultados todos positivos, y la ltima (tubos inoculados con la mayor dilucin) todos negativos.

Utilizacin

Utilizacin de las Tablas

Las tablas ms comunes estn diseadas para tres series de tubos sembrados con 10, 1 y 0,1 ml de la muestra. Se ingresa a la tabla con el nmero caracterstico, que consiste en los positivos confirmados de esas series (Tabla 1, ejemplos 1 y 2).

Para cada combinacin posible de resultados positivos de las tres series, corresponde un valor de NMP. Los valores de NMP expresan cantidad de bacterias por cada 100 ml de muestra.

Si en lugar de 10, 1 y 0,1 ml de la muestra se sembraron 1, 0,1 y 0,01 ml, el valor de la tabla se multiplicar por 10; si se sembraron 0,1 , 0,01 y 0,001 ml, el valor de la tabla se multiplicar por 100 (Tabla 1, ej. 5 y 6).

Cuando se sembraron ms de tres diluciones decimales, se ingresa a la tabla con el valor de la mayor dilucin que dio todos los resultados positivos, seguidos de los dos siguientes (Tabla 1, ej. 5, 6 y 7).

En el ejemplo 4 se eligen las tres primeras diluciones dejando el nico resultado positivo en la dilucin central.

Las tablas 2 y 3, presentan los ndices de NMP, para distintas combinaciones de resultados positivos, cuando se utilizan 5 y 3 tubos por dilucin, respectivamente.

Anlisis de los resultados

Los recuentos de bacterias coliformes se utilizan internacionalmente para establecer criterios de calidad de aguas para diferentes usos.

Si bien existen otros mtodos para deteccin y determinacin de bacterias coliformes, el NMP es el ms usado a punto tal que en los informes se omite mencionarlo.

Los entes oficiales de control frecuentemente utilizan la tcnica estndar, sembrando 10, 1 y 0,1 ml de muestra con tres rplicas. Este esquema de trabajo no permite obtener un recuento preciso cuando la poblacin de bacterias excede 1100 bacterias/100 ml. Sin embargo, como este nmero supera la mayora de las reglamentaciones, es suficiente para definir el uso de un recurso hdrico y permite un trabajo de rutina normalizado.

a) Filtracin y desinfeccin.

b) Coagulacin, floculacin, filtracin y desinfeccin.

c) Cloracin, coagulacin, floculacin, filtracin por arena, filtracin por carbn activado y

desinfeccin.

A. Canadian Water Quality Guidelines. Canadian Council of Resourse and Environmental

Ministers. Marzo 1987.

B. Ltat de lenvironnement. Premier Rapport. Commission des Comunauts

Europennes.

C. Cdigo Alimentario Argentino. Decreto 141/53. Provisin de agua potable. Decreto

352/79.

Filtro de membrana.

La tcnica se fundamenta en la filtracin de un volumen conocido de la muestra o de sus

diluciones, a travs de una membrana de poros muy pequeos (0.22 a 0.45 m de dimetro)

que pueden retener los microorganismos. Las bacterias atrapadas en los poros pueden

crecer localmente y formar una colonia observable a simple vista. Se supone que en cada

poro entro solo una bacteria. La filtracin se realiza con un dispositivo (embudo de filtracin)

estril, que puede ser plstico, de vidrio o de acero inoxidable montado sobre un frasco

receptor con un soporte para la membrana de filtracin. La esterilizacin del equipo se hace

por ebullicin (30min), por auto clave (121 0 c 20 min) o por luz ultra violeta (para los filtros

de plstico y vidrio). El sistema de filtracin se completa con una bomba de succin. Existen

soportes de filtracin que permiten conectar 3 a 5 filtros enserie a una nica bomba. Estos

permiten procesar varias muestras simultneamente.

Antes de la filtracin, se preparan los medios de cultivo y despus de esterilizados se vierten

en placas de Petri, tambin estriles. El medio de cultivo debe ser especfico para la bacteria

que se desea cuantificar. Los medios de cultivo pueden ser solidos (con agar) o lquidos.

Si son lquidos, debern colocarse dentro de la placa de Petri una almohadilla absorbente

atoxica (pad) que absorba el medio de cultivo lquido.

IV. Resultados:

V. Anlisis de Resultados:

Los datos obtenidos indican que el caso del pozo fue el que arroj ms falsos positivos, mientras

que en los otros fue casi nulo; lo que indica presencia de coliformes para todos los casos.

VI. Conclusiones

Se logr observar la eficacia de esta tcnica en base a la confirmacin de la prueba presuntiva y

tomando en cuenta los siguientes aspectos:

Para un rio es 100% probable la existencia de elementos patgenos, debido a factores

ambientales y culturales. Esto se confirma en los datos arrojados por la prueba presuntiva. La

prueba confirmativa indica que todas las bacterias de la prueba presuntiva en su totalidad son

coliformes; y estas, a su vez, mayormente fecales.

En el agua que abastece los pozos influyen la filtracin natural por la infiltracin de las aguas a

los acuferos, lo que elimina en pequeas proporciones a las bacterias. Se nota la diferencia

entre la prueba confirmativa y la presuntiva debido a lo expuesto anteriormente. Esta muestra

tiene menos concentracin de coliformes en comparacin con la muestra del ro.

El agua potable no debera de contener coliformes de ningn tipo, ya que esto indica la

presencia de elementos patgenos. La presencia de estos refleja fallas o deficiencias en el

sistema de potabilizacin del agua.

Es importante resaltar la importancia de estas pruebas en las plantas de tratamiento de aguas, ya

que el agua potable es indispensable en la poblacin. Los datos obtenidos en la muestra de agua

potable nos hacen ver esta importancia.

FUENTE PRUEBA PRESUNTIVA

* ** PRUEBA CONFIRMATIVA CDIGO DE

RESULTADO NMP/100ml

10 1 10^-1 10^-2 10 1 10^-1 10^-2

RO ARGENTINA

5/5 5/5 5/5 4/5

24 C.T 5/5 5/5 4/5 4/5 5,4,4 3.5x10^3

48

24 C.F 5/5 5/5 4/5 3/5 5,4,3 2.8x10^3

POZO 5/5 5/5 0/5

24 C.T 5/5 1/5 0/5 5,1,0 3.3x10

48

24 C.F 5/5 0/5 0/5 5,0,0 2.3x10

AGUA POTABLE

3/5

24 C.T 3/5 3 7.8

48

24 C.F 1/5 1 2

VII. Cuestionario

1. Mencione dos indicadores microbiolgicos de contaminacin microbiolgica del agua,

ventajas y desventajas. (Diferentes familias de Coliformes).

Los microorganismos indicadores son aquellos que tienen un comportamiento similar a los

patgenos (concentracin y reaccin frente a factores ambientales y barreras artificiales), pero son

ms rpidos, econmicos y fciles de identificar.

Una vez se ha evidenciado la presencia de grupos indicadores, se puede inferir que los patgenos

se encuentran presentes en la misma concentracin y que su comportamiento frente a diferentes

factores como pH, temperatura, presencia de nutrientes, tiempo de retencin hidrulica o sistemas

de desinfeccin es similar a la del indicador.

Un microorganismo indicador de contaminacin fecal debe reunir las siguientes caractersticas: - Ser un constituyente normal de la flora intestinal de individuos sanos. - Estar presente, de forma exclusiva, en las heces de animales homeotrmicos. - Estar presente cuando los microorganismos patgenos intestinales lo estn. - Presentarse en nmero elevado, facilitando su aislamiento e identificacin. - Debe ser incapaz de reproducirse fuera del intestino de los animales homeotrmicos. - Su tiempo de supervivencia debe ser igual o un poco superior al de las bacterias patgenas (su resistencia a los factores ambientales debe ser igual o superior al de los patgenos de origen fecal). - Debe ser fcil de aislar y cuantificar. - No debe ser patgeno.

No existe ningn microorganismo que rena todos los criterios de un indicador ideal y apenas

algunos grupos satisfacen algunos de estos requisitos. A continuacin se describen los grupos

patgenos y los microorganismos que se han propuesto como sus indicadores.

Bacterias

Las bacterias que se encuentran con mayor frecuencia en el agua son las bacterias entricas que

colonizan el tracto gastrointestinal del hombre y son eliminadas a travs de la materia fecal. Cuando

estos microorganismos se introducen en el agua, las condiciones ambientales son muy diferentes y

por consiguiente su capacidad de reproducirse y de sobrevivir son limitadas. Debido a que su

deteccin y recuento a nivel de laboratorio son lentos y laboriosos, se ha buscado un grupo

alternativo de indicadores que sean de ms rpida y fcil deteccin. El grupo ms utilizado es el de

las bacterias coliformes.

El grupo de microorganismos coliformes es adecuado como indicador de contaminacin bacteriana

ya que los coliformes,

Son contaminantes comunes del tracto gastrointestinal tanto del hombre como de los animales de

sangre caliente.

Estn presentes en el tracto gastrointestinal en grandes cantidades.

Permanecen por ms tiempo en el agua que las bacterias patgenas.

Se comportan de igual manera que los patgenos en los sistemas de desinfeccin.

Los coliformes fecales y E. coli en particular, se han seleccionado como indicadores de

contaminacin fecal debido a su relacin con el grupo tifoide-paratifoide y a su alta concentracin

en diferentes tipos de muestras.

Los coliformes fecales son un subgrupo de los coliformes totales, capaz de fermentar la lactosa a

44.5C.

Aproximadamente el 95% del grupo de los coliformes presentes en heces fecales, estn formados

por Escherichia coli y ciertas especies de Klebsiella. Ya que los coliformes fecales se encuentran casi

exclusivamente en las heces de animales de sangre caliente, se considera que reflejan mejor la

presencia de contaminacin fecal. Otro de los aspectos negativos del uso de los coliformes totales

como indicador es el hecho de que algunos coliformes son capaces de multiplicarse en el agua

(Madigan y col., 1997).

Los coliformes fecales se denominan termo tolerantes por su capacidad de soportar temperaturas

ms elevadas. Esta denominacin est ganando ms adeptos actualmente, pues sera una forma

ms apropiada de definir este subgrupo que se diferencia de los coliformes totales por la

caracterstica de crecer a una temperatura superior.

La capacidad de reproduccin de los coliformes fecales fuera del intestino de los animales

homeotrmicos es favorecida por la existencia de condiciones adecuadas de materia orgnica, pH,

humedad, etc. Algunos gneros son autctonos de aguas con residuos vegetales, como hojas en

descomposicin. Tambin pueden reproducirse en las bio-pelculas que se forman en las tuberas

de distribucin de agua potable. Por estas razones y por la existencia de bacterias que responden a

la definicin de coliformes que no son de origen fecal y que incluso pueden ser lactosa-negativas

(apareciendo como positivas si se aplica la prueba de B-galactosidasa), el grupo de los coliformes

totales tiene actualmente poca utilidad como indicador de contaminacin fecal.

Su uso se ha restringido para aguas tratadas y aguas minerales. Para aguas superficiales o para

evaluar la eficiencia de una planta de tratamiento de aguas residuales deben usarse los coliformes

fecales. Solamente deber recurrirse a los coliformes totales si no hay condiciones para cuantificar

los coliformes fecales.

La presencia de coliformes totales debe interpretarse de acuerdo con el tipo de aguas: deben estar

ausentes en 85% de las muestras de aguas potables tratadas. En caso de estar presentes, su nmero

no puede ser superior a 2-3 coliformes. Esta contaminacin a pesar de ser baja, no puede ocurrir en

tres muestras recolectas en das consecutivos.

En aguas tratadas, los coliformes totales funcionan como un alerta de que ocurri contaminacin,

sin identificar el origen. Indican que hubo fallas en el tratamiento, en la distribucin o en las propias

fuentes domiciliarias. Su presencia acciona los mecanismos de control de calidad y de

procesamiento dentro de la planta de tratamiento de agua, e intensifica la vigilancia en la red de

distribucin.

Los Streptococcus fecales (o estreptococos del grupo D de Lancefield) son bacterias integrantes

de la flora normal de los animales homeotrmicos. Actualmente se considera que los estreptococos

fecales pertenecen a dos gneros: Enterococcus y Streptococcus.

Todos los Enterococcus presentan alta tolerancia a condiciones ambientales adversas (altas o bajas

temperaturas, deshidratacin, salinidad, luz solar, etc.).

El gnero Streptococcus rene apenas dos especies ya existentes en la antigua clasificacin: S. bovis

y S. equinu, que son ms abundantes en heces animales.

De manera similar a los coliformes fecales y a E. coli, presentan tasas se supervivencia semejantes

a la de los patgenos entricos. Los Estreptococos fecales no se multiplican en el medio ambiente,

o si esto ocurre es solamente en raras ocasiones. Son ms persistentes en ambientes acuticos y en

suelos contaminados que E. coli. Son importantes en situaciones donde se sabe que hay

contaminacin fecal y no se detectan coliformes, como ocurre cuando las descargas son

intermitentes o ms antiguas, de modo que mueren los coliformes fecales y E. coli, y permanecen

los estreptococos.

Clostridium perfringens es de origen fecal y no es patgeno en el intestino de animales

homeotrmicos. No es exclusivamente fecal se encuentra en suelos y aguas contaminadas. Por ser

una bacteria esporulada tolera elevadas temperaturas y desecacin, pH extremos y falta de

nutrientes, entre otras condiciones adversas. Esta resistencia elevada la convierte en un indicador

apropiado de contaminacin fecal antigua, intermitente, tambin cuando las descargas domsticas

se mezclan con las industriales que tienen un pH extremo que mata a las bacterias no esporuladas,

o cuando hay altas temperaturas que tambin eliminan las formas vegetativas de las bacterias. Es

de gran utilidad cuando los coliformes estn ausentes, pues indicar contaminacin fecal antigua.

Por otro lado, esa misma resistencia elevada limita su uso: no puede ser aplicado como indicador

de la eficiencia de tratamientos de aguas residuales, pues estar presente en los efluentes despus

de la eliminacin de los patgenos. O sea que su nmero no reflejar el verdadero grado de

contaminacin fecal.

Virus

En contraste con las bacterias, los virus no se encuentran normalmente en las heces del hombre.

Estn presentes solamente en el tracto gastrointestinal de individuos que han sido afectados.

Ms de 140 virus patgenos pueden ser transmitidos al hombre a travs del agua. Estos son los

virus entricos eliminados a travs de las heces de personas infectadas. Los ms comunes son los

virus causantes de gastroenteritis y el virus de la hepatitis. Algunos de estos virus (rotavirus, virus

Norwalk) no generan una proteccin inmunitaria a largo plazo por lo que la infeccin puede

repetirse varias veces a lo largo de la vida.

Acerca de los virus se sabe que, an en bajas concentraciones, tienen la capacidad de causar

infeccin o enfermedad.

Algunos virus son ms resistentes a la desinfeccin que los organismos coliformes, por lo que los

indicadores tradicionales de contaminacin bacteriana no evalan de manera eficiente la presencia

o ausencia de virus en el agua.

El poliovirus ha sido propuesto como indicador viral. Sin embargo, las cantidades de este virus

encontradas en ambientes acuticos son demasiado variables como para que sea considerado un

buen indicador. Adems de estas variaciones, la deteccin de virus entricos requiere laboratorios

especializados y los resultados tardan varios das. Estas dificultades en el uso de los enterovirus

como indicadores de contaminacin de origen fecal en el agua, ha llevado a la bsqueda de

indicadores alternativos que sean de rpida y fcil deteccin y que permitan prever el

comportamiento de los enterovirus en el medio ambiente. Estos indicadores son los fagos

(Schwartzbrod, 1995).

Se han propuesto dos tipos de fagos: colifagos somticos y colifagos F especficos. Los argumentos

que validan la propuesta son:

Los fagos se encuentran abundantemente en agua residual y agua contaminada.

Las poblaciones de colifagos son mucho ms grandes que las de los enterovirus.

Los colifagos son incapaces de reproducirse fuera del husped bacteriano.

Los colifagos se pueden aislar y contar usando mtodos sencillos.

Se obtienen resultados ms rpidos cuando se analizan los colifagos que cuando se trabaja con

enterovirus.

Ciertos colifagos son tan resistentes como los enterovirus a los procesos de desinfeccin.

Los colifagos se relacionan directamente con su husped bacteriano especfico E. coli. Cuando las

condiciones ambientales son desfavorables, los coliformes fecales no son buenos indicadores de

contaminacin fecal, ya que desaparecen rpidamente. Por consiguiente es mejor usar

microorganismos ms resistentes, como los colifagos que reflejan mucho mejor los niveles de

Salmonella (Kott y cols., 1978; Borrego y cols., 1987; Yates, 1992).

Los coliformes estn presentes en nmeros bajos en las heces humanas y de animales

homeotrmicos, pero estn en nmero elevado en aguas residuales. Invariablemente estarn en

aguas que contienen E. coli y por tanto sern indicadores de contaminacin fecal. Por ser ms

resistentes a las factores ambientales y a la cloracin que los coliformes y que todas las bacterias en

general, su presencia en plantas potabilizadoras indican fallas en algn paso del tratamiento, en

especial en la cloracin.

El tercer grupo propuesto, son los fagos que infectan Bacteroides fragilis. Este grupo presenta la

ventaja de no replicar en ambientes naturales, dado que infectan una cepa anaerobia y su

multiplicacin se realiza solo bajo estas condiciones.

Por otro lado su aislamiento se realiza en la mayora de los casos en heces humanas.

2. Por qu es importante realizar monitoreos bacteriolgicos en agua potable? Qu

criterios se toman en cuenta para su ejecucin?

El control de los parmetros fsico-qumicos y microbiolgicos es muy importante tanto en los

sistemas de potabilizacin como de depuracin del agua. Sin embargo, en los lugares donde el agua

es consumida por el hombre o es reutilizada, el factor de riesgo ms importante est asociado con

la exposicin a agentes biolgicos que incluyen bacterias patgenas, helmintos, protozoos y virus

entricos (Asano y Levine, 1998).

El riesgo de contaminacin tanto a nivel humano como ambiental hace necesario el control de la

presencia de microorganismos en el agua. Determinar el tipo de microorganismos presentes y su

concentracin proporciona herramientas indispensables para conocer la calidad del agua y para la

toma de decisiones en relacin al control de vertidos, tratamiento de aguas y conservacin de

ecosistemas.

3. Por qu se utiliza a los coliformes fecales como indicadores de contaminacin

microbiolgica de las aguas?

El grupo de microorganismos coliformes es adecuado como indicador de contaminacin bacteriana

ya que los coliformes,

Son contaminantes comunes del tracto gastrointestinal tanto del hombre como de los animales de

sangre caliente.

Estn presentes en el tracto gastrointestinal en grandes cantidades.

Permanecen por ms tiempo en el agua que las bacterias patgenas.

Se comportan de igual manera que los patgenos en los sistemas de desinfeccin.

Los coliformes fecales y E. coli en particular, se han seleccionado como indicadores de

contaminacin fecal debido a su relacin con el grupo tifoide-paratifoide y a su alta concentracin

en diferentes tipos de muestras.

VIII. Bibliografa.

MANUAL PRCTICO DE MICROBIOLOGA - Tomo II: Microbiologa Ambiental II Manacorda A. M.,

Cuadros D. P y lvarez A. S.

file:///C:/Users/Naxalia/Downloads/Fundamentos%20de%20limnologa%20ne

otropical%20-

%20Gabriel%20Roldn%20Prez,%20John%20Jairo%20Ramrez