AREA ACADEMICA DE MEDICINAINSTITUTO DE CIENCIAS DE LA SALUD

Laboratorio

de

Patologa

Nombre: Cruz Jurez AbrahamTercer SemestrePachuca Hidalgo, 2015

Dr. DE LA ROSA BAYON JAVIER F.

Tcnica Histolgica

La tcnica histolgica es una serie secuencial de pasos a travs de los cuales una muestra de tejido llega a transformarse en delgados cortes coloreados capaces de ser observados al microscopio.

Pasos de la tcnica histolgica

OBTENCIN Consiste en la provisin del material que se desea estudiar por medio del microscopio. El mtodo seleccionado debe ser el adecuado para cada tipo de material. En todos los casos el instrumental con el cual se seccionan los tejidos debe estar muy afilado para evitar aplastar sus elementos, as como se debe evitar cualquier otro tipo de maltrato en su manipulacin. Los principales mtodos empleados son: la biopsia, la reseccin quirrgica y la autopsia.

Biopsia: Consiste en tomar un trozo de tejido de un ser vivo. Esteprocedimiento de uso frecuente en medicina requiere el mismo cuidado deasepsia,antisepsia,etc.,queseutiliza entodoactoquirrgico menoro mayor. Biopsia incisional: se realiza seccionando con instrumentos cortantes como el bistur. Biopsia por punch: el punch es un instrumento filoso con forma de sacabocados que se utiliza para tomar biopsias de piel. Biopsia por puncin: se realiza con agujas de biopsia y recientemente tambin con agujas del tipo intramuscular (microbiopsia). Biopsia endoscpica: se hace a travs de endoscopios, que son instrumentos flexibles que permiten la observacin de algunas cavidades internas del organismo.

Necropsia: Es el procedimiento en el cual se extrae material de uncadver Autopsia: Consiste en el estudio analtico y sistemtico completo macroscpico y microscpico de los rganos, aparatos y sistemas de un cadver.Serealizaparaestablecercausasdemuerte.

FIJACINUna vez obtenido el material que se desea estudiar por cualquiera de los procedimientos descriptos se procede a su fijacin con lo que se evita la destruccin o lisis celular. Es un proceso fsico-qumico complejo por el cual se mantiene a las estructuras orgnicas en el estado ms parecido al que posean en vida.La fijacin debe realizarse inmediatamente de extraer las clulas del organismo, para evitar las lesiones agnicas ocasionadas por la anoxia, que inicialmente producen cambios osmticos y luego alteraciones estructurales y bioqumicas ms profundas, fenmenos conocidos en conjunto como autolisis. Por el mismo motivo los fijadores deben actuar sobre fragmentos relativamente pequeos de tejidos (como regla general menos de 1 cm cbico), para que la difusin del fijador desde las superficies hasta la parte central del bloque tisular se haga en un tiempo reducido

Losobjetosdelafijacinson: Mantenerlasestructurasenelestadomsparecidoalqueposean in vivo. Evitarlalisiscelularylaproliferacinbacteriana Dar cierta solidez o dureza al tejido o material. La fijacin detiene los procesos vitales pero en ciertas condiciones mantiene las actividades de algunos componentes moleculares, por ejemplo la actividad de algunas enzimas

CLASIFICACIN GENERAL DE LOS FIJADORES

- Fsicos- Calor- Desecacin- Microondas

- Qumicossimples- Alcoholes- Metanol- Etanol

- Aldehdos- Formaldehdo- Glutaraldehdo

- Acidos- Actico- Pcrico- Osmico

- Sales- Bicromato de potasio- Bicloruro de mercurio

- Mezclas dequmicos- Carnoy- Alcohol etlico +Acido actico

- Bouin- Acido pcrico +Formol +Acido actico

- Zenker- Bicromato de potasio +Bicloruro de mercurio +Acido actico

- FaGlu- Formaldehdo +Glutaraldehdo

Tiempos de fijacin: Depende del tejido, su volumen y el fijador usado Cuandoseusaelformollaspiezaspequeasrequierenalgunashorasyyaalas24horasse fijan bien.La fijacin sepuedecontrolarasimple vistaporelcambiodecolor del tejido y su consistencia (se endurece) pero una buena fijacin solo se apreciaenelcorteyapreparadoobservandoalmicroscopioptico.

DESHIDRATACINSecolocalamuestraenalcoholesdeconcentracincrecienteparaeliminarelagua quecontengaya que la parafinano es miscible conagua. Se utiliza etanol al 70%, 80%, 96% y 100%.

ACLARACIN.Son solventes que producen transparenciaen los tejidos, adems de solubilizarla parafina. Entreellos seencuentran: xilol, toluol, acetona,benceno. El ms usado es el Xilol.

INCLUSIN EN PARAFINA Laparafinaesuna mezcla dehidrocarburossaturados quetienen diferentes puntos de fusin. Parafina blandafundea44-48Cy laparafinaduraa56-58C. Laparafinaseponeenestufadecultivoaunosgradosporencimadesupuntodefusin.Sesumergelamuestra,sellevaaestufaunosminutosparaquela parafina penetre en los tejidos. Luego se enfra bruscamentecolocandoelrecipienteenhielo.

CORTESe Realiza mediante el uso del micrtomo. El micrtomo de congelacin permite cortar el tejido despus de fijarlo por frio, congela con dixido de carbono y lo endurece para que luego pueda ser cortado. Es un mtodo rpido y por eso se usa para el diagnostico de biopsias obtenidas en el acto quirrgico para que el cirujano proceda segn este informe. Se lo usa tambin para visualizacin de lpidos y es muy til en el estudio de tejido nervioso. Los cortes en el micrtomo pueden tener un espesor de 4 a 1000mm o ms, segn los tejidos que se estudian.

COLOCACIN SOBREPORTA OBJETOEfectuadosloscortessecolocanenaguatibiaparaque seextiendan yluegose recogen conunpincelyselosextienden en el portaobjetos y se dejan secar para su posterior coloracin.

DESPARAFINIZACINSedebeextraertodolaparafinadeltejidoyaclararlonuevamente.SeutilizaXilol.

HIDRATACINSedebehidratareltejidoyaquelamayoradeloscolorantessondebaseacuosa.Paraellosecolocaelportaobjetoensolucionesdeetanoldeconcentracionesdecrecientes.Etanol100%,96%,80%,70%yAguadestilada

COLORACINEsuncompletocomplejofsicoqumicoqueleconfierecoloralostejidosdurantetiemposprolongados.Lasmolculasdecolorantestienenungrupoqueeselqueleconfiereel color:cromforoyotroquelofijaauxocromo.Loscolorantessonsalesperoselosclasificaen:

Bsicos:endondelamolculadesalquecoloreaeslabasecomoporejemploelazuldetoluidina,azulde metileno,hematoxilina. cidos: Dondelamolculadesalquecoloreaeselcidocomoporejemplola eosina. Neutros: Donde las dos partes de la solucin salina proporcionan color, un ejemplo de esta es el eosinato de azul de metileno.

COLOCACIN DE CUBREOBJETOSe cubre el corte con undelgadovidrio(el cubreobjeto)que seadhiereconresina (blsamo de Canad) y permite su uso prolongado.

ARTIFICIOSDETCNICASSon todas las alteraciones que se producen en los preparados histolgicos por defectos o fallas en una o ms de las etapas de la tcnica. Defectos de fijacin, deshidratacin, inclusin, pueden causar desgarros yretracciones. Si la acidez del formol no fue neutralizada, pueden aparecer grnulos coloreados por interaccin del acido frmico con la hemoglobina. Duranteelcortepuedenaparecerdesgarrospormelladurasenlacuchilla. Si el corte no es cuidadosamente extendido pueden aparecer pliegues oarrugas. Defectos en la coloracin son inherentes a la calidad y preparacin de los colorantes as como insuficiente coloracin.

RESUMEN DEL PROCESO HISTOLOGICO:

BIBLIOGRAFA

http://histologiaunam.mx/descargas/ensenanza/portal_recursos_linea/apuntes/3_tecnica_histologica.pdf

LeBlonde, Brown y DeGowin y DeGowin. Examen diagnstico. 9 ed. Mxico: Editorial Mc Graw-Hill; 2009.

Wallach J. Interpretacin clnica de pruebas diagnsticas. 8 ed. Mxico: Editorial Wolters Kluwer/Lippincott Williams & Wilkins; 2007.

Miomas Uterinos

Tumores benignos del msculo liso del tero, ocasionalmente malignizan (1%). Su tamao es variable, van desde milmetros hasta grandes tumores que ocupan toda la cavidad abdominal. Estn asociados a perodos menstruales abundantes, sntomas de compresin y ocasionalmente dolor. Son dependientes de estrgenos y progesterona, generalmente tienen regresin en la menopausia.

La miomatosis uterina es la causa ms comn de tumores plvicos slidos en mujeres, y ocurre en 20 a 40% de mujeres en edad reproductiva. Se le conoce tambin como leiomiomatosis uterina, fibromiomas, leiofibromiomas y fibroleiomiomas. Estn compuestos por grandes cantidades de matriz extracelular (colgeno, fibronectina y proteoglicanos). El colgeno tipo I y II estn presentes en cantidades abundantes, pero las fibras de colgeno se forman de manera irregular y desordenada, parecido a la formacin queloide.

ETIOLOGALa etiologa de los miomas an se desconoce. stos usualmente son de origen monoclonal y su crecimiento est relacionado con expansin clonal de una sola clula. Se sabe que aproximadamente 60% de los miomas son cromosmicamente normales, con cariotipo 46XX.El 40% restante presentan anomalas cromosmicas; de estas alteraciones, las ms comunes incluyen translocaciones entre los cromosomas 12 y 14, deleciones del cromosoma 7q, 3q y 1q, as como rearreglos del cromosoma 6q, 10q y 13q.Los miomas estn claramente asociados con la exposicin de estrgenos y progesterona circulante. De hecho se observan raramente durante la pubertad, y son ms prevalentes durante los aos reproductivos, con regresin despus de la menopausia. Existe mayor concentracin de receptores estrognicos en los miomas uterinos que en el miometrio adyacente.

FACTORES DE RIESGO El rango de edad de aparicin de los miomas uterinos puede ir desde los 20 a 70 aos, con mayor incidencia entre los 35 a 45. La nuliparidad es un factor de riesgo para el desarrollo de miomatosis uterina La obesidad y sobrepeso incrementan el riesgo de desarrollar miomas por el efecto estrognico sostenido. Las condiciones que aumentan la exposicin a estrgenos durante la edad reproductiva son factores de riesgo para desarrollar miomatosis uterina; tales como menarca temprana, menopausia tarda, tumores ovricos productores de estrgenos, ingesta de altas dosis y por tiempo prolongados de hormonales orales

DIAGNSTICO El 50% de las miomatosis uterinas son asintomticas La hemorraga uterina anormal se presenta en el 21.4% de las pacientes con miomatosis uterina. Los sntomas de compresin dependen de su localizacin anatmica y tamao. El 33% de las pacientes presentan dolor plvico. El tacto bimanual (recto-vaginal) tiene una alta sensibilidad cuando el mioma mide ms de 5 cm. La exploracin ginecolgica armada coadyuva a llegar a un diagnstico diferencial.

EXMENES DE LABORATORIO El ultrasonido abdominal o transvaginal tienen una sensibilidad hasta del 85% para detectar miomas de 3 o ms centmetros Dado que no existe ninguna evidencia que sustente el uso de la histerosalpingografa para diagnstico de miomatosis uterina no se recomienda su uso rutinario Realizar histeroscopa si los estudios previos no son concluyentes para miomatosis uterina y persiste la sintomatologa Se recomienda usar la resonancia magntica, en casos justificados (casos con dificultad diagnstica o de investigacin). A toda paciente mayor de 35 aos se sugiere realizar biopsia endometrial para descartar patologa maligna.

CARACTERSTICAS MACROSCOPICASMacroscpicamente son masas slidas bien delimitadas de color que vara desde ligeramente ms plida que el miometrio circundante hasta blanco grisceo, que al corte presenta un aspecto arremolinado, conformado por fibras de patrn en espiral y son de consistencia de firme a ahulada. El aspecto macroscpico puede variar, si ste presenta cambios degenerativos que son un fenmeno frecuente en los miomas, especialmente entre mayor tamao tenga ste. El cambio degenerativo ms comn es la degeneracin hialina que puede involucrar reas o la totalidad del tumor. En este tipo de degeneracin el mioma asume un aspecto plido eosinof- lico homogneo, con borramiento del patrn arremolinado en las reas de hialinizacin.

CARACTERSTICAS MICROSCOPICASMicroscpicamente, los miomas se componen de fascculos entrelazados de clulas musculares lisas. Las clulas musculares son alongadas, con citoplasma eosinfilo y ncleos uniformes en forma de puro y las figuras mitticas son prcticamente inexistentes. Las clulas se encuentran dispuestas de forma ms cercana entre s que en el miometrio normal, dndole un aspecto hipercelular al tumor.El trmino fibroide, aunque pueda resultar semnticamente poco cientfico, se usa de forma universal y es entendido en todo lugar. Llama la atencin la demarcacin acentuada que existe entre el mioma y el miometrio circundante, de la misma forma que se observa microscpicamente.

CLASIFICACION ANATMICA DE LA MIOMATOSISCLASIFICACIONLOCALIZACIN ANATOMICA

SubmucosoPor debajo de la capa mucosa

IntramuralesEn el espesor de la capa muscular del tero

SubserososPor debajo de la capa serosa

Otros: Cervical Cornual Intraligamentosos corporal

Inflamacin

La inflamacin es la respuesta del tejido vivo vascularizado a la lesin. Pueden desencadenarla infecciones microbianas, elementos fsicos, sustancias qumicas, tejido necrosado o reacciones inmunitarias. La inflamacin pretende contener y aislar la lesin, destruir los microorganismos invasores e inactivar las toxinas y preparar al tejido para la curacin y la reparacin

La inflamacin se caracteriza por:

1) Dos componentes principales: una respuesta de la pared vascular y una respuesta celular inflamatoria2) Efectos mediados por protenas plasmticas circulantes y factores producidos en la zona por la pared vascular o las clulas inflamatorias3) Terminacin cuando se elimina la causa y los mediadores secretados; tambin participan mecanismos antiinflamatorios activos4) Asociacin estrecha con la curacin; incluso cuando la inflamacin destruye, diluye o contiene de alguna otra forma la lesin, pone en marcha acontecimientos que al final reparan la lesin5) Una respuesta fundamental protectora; sin embargo, la inflamacin puede ser tambin perjudicial, por ejemplo al causar reacciones de hipersensibilidad peligrosas para la vida o una lesin continua y progresiva del rgano por una inflamacin crnica y la posterior fibrosis (p. ej., artritis reumatoide, ateroesclerosis)6) Patrones agudo y crnico: Inflamacin aguda: comienzo temprano (es decir, de segundos a minutos),duracin corta (es decir, de minutos a das), con exudacin de lquido (edema) y migracin de clulas polimorfonucleares (neutrfilos) Inflamacin crnica: comienzo tardo (es decir, das) y duracin mayor (es decir, de semanas a aos), con linfocitos y macrfagos, proliferacin de vasos sanguneos y fibrosis (cicatrizacin)

Hay cinco signos clsicos de la inflamacin (ms destacados en la inflamacin aguda): Calor (latn: calor) debido a dilatacin vascular Eritema (latn: rubor debido a dilatacin vascular y congestin Edema (latn: tumor) debido a un aumento de la permeabilidad vascular Dolor (latn: dolor) debido a liberacin de mediadores Prdida de funcin (latn: functio laesa) debida a dolor, edema, lesin tisular y/o cicatriz.

REGULADORES DEL PROCESO

1. Mediadores de la inflamacin: Histamina, serotonina, bradicinina, eicosanoides (prostaglandinas, prostaciclinas, tromboxanos y leucotrienos), quimiocinas, enzimas (triptasas y otras proteasas), factor activador de plaquetas, fibrina, C3a, C5a.

2. Citocinas. Tempranas o de alarma: IL-1, IL-6, TNF, son las conductoras del proceso. Participan tambin citocinas quimioatractantes (IL-8); inductoras de la respuesta linfoctica (IL-12, IL-18); generadoras de clulas en mdula sea (IL-3, GMCSF); supresoras del proceso (IL-10, TGF).

ETAPAS

1. Quimiotaxis Es el desplazamiento, que por atraccin, realiza una clula a lo largo de un gradiente de concentracin de una molcula atrayente. A travs de este proceso llegan y se acumulan clulas en el sitio daado. Por la accin de quimioatractantes como IL-8, C5a, histamina, leucotrieno (LT) B4, lipopolisacridos, restos de fibrina o de colgena, las reas lesionadas reclutan, adems de clulas de la circulacin, aquellas que se encuentran en reposo adheridas a las paredes endoteliales. Inicialmente se captan neutrfilos y posteriormente, en un lapso de 24 a 72 horas, participan monocitos, fagocitos y linfocitos. Las clulas tisulares (cebadas, fibroblastos, queratinocitos, etctera) adyacentes a la zona infectada o lesionada, son las primeras en llegar, en ser activadas y en promover la inflamacin.

2. Aumento del dimetro vascular Este cambio vascular, inducido principalmente por las sustancias inflamatorias: histamina, bradicinina, eicosanoides, triptasas, que son secretadas desde los primeros segundos por los mastocitos locales, los basfilos y las clulas endoteliales activadas, aumentan el flujo de sangre hacia el rea inflamada, lo que genera elevacin de la temperatura y enrojecimiento local (calor y rubor).

3. Aumento de la permeabilidad vascular La dilatacin capilar permite el paso de lquido y protenas sanguneas (entre las que se encuentran complemento e inmunoglobulinas), stos al acumularse producen edema (tumor). La distensin de los tejidos, la accin de la bradicinina y el estmulo que todo lo anterior ejerce sobre las terminaciones nerviosas, originan el dolor, ltima de las cuatro manifestaciones clnicas cardinales de la inflamacin: calor, rubor, tumor y dolor, descritas por Celsus.

4. Adherencia y rodamiento celular Inicialmente los neutrfilos (posteriormente los monocitos) se unen a las clulas endoteliales a travs de las molculas de adherencia de baja afinidad denominadas selectinas. Los leucocitos se desplazan sobre las clulas endoteliales de las vnulas postcapilares mediante un mecanismo denominado rodamiento; la velocidad de estas clulas, que normalmente viajan a 4,000 m por segundo, se reduce a 40. Las quimiocinas (IL-8) se adhieren a la superficie de los leucocitos en rodamiento e inducen en ellos la expresin de otros grupos de molculas de adherencia de alta afinidad, las integrinas; a su vez la IL-1 y el TNF actan sobre las clulas endoteliales para que aumente la expresin de los ligandos (molculas unidoras) para las integrinas de los leucocitos, con lo que se establece una unin firme entre ambas clulas.

5. Estimulacin de la va extrnseca de la coagulacin En forma simultnea a los eventos sealados, se inicia esta va. El proceso culmina con la formacin de fibrina y un estado procoagulante, lo que impide la diseminacin de grmenes a travs de la circulacin sangunea.

6. Transmigracin o diapdesis celular El rodamiento de leucocitos sobre las clulas endoteliales, culmina con el paso de los leucocitos hacia el foco infeccioso o el tejido lesionado. Los leucocitos pueden pasar a travs de las uniones intercelulares. La protena JAM, las ocludinas y la cadherina VE mantienen las uniones laterales de las clulas endoteliales, al momento de la transmigracin se ha observado una prdida focal de esta ltima molcula, lo que favorece la apertura. Los leucocitos tambin pueden pasar de manera transcelular, para lograrlo, los neutrfilos extienden pseudpodos al interior de la clula endotelial y migran a travs de sus poros; esta va es guiada predominantemente por quimiocinas. Una vez que los leucocitos han traspasado la barrera endotelial, pueden llegar al tejido inflamado, guiados por las seales quimioatractantes que en l se generan. En el sitio de la inflamacin, las clulas fagocticas endocitan al antgeno, lo procesan y lo convierten en pequeos pptidos, los que unidos a molculas de MHC (complejo principal de histocompatibilidad) pueden ser presentados a los linfocitos T. De esta manera, se induce la participacin de la inmunidad especfica o facultativa, con lo que se potencializa notablemente la repuesta inmune ante los agresores o causantes de la inflamacin. Si la respuesta inflamatoria aguda local es exitosa: el agresor es eliminado, el dao no se extiende, no hay manifestaciones sistmicas, la respuesta es inhibida oportunamente, finaliza en poco tiempo y el tejido es reparado satisfactoriamente. Si por el contrario, el proceso no limit el dao, la inflamacin aguda inicialmente local, se transforma en un proceso sistmico o crnico.

BIBLIOGRAFA

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Neoplasias

Los trminos neoplasia (literalmente crecimiento nuevo) y tumor se usan de forma intercambiable; se refieren a masas anmalas de tejido cuyo crecimiento es casi autnomo y excede el de los tejidos normales. De modo general, los tumores se clasifican en funcin de sus comportamientos clnicos en:

Benignos: tienen u n comportamiento inocente caracterizado por una lesin localizada, sin diseminacin a otros lugares, y susceptible de reseccin quirrgica; el paciente suele sobrevivir, aunque hay excepciones

Malignos: se denominan cnceres, con comportamiento agresivo que incluye la invasin y destruccin de los tejidos adyacentes y la capacidad de diseminacin a otros lugares (metstasis).

Todos los tumores tienen dos componentes bsicos:

Las expansiones clnales de clulas neoplsicas constituyen el parnquima del tumor

El estroma de soporte compuesto de tejido conjuntivo no neoplsico y vasos sanguneos; el estroma colgeno abundante se llama desmoplasia y tales tumores son duros o escirros.

Tumores benignos

Los lipomas, fibromas, angiomas, osteomas y leiomio mas son tumores mesenquimatosos benignos. La nomenclatura de los tumores epiteliales benignos es menos sencilla e incorpora elementos de la histogenia, aspecto macroscpico y arquitectura microscpica:

Adenomas: tumores epiteliales que surgen de glndulas o forman patrones glandulares Cistoadenomas: adenomas que producen masas qusticas grandes, frecuentes en el ovario Papilomas: tumores epiteliales que forman proyecciones digitales macroscpicas o microscpicas Plipo: tumor que se proyecta macroscpicamente sobre la mucosa.

Tumores malignos

Los tumores malignos se dividen en dos categoras generales: Carcinomas derivados de clulas epiteliales Sarcomas originados en clulas mesenquimatosas

La nomenclatura de los tumores malignos especficos se basa en su aspecto o clula de origen. Los tumores epiteliales malignos que se parecen al epitelio escamoso estratificado se denominan carcinomas epidermoides, mientras que los que tienen patrones de crecimiento glandulares se llaman adenocarcinomas. Los sarcomas se designan mediante el prefijo de la clula adecuada (p. ej., las neoplasias malignas del msculo liso son los leiomiosarcomas). No es infrecuente que neoplasias compuestas de clulas poco diferenciadas e irreconocibles solo puedan designarse como tumores malignos indiferenciados.

Bibliografa

KUMAR, V., A. K. ABBAS, N. FAUSTO y J. C. ASTER Robbins y Cotran - Patologa estructural y funcional Ed. Elsevier, 8 ed., 2010