Cultivo PuroTécnicas de aislamiento

Mantenimiento y preservación de cultivos purosMorfología macroscópicaMorfología microscópica

Definición

El cultivo puro representa las condiciones artificiales para el

desarrollo de las bacterias y otros microorganismos y las

condiciones impuestas a los microorganismos mediante el manejo

del laboratorio.

Para determinar las características de especies concretas de

microorganismos, es imperativo que el organismo se aislé y se

desarrollo en el laboratorio como un cultivo libre de otras

especies.

Método para aislar cultivos puros.

Técnica de siembra por estrías en placa

Técnica por difusión en placa

Técnica de la placa vertida

Técnica del enriquecimiento del cultivo

Técnica de las diluciones en serie

Aislamiento de una sola bacteria

Técnicas de aislamiento

Técnicas de siembra por estrías en placa

Con un asa bacteriológica, se pasa una porción de la muestra a

la superficie de un medio de cultivo hecho a base de agar y se

siembra en el medio por estrías en cuadrantes.

Técnicas de siembra por difusión en placa

Para sembrar por difusión en placa, por lo común se usa una

varilla de cristal estéril para esparcir la muestra.

Esta operación hace posible adelgazar la muestra de tal manera

que en la superficie del agar quedan las bacterias separadas

unas de otras.

Técnicas de siembra en placa

Una porción de una colonia que se pase a un medio de cultivo en tubo

viene a ser un cultivo puro.

Después de una incubación apropiada, el desarrollo de cada cultivo se

observa al microscopio o mediante cultivo para verificar que es puro.

El principio de la técnica de la placa vertida es la dilución

(adelgazamiento) de la muestra en tubos.

El medio se mantiene al estado líquido a una temperatura

de 45 – 52º C para permitir que el inóculo se distribuya

adecuadamente en el medio.

Esta técnica se hace en forma cualitativa o cuantitativa.

Técnica de la placa vertida

Técnica de la placa vertida

Técnica del enriquecimiento del cultivo.

El principio de esta técnica, es procurar un ambiente de cultivo

diseñado (medio de composición conocida y condiciones

específicas de incubación) que pueda favorecer el desarrollo de

cierto tipo concreto de bacterias que necesitemos pero que no

sea adecuado para las demás

Técnica del enriquecimiento del cultivo.

Los medios de enriquecimiento se usan generalmente cuando el

tipo de bacteria que queremos aislar se encuentra en muy

pequeñas cantidades y se desarrolla con mayor lentitud que

muchas de las otras especies presentes en el inóculo.

Técnica del enriquecimiento del cultivo.

Técnica de las diluciones en serie.

Se realiza mediante diluciones seriadas.

Se basa en cuando la muestra esté muy diluida

contendrá solamente la bacteria que buscamos.

O dependiendo de la dilución realizada se aislara el

microorganismo adecuado.

Técnica de las diluciones en serie.

Dilución Tipo de microorganismo

10-1 a 10-3 Hongos

10-4 a 10-6 Levaduras

10-7 a 10-10 Bacterias

Para el aislamiento de microorganismos se puede aplicar la técnica de aislamiento por estría o por extensión en superficie (se trasfiere de 0.1 a 0.5 ml.)

Técnicas de Siembra

a) Siembra por inoculación o agitación: Con una asa bacteriológica, esterilizada, se toma cantidad de inóculo, se introduce en el centro del medio líquido, agitándose, no tocar la pared del tubo

b) Siembra por estría (en tubos de agar inclinado): Muestra de material en asa de siembra, deslizar en zigzag, empezar por superficie más profunda

c) Siembra por picadura: Asa recta, tomar muestra, sembrar en agar semisólido, forma vertical

d) Siembra por dispersión-agotamiento: Asada de la muestra, sembrar en medió sólido, en placa Petri

e) Siembra por vertido en placa: Diluciones en varios tubos, pipeta 1cc de muestra o dilución, agregar en placa Petri estéril, se agrega medio licuado, mantener a 55°C, movimientos rotatorios, solidificar

Morfología y crecimiento de las colonias

Las colonias son masas visibles de células que se forman por división de una o varias células. El desarrollo de colonias sobre superficies de agar permite al microbiólogo identificar las bacterias porque las especies forman a menudo colonias con una forma y aspecto característico. El tamaño, forma, textura y color de una colonia es propio de cada organismo. La morfología de la colonia de una bacteria puede variar según el medio en que crezca la bacteria.

Colonias de bacterias

Serratia marcescensCultivada en Agar MaConkey

Pseudomonas aeruginosaCultivada enAgar Tripticasa-soja

Shigella flexneriCultivada enAgar MacConkey

Colonias de Bacillus subtilis que han crecido en medios con pocos nutrientes