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SEROEPIDEMIOLOGIA DE LA DIARREA VIRAL BOVINA EN EXPLOTACIONES LECHERAS DE LA SABANA DE BOGOTA* , , n,uln Inll ,. IUI •••• IU RESUMEN La actividad del Virus de la Dia- rrea Viral Bovina (VDVB) en Co- lombia data de 1975 en un lote de novillas importadas de Holanda. En la Sabana de Bogotá, se de- mostró su presencia en 1987 aso- ciada a cuadros cHnicos tales como aborto y retardo en el crecimiento. La presente investigación se desarrolló en 4 fincas bovinas le- cheras, no vacunadas, de la Saba- na de Bogotá, Colombia, a 2600 m.s.n.m., escogiendo al azar 21-25 animales por finca en forma pro- porcional a los grupos de edad. Ca- da 30 días en promedio se san- graron 96 animales, de los cuales e113% fueron terneras, el 17% no- villas y el71 % vacas. Se colectaron 1048 sueros que fueron sometidos a la prueba de seroneutralización con 100 DITC50% de la cepa Sin- ger en diluciones dobles desde 1:4 hasta 1:8192 en cultivos de RFB suplementados con SFB al1 0% li- bre de VDVB-NCP. Para el análisis de los resulta- dos se construyó una base de da- tos en el programa panacea y se aplicó estadística descriptiva, aná- lisis de varianza, regresiones y pro- cedimientos no paramétricos. De las diversas cepas virales empleadas junto con dos procedi- mientos básicos de cosecha viral, se determinó que los títulos virales más altos (10 7 .°) se obtuvieron con la cepa viral Singer en cultivo de Riñón Fetal Bovino (RFB) em- pleando el procedimiento de con- gelación-descongelación de los sobrenadantes del cultivo celular. I ,. IU"'" , ,, Jorge Luis Parra A. ,.,. Víctor J. Vera A. ,.,. Luis C. Vil/amil J. ,.,. Gloria C. Ramírez N. ** el biotipo no citopático (NCP) que no causa daños visibles o este es muy sutil (Bolin el. al., 1987) ha- ciendose necesario el uso de téc- nicas inmunohistoquímicas como inmufluorescencia e inmunopero- xidasa para su detección (Roberts and Etchinson, 1988). La infección con el virus de DVB puede resultar en una amplia varie- dad de condiciones patológicas de- pendiendo de su ocurrencia du- rante la vida prenatal o postnatal y el estado inmune del animal al mo- mento de la infección (Duffell et al., 1985; Baker, 1987; Ernst, 1983; Moenning, 1990), Se han clarifica- do algunos aspectos de su epide- miología al interrelacionar el papel que el biotipo NCP y CP tienen en la presentación de la Enfermedad de las Mucosas y otras formas de presen- tación de la enfermedad (Bolin, 1984; Wilhelmsen el. al., 1991; Brownlie el. al., 1989). En vacas gestantes suscepti- bles después de infectarse en con- diciones naturales por vía respi- ratoría y/o oral sobreviene una vire- mia de 7-12 días y una intensa pero corta inmunodepresión, con paso del virus a través de la placenta e infección del feto (Ohmann, 1988; Done el. al., 1980) lo cuál puede desencadenar aborto, momifica- ción o muerte embrionaria, o sub- sistir el animal a la injuria y montar una respuesta inmune in utero si su sistema inmune ya es competente o "aceptar como propios" los deter- minantes antigénicos virales y oca- sionar un animal infectado persls- tentemente o inmunololerante, en el cual se multiplica el virus por el resto de su vida intra y extrauterina, dichos animales no desarrollan an- De los 1048 sueros bovinos examinados, el 56% presentaron títulos 1:4, siendo la reactividad de los sueros de vacas, terneras y no- villas de 68%, 48% Y 24% respec- tivamente. La mediana general de los títulos fue de 1:256, igual para vacas y 1:64 para terneras y novi- llas. Por grupos de edad los títulos presentaron diferente proporción siendo bajos para terneras y novi- llas, mientras que las vacas oscila- ron entre títulos medianos y altos. El 11 % de los animales evalua- dos no presentaron títulos, siendo de gran importancia dentro de la epidemiología de la enfermedad ya que dichos animales podrían estar en la categoría de inmunotoleran- les o susceptibles. Analizando el comportamiento de los títulos virales según el mes de sangría, todos los predios pre- sentaron un comportamiento dife- rente y particular con fluctuaciones en diversos períodos del año. Esta circunstancia demuestra que en los predios con respuesta serológi- ca al VDVB el resultado de un solo muestreo no sea indicativo del ver- dadero estado y forma de evolu- ción de la enfermedad. La variable finca fue la mas asocia- da ron la reactividad (P ~ 0.001 ),así romo el grupo etáreo (P). La edad ex- plicó en forma inversa en terneras y directa en vacas (P ~ 0.001) la varia- ción en los títulos (R2: 0.32 y 0.06). Los resultados del presente tra- bajo sugieren una respuesta sero- lógica activa al virus de la DVB en la Sabana de Bogotá. En esta res- puesta intervienen una serie de va- riables dependientes del agente, del medio ambiente propio de cada subregión y de las prácticas de ma- nejo establecidas para cada hato. A partir de este diagnóstico se ad- vierte la necesidad de establecer dentro de los registros de las explo- taciones lecheras un seguimiento serológico de la enfermedad con el fin de determinar el comportamiento particular de la misma en cada pre- dio y así optar por medidas de control apropiadas. Se recomienda además realizar futuras investigaciones que aborden el aislamiento y caraderiza- ción molecular de las cepas presen- tes en nuestro medio, romo también la presencia de animales persist- entemente infedados. INTRODUCCION La Diarrea Virai 80vina (DVB) es una enfermedad causada por un pestivirus clasificado dentro de la familia Flaviviridae (Franeki, 1991; citado por Hooft el. al., 1992), cuyo ácido nucleico es RNA de una sola cadena abierta (Horzinek, 1971) de polaridad positiva (Dubovi, 1990), posee cubierta lipídica donde se aloja la glicoproteína estructural GP-53 responsable de la seroneu- tralización viral siendo el antígeno que genera la mayor respuesta in- munológica en bovinos (Corapi el. al., 1990; Dubovi, 1990), glicopro- teína que ha mostrado un perfil electroforético ligeramente varia- ble, entre 55 y 58 Kd (Purchio el. al., 1984; Donisel. al., 1987; Collett el. al., 1988; Meyers el. al., 1991). Se conocen dos biotipos del vi- rus cuya denominación correspon- de a su capacidad para producir o no efecto citopático en cultivos ce- lulares: el biotipo citopático (CP) que origina vacuolización y des- trucción de la monocapa celular y El presente trabajo se realiazó en el Posgrado de Salud y Producción animal de la Facultad de Medicina, Veterinaria y Zootecnia de la Universidad Nacional, con el apoyo de Colciencias mediante el proyecto "Estudio prospectivo de limitantes de salud en ganado lechero de la Sabana de Bogotá y el Valle de Ubaté". Respectivamente: DMV., MSc Corpoica Villavicencio; DMV, MSc; DMV, PhD., DMV, MSc., Profesores Universidad Nacional de Colombia. REVISTA DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA 29

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SEROEPIDEMIOLOGIA DE LA DIARREA VIRAL BOVINA ENEXPLOTACIONES LECHERAS DE LA SABANA DE BOGOTA*, , n,uln Inll ,. IUI •••• IU

RESUMEN

La actividad del Virus de la Dia-rrea Viral Bovina (VDVB) en Co-lombia data de 1975 en un lote denovillas importadas de Holanda.En la Sabana de Bogotá, se de-mostró su presencia en 1987 aso-ciada a cuadros cHnicos tales comoaborto y retardo en el crecimiento.

La presente investigación sedesarrolló en 4 fincas bovinas le-cheras, no vacunadas, de la Saba-na de Bogotá, Colombia, a 2600m.s.n.m., escogiendo al azar 21-25animales por finca en forma pro-porcional a los grupos de edad. Ca-da 30 días en promedio se san-graron 96 animales, de los cualese113% fueron terneras, el 17% no-villas y el71 % vacas. Se colectaron1048 sueros que fueron sometidosa la prueba de seroneutralizacióncon 100 DITC50% de la cepa Sin-ger en diluciones dobles desde 1:4hasta 1:8192 en cultivos de RFBsuplementados con SFB al1 0% li-bre de VDVB-NCP.

Para el análisis de los resulta-dos se construyó una base de da-tos en el programa panacea y seaplicó estadística descriptiva, aná-lisis de varianza, regresiones y pro-cedimientos no paramétricos.

De las diversas cepas viralesempleadas junto con dos procedi-mientos básicos de cosecha viral,se determinó que los títulos viralesmás altos (107.°) se obtuvieron conla cepa viral Singer en cultivo deRiñón Fetal Bovino (RFB) em-pleando el procedimiento de con-gelación-descongelación de lossobrenadantes del cultivo celular.

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Jorge Luis Parra A. ,.,.Víctor J. Vera A. ,.,.

Luis C. Vil/amil J. ,.,.Gloria C. Ramírez N. **

el biotipo no citopático (NCP) queno causa daños visibles o este esmuy sutil (Bolin el. al., 1987) ha-ciendose necesario el uso de téc-nicas inmunohistoquímicas comoinmufluorescencia e inmunopero-xidasa para su detección (Robertsand Etchinson, 1988).

La infección con el virus de DVBpuede resultar en una amplia varie-dad de condiciones patológicas de-pendiendo de su ocurrencia du-rante la vida prenatal o postnatal yel estado inmune del animal al mo-mento de la infección (Duffell et al.,1985; Baker, 1987; Ernst, 1983;Moenning, 1990), Se han clarifica-do algunos aspectos de su epide-miología al interrelacionar el papelque el biotipo NCP y CP tienen enla presentación de la Enfermedadde las Mucosas y otras formas depresen- tación de la enfermedad(Bolin, 1984; Wilhelmsen el. al.,1991; Brownlie el. al., 1989).

En vacas gestantes suscepti-bles después de infectarse en con-diciones naturales por vía respi-ratoría y/o oral sobreviene una vire-mia de 7-12 días y una intensa perocorta inmunodepresión, con pasodel virus a través de la placenta einfección del feto (Ohmann, 1988;Done el. al., 1980) lo cuál puededesencadenar aborto, momifica-ción o muerte embrionaria, o sub-sistir el animal a la injuria y montaruna respuesta inmune in utero si susistema inmune ya es competenteo "aceptar como propios" los deter-minantes antigénicos virales y oca-sionar un animal infectado persls-tentemente o inmunololerante, enel cual se multiplica el virus por elresto de su vida intra y extrauterina,dichos animales no desarrollan an-

De los 1048 sueros bovinosexaminados, el 56% presentarontítulos 1:4, siendo la reactividad delos sueros de vacas, terneras y no-villas de 68%, 48% Y 24% respec-tivamente. La mediana general delos títulos fue de 1:256, igual paravacas y 1:64 para terneras y novi-llas. Por grupos de edad los títulospresentaron diferente proporciónsiendo bajos para terneras y novi-llas, mientras que las vacas oscila-ron entre títulos medianos y altos.

El 11% de los animales evalua-dos no presentaron títulos, siendode gran importancia dentro de laepidemiología de la enfermedad yaque dichos animales podrían estaren la categoría de inmunotoleran-les o susceptibles.

Analizando el comportamientode los títulos virales según el mesde sangría, todos los predios pre-sentaron un comportamiento dife-rente y particular con fluctuacionesen diversos períodos del año. Estacircunstancia demuestra que enlos predios con respuesta serológi-ca al VDVB el resultado de un solomuestreo no sea indicativo del ver-dadero estado y forma de evolu-ción de la enfermedad.

La variable finca fue la mas asocia-da ron la reactividad (P ~ 0.001 ),asíromo el grupo etáreo (P). La edad ex-plicó en forma inversa en terneras ydirecta en vacas (P ~ 0.001) la varia-ción en los títulos (R2: 0.32 y 0.06).

Los resultados del presente tra-bajo sugieren una respuesta sero-lógica activa al virus de la DVB enla Sabana de Bogotá. En esta res-puesta intervienen una serie de va-riables dependientes del agente,del medio ambiente propio de cada

subregión y de las prácticas de ma-nejo establecidas para cada hato.A partir de este diagnóstico se ad-vierte la necesidad de establecerdentro de los registros de las explo-taciones lecheras un seguimientoserológico de la enfermedad con elfin de determinar el comportamientoparticular de la misma en cada pre-dio y así optar por medidas de controlapropiadas. Se recomienda ademásrealizar futuras investigaciones queaborden el aislamiento y caraderiza-ción molecular de las cepas presen-tes en nuestro medio, romo tambiénla presencia de animales persist-entemente infedados.

INTRODUCCION

La Diarrea Virai 80vina (DVB)es una enfermedad causada por unpestivirus clasificado dentro de lafamilia Flaviviridae (Franeki, 1991;citado por Hooft el. al., 1992), cuyoácido nucleico es RNA de una solacadena abierta (Horzinek, 1971) depolaridad positiva (Dubovi, 1990),posee cubierta lipídica donde sealoja la glicoproteína estructuralGP-53 responsable de la seroneu-tralización viral siendo el antígenoque genera la mayor respuesta in-munológica en bovinos (Corapi el.al., 1990; Dubovi, 1990), glicopro-teína que ha mostrado un perfilelectroforético ligeramente varia-ble, entre 55 y 58 Kd (Purchio el.al., 1984; Donisel. al., 1987; Collettel. al., 1988; Meyers el. al., 1991).

Se conocen dos biotipos del vi-rus cuya denominación correspon-de a su capacidad para producir ono efecto citopático en cultivos ce-lulares: el biotipo citopático (CP)que origina vacuolización y des-trucción de la monocapa celular y

El presente trabajo se realiazó en el Posgrado de Salud y Producción animal de la Facultad de Medicina, Veterinaria y Zootecnia de la Universidad Nacional, con el apoyode Colciencias mediante el proyecto "Estudio prospectivo de limitantes de salud en ganado lechero de la Sabana de Bogotá y el Valle de Ubaté".Respectivamente: DMV., MSc Corpoica Villavicencio; DMV, MSc; DMV, PhD., DMV, MSc., Profesores Universidad Nacional de Colombia.

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ticuerpos detectables a la cepa ad-quirida in utero pero si a otros virusde DVB si son antigénicamente di-ferentes a la cepa residente (Cora-pi et. al., 1986; Boli, 1988; Wil-helmsen et. al., 1991).

Los animales persistentementeinfectados pueden presentar al na-cer efectos teratogénicos como mi-crocefalia, hidrocefalia, disgenesiao hipoplasia cerebelar, desmielini-zaci6n de la médula espinal, apla-sia del timo, atrofia de la retina,tremor muscular del neonato, o ani-males de baja talla y peso (Done et.al., 1980; Hewicker et. al., 1990;).Estos animales generalmente tie-nen una tasa de supervivencia me-nor que la de no infectados, ya quepor ser inmunodeprimidos son massusceptibles a contraer enferme-dades respiratorias y/o digestivasdonde se asocian otros virus y/obacterias (Nagele., 1984; Barberet. al., 1985; Pritchard et. al., 1989).

La principal fuente de infecciónson los animales inmunotolerantesque pueden considerarse como re-servorios y la infección transpla-centaria tiene el mayor peso en latransmisión y supervivencia del vi-rus en la naturaleza (Brownlie et.al., 1989; Brownlie et. al., 1984; Lo-ken et. al., 1991).

Los trabajos experimentalescon biotipo CP no han podido de-mostrar la infección transplacenta-ria e inducción de inmunoto-lerantes pero si interferencia en lafertilización, situación observadapara los 2 biotipos. De otro lado, encondiciones naturales y experi-mentales el biotipo NCP ha estadoimplicado en la infección transpla-centaria (Brownlie et. al., 1989;Grhan el. al., 1989; Whitmore el.al., 1981; Virakul et. al., 1988).

El biotipo NCP se ha encontra-do frecuentemente como contami-nante de los cultivos celulares dediferente origen empleados en in-vestigación, diagnóstico e industriade vacunas y biológicos en Medici-na Humana y Veterinaria (Potts et.al., 1989; De Galvis, 1991; Levingset. al., 1991; Vera y cols., 1992) asícomo en Suero Fetal Bovino el másimportante nutriente para la multi-plicación celular in vitro (Bolin el.al., 1991; Vera y cols., 1992).

Los autores hacen una clara di-ferenciación entre cepas y aisla-mientos para ambos biotipos. Lascepas son consideradas aquellosaislamientos sometidos durantemucho tiempo en laboratorios a pa-

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ses en diferentes sistemas celula-res y/o en animales experimen- ta-les, mientras los aislamientos sonconsiderados aún cepas de campoque no han sufrido en forma conti-nuada este proceso (Moening,1990). Cepas de referencia conoci-das que son empleadas como an-tígeno en pruebas de seroneutra-lización como NADL, Singer y Ore-gon C24 se han comportado en for-ma diferente a un panel de anti-cuerpos monoclonales originadosen la cepa Singer pudiéndose con-siderar antigénicamente diferentes(Corapi et. al., 1990) situación quetambién ha sido observada en ais-lamientos de campo con ambosbiotipos (Dubovi et. al., 1986).

Los estudios sobre DVB en Co-lombia datan de 1975 cuando seimportaron de Holanda ternerasHolstein que desarrollaron el cua-dro clásico de Enfermedad de lasmucosas diagnóstico confirmadopor el gobierno Holandés (Borda,1975). A la luz de los actuales co-nocimientos y teniendo en cuenta elestatus serológico exigido para lasterneras importadas y sus madres,es posible que algunos animales ha-yan desarrollado EM, sin embargoun síndrome descrito recientementeen neonatos susceptibles no in:nu-notolerantes ocasio- nado por bioti-po NCP concuerda con lo observadoen aquella época (Corapi el. al.,1989; Corapi el. al., 1990).

Posteriormente Gallego (1987)aisló el virus en fincas de la Sabanade Bogotá observando abortos, se-roconversión y retardo en el creci-miento (Gallego y cols., 1987).

El más amplio estudio serológi-co en bovinos de leche fue el desa-rrollado por Griffiths y cols (1982)en 9 subregiones naturales de Co-lombia, donde hallaron una tasa dereactores de 47.2 % para animalesy de 82 % para predios. Otro traba-jo efectuado en la Costa Atlánticaencontró una tasa de reactores de5.7% en animales y 46.3 % en pre-dios (Otte y cols., 1989). El trabajomás reciente describe por primeravez en el país un caso de Enferme-dad de las Mucosas donde se ais-lan e identifican ambos biotipos(Mogollón y cols., 1990).

La prueba serológica mas em-pleada en investigación y diagnós-tico es la neutralización viral te-niendo como indicador de la reac-ción antígeno-anticuerpo célulasque deben ser libres de biotipoNCP, y suplementadas con SFBque cumpla esa misma condición,

siendo una prueba costosa, dis-pendiosa y exigente en la calidadde sus reactivos, aspectos que limi-tan su oferta como prueba de rutinapara diagnóstico en el pals. En estaprueba los anticuerpos circulantesse adhieren a los epitopes de GP-53 en la cubierta viral, impidiendola multiplicación del virus dentro delas células (Corapi et. al., 1989).

Aunque en condiciones natura-les el virus tiene un amplio espectrode variabilidad antigénica (Corapiet. al., 1990) no se han identificadoserogrupos separados (Bolin et.al., 1991). Dependiendo de la cepa,ya sea de referencia o aislamientode campo, empleada como anlige-no en la prueba de neutralización,la respuesta con sueros policlona-les o anticuerpos monoclonalespuede presentar diferencias impor-tantes (Bolin et. al., 1990; Bolin et.al., 1989), lo que trae consigo quela interpretación de los títulos searelativa, así mismo un título alto obajo parece no estar relacionadocon el grado de patogenicidad o vi-rulencia de la cepa inductora (Co-rapi el. al., 1990).

En condiciones experimentaleslos anticuerpos neutralizantes sedesarrollan entre 14 y 30 días pos-tinfección alcanzando su máximotitulo a los 60 días, cuando empie-zan a declinar (Westenbrick el. al.,1989), en condiciones naturales larespuesta entre muestreos seria-dos para un mismo grupo de ani-males tiene amplia variación obser-vando que entre el 40% y 60% delos animales exhiben títulos dife-rentes con intervalos de 90 días(Stauber el. al., 1986).

Pocos trabajos experimentales yde campo conducen la respuestaserológica hasta su título final, debi-do a los costos y objetivos de los en-sayos, y emplean generalmente unlimite a 1:1024, sin embargo los ani-males pueden llegar a desarrollar tí-tulos superiores a 1:8192 (Kelling el.al., 1990; Paton el al., 1990).

En condiciones naturales enpoblaciones infectadas no se cono-cen informes de la literatura nacio-nal e internacional sobre el com-portamiento de la respuesta inmu-ne a DVB en el tiempo, que permitaconocer ocurrencia de procesos dere infección favorecidos por dismi-nución de niveles protectivos enuna población o respuestas dife-renciales por grupo etáreo y fincaexplicados por el manejo dentro deun sistema de producción como esel de producción de leche. En este

sentido este trabajo pretende dis-cemir en condiciones de trópico fríoen predios reactores, la dinámicaserológica en el tiempo que indirec-tamente puede expresar dinámicaviral dentro de predios infectados.

MATERIALES Y METODOS

Con el fin de hacer un monito-reo serológico a DVB se seleccio-naron 4 predios de producción deleche con bovinos Holstein no va-cunados contra DVB antes ni du-rante el seguimiento, escogiendoen cada finca una cohorte de 21 a25 animales, independiente de lapoblación en cada una de ellas,que representara en forma propor-cional a 10l> diferentes grupos etá-reos. Cuando en las primeras 4sangrías algún animal murió o fuedescartado, se reemplazó por otrodel mismo grupo, en las fincas don-de la población de terneras erainestable esta categoría no se con-sideró (Finca 10). De acuerdo al or-den consecutivo del banco desueros del posgrado los predios sedenominaron como 7, 8, 9y10. Losdos primeros estaban situados enel municipio de Mosquera y erancolindantes, el tercero en el muni-cipio de Cajicá y el último en lasestribaciones de la CordilleraOriental en el municipio de Sibaté.El grupo inicial de seguimiento fuede 96 animales de los cuales el13% fueron terneras, 8117% novi-llas y el71 % vacas. En la finca 7 sesiguió el 78% de los animales(25/32), en la 9 el 16% (25/168), enla 10 el 20 % (25/132) Y en la 11 el32% (21/66). Las vacas se esco-gieron al azar y en forma proporcio-nal al número de partos inde-pendiente de si estaban lactando osecas, vacías o gestando. Se consi-deraron como terneras animalesdesde un día de edad hasta los 12meses, novillas 12 meses hasta an-tes de parir y vacas animales quehablan tenido uno o mas partos.

En promedio cada 30 días setomó a cada animal una muestra desangre de la vena o arteria cocer-gea en tubos estériles y al vacío,que se transportaron el mismo díaal laboratorio donde se centrifuga-ron a 700 xg por 20 minutos alma-cenandolos a -70°C hasta suempleo en la prueba de seroneu-tralización. El período de toma demuestras estuvo comprendido en-tre diciembre de 1989 y enero de1991 , todos los predios tuvieron 12sangrías con excepción de la finca11 que tuvo 11 tomas.

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La prueba de seroneutraliza-ción se efectuó a 1048 sueros si-guiendo el procedimiento descritopor Cortés E., (1988), empleando100 OITC50/0.1 mi con dilucionesdobles de suero desde 1:4 hasta1:256, los sueros reactores a estaúltima dilución se corrieron nueva-mente desde 1:128 hasta 1:8192.

Para cultivo, titulación viral porel método de Reed and Munch(Carnero, 1982) y seroneutraliza-ción se empleó cultivo primario de

Las variables que no presenta-ron distribución normal y/o no erancontinues fueron transformadas deacuerdo a su naturaleza siguiendolos procedimientos señalados porSteel y Torrie (1985).

El índice de seroconversión (IS)por cohorte se caluló asl:

Se calificó como incidencia se-rológlca la reactividad 1:4, entresangrías consecutivas, cuando enla primera de estas no era reactora la prueba. Los animales con másde 3 sangrías y no reactores a laprueba en cualquier punto delmuestreo se consideraron sujetossusceptibles de incidencia seroló-gica, las tasas de incidencia se cal-cularon de la misma forma a lodescrito para seroconversión.

RESULTADOS Y DISCUSION

La cepa Oregon C24 se cultivóen la línea celular Madin Oarby Bo-vine Kidney (MOBK) (ATCC, 1988)sin observarse crecimiento y lesiónviral sobre la monocapa debido acontaminación celular con virus deOVB-NCP presentándose interfe-rencia entre biotipos, efecto que nose detectó cuando se cultivó enRFB libre de virus adventicio (Tabla1), este resultado fue contrario alobservado por otros autores dondela cepa Oregon C24 no fue inhibidapor aislamientos NCP de origenEstadounidense y Japonés (Sugi-

Riñón Fetal Bovino (RFB) hasta elsubcultivo 3 siguiendo las técnicasdel posgrado de reproducción ani-mal, Las células y SFB empleadosfueron sometidos a Inmunofluores-cencia indirecta, seroenutraliza-ción e interferencia para garantizarque no portaran biotipo NCP, care-cieran de anticuerpos neutralizan-tes al virus de OVB y no existierainterferencia con el biotipo CP em-pleado como antígeno (Manual detécnicas de Laboratorio. PRA. UN.Sin publicar).

Cómo posibles antlgenos se pro-baron las cepas citopáticas OregonC24, Singer e ICA, empleandoMOBK, RFB y titulación del sobrena-dante (Virus liberado) y por disrup-ción celular de células- sobrena-dante por congelación y desconge-lación (Virus asociado) en diferentestiempos postinoculación.

Se construyó una base de da-tos en el Programa PANACEA don-de se efectuó estadística descrip-tiva, análisis de varianza de una

TSC: Número de animales que se convirtieron en el monitoreoNúmero de animales en la cohorte con mas de 4 sangrfas al final éJ periodo

Valor transformado: Logaritmo natural (Título + 1)

Arbitrariamente los títulos seclasificaron como bajos entre 1:4 y1:32, medios entre 1:64 y 1:512 yaltos entre 1:1024 y 1:8192.

Se consideró como un procesode seroconversión, el incrementoen 3 o mas diluciones entre san-grías consecutivas, siendo necesa-rio que en la sangría previa fuerareactor entre 1:4 y 1: 1024 Y tuviera

Procesos de seroconversión en el mes XiTSC(mes Xi): Total de procesos observados en el monitoreo

IS: Número de procesos de seroconversiónNúmero de animales susceptibles de seroconvertir

yama et. al., 1984). Los escasosestudios sobre interferencia indi-can que posiblemente la ocurren-cia de este fenómeno depende dela similitud bioqulmica de la ceparesidente y desafiante (Moening,1990), del tiempo de adaptacióndel biotipo NCP en el cultivo, ya quese ha observado que el efecto nose presenta cuando los biotiposson inoculados simultáneamente(Shirai et. al., 1984) y, de la canti-dad de virus infectivo con el cual seinocula un cultivo contaminado(Sugiyama et. al., 1984). Existe po-ca claridad sobre el proceso de in-terferencia donde por la secuenciade pases el biotipo NCP está adap-tado a lineas celulares de diversoorigen animal (Levings et. al.,1990; Potts et. al., 1989; Vera ycols., 1992).

El aislamiento citopático ICAmejoró su capacidad infectiva amedida que se efectuaron pasesen RFB, presentando al tercer pa-se un título similar al reportado ensu aislamiento (Mogollón y cols.,1990). Tabla 1.

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En general los títulos de las co-sechas virales por congelación ydescongelación de células-sobre-

vla, Regresión lineal simple y múl-tiple y algunos procedimientos noparámetricos como Chi-cuadrado,a su vez en el programa SAS seefectuó (para observaciones repe-tidas) una prueba de esfericidad deMauchlly's en base a chi cuadradoy una prueba de Wilky's Lambda deanálisis multivariado (manova) yunivariado para comparar perfilesentre y dentro de animales por fin-ca. (Static Analytical Sistem.,1988). Los títulos a OVB fuerontransformados por la ecuación:

4 o mas muestreos consecutivos.la tasa de seroconversión (TSC)para cada cohorte y por mes se cal-cularon de la siguiente forma:

nadante fueron superiores al delsobrenadante (Tabla 1). Se esco-gió como antlgeno para la prueba

TABLA 1TITULO OBTENIDO PARA DIFERENTES CEPAS CITOPAnCAS DE DVB

CON DIVERSOS METODOS y TIEMPO DE COSECHACEPA CELULAS METODO llEMPO TITULO

Oregon MDBK 1 72 hrs Interferencia

Oregon RFB 1 72 hrs 104.2

ICA RFB 2 72 hrs 103.5

ICA RFB 2 60 hrs 103.4

ICA RFB 2 52 hrs 104.5

SINGER RFB 1 72 hrs 105.3

SINGER RFB 1 60 hrs 107.0

SINGER RFB 2 28 hrs 104.8

SINGER RFB 2 52 hrs 104.3

Los títulos de la cepa ICA corresponden a los pases 1, 2 Y 3.Título expresado en DITC50%/0.1 mi calculado por el método de Reedand Muench. Método 1: Células-sobrenadante congelado y descon-gelado 3 veces. Método 2: Sobrenadante. MDBK: Unea celular MadinDarby Bovine Kidney.

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Frecuencia.(N 583)140~~==~~~~~---------------------------------¡

120

100

80

60

40

20

o4 6 16

116

32 126 256 512Títulos

1024 2048 4096 819264

FIGURA 1. Histograma de títulos por SN de los sueros reactores.

de seroneutralización el sobrena-dante de la cepa Singer cultivadaen RFB por 52 horas con un títulode 1043 DITC50/0.1 mlla cual a pe-sar de tener títulos mas bajos po-see una mejor integridad viral ymenor contaminación con restoscelulares, ya que el proceso de dis-rupción celular por cambios detemperatura trae consigo virus en-samblado, proteínas estructuralesy no estructurales y antígenos deorigen celular (Magar el. al., 1987),además de mRNA viral que por supolaridad positiva es infectivo paralas células (Dubovi, 1990).

De los 1048 sueros bovinosexaminados el 56% (583) presen-taron título 1:4. A su vez el 41 % delos sueros (37/91) del grupo etáreoterneras presentaron anticuerposneutralizantes, el 24% de los sue-ros de novillas (55/234) y e168% delos sueros de las vacas (491/723).La tasa de sueros reactores fue de59%,35% 75% Y 54% para las fin-cas 7,9,10 Y 11 respectivamente.

El histograma de frecuenciasde los sueros reactores mostró unadistribución simétrica con aparien-cia normal (Figura 1) Y una media-na con un título de 1:256 que seobservó en el 20%, el 41 % de lasveces el título estuvo entre 1:256 y1:512. Así mismo el 24% de los tí-tulos fueron bajos, el 49% media-nos y el 27% altos.

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tudio de prevalencia puntual en Di-namarca, donde el histograma y lamediana (1 :128) fueron similares alde este estudio, sugiriendo que enpoblaciones infectadas la distribu-ción de frecuencias de los títulostiene una tendencia normal.

Al descomponer las frecuen-cias de reactividad por grupos etá-reos, las terneras presentarondesplazamiento a la izquierda conuna mediana de 1:64, similar con-dición se observó en las novillascon igual mediana, mientras las va-cas desplazarron el histograma unpoco a la derecha con una medianade 1:256. Tabla 2.

Los títulos agrupados en clasespresentaron diferente proporciónpara los grupos de edad, es así co-mo en las terneras la mayor fre-cuencia correspondió a títulosbajos, en novillas a títulos bajos ymedianos, mientras en vacas los tí-tulos bajos fueron los de menor

La distribución de títulos encon-trada en este trabajo con muestreorepetitivo sobre un mismo grupo deanimales, concuerda con lo halladopor Loken el. al., (1991) en un es-

TABLA 2FRECUENCIAS DE REACTIVIDAD A LA PRUEBA

DE SERONEUTRALlZACION PARA DVB, SEGUN GRUPO ETAREODE LOS BOVINOS MONITOREADOS

TITULO TERNERAS % NOVILLAS % VACAS %

4 6 16 6 11 23 58 4 11 6 11 21 4

16 3 8 7 12 17 3

32 5 13 6 11 36 764 3 8 5 9 37 8

128 4 22 6 11 54 11

256 4 11 8 14 104 21

512 4 11 5 9 49 10

1024 3 9 2 4 44 92048 O - O - 52 11

4096 O - 2 4 25 58192 1 3 2 4 29 6

TOTAL 37 55 491

presentación y los más frecuenteslos medianos, así mismo este gru-po tuvo la mayor proporción de tí-tulos altos comparado con ternerasy novillas, este hallazgo es compa-rable a lo encontrado por Kelling el.al., (1990) en un estudio transver-sal en ganado de carne en los Es-tados Unidos. Figura 2.

Los coeficientes de variación delos títulos transformados de lossueros reactores fueron: 0040,0.48, 0.30 Y 0.36 para los predios7,9,10 Y 11 respectivamente, a suvez en los grupos de edad el coefi-ciente encontrado fue: 0047 paraterneras, 0.46 para novillas y 0.35para vacas. Esto indica dispersiónde los títulos y un comportamientoserológico variable. En la literaturainternacional disponible no se ha-llaron referencias de estudios decampo similares para establecercomparaciones válidas con el pre-sente estudio. Las vacas presenta-ron por tanto menor dispersión yuna respuesta mas homogénea enrelación con las terneras y novillas,así como la cohorte de la finca 10con respecto a los demás predios.

Cuando se consideraron sue-ros reactores y no reactores se ob-tuvo un título promedio de 1:4 paraterneras, 1:4 para novillas y 1:32para vacas y 1:16,1 :4,1 :64 y 1:16para las cohortes de las fincas 7, 9,10 Y 11 respectivamente. Los ma-yores títulos promedio pertenecie-ron en todos los predios a lasvacas, con excepción de la finca 9donde terneras y vacas tuvieron untítulo medio similar, así mismo enlos predios donde se evaluaron ter-neras el título medio en estas fuesuperior al de novillas (Figura 3). Elanálisis de varianza por predios paragrupos etáreos no fue significante enel predio 9 (P z 062) pero si en losdemás (P ~ 0.01), donde el grupovacas tuvo diferencias significativasen todos los casos con respecto aterneras y novillas. Tabla 3.

El análisis de frecuencias de re-actores y negativos a la prueba ygrupos etáreos por finca, demostróasociación estadística entre estasvariables, siendo su intensidad di-ferente entre predios, es así comola finca 7 mostró la más alta asocia-ción seguida de los predios 9,11 Y10. El análisis señala que en todaslas fincas la respuesta serológicaestuvo asociada a las categoríasde edad. Tabla 4.

En la Figura 4, se observa elpromedio del título transformado,en función de la edad de los anima-

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