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Servicio de Citometría de Flujo
FUNCIONAMIENTO DE UN CITÓMETRO DE FLUJO
La citometría es una tecnología que permite medir y cuantificar propiedades
fenotípicas, bioquímicas y/o moleculares de células individuales o, de otras partículas
biológicas o no biológicas dentro del mismo rango de tamaño
La citometría de flujo
forma que pasen alineadas de forma individual, por una z
En la zona o punto de interrogación, las células van a interaccionar con una
fuente luminosa, lo que va a permitir medir múltiples propie
cada célula individual. Además, este análisis se va a poder realizar sobre un gran
número de células, a velocidades que pueden alcanzar hasta
Servicio de Citometría de Flujo CITF-SAI-HNP
FUNCIONAMIENTO DE UN CITÓMETRO DE FLUJO
es una tecnología que permite medir y cuantificar propiedades
fenotípicas, bioquímicas y/o moleculares de células individuales o, de otras partículas
biológicas o no biológicas dentro del mismo rango de tamaño
citometría de flujo se basa en conducir células en el seno de un fluido, de tal
forma que pasen alineadas de forma individual, por una zona de interrogación
En la zona o punto de interrogación, las células van a interaccionar con una
fuente luminosa, lo que va a permitir medir múltiples propiedades físicas y químicas de
Además, este análisis se va a poder realizar sobre un gran
número de células, a velocidades que pueden alcanzar hasta 10.000-20.000
HNP
FUNCIONAMIENTO DE UN CITÓMETRO DE FLUJO
es una tecnología que permite medir y cuantificar propiedades
fenotípicas, bioquímicas y/o moleculares de células individuales o, de otras partículas
élulas en el seno de un fluido, de tal
ona de interrogación
En la zona o punto de interrogación, las células van a interaccionar con una
dades físicas y químicas de
Además, este análisis se va a poder realizar sobre un gran
20.000 células/sg.
Servicio de Citometría de Flujo
La dispersión de luz y la emisión de fluorescencia producida
interrogación, se colecta, filtra y se procesa a señales digitales que se van a guardar
en un ordenador en forma de datos que posteriormente analizaremos.
Los parámetros analizables por citometría de flujo son: i) los relacionados con
las características físicas de la partícula: el
luz en pequeños y en grandes ángulos: FSC y SSC)
fluorescencias asociadas a la partícula.
células/segundo, se obtienen
identificar poblaciones representadas en baja frecuencia dentro de la población global.
Otra importante característica de la citometría de fluj
una suspensión de partículas individualizadas,
objeto de análisis deben encontrarse en suspensión y en forma de partícula (célula)
única.
Visión en conjunto del proceso que
1. Una única célula pasa por el punto de interrogación (iluminación)
2. Se generan fotones de fluorescencia por acción del haz de láser sobre los
fluorocromos.
3. Los fotones inciden sobre detectores que generan una corriente eléctrica
proporcional al número de fotones que detectan.
4. El pulso de corriente eléctrica se mide y digitaliza.
5 Los datos se muestran en gráficos para su análisis.
Servicio de Citometría de Flujo CITF-SAI-HNP
La dispersión de luz y la emisión de fluorescencia producida
interrogación, se colecta, filtra y se procesa a señales digitales que se van a guardar
en un ordenador en forma de datos que posteriormente analizaremos.
Los parámetros analizables por citometría de flujo son: i) los relacionados con
aracterísticas físicas de la partícula: el tamaño y la complejidad (dispersión de la
luz en pequeños y en grandes ángulos: FSC y SSC) y ii) la emisión de distintas
a la partícula. Al realizar el análisis a velocidades de miles de
se obtienen datos de elevada fiabilidad estadística, pudiendo además
identificar poblaciones representadas en baja frecuencia dentro de la población global.
Otra importante característica de la citometría de flujo es que el análisis se realiza en
suspensión de partículas individualizadas, por lo que las partículas o células
objeto de análisis deben encontrarse en suspensión y en forma de partícula (célula)
Visión en conjunto del proceso que ocurre en un citómetro de flujo:
Una única célula pasa por el punto de interrogación (iluminación)
Se generan fotones de fluorescencia por acción del haz de láser sobre los
Los fotones inciden sobre detectores que generan una corriente eléctrica
ional al número de fotones que detectan.
El pulso de corriente eléctrica se mide y digitaliza.
Los datos se muestran en gráficos para su análisis.
HNP
en el punto de
interrogación, se colecta, filtra y se procesa a señales digitales que se van a guardar
en un ordenador en forma de datos que posteriormente analizaremos.
Los parámetros analizables por citometría de flujo son: i) los relacionados con
(dispersión de la
y ii) la emisión de distintas
a velocidades de miles de
pudiendo además
identificar poblaciones representadas en baja frecuencia dentro de la población global.
o es que el análisis se realiza en
por lo que las partículas o células
objeto de análisis deben encontrarse en suspensión y en forma de partícula (célula)
n citómetro de flujo:
Una única célula pasa por el punto de interrogación (iluminación)
Se generan fotones de fluorescencia por acción del haz de láser sobre los
Los fotones inciden sobre detectores que generan una corriente eléctrica
Servicio de Citometría de Flujo
Para su funcionamiento, un citómetro necesita un sistema combinado de:
- Sistema de fluidos
interrogación
- Óptica: Todo el sistema de iluminación de las células o partículas, y el
conjunto de filtros y espejos que conducen la luz emitida hasta los detectores de
fotones (Fotomultiplicadores)
- Electrónica: Compuesto por fotomultiplicadores que
electrones y además los cuantifica
De forma sencilla, un citómetro está compuesto por los siguientes elementos básicos:
- Una cámara de flujo
sin mezclarse (gracias al flujo laminar establecido por las diferencias de presión
entre el fluído envolvente y la muestra) y se enfoca hidrodinámicamente
forma que las células
interrogación. Es donde ocurre la conexión entre el sistema de fluidos y el
sistema óptico del citómetro.
Servicio de Citometría de Flujo CITF-SAI-HNP
n citómetro necesita un sistema combinado de:
Sistema de fluidos: Es el encargado de llevar a las células hasta el punto de
Todo el sistema de iluminación de las células o partículas, y el
conjunto de filtros y espejos que conducen la luz emitida hasta los detectores de
fotones (Fotomultiplicadores)
Compuesto por fotomultiplicadores que convierte
los cuantifica y digitaliza para su análisis en un
De forma sencilla, un citómetro está compuesto por los siguientes elementos básicos:
cámara de flujo, donde la muestra fluye en el seno de un fluido envolvente
sin mezclarse (gracias al flujo laminar establecido por las diferencias de presión
entre el fluído envolvente y la muestra) y se enfoca hidrodinámicamente
forma que las células pasan de forma individualizada por el punto de
Es donde ocurre la conexión entre el sistema de fluidos y el
sistema óptico del citómetro.
HNP
n citómetro necesita un sistema combinado de:
encargado de llevar a las células hasta el punto de
Todo el sistema de iluminación de las células o partículas, y el
conjunto de filtros y espejos que conducen la luz emitida hasta los detectores de
onvierten los fotones en
ordenador.
De forma sencilla, un citómetro está compuesto por los siguientes elementos básicos:
la muestra fluye en el seno de un fluido envolvente
sin mezclarse (gracias al flujo laminar establecido por las diferencias de presión
entre el fluído envolvente y la muestra) y se enfoca hidrodinámicamente, de
pasan de forma individualizada por el punto de
Es donde ocurre la conexión entre el sistema de fluidos y el
Servicio de Citometría de Flujo
-
Láseres: Fuente de iluminación de la muestra que va a incidir sobre el punto de
interrogación. Va a se
fluorescencia, y absorber la luz para después dispersarla.
tienen varias líneas de láser que permiten la excitación a diferentes longitudes
de onda y la utilización de un mayor número de fluor
parámetros a analizar. Forma parte del sistema óptico de excitación
- Filtros/ Espejos: Sistemas ópticos que van a permitir el paso de luz con una
determinada longitud de onda hacia un detector, y a reflejar el resto. Son
necesarios para recoger la emisión de fluorescencia de la muestra
parte del sistema óptico de emisión y detección
- Detectores/ PMTs:
en un pulso eléctrico.
electrónico.
- Conversores analógico/digital y Ordenador:
y se convierten en señales digitales que son procesadas y almacenadas en un
ordenador. Constituyen el sistema electrónico del citómetro.
Video explicativo del funcionamiento de un citómetro (en inglés), realizado por el MIT.
https://www.youtube.com/watch?v=EQXPJ7eeesQ
Servicio de Citometría de Flujo CITF-SAI-HNP
Fuente de iluminación de la muestra que va a incidir sobre el punto de
interrogación. Va a ser responsable de que la muestra pueda emitir
fluorescencia, y absorber la luz para después dispersarla. Hay citómetros que
tienen varias líneas de láser que permiten la excitación a diferentes longitudes
de onda y la utilización de un mayor número de fluorocromos y, por ende, de
parámetros a analizar. Forma parte del sistema óptico de excitación
Sistemas ópticos que van a permitir el paso de luz con una
determinada longitud de onda hacia un detector, y a reflejar el resto. Son
necesarios para recoger la emisión de fluorescencia de la muestra
parte del sistema óptico de emisión y detección.
Detectores/ PMTs: Van a recoger información luminosa y le va a transformar
en un pulso eléctrico. Son el nexo de unión entre el sistema óptico y el sistema
Conversores analógico/digital y Ordenador: Los pulsos eléctricos se
convierten en señales digitales que son procesadas y almacenadas en un
Constituyen el sistema electrónico del citómetro.
Video explicativo del funcionamiento de un citómetro (en inglés), realizado por el MIT.
https://www.youtube.com/watch?v=EQXPJ7eeesQ
HNP
Fuente de iluminación de la muestra que va a incidir sobre el punto de
r responsable de que la muestra pueda emitir
Hay citómetros que
tienen varias líneas de láser que permiten la excitación a diferentes longitudes
ocromos y, por ende, de
parámetros a analizar. Forma parte del sistema óptico de excitación
Sistemas ópticos que van a permitir el paso de luz con una
determinada longitud de onda hacia un detector, y a reflejar el resto. Son
necesarios para recoger la emisión de fluorescencia de la muestra. Forman
Van a recoger información luminosa y le va a transformar
Son el nexo de unión entre el sistema óptico y el sistema
Los pulsos eléctricos se cuantifican
convierten en señales digitales que son procesadas y almacenadas en un
Video explicativo del funcionamiento de un citómetro (en inglés), realizado por el MIT.
