SERIE BLANCA: PRACTICA NO · Web viewEs el principal método de extracción de sangre en el...

Facultad de Bioanálisis, Veracruz Manual de Prácticas de Hematología

MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO

SERIE BLANCA

ELABORÓ:

Q.C. MARIA ESTHER DESCHAMPS LAGO

Serie Blanca 1


SERIE BLANCA: PRACTICA NO.1OBTENCIÓN DE LA MUESTRA DE SANGRE

1. INTRODUCCIÓN

Obtención De Sangre Capilar Es el método empleado cuando se necesita tan solo una pequeña cantidad de sangre, ya que los estudios a realizar así lo requieren. El sitio más apropiado para obtener sangre capilar es la yema del dedo. En los niños más pequeños, es más conveniente obtenerla del talón ó del dedo pulgar del pie. Los detalles relativos a los recipientes y portaobjetos que se utilizan, se indican a continuación.

VENTAJAS. Facilidad

con que puede obtenerse Especialm

ente útil en pacientes geriátricos y en niños, en particular, recién nacidos.

DESVENTAJAS. Sólo logra

obtenerse una pequeña cantidad de sangre que puede ser insuficiente. Es un

método por lo general tardado y que tiende a provocar hemólisis de la muestra En pacientes inmunocomprometidos puede provocar infecciones, excepto cuando se

realiza la punción después de 8 a 10 min. de contacto con la piel con un buen antiséptico.

Obtención De Sangre Venosa . Es el principal método de extracción de sangre en el laboratorio de análisis clínicos, ya que es relativamente fácil de realizar.

VENTAJAS. Nos permite hacer múltiples exámenes y en repetidas veces si se desea, con la misma

muestra. Las alícuotas de plasma y suero pueden congelarse para futura referencia.

DESVENTAJAS Puede provocar la coagulación de la sangre si el procedimiento lleva mucho tiempo. Algunos componentes no son estables en sangre anticoagulada. Puede dificultarse en niños, pacientes obesos ó en estado de shock. Puede ocasionarse hemólisis de las muestras afectando ciertas determinaciones, por

las siguientes causas: Por forzar el paso de la sangre al tubo

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Por agitar el tubo enérgicamente Por extraer sangre de un hematoma

Anticoagulantes Empleados. Estas sustancias impiden la formación de coágulos. El mecanismo por el que se evita la coagulación, varía según el anticoagulante; por ejemplo, EDTA, citrato y oxalato se unen con el calcio, mientras que la heparina impide la conversión de protrombina en trombina.Ejemplos de anticoagulantes son EDTA, citrato de sodio, y heparina en forma de sal de litio ,Los tubos deben invertirse varias veces para asegurar la mezcla adecuada después e la recolección, de acuerdo con las instrucciones del fabricante.

2. PRINCIPIO Y METODOLOGÍA .El sitio más práctico para obtener sangre venosa es la flexura anterior del brazo, de preferencia justo por arriba de alguna de las ramas venosas que allí se encuentran. Las venas superficiales de la cara anterior del antebrazo son las más comúnes para la venopunción. Las tres venas principales que se utilizan son:1) vena cefálica, ubicada en la parte superior del antebrazo y del lado del pulgar de la mano; 2) vena basílica, ubicada en la parte inferior del antebrazo y del lado del dedo meñique de la mano; y 3) vena cubital mediana, que conecta las venas basílica y cefálica en la fosa antecubital ( flexión del codo) y es la vena de elección.Si el paciente aprieta el puño después de aplicar el torniquete, la vena se tornará más prominente.El torniquete facilita la obtención. En los niños pequeños se pueden utilizar otros sitios; si es así, es mejor que la sangre la obtenga alguna persona con experiencia. Usar una aguja puntiaguda, nunca menor de calibre 21 y una jeringa de 5 ml ó de 10 ml. Tanto la aguja como la jeringa deberán estar limpias, secas y estériles. Con práctica se puede obtener sangre usando sólo una aguja con un tubo de goma por el que se deja correr la sangre hasta los tubos en los que se recoge la muestra. Para esta técnica se utilizan agujas de calibre 19.

3. LISTA DE REQUERIMIENTOS

3.1 Materiales de Laboratorio

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CANTIDAD DESCRIPCIÓN2 Tubos de recogida de muestras con EDTA1 Aguja de Vacutainer1 Contenedor de Vacutainer1 Jeringa1 Lanceta1 Torundas de algodón con alcohol isopropílico1 Ligadura


4. PROCEDIMIENTO.

4.1 Punción Capilar

4.1.1 Indicaciones.

En lactantes, se realiza en la superficie plantar interna ó externa del talón.En niños de más de un año, en la superficie palmar de la última falange del segundo, tercero ó cuarto dedo de la mano.La punción no deberá realizarse en una parte edematosa ó congestionada, ó donde la piel se encuentra fría y cianótica.

4.1.2 Identificación del Paciente

Asegurarse de que el paciente llegue en condiciones óptimas y tranquilizarlo.

Colocar al paciente adecuadamente. Checar el material para la extracción:

4.1.3 Técnica.

4.1.3.1 Limpiar cuidadosamente la piel en el sitio de punción y a su alrededor con algodón mojado en algún desinfectante , como alcohol de 70%.

4.1.3.2 Secar el área con gasa estéril seca.4.1.3.3 Puncionar con una lanceta estéril ó aguja desechable. El movimiento debe ser

rápido y la punción suficientemente profunda para asegurar que la sangre fluya libremente.La salida de la sangre puede facilitarse ejerciendo una suave presión en la cara lateral del dedo. A corta distancia del sitio de punción.

4.1.3.4 La sangre deberá fluir libremente. Si se ejerce demasiada presión, se diluirá con los líquidos tisulares, lo que la puede hacer inapropiada para estudio.

4.1.3.5 Descartar siempre la primera gota de sangre, limpiándola con una gasa seca y dejar el sitio de punción limpio y seco.

4.3.1.6 Obtener la cantidad requerida de muestra, aspirando la sangre con pipeta ó colocándola en un portaobjetos.

4.2 Punción Venosa

4.2.1 Indicaciones.

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Debe indicarse al paciente la posición correcta, que puede ser sentado ó recostado, apoyando bien el brazo en posición horizontal.Elegir la vena adecuada, prefiriéndose la cubital mediana, la vena basílica, la cefálica, las venas de la muñeca, tobillo y mano, ya que resultan fáciles de palpar.

4.2.2 Técnica

1. Desinfectar la piel en el sitio de punción con algodón mojado en un desinfectante apropiado como alcohol de 70%.

2. Preparar la jeringa y la aguja, ó en su defecto la aguja con el contenedor en el caso del sistema de tubos al vacío, cuidando que la técnica sea aséptica.

3. Aplicar un torniquete en el brazo ( por arriba del sitio de punción), suficientemente apretado para que restrinja el flujo de la sangre venosa.

4. Desinfectar nuevamente el sitio de punción, y secar la piel con algodón ó gasa limpios, secos y estériles.

5. Asegurarse de que el émbolo de la jeringa esté hasta el fondo , es decir, que la jeringa no contenga aire. Insertar la aguja de la jeringa en una vena con un movimiento preciso.

6. Jalar lentamente el émbolo y obtener 2 a 3 ml de sangre.7. Retirar la jeringa de la aguja y sustituirla por otra jeringa que contenga la solución

anticoagulante de citrato de sodio. O directamente introducir el tubo del sistema de vacío.

8. Obtener el volumen de sangre deseado jalando el émbolo muy despacio.9. Soltar el torniquete y colocar una gasa seca sobre el sitio de la punción, retirando

después la aguja con un solo movimiento.10. Presionar ligeramente la gasa sobre el sitio de punción durante algunos momentos y

después pedir al paciente que continúe aplicando la presión durante unos minutos.11.Cuando la sangre se obtiene empleando sólo una aguja sin jeringa, se emplea el

mismo procedimiento y cantidad de anticoagulante. Deben usarse tubos graduados para obtener la proporción adecuada de anticoagulante y sangre.

Actividades:- Practicar la toma de sangre capilar.- Practicar la toma de sangre venosa.

-Realizar esquemas de punción capilar .

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-Realizar esquemas de punción venosa y de las principales venas empleadas.

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-Realizar esquema de los diferentes sistemas de extracción: jeringa y sus partes; sistema vacutainer y sus partes; tipos de tubos y colores de tapones empleados en el sistema vacutainer, de acuerdo con el anticoagulante empleado .

- Reporte de resultados._________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

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SERIE BLANCA:PRÁCTICA No. 2“EXTENDIDOSDE SANGRE”

1. INTRODUCCIÓN.Los extendidos de sangre se realizan dentro del estudio del hemograma completo, ó bien de manera aislada .En ellos se pueden estudiar los eritrocitos, los leucocitos y las plaquetas, y el propósito de ello es determinar las características morfológicas de cada tipo celular y evaluar la frecuencia relativa de los distintos tipos de leucocitos.Se deben teñir con una de las tinciones de Romanowsky las cuales varían en sus propiedades de tinción, y por lo tanto, es importante seleccionar una y familiarizarse con ella. La coloración de Wright es muy confiable y sencilla, pero otras también lo son, tales como la de Giemsa. Leishman ó May-Grünwald, las cuales son igualmente satisfactorias, aunque puede variar la tinción de un lote a otro de colorante.

2. PRINCIPIO Y METODOLOGÍA .

Los frotis de sangre deben confeccionarse con láminas portaobjetos de vidrio que previamente se hayan lavado y secado de manera conveniente, con la finalidad de eliminar cualquier resto de grasa que pudiera quedar en ellos y evitar así una mala calidad en la tinción. Los frotis de sangre son esenciales para el estudio morfológico y cuantitativo de las células sanguíneas. Cuando un frotis se encuentra bien realizado, se podrán distinguir en él tres áreas importantes: la cabeza ó zona de inicio, el cuerpo ó zona media y la cola ó área final del mismo. Un frotis no deberá ser ni grueso ni delgado, pues en ninguno de ellos se podrán apreciar bien las áreas antes mencionadas. En un frotis bien realizado, la tinción será de mejor calidad.

3.LISTA DE REQUERIMIENTOS


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NÚMERO DESCRIPCIÓN2 Tubos de recogida de muestras1 Aguja de Vacutainer1 Contenedor de Vacutainer1 Jeringa1 Torundas de algodón con alcohol isopropílico1 Ligadura1 Caja de portaobjetos limpios


4. PROCEDIMIENTO.

Técnica de los dos Portaobjetos.

1. Colocar a una distancia de 1.5-1.9 cm del extremo derecho de un portaobjetos, una pequeña gota desangre ( del tamaño de 3 cabezas de alfiler) obtenida por punción capilar del talón, del lóbulo de la oreja ó por extracción venosa.

2. Si se emplea sangre venosa mezclada con anticoagulante, el frotis deberá realizarse lo más pronto posible, debido a que el contacto prolongado con éste altera la morfología celular.

3. Aproximar el portaobjetos extensor a la gora, dejando que hagan contacto y que por capilaridad éste se extienda a lo largo del borde.

4. Se desliza el portaobjetos extensor hacia el extremo contrario, para lograr una película delgada de sangre.

5. dejar secar y teñir.

ACTIVIDADES:-Realizar 10 frotis correctamente confeccionados.

-Realizar esquema que muestra las partes de un frotis .

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-Realizar esquema de tres frotis: demasiado grueso, demasiado delgado y correctamente realizado.

- Reporte de resultados._________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

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SERIE BLANCA: PRACTICA NO. 3“TINCIÓN DE WRIGHT Y REACTIVOS COMUNMENTE

EMPLEADOS EN HEMATOLOGIA “

1. INTRODUCCIÓN La finalidad de la tinción de Wright es lograr que el alumno se sienta capacitado para preparar adecuadamente algunos de los reactivos y colorantes más comúnmente empleados en las áreas de hematología y microbiología, que como químico clínico tiene la obligación de conocer y dominar.


COLORANTES.A los colorantes de les puede clasificar en tres grupos:1) Acidos. Son aquellos constituídos por sales cuya base es incolora y cuyo ácido es

coloreado. A este grupo pertenecen las eosinas. Estas soluciones se usan para la coloración citoplasmática ó coloración de fondo.

2) Basicos. Son aquellas sales de ácido incoloro y base coloreada como el clorhidrato de azul de metileno. Estos colorantes tiñen por lo general algunos elementos del núcleo.

3) Neutros. Son aquellas sales con el ácido y la base coloreados, por ejemplo, los eosinatos de azul y azur de metileno , los más empleados en hematología. El método de Romanowsky, que emplea estos colorantes, ha sido la base de las coloraciones panópticas utilizadas en la actualidad ya que ha tenido un gran éxito en la tinción diferencial de la mayoría de las estructuras normales y anormales de la sangre. La mayor parte de estos colorantes policromos derivados del método de Romanowsky, se disuelven en alcohol metílico, combinando así, la fijación con la tinción. Los más conocidos de todos ellos, son los de Giemsa y de Wright.

Tipo de Error Causas Como se CorrigeTinción demasiado azul Tiempo excesivo de tinción

Lavado deficientePh muy alcalino

Disminuir el tiempo de tinciónLavar adecuadamenteAcidificar el pH

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Tinción demasiado rosa Tiempo insuficiente de tinciónLavado excesivopH muy ácido

Aumentar el tiempo de tinciónLavar adecuadamenteElevar el pH

Precipitación de colorante Colorante no filtradoSecado de la laminilla durante la tinción.

Filtrado de coloranteProcurar que siempre haya un buen menisco de colorante durante la tinción.

ANTICOAGULANTES.

Los 4 anticoagulantes más usados son: mezcla de oxalato amónico y de potasio ( ó simplemente oxalato amónico ), citrato trisódico, sequestrene ( EDTA ), y heparina.

Los 3 primeros impiden la coagulación sustrayendo el calcio del plasma sanguíneo por precipitación ó fijación en forma no ionizada. La heparina neutraliza la trombina y otras fases de la activación de los factores de coagulación.

El citrato trisódico, el EDTA y la heparina, pueden emplearse para impedir la coagulación de la sangre destinada a transfusiones, sin embargo, la mezcla de oxalatos, no, por ser tóxica.

Los oxalatos pueden usarse para determinaciones como hemoglobina, hematocrito y recuentos globulares, aunque para extensiones sanguíneas puede usarse tan sólo en los primeros minutos, pues más tarde pueden desarrollarse alteraciones de las células sanguíneas como formas dentadas de los hematíes, vacuolización en el citoplasma de los granulocitos, fagocitosis de los cristales de oxalato, artefactos en los núcleos de los linfocitos y monocitos, etc.Además no deben emplearse para determinaciones químicas de nitrógeno y potasio. Para investigaciones de coagulación, es muy útil el citrato trisódico.

El EDTA ó sequestrene es tal vez el anticoagulante más usado para el recuento de células sanguíneas. Se le compara con el oxalato para el estudio del hematocrito y hemoglobina, pero para estudios morfológicos, es todavía mejor, pues con él, no se forman alteraciones ni artefactos en las células sanguíneas, aún después de un buen tiempo de estar hecha la mezcla, si la sangre se refrigera ( 2 horas a 24 horas ).

La heparina también puede usarse para determinaciones como hematocrito y hemoglobina, pero no de óptimos resultados en las extensiones sanguíneas, ya que produce un fondo azul en aquéllas que son teñidas con el colorante de Wright.

3. LISTA DE REQUERIMIENTOS

3.1 Reactivos.NUM. NOMBRE DEL REACTIVO CANTIDAD

1 Colorante de Wright 0.1 g

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2 Metanol 60 ml3 Na2HPO4 2.56 g4 KH2PO4 6.66 g5 EDTA 3g6 Oxalato de amonio 0.8g7 Agua destilada 1.5L

3.2 Equipo de Laboratorio

Balanza GranatariaBalanza Analítica

3.3 Materiales de LaboratorioNUM CANTIDAD DESCRIPCIÓN

1 1 Mortero2 2 Probetas de 100 ml3 1 Matraz Volumétrico de 100 ml4 4 Varillas de vidrio5 1 Frasco de vidrio color ámbar de 1L de capacidad6 3 Frascos de vidrio color ámbar de 150 ml de capacidad7 1 Jeringa ó sistema vacutainer para toma de muestra8 1 Ligadura9 10 Portaobjetos

3.4 Preparación de los reactivos

3.4.1Colorante de Wright: Colorante de Wright: 0.1 g Metanol: 60 ml

Se tritura el colorante con el alcohol en un mortero; ésto se hace poco a poco. Esta operación debe durar 30 min. hasta completar disolución. Se deja reposar dos días y se filtra.

3.4.2 - Amortiguador ó Buffer de fosfatos

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Na2HPO4 2.56 g KH2PO4 6.66 g Agua destilada para aforar a 1 L

Mezclar las sales con poca cantidad de agua destilada, e ir agregando poco a poco más agua, hasta aforar a 1 L. Guardar en un frasco ámbar de 1 L.

3.4.3- EDTA. EDTA 3 g Agua destilada 100 ml

Mezclar el EDTA poco a poco con el agua destilada.

3.4.4 -Solución de Oxalato de amonio.

Oxalato de amonio 0.8 g Agua destilada 80 ml

Mezclar poco a poco el oxalato de amonio con el agua destilada. En ambos, se utiliza 1 gota de solución por ml de sangre.

4.PROCEDIMIENTO.

4.1 Técnica: Tinción de Wright.

4.1.1. Seleccionar un portaobjetos nuevo de 25 X 75 mm para hacer extendidos, que tenga la orilla relativamente lisa.

4.1.2 Obtener una pequeña cantidad de muestra de sangre periférica.4.1.3Colocar una pequeña gota de sangre a 2 ó 3 mm de la orilla de un portaobjetos

limpio y seco. Colocar el portaobjetos para hacer extendido en un ángulo de 30 a 45 grados con respecto al portaobjetos que tiene la muestra y hacer contacto cn la gota. Esta debe extenderse rápidamente a lo largo de la orilla del portaobjetos para hacer los extendidos. Deslizar el portaobjetos de extensión sobre la superficie dispersando la muestra de sangre. El extendido de sangre debe medir aproximadamente 30 mm de largo . El portaobjetos de extensión no se despegará hasta haber extendido toda la sangre. El grueso del extendido de sangre puede regularse modificando el ángulo del portaobjetos de extensión, variando el tamaño de la gota de sangre, la presión ó la velocidad de extensión.

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4.1.4 El extendido de sangre se seca con el aire. Una vez seco, se escribe con lápiz el nombre del paciente en una orilla del portaobjetos.

4.1.5 Fijar el extendido de sangre en alcohol metílico absoluto durante 2 a 3 minutos. El color del extendido de sangre cambiará de rojo a café claro. Esta fijación es recomendable aunque el colorante que se vaya a emplear se encuentre diluído en alcohol metílico absoluto.

4.1.6 Cubrir el portaobjetos completamente con el colorante. Después de 3 minutos añadir un volumen igual de amortiguador. Soplar ligeramente para mezclar uniformemente. Aparecerá un brillo metálico verde.

4.1.7 Después de 5 minutos enjuagar cuidadosamente con agua de la llave ó amortiguador de fosfatos, al principio con chorro delgado y suavemente y después con el chorro fuerte para eliminar todo exceso de colorante. Limpiar el reverso del portaobjetos en posición erecta. Cuando se haya secado, cubrir el portaobjetos con un cubreobjetos rectangular y fijarlo con una gota de líquido de montaje. Se puede usar sólo aceite de inmersión en una preparación temporal.

El alumno deberá ensayar tiempos hasta ajustar aquellos que más convengan para una óptima coloración. Así, con tres frotis más deberá ensayar: 2 minutos de colorante y 4 de amortiguador; 6 minutos de colorante y 6 minutos de amortiguador; 6 minutos de colorante y 11 minutos de amortiguador.

4.2 Resultados Esperados. Los resultados esperados en la tinción serán los siguientes:

Hematíes en color rosa.Núcleos de los leucocitos de azul púrpura, con la cromatina y paracromatina netamente diferenciadas.Gránulos neutrófilos del citoplasma, lila ó violetaGránulos eosinófilos, rojo tirando a naranja.Gránulos basófilos, púrpura tirando a azul oscuro.Plaquetas, color lila oscuro.Citoplasma de los linfocitos, azul claro.Citoplasma de los monocitos, ligero azul.

Actividades:-Practicar la tinción de Wright con frotis de sangre periférica.-Corregir de acuerdo al recuadro , errores encontrados en la tinción.

- Reporte de resultados .______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

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SERIE BLANCA:PRÁCTICA No. 4“EVALUACIÓN DE SANGRE PERIFÉRICA”

1.INTRODUCCIÓN.

Una vez que se ha hecho y teñido un frotis satisfactorio, éste puede ser evaluado en búsqueda de anormalidades. Cada examen debería incluir análisis con bajo poder ( 10X ), con alto poder ( 40 ó 45 X), e inmersión ( 100X ).Un error común consiste en comenzar el examen con el objetivo de inmersión.Ciertos problemas de la muestra y anormalidades morfológicas significativas pueden pasarse por alto a menos que todos los objetivos sean empleados.

La presencia de eritrocitos anormales en el frotis de sangre periférica a menudo brinda importantes claves en el diagnóstico diferencial de las anemias, y puede ser también de ayuda en el diagnóstico de otras enfermedades. La morfología de los eritrocitos puede verse alterada con cambios en el tamaño, en la forma, en las propiedades tintoriales de células individuales ó por la presencia de ciertos materiales dentro de ellas. Incluso, la presencia de solo una única célula con ciertos cambios, puede considerarse significativa; en otros, la anormalidad se considera importante sólo si un número significativo de células se ven afectadas.

Asimismo, en la serie blanca, es importante realizar el recuento diferencial, aún cuando los nuevos contadores electrónicos den un resultado anticipado del mismo, ya que sólo puede confirmarse éste por medio de dicha lectura. Del mismo modo, se buscarán anormalidades en las células blancas y éstas se reportarán, así como la presencia de células que normalmente no se ven en sangre periférica, sino únicamente en médula ósea, a menos que exista alguna patología presente.

Lo mismo aplica para las plaquetas, las células más pequeñas de sangre periférica.Se puede hacer un recuento indirecto de las mismas cuando así se requiera, y buscar anormalidades en su forma y en su tamaño. Algunas anormalidades pueden requerir que se

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indique le severidad del cambio. Todas estas determinaciones pueden diferir de observador a observador, conduciendo a una variación considerable en el análisis del mismo frotis de sangre.

Los laboratorios actualmente tratan de controlar estas inconsistencias desarrollando criterios para estandarizar la evaluación de la morfología. Así, muchos laboratorios usan un método semicuantitativo de evaluación, consistente en los términos: leve, moderado ó severo. O bien un sistema " por cruces" :1+, 2+, 3+, etc.

Tan importante como el que haya consistencia entre los observadores, es importante también la selección de una área apropiada del frotis para la evaluación. En un frotis en " cuña ", en el área "aplumada" ó terminal del frotis, demuestran cambios que pueden considerarse patológicos, p.e. macrocitosis, esferocitosis, células en "diana ", etc. En el área gruesa del frotis, las células pueden interpretarse como microcíticas en forma equivocada, y la morfología puede ser difícil de evaluar. También tenderán a formar apilamientos ( rouleaux ) en esta área. Por ello, el área ideal para examinar un frotis, es aquella que contiene aproximadamente 200-250 células por campo a seco fuerte. Esto corresponde a una área en donde los eritrocitos se tocan pero no se enciman. En el verdadero Roleaux, los márgenes individuales de las células son difíciles de distinguir y dan una imagen como de pilas de monedas que han sido empujadas y tiradas, imagen que persiste aún en las áreas más delgadas del frotis, aunque ahí exista menor cantidad de células. La intensidad de la formación de "rouleaux" depende de la concentración de las proteínas plasmáticas, especialmente el fibrinógeno. En enfermedades inflamatorias, los niveles de fibrinógeno pueden aumentar. También la elevación de gama globulinas, como se observa en el Mieloma múltiple, provoca formación de "rouleaux".


2.1 Análisis con bajo poder. Este objetivo debe utilizarse para evaluar la calidad de la tinción.Las células blancas deberían verse fácilmente con este aumento.Si no es asi, el frotis debe ser nuevamente teñido.El borde aplumado debe ser examinado para buscar cúmulos de plaquetas ó filamentos de fibrina, indicando esto que debe realizarse una nueva toma, ya que esta evidencia de coagulación podría interferir con muchas pruebas hematológicas. Los extremos laterales y aplumado deben evaluarse en búsqueda de un número desproporcionado de leucocitos.,Las células más grandes ( por ejemplo los neutrófilos y los monocitos, tienden a acumularse más en estos lugares y si el frotis está mal hecho, se acumularán más en estas áreas, las cuales están fuera del área ideal de observación.Si la mayoría de las células se encuentran en el borde aplumado, el frotis deberá descartarse y prepararse uno nuevo.

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2.2 Análisis con alto poder. Con este objetivo existen dos problemas por resolver. En primer lugar, se debe seleccionar el área apropiada para iniciar la cuenta diferencial. Esta debe ser donde los eritrocitos se tocan pero no se sobreponen, y puede ser un área en donde se encuentren 200 eritrocitos por campo. Si la cuenta de leucocitos es muy baja, puede ser necesario incluir áreas fuera del área ideal con el fín de encontrar suficientes células blancas.El segundo problema por resolver con este objetivo, será estimar la cuenta total de leucocitos. Estando en el área ideal, contar el número de células blancas observadas en cinco a diez campos y determinar el promedio. El promedio, multiplicado por un factor de corrección que a menudo está entre 2000 y 2,500 ( 2 a 2.5 en miles) representará la cuenta total del leucocitos.

2.3 Análisis con objetivo de inmersión. Con este objetivo, la cuenta diferencial de leucocitos debe estimarse, la cuenta de plaquetas, también debe poder estimarse y los tres tipos de células ( leucocitos , eritrocitos y plaquetas ) deben observarse en búsqueda de anormalidades morfológicas.La cuenta diferencial consiste en identificar cuando menos 100 leucocitos consecutivos, y reportar estos valores como un porcentaje. Es importante incluir las células de los márgenes, así como las del cuerpo del frotis. Así, para lograr esto, debe seguirse el patrón de observación de la imagen siguiente:

El número de plaquetas también puede ser estimado con este objetivo. Empleando la

misma área que para la cuenta diferencial, es decir, donde los eritrocitos se tocan pero no se sobreponen, deben contarse las plaquetas en al menos diez campos. Este número será convertido en no. de plaquetas/μl de sangre, como se hizo con la cuenta de leucocitos. Deberá calcularse el número promedio de plaquetas por campo, y dicho número se multiplicará por un factor determinado por el propio laboratorio en base a la combinación de los objetivos y oculares empleados en sus microscopios. Por ejemplo, cada plaqueta, observada representa 15,000 plaquetas ó 20,000 / μl. Si se llegaron a observar un promedio de 12 plaquetas por campo, entonces, la cuenta total de plaquetas sería de 180,000/ μl en el primer caso, ó 240,000 / μl en el segundo caso.

La última actividad a realizar con este objetivo, sería evaluar la morfología celular. Esto puede irse haciendo a medida que se va realizando la cuenta diferencial. Cualquier anormalidad ó inclusión en células rojas y blancas, deberá reportarse. También es importante

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evaluar la forma y el tamaño de los eritrocitos en esta misma área. Las células suelen distorsionarse en áreas muy delgadas, ó demasiado gruesas. Las plaquetas también deberán evaluarse en su tamaño y forma. Más de una forma inusualmente grande de plaquetas, en cada cinco campos deberán ser reportadas .

3. LISTA DE REQUERIMIENTOS.

3.1 Equipo de laboratorio.

Microscopio de Luz


CANTIDAD DESCRIPCIÓN1 Frotis de sangre periférica teñido con colorante de Wright

4. PROCEDIMIENTO.

4.1 Análisis con bajo poder. 4.1.1Evaluar la calidad de la tinción. 4.1.2Examen en el borde aplumado del frotis en búsqueda de cúmulos de plaquetas ó

filamentos de fibrina.4.1.3Evaluar extremos laterales y aplumado en búsqueda de leucocitos desproporcionados.

4.2 Análisis con alto poder. 4.2.1Seleccionar el área apropiada para iniciar la cuenta diferencial.

4.2.3Estimar la cuenta total de leucocitos.

4.3Análisis con objetivo de inmersión.4.3.1Realizar el recuento diferencial, contando cien células en total, y diferenciando la línea celular a la que pertenecen.

4.3.2Realizar el recuento indirecto de plaquetas. 4.3.3Buscar anormalidades morfológicas tanto de los leucocitos como de los eritrocitos y de las plaquetas.

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ACTIVIDADES:

- Reporte de resultados

1. Análisis con bajo poder.

1.1 Calidad de la tinción:___________________________________________________________________________________________________________________

1.2 Examen del borde aplumado del frotis _____________________________________________________________________________________________________

1.3 Examen de los extremos laterales y aplumado del frotis._________________________________________________________________________________________

2. Análisis con alto poder.

2.1 Seleccionar el área apropiada para iniciar la cuenta diferencial.___________________________________________________________________________________

2.2 Estimar la cuenta total de leucocitos.___________________________________________________________________________________________________________

3. Análisis con objetivo de inmersión.

3.1 Recuento diferencial

Metamielocitos _____Bandas _____Segmentados _____Linfocitos _____Monocitos _____Eosinófilos _____Basófilos _____ 100

3.2 Busqueda de anormalidades morfológicas de:

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leucocitos ___________________________________________________________

SERIE BLANCA:PRÁCTICA No. 5“FORMULA LEUCOCITARIA Ó RECUENTO DIFERENCIAL”

1.INTRODUCCIÓN.

La fórmula leucocitaria nos da información sobre el porcentaje de leucocitos de cada tipo, en base a su morfología y características tintoriales.A partir de estos valores y de la cuenta total de glóbulos blancos obtenidos en microlitros, podremos calcular los valores absolutos de cada línea celular en sangre periférica, y así compararlos con los valores normales de cada una de ellas.

2.PRINCIPIO Y METODOLOGÍA .Se realizará el recuento diferencial, de acuerdo como se indica en el procedimiento, y se comparará contra los siguientes valores normales .Se anexan también, además de los valores normales en %, los valores normales absolutos, que indican el número de cada estirpe celular expresado por microlitro . ( para obtenerlos, ver práctica no.7 )

-VALORES NORMALES.

TIPO CELULAR PORCENTAJE ( % ) LÍMITES ABSOLUTOSMetamielocitos 0-2 <10-500Bandas 0-11 100-800Segmentados 40-74 2000-6000Linfocitos 12-46 1000-4200Monocitos 1-13 100-800Eosinófilos 0-7 <100-200Basófilos 0-3 <10-20

3. LISTA DE REQUERIMIENTOS3.1 Equipo de Laboratorio

1. Microscopio de Luz


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4. PROCEDIMIENTO. Con el objetivo de inmersión, identificar cuando menos 100 leucocitos consecutivos en un frotis teñido con Wright, y reportar estos valores en por ciento.Se aconseja identificar el área ideal para la observación: el área del cuerpo del frotis, donde las células se tocan pero no se sobreponen. El recorrido debe hacerse de manera vertical, para no omitir células de los márgenes y para no salirse del área ideal para el recuento.

ACTIVIDADES. Investigar en qué casos pueden encontrarse cada una de las líneas celulares reportadas en la cuenta diferencial, con valores por arriba y por debajo de lo normal.

REPORTE DE RESULTADOS:

TIPO CELULAR PORCENTAJE ( % ) VALORES ABSOLUTOS

MetamielocitosBandasSegmentadosLinfocitosMonocitosEosinófilosBasófilos

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SERIE BLANCA:PRÁCTICA No. 6“RECUENTO DE GLÓBULOS BLANCOS”

1.INTRODUCCIÓN.

La evaluación de los glóbulos blancos considera el conteo total de leucocitos y la cuenta diferencial de cada uno de ellos. La medición del número total de leucocitos sirve en ocasiones de guía para evaluar la severidad de una enfermedad, siempre que se le asocie a la clínica que ésta presenta.Un aumento de los glóbulos blancos por encima de 10,000 /μl, se llama leucocitosis, que con frecuencia es acompañada por incremento de los granulocitos neutrófilos, aunque no es la única causa. Es menos frecuente que aumenten todas las líneas celulares, lo que podría deberse en realidad a una hemoconcentración. Una disminución en el recuento de glóbulos blancos por debajo de los valores normales establecidos, se conoce como leucopenia.

2.PRINCIPIO Y METODOLOGÍA .

Las pipetas empleadas para el recuento manual de glóbulos blancos, son similares a las que se usan para el recuento de glóbulos rojos, pero presentan en su capilar superior, la grabación 11, y en la inferior, la grabación 0.5, lo cual indica una dilución distinta, que es en este caso de 1:20. Se emplea la misma cámara cuentaglóbulos llamada cámara de Neubauer, nada más que el conteo y los cálculos se realizan de diferente manera.

La cámara cuentaglóbulos presenta un retículo con una superfcie total de 9mm², de 1 mm² cada uno. Los cuadrados de las cuatro esquinas están subdivididos en 16 cuadrados, y el cuadrado central, en 25.

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3.LISTA DE REQUERIMIENTOS.

3.1 Reactivos

NUM NOMBRE DEL REACTIVO CONCENTRACIÓN CANTIDAD1 Acido Acético 2% 50 ML

3.2 Equipo de Laboratorio1. Microscopio de Luz

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Cuadrículas ( L ) para recuentode glóbulos blancos


3.3 Material de Laboratorio

CANTIDAD DESCRIPCIÓN1 Cámara de Neubauer1 Pipeta para recuento de glóbulos blancos1 Tubo de ensaye de 13 X 1001 Boquilla

4.2 Preparación del reactivo

4.2.1Líquido de Turk ó hemolizante:

-solución de ácido acético al 2% - Agregar 1 gota de azul de metileno líquido

5 PROCEDIMIENTO. 5.1 Técnica.

4.1.1 Pipetear sangre hasta la marca de 0.5 4.1.2 Limpiar cuidadosamente con una gasa o papel suave el extremo de la pipeta y completar con el líquido de dilución hasta la marca de 11.4.1.3 Mezclar en el agitador por 2 minutos.4.1.4 Cargar la cámara con la dilución bien homogeneizada

4.1.5 Dejar reposar 4.1.6 Contar los leucocitos contenidos en los cuatro retículos de las esquinas.

Estos se encuentran divididos en 16 cuadros cada uno.4.1.7 Realizar cálculos como indica la fórmula:

N______x______20______x______10 = N X 50 4

En donde:

N = suma de los leucocitos encontrados en los 4 retículos20 = Título de la dilución10 = Corrección de la cámara para llevar a 1 mm³ 4 = número de retículos.

4.2 Valores Normales:

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Adultos: 5,000 - 10,000 / mm³ Niños hasta 5 años: 6,000 - 15,000 / mm³ Recién nacidos: 10,000 - 15,000/ mm³

4.3 Causas de error

4.3.1 Recolección de la sangre en condiciones de cianosis. Si se practica la punción venosa, evitar la compresión exagerada y prolongada.

4.3.2 Pipetas mal calibradas4.3.3 Dilución agitada insuficientemente4.3.4 Carga de la cámara con la primera gota de la pipeta4.3.5 Distribución desigual de la cámara4.3.6 Incorrecto ajuste del cubreobjetos4.3.7 Cuenta defectuosa de los elementos celulares4.3.8 Confundir a los eritroblastos con leucocitos. Para evitar dicho error, se debe

realizar una corrección con la siguiente fórmula:

Y = %_eritroblastos_contados X No. De leucocitos contados 100 + % de eritroblastos contados

Numero real de leucocitos= No. De leucocitos contados – Y Ejemplo: No. De leucocitos= 15,000 % de eritroblastos= 35

Y = 35 _ x 15,000 100 + 35

No. Real de leucocitos= 15,000 – 3,750No. Real de leucocitos= 11,250

ACTIVIDADES.

Realizar un esquema de la pipeta empleada para el conteo de Glóbulos Blancos.

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Enlistar causas de leucocitosis así como de leucopenia.

- Reporte de resultados .____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

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SERIE BLANCA:PRÁCTICA No. 7“EVALUACIÓN DE FROTIS DE S.P. CON LEUCOCITOSIS Y

DESVIACIÓN A LA IZQUIERDA”

1.INTRODUCCIÓN.

Un cambio en sangre periférica que no está asociado con ningún cambio morfológico celular pero que está asociado con enfermedad, es un incremento en las bandas. Esto puede ser referido como una " desviación hacia la izquierda ", particularmente si formas aún más jóvenes son encontradas en la circulación. Normalmente la cuenta de neutrófilos también se encuentra aumentada, ya que si no es así, ésto puede indicar un peor pronóstico para el paciente, por lo que algunos autores se refieren a la primera circunstancia como un " cambio regenerativo hacia la izquierda ", y a la segunda , con cuenta normal ó baja de leucocitos, como un " cambio degenerativo hacia la izquierda ". Ocasionalmente, el aumento en la cuenta total de blancos y la aparición de formas neutrofílicas jóvenes, es tan marcada, que pareciera la sangre periférica que se analiza en pacientes con leucemia mielocítica crónica. Este exceso de salida de estas formas a la circulación, de hecho sí es debido a algún otro proceso patológico y debe ser distinguido de leucemia. El término " Reacción Leucemoide " es el indicado en esta situación.

En general, una cuenta de glóbulos blancos elevada, se conoce como “leucocitosis”.Aunque más frecuentemente se debe a un aumento en los neutrófilos ( neutrofilia ), no siempre es así: puede estar elevada a causa de un incremento en los linfocitos ( linfocitosis), en los eosinófilos ( eosinofilia ), y casi siempre se debe a alguna alteración .


Se deberán buscar tanto en el frotis sanguíneo como por medio del recuento de glóbulos blancos en el contador electrónico ó por el método manual, el número aproximado de leucocitos en una muestra que previamente haya sido analizada y de la cual se haya reportado leucocitosis y desviación a la izquierda. El hallazgo de un número aumentado de leucocitos y el de formas jóvenes que incluyan principalmente formas en banda y metamielocitos, confirmarán dicho diagnóstico .

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4.PROCEDIMIENTO.

Observar imágenes en laminillas y/ó diapositivas correspondientes con estas alteraciones.

ACTIVIDADES.


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SERIE BLANCA:PRÁCTICA No. 8“EVALUACIÓN DE FROTIS DE S.P. CON EOSINOFILIA”

1.INTRODUCCIÓN. Como ya se ha mencionado, la elevación de los glóbulos blancos a partir de neutrófilos, es la más común. Sin embargo, puede haber un incremento en los eosinófilos que lleven a una leucocitosis. Aun cuando la cuenta de glóbulos blancos no estuviera elevada, se podría decir que puede haber eosinofilia, y ésto se determinará en base al cálculo de los valores absolutos. Si los valores absolutos de los eosinófilos se encuentran por arriba de lo normal, se podría decir que hay “eosinofilia”. Son dos las causas más comunes de esta condición: las enfermedades y reacciones alérgicas, y ciertas parasitosis, sin embargo, no son las únicas.


Se analizarán muestras en las que exista el hallazgo de eosinofilia, haciéndose el recuento diferencial así como la determinación de los valores absolutos de los eosinófilos.


3.1 Equipo de LaboratorioMicroscopio de Luz



4. PROCEDIMIENTO.


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ACTIVIDADES.

Realizar una lista de enfermedades en las que se encuentren elevados los eosinófilos.

- Reporte de resultados .___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

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SERIE BLANCA:PRÁCTICA No. 9“EVALUACIÓN DE FROTIS DE S.P. CON PICNOSIS Y

MICROORGANISMOS INTRACELULARES”

1.INTRODUCCIÓN.

Picnosis. El núcleo del neutrófilo normalmente es algo picnótico, pero pueden distinguirse la paracromatina y la cromatina.Las células muertas ó las que están a punto de morir, sin embargo, tendrán un núcleo obscuro y redondo sin evidencia de estructura nuclear. Los lóbulos pueden estar separados ó puede haber un único y redondo núcleo en degeneración. Las células pueden distinguirse como neutrófilas porque el citoplasma retiene el tiente rosa habitual. Estas células también pueden ser identificadas como necrobióticas. En una muestra fresca, estas células son evidencia de que el organismo está " perdiendo la batalla " en un paciente con infección; también pueden aparecer en pacientes que reciben quimioterapia. Estos cambios también pueden encontrarse como resultado de una prolongada exposición al EDTA.

Organismos intracelulares. Esta es un tipo de inclusión muy rara de encontrar e indica la presencia del organismo infectante, ya que una sola célula que presente un microorganismo es significativo. Puede ser o bien una bacteria, ó bien una levadura, y puede observarse intra ó extracelularmente, e indica una septicemia abrumadora, de mal pronóstico aunque podría ser un artificio originado por la toma de la muestra a través de algún catéter contaminado.

2.PRINCIPIO Y METODOLOGÍA .Se analizarán muestras en las que exista el hallazgo de picnosis y microorganismos

intracelulares.




CANTIDAD DESCRIPCIÓN1 Frotis de sangre periférica teñido con Wright

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4.PROCEDIMIENTO.


ACTIVIDADES.


Serie Blanca 33


SERIE BLANCA:PRÁCTICA No. 10“EVALUACIÓN DE FROTIS DE S.P. CON CAMBIOS

MORFOLÓGICO-BENIGNOS: GRANULACIONES TÓXICAS, VACUOLIZACIONES, CUERPOS DE DOHLE Y

AGRANULACIÓN CITOPLÁSMICA”

1.INTRODUCCIÓN.

Granulaciones Tóxicas. Este cambio representa la presencia de gránulos primarios no específicos, los cuales se tiñen de color azul-púrpura con la tinción de Wright como sucede con los del promielocito. Pueden deberse al menor número de mitosis realizadas durante la maduración celular. Algunas células pueden contener sólo unos pocos gránulos, otras, pueden contener muchos. Las granulaciones tóxicas pueden ser vistas en una variedad de desórdenes inflamatorios ó tóxicos, como por ejemplo, en infección bacteriana, ataque al corazón, insuficiencia renal, gota, artritis reumatoide, así como en respuesta a una neoplasia. Una granulación aumentada también puede ser vista cuando el frotis es teñido por mucho tiempo. Si estos gránulos fueran realmente debidos a un proceso patológico, no serían vistos en todas las células, y además aquellas que en verdad presenten granulaciones tóxicas, lo harán en variedad de grados. Si todas las células se ven afectadas y en el mismo grado de intensidad, ésto debe considerarse como un artificio del frotis.

Vacuolización. Ya que la principal función de los neutrófilos es la fagocitosis, si existe actividad fagocítica aumentada, pueden haber numerosas vacuolas dentro del citoplasma como una evidencia de ésto. Estas son identificadas morfológicamente como " hoyos " dentro del citoplasma. Sin embargo, ésto también puede ser el resultado de una exposición prolongada al EDTA. Al igual que en las granulaciones tóxicas, si todas las células se ven afectadas en el mismo grado, debe sospecharse un artificio del frotis. La vacuolización puede encontrarse frecuentemente cuando el paciente tiene una infección bacteriana, especialmente con las bacterias piógenas . También es frecuente observarlas junto con las granulaciones tóxicas.

Cuerpos de Döhle. Estas inclusiones son a menudo encontradas junto con las granulaciones tóxicas y/ó vacuolización, aunque no siempre. A veces pueden ser la única evidencia de un proceso tóxico ó reactivo en un paciente. Los cuerpos de Döhle son pedazos de RNA residual ( retículo endoplásmico rugoso ) en el citoplasma. Tienen el característico color azul tenue del RNA y se les encuentra frecuentemente cerca de la membrana citoplasmática de la célula.

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En algunas células, pueden ser muy prominentes, y en otras, pequeños y muy tenues, y pueden pasarse por alto si el observador no tiene suficiente cuidado en la observación. En ocasiones pueden observarse los tres tipos de cambios tóxicos en la misma célula.

Agranulación citoplásmica. En ocasiones, la única evidencia de neutrófilos activados es una área clara agranular en la periferia de la célula, que indica la formación de un pseudópodo. Estas células también se distinguen por un borde citoplásmico irregular en contraste con el borde redondo usual del neutrófilo. También ésto puede ser visto junto con las granulaciones tóxicas, la vacuolización, y los cuerpos de Döhle, aunque cada uno de ellos puede verse individualmente, y a menudo estos cambios se asocian con aumento en las formas en banda y cuenta elevada de leucocitos, aunque no siempre. 2.PRINCIPIO Y METODOLOGÍA . Se analizarán muestras con alteraciones en las que exista el hallazgo de varios cambios morfológico-benignos.




CANTIDAD DESCRIPCIÓN1 Frois de sangre periférica teñido con Wright

4. PROCEDIMIENTO. Observar imágenes en laminillas y/ó diapositivas correspondientes con estas

alteraciones.

ACTIVIDADES.


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SERIE BLANCA:PRÁCTICA No. 11“EVALUACIÓN DE FROTIS DE S.P. CON LINFOCITOS

ATÍPICOS”

1.INTRODUCCIÓN.

El término " atípico ", ha sido utilizado para describir cualquier forma que varíe del criterio morfológico empleado para un linfocito normal. Debido a que varias formas son el resultado de infección viral, el término " reactivo" y el más específico de " virocito " han sido asociados con esta respuesta. Puede aplicarse el término " linfocitos variantes " ya que no todos los cambios son " reactivos " ó asociados con infección viral. La mayoría de las formas variantes están asociadas con infecciones virales, especialmente con el grupo herpes virus ( por ejemplo, el virus Epstein-Barr-la causa de mononucleosis infecciosa, citomegalovirus ó herpes simplex tipos 1 y 2 ), y virus de hepatitis B y C. También pueden encontrarse en casos de toxoplasmosis, sífilis ó tuberculosis. Debido a que ocasionalmente puede encontrarse algún linfocito atípico y considerarse normal, algunos laboratorios los reportan como un porcentaje separado de leucocitos, por ejemplo, un porcentaje de linfocitos normales y un porcentaje de formas variantes. Otros pueden usar un método semicuantitativo, como " 1+, 2+, 3+ " ó " leve, marcado ó severo ", para indicar su frecuencia relativa. Siempre que más del 10% sean clasificados como variantes, el hallazgo es considerado clínicamente significativo y debe ser reportado. Otra de las formas se asemejan muy a menudo a un monocito. Son grandes, con citoplasma abundante y a menudo vacuolado, el cual puede ser más gris, comparando con el usual color azul cielo del linfocito normal. El núcleo puede ser redondo, doblado, indentado ó lobulado y tiene una apariencia más abierta y color más tenue que lo usual. No presenta nucleolos. A veces, el citoplasma es predominantemente azul cielo, y contiene áreas de un azul más intenso, que tienden a irradiar del núcleo ó a concentrarse en la periferia de la célula, especialmente en donde hace contacto con las células que la rodean. A esta característica se le conoce como basofilia radial ó basofilia periférica, respectivamente. Estas células, como puede verse, pueden ser especialmente difíciles de distinguir de los monocitos. Algunos rasgos útiles para distinguirlos es que los monocitos son células que empujan a otras y tienden a indentarlas cuando están muy próximas a ellas. En cambio, los linfocitos más fácilmente sufren esa indentación . El núcleo del monocito, típicamente es más doblado ó lobulado, y el patrón cromatínico es más delicado y fino. Por otro lado, si se está en duda, puede seguirse una regla general que menciona que si hay muchos linfocitos en el frotis, la célula que se sospecha más seguramente es un linfocito también. En un momento dado, hay quien puede confundir estas células con formas malignas ó blastos. Debe recordarse entonces que en casos de leucemia, las células tienden a ser muy similares morfológicamente, dando una apariencia monótona, homogénea, especialmente al observarse con pocos aumentos.En contraste, las enfermedades asociadas con formas variantes, demostrarán una apariencia muy heterogénea.

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2.PRINCIPIO Y METODOLOGÍA .Se analizarán muestras en las que exista el hallazgo de linfocitos atípicos.






alteraciones.

ACTIVIDADES.


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SERIE BLANCA:PRÁCTICA No. 12“EVALUACIÓN DE FROTIS DE S.P. CON LINFOCITOS

PLASMOCITOIDES”

1.INTRODUCCIÓN.

Una de las formas en que se presenta el linfocito atípico, comparte rasgos con la célula plasmática, la cual no es encontrada normalmente en sangre periférica. Ambas tienen un citoplasma azul muy intenso y pueden medir de 15-20 µ .Los dos pueden distinguirse por su patrón de cromatina nuclear. En el linfocito " plasmacitoide ", el núcleo tiene una apariencia abierta y laxa y tiene un color rojo-púrpura más tenue. Pueden verse también nucleolos. Esto es en contraste con la apariencia amontonada, abultada del núcleo de la célula plasmática y su localización excéntrica dentro de la célula. No hay una área clara perinuclear en el linfocito plasmacitoide como la hay en la célula plasmática. Los linfocitos plasmocitoides son comúnes de encontrar en ciertas enfermedades virales como el dengue y las enfermedades exantemáticas de la infancia.

2.PRINCIPIO Y METODOLOGÍA .Se analizarán muestras que tengan el hallazgo de linfocitos plasmocitoides.






alteraciones.

ACTIVIDADES. - Reporte de resultados .____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

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SERIE BLANCA:PRÁCTICA No. 13“EVALUACIÓN DE FROTIS DE S.P. CON

HIPERSEGMENTACIÓN NUCLEAR EN NEUTRÓFILOS”

1.INTRODUCCIÓN.

Los núcleos de los neutrófilos normalmente tienen de dos a cinco lóbulos nucleares.La mayoría tendrán dos ó tres. Si existe un aumento en las células con cuatro ó cinco lóbulos, el observador debería buscar cuidadosamente células con más de cinco lóbulos.La presencia de una sola célula con seis distintos lóbulos nucleares, puede tener significancia clínica. Por otro lado, si más del 5% de los neutrófilos tienen cinco lóbulos ó si la mayoría tienen cuatro, ésto también puede ser un hallazgo importante. Los neutrófilos hipersegmentados son la indicación más temprana en sangre periférica de anemia megaloblástica ( por deficiencia de vitamina B12 ó de folatos ), y es importante que se reporten. Cuando menos deben identificarse seis lóbulos distintos para que la célula sea identificada como hipersegmentada.En casos severos, pueden encontrarse células con nueve lóbulos ó aún más.

2.PRINCIPIO Y METODOLOGÍA . Se analizarán muestras que tengan el hallazgo de hipersegmentación nuclear en neutrófilos



3.2 Materiales de LaboratorioCANTIDAD DESCRIPCIÓN

1 Frotis de sangre periférica teñido con Wright


alteraciones.

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ACTIVIDADES.


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SERIE BLANCA:PRÁCTICA No. 14“ESTUDIO DE MÉDULA ÓSEA”

1.INTRODUCCIÓN.

El estudio medular es un procedimiento especializado de gran utilidad clínica. Puede ser realizado tanto por aspirado (mielograma) como por biopsia percutánea según las características clínicas del paciente y el diagnóstico presuntivo. El estudio medular permite identificar las diferentes series hematopoyéticas, estudiar el estroma medular y obtener material para estudios bacteriológicos, micológicos, de citometría de flujo y genéticos entre otros. La decisión de solicitar un estudio de médula ósea debe basarse en la hipótesis de que los hallazgos que se esperan del estudio justifiquen someter al paciente al riesgo y la molestia, a pesar de éstos ser mínimos. Los hallazgos medulares esperados (o inesperados) en parte dependen del cuadro clínico, de los hallazgos en sangre periférica y de la información que se requiere en algunos casos específicos. En la actualidad el estudio medular hace parte integral del estudio sistematizado de un importante número de enfermedades hematológicas, infiltrativas y neoplásicas que están bien protocolizadas. Debido a que el aspirado de médula ósea está virtualmente libre de riesgo (excepto si se hace en el esternón) y que la biopsia medular es un procedimiento invasivo mínimo, el estudio se recomienda en todos los casos en donde se pueda justificar un probable beneficio con la información obtenida.

Estudio medular .El tipo de procedimiento utilizado para el estudio de la médula ósea (aspirado, biopsia

o ambos), depende de la sospecha clínica. En términos generales se plantean cuatro posibilidades: Compromiso de precursores hematopoyéticos con alteraciones citológicas, como en las anemias y leucemias. En estos casos, está mejor indicado el aspirado medular o mielograma. Compromiso de las estructuras de soporte del tejido hematopoyético o del mismo hueso como en la mielofibrosis, metástasis o granulomas, o que haya disminución del tejido hematopoyético y se requiera determinar con certeza la celularidad, como en la anemia aplástica. En estos casos está mejor indicada la biopsia medular. Fiebre de origen desconocido, en donde se debe solicitar un estudio de aspirado y biopsia. Sospecha clínica o se desee estudiar una enfermedad infecciosa por bacterias, micobacterias y hongos. En estos casos, se debe solicitar estudio de cultivos de material medular obtenido por aspirado. Algunos pacientes con coagulopatía (especialmente los hemofílicos) requieren terapias de reemplazo para hacer el procedimiento cuando está indicado hacer el estudio.

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Como la médula ósea es un tejido blando, se pueden obtener muestras introduciendo una aguja adecuada en la médula y aspirando con jeringa. Los sitios donde se puede obtener médula ósea en los adultos y niños mayores de un años son: el esternón, las espinas ilíacas superiores anterior o posterior; la cresta ilíaca y las apófisis espinosas de las vértebras. La punción esternal, hasta donde sea posible, no se debe hacer de rutina, debido al riesgo de lesión cardiovascular. En niños menores de un año se puede tomar material medular por aspirado en el tubérculo tibial. A partir del primer año de vida se toma similar a la del adulto.

Procedimientos especiales en el material medular Las muestras de médula ósea son coloreadas con Wright cuando son obtenidas por aspiración y con hematoxilina-eosina, cuando es por biopsia; de acuerdo con los resultados obtenidos el hematólogo apoyado en los hallazgos de sangre periférica y en el examen físico, puede recurrir que tipo de procedimientos especiales están indicados para confirmar el diagnóstico.


2.1Principio.Los extendidos de médula ósea se colorean con Wright siguiendo la técnica usual.

Inicialmente son observados macroscópicamente para determinar la presencia de partículas. Luego el extendido es examinado en bajo poder (10X) para apreciar la relativa cantidad de grasa y de contenido celular hematopoyético de acuerdo al cual la médula se puede clasificar como: hipocelular, normocelular e hipercelular. Después de la observación en 10X el extendido se examina con objetivo de 100X localizando los campos donde se hallan las partículas y se procede al análisis de las células sanguíneas que habitan en la médula ósea. Se establece la relación del número de las células blancas frente al número de células rojas nucleadas. Esta proporción se denomina “relación mielo - eritroide” (M:E). Para estimar esta relación es necesario la identificación y tabulación de 300 - 500 células nucleadas. Se observa aumento en la relación mielo-eritroide, cuando se aumentan los precursores mieloides como sucede en los procesos inflamatorios agudos, leucemias o cuando se disminuyen los precursores eritroides como en la insuficiencia renal crónica. Una disminución en la relación mielo-eritroide se presenta cuando se disminuyen los precursores mieloides como en la anemia aplástica o cuando aumentan los precursores eritroides como en las anemias hemolíticas y megaloblásticas. En forma simultánea se realiza una valoración cuidadosa de la morfología de las diferentes líneas celulares: serie eritroide, granulocítica, linfoide, monocítica, megacariocítica, células plasmáticas y otras células.

Serie Blanca 42


2.2 Metodología

Estudio de Médula Osea El estudio de médula ósea, comprende los siguientes aspectos:

2.2.1 Seco Débil ó 10X. Celularidad Global, Ausencia ó Aumento del No. De Células grasas y/ó

megacariocitos. Celuraridad Hematopoyética

-Normal -Aumentada: hiperceluraridad -Disminuída: hipoceluraridad ó aplasia.

2.2.2 Examen a Gran Aumento ó 100X.

2.2.2.1 Recuento Global: Serie Granulocítica con predominio:mielocitos y metamielocitos : 60%.

Serie Eritrocítica: Predominio: Policromatófilos y Ortocromáticos. 20%. Serie linfoide, Monocítica y Megacariocítica: 20%.

2.2.2.2 Características Morfológicas: -Aumento de Mieloblastos -Aumento de Linfocitos ó células plasmáticas -Basofilia, Eosinofilia, aumento de células Cebadas ó de Macrófagos. -Megacariocitos: hipo ó hipersegmentación nuclear; alteraciones de la madurez

citoplásmica, megacariocitos de tamaño muy pequeño. -Serie Eritoide con cambios Megaloblásticos ó diseritropoyesis. -Presencia de células no hematopoyéticas: células metastásicas.

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2.2.3 Reporte del Mielograma y Valores Normales.

LÍMITES DE NORMALIDAD (%)

Serie Blanca 50.4-70.3Mieloblastos 0.2-1.5Promielocitos 2.1-4.1Mielocitos 8.4-17.0Metamielocitos 10.0- 26.8Bandas + segmentados 15.7 -31

Serie RojaProeritroblastos 0.2-1.3Eritroblastos Basófilos 0.5-2.4Eritroblastos Policromáticos 17.9-29.2Eritroblastos Ortocromáticos 0.4-4.6

Linfocitos 11.1-23.1

Basófilos y Células Cebadas 0-0.2

Megacariocitos 0-0.4

Monocitos + macrófagos 0-0.8

Plasmocitos 0.4-3,9

Relación Mieloide-Eritroide 1.5-3.3


3.1 Equipo de Laboratorio1 Microscopio de Luz

3.2 Material de LaboratorioCANTIDAD DESCRIPCIÓN

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1 Laminillas y/ó diapositivas con muestra de aspirado de médula ósea

4.PROCEDIMIENTO.Observar las laminillas ó diapositivas y reportar el mielograma de acuerdo con el formato que aparece en el reporte de resultados.

ACTIVIDADES. -Observación de laminillas y/ó diapositivas con imágenes de aspirados de médula ósea normal .-Reportar un mielograma normal.

R E P O RT E D E M I E L O G R A M ASerie BlancaMieloblastosPromielocitosMielocitosMetamielocitosBandas + segmentados

Serie RojaProeritroblastosEritroblastos BasófilosEritroblastos PolicromáticosEritroblastos Ortocromáticos

Linfocitos

Basófilos y Células Cebadas

Megacariocitos

Monocitos + macrófagos

Plasmocitos

Relación Mieloide-Eritroide

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SERIE BLANCA:PRÁCTICA No. 15“ INTRODUCCIÓN A LAS LEUCEMIAS Y EVALUACIÓN DE

FROTIS DE S.P. CON LEUCEMIA GRANULOCÍTICA CRÓNICA”

1.INTRODUCCIÓN.

Las leucemias mieloides son neoplasias malignas del Sistema Hematopoyético.

Como las neoplasias en general, las células leucémicas:

Proliferan de manera independiente de sus factores de crecimiento ( producidos por las células estromales de su microambiente)

Tampoco responden a factores que las inhiben pues están protegidas de la apoptosis. Esta autonomía en la reproducción celular se debe a mutaciones en los genes que

codifican para:- factores de crecimiento- factores de transcripción- proteínas fosforiladoras( que meten a la célula en ciclo celular)- factores inhibidores de la apoptosis- factores inhibidores del ciclo celular

El término LEUCEMIA significa “ aumento de leucocitos neoplásicos en la sangre”, por lo cual es un término inapropiado.Las LEUCEMIAS son neoplasias clonales que provienen de una sola célula maligna original la cual tiene una gran capacidad proliferativa, como la CTH ó las CFC:Las leucemias pueden ser agudas ó crónicas

LEUCEMIAS CRÓNICAS

En las Leucemias Crónicas, las células neoplásicas maduran terminalmente No producen la muerte en las etapas iniciales El número de células maduras es normal ó aumentadoSegún el predominio de la línea celular hacia la cual maduran pueden distinguirse:

Leucemia Granulocítica CrónicaLeucemia Mielomonocítica CrónicaPolicitemia Vera

Serie Blanca 46

CTH CTHCFC GEMM


Trombocitemia esencialMielofibrosis crónica idiopática con metaplasia mieloide.

LEUCEMIA GRANULOCÍTICA CRÓNICA

La mutación original se produce en una CTH, que madura terminalmente hacia todas las líneas celulares, pero lo hace de predominantemente hacia la línea granulocítica, y frecuentemente hacia la megacariocítica.


2.1 Datos Característicos en el Diagnóstico:

Leucocitosis generalmente por arriba de 50,000leucocitos totales, y en más del 70% de los casos, por arriba de 100,000.

Presencia de granulocitos en todas las etapas de maduración.

Eosinofilia y sobre todo basofilia absolutas

Presencia de eritroblastos

Anemia moderada ó ausencia de ésta

Plaquetas normales ó aumentadas

Fosfatasa alcalina en leucocitos disminuída.

Médula Óea con Hiperplasia de células granulocíticas en todas las etapas de maduración y con abundantes megacariocitos.

2.2 Datos Definitivos Para El Diagnóstico

Datos Citogenéticos :

Presencia del Cromosoma Philadelphia: translocación recíproca entre los cromosomas 9 y 22. ( aumento de tirosina kinasa intracelular)

Presencia de translocación con formación del gen híbrido BCR/abl

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CANTIDAD DESCRIPCIÓN1 Frotis de sangre periférica teñido con Wright y/ó diapositivas 1 Aspirado de médula ósea teñido con Wright y/ó diapositivas

4.PROCEDIMIENTO.


ACTIVIDADES. - Reporte de resultados .______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

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SERIE BLANCA:PRÁCTICA No. 16“EVALUACIÓN DE FROTIS DE S.P. Y M.O. CON

POLICITEMIA VERA Y MIELOFIBROSIS IDIOPÁTICA CON METAPLASIA MIELOIDE”

1.INTRODUCCIÓN.

En las leucemias mieloides crónicas, la CTH tienen todavía más capacidad de dividirse que una CTH normal.Si la maduración predomina hacia la línea de los eritrocitos, se tendrá:Policitemia vera.Cuando la proliferación es predominantemente hacia la línea de los megacariocitos, pero éstos se mueren en la etapa de megacariocito maduro, a esta neoplasia se le llama Mielofibrosis con Metaplasia Mieloide.

1.1 POLICITEMIA VERA Policitemia ( elevación de los glóbulos rojos ó masa eritrocítica total) de orígen primario en la que hay que descartar otras causas de policitemia secundaria como son:

Enfermedades con dificultad en la oxigenación sanguínea: tabaquismo crónico, síndrome de Pickwick.

Fístulas arteriovenosas ó cardiopatías congénitas. Hemoglobinas anormales que producen hipoxi tisular. Tumores productores de eritropoyetina.

1.2 MIELOFIBROSIS CRÓNICA IDIOPÁTICA CON METAPLASIA MIELOIDE

Se origina también en una CTH que madura hacia todas las líneas mieloides pero predominantemente hacia los megacariocitos

En la Médula Ósea existe aumento de todas las líneas, pero predominantemente hacia los megacariocitos los cuales mueren en la etapa de megacariocitos maduros, liberando los factores de crecimiento fibroblásticos, lo cual lleva a la mielofibrosis.

Al ocuparse el tejido medular por el tejido fibroso, se origina la hematopoyesis extramedular.

En sangre periférica usualmente hay un cuadro leucoeritroblástico.( elevación del número de granulocitos inmaduros y muchos eritroblastos

Serie Blanca 49



2.1 Criterios para el Diagnóstico de Policitemia Vera:

Proliferación de la CTH hacia todas las lineas con predominio hacia la línea eritrocítica:plaquetas ,eritroblastos ,basofilia , eosinofilia, granulocitosis con células no más inmaduras que los mielocitos.Sin embargo la Biometría Hemática no es definitiva.

Trombocitosis > 400,000/ μl Leucocitosis > 12,000/ μl sin fiebre ó infección Aumento de fosfatasa alcalina leucocitaria sin fiebre ó infección. Aumento de vitamina B12 sérica ó transcobalamina Cromosoma Philadelphia negativo.

Estudio de Cortes Histológicos de Médula Ósea en Policitemia Vera

Hiperplasia notable, con aumento de todas las líneas celulares, principalmente eritroblastos y megacariocitos.

Células Grasas disminuídas ó ausentes. El 30% de pacientes desarrollan mielofibrosis con metaplasia mieloide.

2.2 Criterios para el Diagnóstico de Mielofibrosis Idiopática Crónica con Metaplasia Mieloide.

En médula ósea, aumento de todas las líneas, pero predominantemente hacia los megacariocitos.

Mielofibrosis desde el principio en algunos pacientes, aunque no en todos, que se demuestra con gruesas fibras de colágena en médula ósea y sustitución de la celuraridad normal por tejido fibroso, ocasionada por liberación de factores de crecimiento fibroblástico por los megacariocitos malignos.

En sangre periférica puede haber elevación o disminución de plaquetas y granulocitos .

En sangre periférica, cuadro leucoeritroblástico ( granulocitos inmaduros y muchos eritroblastos , anemia y poiquilocitos ( sobre todo dacriocitos ).

Realizar diagnóstico diferencial con otras enfermedades que causan mielofibrosis.( los demás sindromes mieloproliferativos crónicos ).

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CANTIDAD DESCRIPCIÓN1 Frotis de sangre periférica teñido con Wright y/ó diapositivas1 Aspirado de médula ósea teñido con Wright y/ó diapositivas

4.PROCEDIMIENTO. Observar imágenes en laminillas y/ó diapositivas correspondientes con estas alteraciones.


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LEUCEMIA MIELOMONOCÍTICA CRÓNICA Y TROMBOCITEMIA ESENCIAL”

1.INTRODUCCIÓN.

Cuando la maduración de la CTH es predominantemente hacia los neutrófilos y monocitos, la leucemia se llama Leucemia Mielomonocítica Crónica.Cuando la maduración predomina hacia las plaquetas, se trata de Trombocitemia esencial.

1.1LEUCEMIA MIELOMONOCÍTICA CRÓNICA

Leucemia Mielomonocítica Crónica ó Mielodisplasia Tipo IV.Cuadro parecido al de la LGC, pero con un incremento en la maduración hacia la línea

de los monocitos .

1.2TROMBOCITEMIA ESENCIAL ( Primaria ó Hemorrágica )

La célula que sufre la mutación neoplásica, es la CTH, que madura hacia todas las líneas, pero con predominio hacia la línea de megacariocitos-plaquetas.


2.1 Criterios para el Diagnóstico de Leucemia Mielomonocítica Crónica.

Monocitos displásicos, ó células híbridas entre mielocitos y monocitos. Menos del 15% de los granulocitos son inmaduros. Cambios displásicos +++.( apéndices nucleares ; núcleos de neutrófilos muy

largos ) Más de 1000 monocitos /μl ( ó más del 3% ), Anemia leve. En médula ósea los mieloblastos son <20%.

2.2 Criterios para el Diagnóstico de Trombocitemia Esencial

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Cuenta de Plaquetas por arriba de 600,000/μl Hemoglobina < 13 g/dl Ausencia de Cromosoma Philadelphia ó del gen híbrido BCT/abl Fibrosis medular ausente ó menos de 1/3 de la biopsia Ausencia de otra causa de trombocitosis ( trombocitosis secundaria ) Médula Ósea con hiperplasia moderada de las líneas eritroblástica y granulocítica

y aumento marcado de megacariocitos. Descartar otras causas de Trombocitosis Secundaria, como:Deficiencia de

Hierro,Hemorragias crónicas, Procesos inflamatorios ó infecciosos crónicos, Neoplasias malignas no hamatopoyéticas, Pacientes esplenectomizados.






ACTIVIDADES.

- Reporte de resultados ._____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

SERIE BLANCA:PRÁCTICA No. 18

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“EVALUACIÓN DE FROTIS DE S.P. Y M.O.CON LEUCEMIA MIELOIDE AGUDA M0 ”

1.INTRODUCCIÓN.

LEUCEMIAS AGUDAS

En las leucemias agudas, las células neoplásicas no maduran teminalmente; generalmente maduran hasta la etapa de blasto ó un poco más allá.

Para que se consideren agudas deben tener > 20% de blastos en M.O. Las células blásticas inhiben la proliferación de las clonas normales. Los pacientes tienen anemia, plaquetopenia, granulocitopenia. La muerte sobreviene por hemorragias, por la plaquetopenia e infecciones.

La Leucemia M0, es una leucemia aguda cuya cuenta típica de Médula Osea es la siguiente:

96% de Mieloblastos ( 1a) 4% de eritroblastos ( eritroblastos y granulocitos en maduración: muy disminuídos ). Por lo tanto: 0-3% de los blastos son positivos para tinción citoquímica de MIELOPEROXIDASA.


Criterios para el diagnóstico de la Leucemia Aguda M0

Demostrar con anticuerpos anti-mieloperoxidasa, la presencia de esta enzima ( MPO) en el Retículo Endoplásmico Rugoso ó en el Aparato de Golgi. Ó Demostrar la presencia de proteínas de membrana CD13 ó CD33 con anticuerpos monoclonales .

Demostrar la ausencia de esterasas específicas, que son propias de la serie monocítica, Ó Demostrar la ausencia del marcador monocítico CD14 y que descartan la Leucemia M5a ó monoblástica .

Demostrar la ausencia de marcadores megacariocíticos como CD41 ó CD61, que descartan Leucemia M7 ó Megacarioblástica.

Demostrar la ausencia de marcadores de linfocitos que descartan leucemia linfoblástica: de Precursores B: CD10, CD19, y TDT. Y de Precursores T: CD2, CD3, CD5, CD7 y TDT.


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CANTIDAD DESCRIPCIÓN1 Frotis de sangre periférica teñido con Wright y /ó diapositivas1 Aspirad de médula ósea teñido con Wright y/ó diapositivas




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1.INTRODUCCIÓN.

La cuenta típica de la leucemia aguda M1 es:

Mieloblastos: 83% Promielocitos: 3% Mielocitos: 2% Eritroblastos: 12%


Los criterios para el diagnóstico de la leucemia aguda M1, son:

>3% y < 10% de células tienen gránulos MPO positivos ó bastones de Auer observables con la tinción citoquímica para MPO ó son células con un poco más de maduración . ( que pueden ser: mieloblastos 1b ( mieloperoxidasa + ) , mieloblastos 2, promielocitos , mielocitos.

90% de células son mieloblastos sin gránulos ( mieloblastos 1ª =negativos para mieloperoxidasa )

Hay anemia, granulocitopenia, trombocitopenia




1 Frotis de sangre periférica teñido con Wright y/ó diapositivas1 Aspirado de médula ósea teñido con Wright y/ó diapositivas

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SERIE BLANCA:PRÁCTICA No. 20“EVALUACIÓN DE FROTIS DE S.P. Y M.O.CON LEUCEMIA MIELOIDE AGUDA M2 ”

1.INTRODUCCIÓN.

La Leucemia mieloide aguda M2, presenta la siguiente cuenta típica de Médula Osea:

Mieloblastos: 52% Promielocitos: 33% Mielocitos: 7% Granulocitos más maduros: 3% Eritroblastos: 5%


Criterios para el diagnóstico de la Leucemia Aguda M2:

Entre 30 y 89% de células de médula ósea ( excluyendo eritroblastos ) son mieloblastos y > 10% de células son promielocitos ó granulocitos más maduros. ) El rango puede ser: desde 20% de blastos con 80% de promielocitos ó células más maduras , hasta 80% de blastos con 20% de promielocitos ó células más maduras

Las llamadas Leucemias Agudas de Eosinófilos, de Basófilos y de Células cebadas, son similares a la M2, aunque con diferenciación a cada línea respectiva




CANTIDAD DESCRIPCIÓN1 Frotis de sangre periférica teñido con Wright y/ó diapositivas1 Aspirado de Médula ósea teñido con Wright y/ó diapositivas

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LEUCEMIA MIELOIDE AGUDA M3 ”

1.INTRODUCCIÓN.

La leucemia M3 es una leucemia aguda, en la cual, la célula neoplásica original es la CFC GEMM y no la CTH. Y en donde el 90% de las células de médula ósea maduran hasta la etapa de promielocitos. Su complicación principal y la causa de su gravedad es la CIVD, la cual se evita con el Acido Transretinoico, , que favorece la diferenciación de las celulas malignas.


Criterios para el diagnóstico de la leucemia aguda M3.

90% de células de Médula Osea maduran hasta la etapa de PROMIELOCITOS , los cuales son anormales, y en mayor cantidad que los promielocitos normales; algunas células pueden madurar hasta neutrófilos segmentados y las células que maduran más pueden presentar anomalía de Pseudo-Pelger. Pueden ser de dos variedades:

1) Variedad de gránulos grandes, los cuales son observables, y cristalizan formando bastones de Auer, generalmente en cantidad múltiple, llamados faggots, en el 90% de las células )

2) La Variedad Microgranular, en la que los gránulos pueden no verse claramente, teniendo estos casos el núcleo plegado, de aspecto monocitoide, por lo que puede ser confundida con una leucemia M5b ( monoblástica ), por lo cual debe realizarse para su diagnóstico, tinciones de Mieloperoxidasa Y esterasas dobles:

MPO Esterasas M3 +++ -

M5b + +++

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LEUCEMIA MIELOIDE AGUDA M4 ”

1.INTRODUCCIÓN.

En la leucemia M4, la maduración de la clona neoplásica se dirige hacia dos líneas de manera simultánea: la de los granulocitos y la de los monocitos, por lo que la morfología es compatible tanto con una M2 como con una M5.

Cuenta típica en Médula Osea:

Mieloblastos y promielocitos: 45% Mielocitos: 8%

Monoblastos y promonocitos: 43% Eritroblastos: 4%


Criterios para el diagnóstico de la Leucemia Aguda M4

20% de las células son blastos, que inluyen: mieloblastos 1 y 2; monoblastos 1 y 2 y promonocitos ( ó más de 5,000 células de estirpe monolítica ).

Más del 20% y < 80% de células son blastos, promonocitos y granulocitos más maduros.( Los granulocitos y células de estirpe monolítica se encuentran en proporciones muy similares.

Si > 80% de células fueran de estirpe monocítica, sería una M5




CANIDAD DESCRIPCIÓN1 Frotis de sangre periférica teñido con Wright y/ó diapositivas1 Aspirado de médula ósea teñido con Wright y/ó diapositivas

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ACTIVIDADES. - Reporte de resultados .____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

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SERIE BLANCA:PRÁCTICA No. 23“EVALUACIÓN DE FROTIS DE S.P. Y M.O.CON LEUCEMIA

MIELOIDE AGUDA M5 ”

1.INTRODUCCIÓN.

Se distinguen dos tipos de leucemias Monoblásticas: la M5a ó poco diferenciada, y la M5b ó bien diferenciada. El diagnóstico se realiza al encontrar en M.O. > 80% de células de estirpe monocítica: monoblastos, promonocitos y monocitos en una cuenta sin eritroblastos.

Cuenta típica de la leucemia M5a:

Monoblastos: 90% Promonocitos y monocitos: 6% Eritroblastos: 4%

Cuenta típica de la leucemia M5b:

Monoblastos: 6% Promonocitos: 85% Monocitos: 7% Eritroblastos: 2%

2.PRINCIPIO Y METODOLOGÍA.

Criterios para el diagnóstico de la Leucemia M5.

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M5a M5b

> 80% de células son de estirpe monocítica: monoblastos, promonocitos y monocitos en una cuenta sin eritroblastos.

> 80% de células son de estirpe monocítica: monoblastos, promonocitos y monocitos en una cuenta sin eritroblastos.

>80% de células de estirpe monocítica son monoblastos

<20% de células de estirpe monocítica son monoblastos

La M5a poco diferenciada ( equivalente a la M0) se forma de monoblastos 1ª y constituye el 15% de los casos de M5a.Debe distinguirse de la M0 ó de la L2: -usando anticuerpos monoclonales para CD14 -Demostrando la presencia de esterasas no específicas en el RER con el microscopio electrónico, ó la ausencia de MPO.

> 80% de las células de estirpe monocítica son promonocitos y monocitos; éstos se distinguen por sus gránulos azurófilos con Wright

La M5a bien diferenciada, se forma de monoblastos 1b y 2 y ---es positiva para esterasas no específicas. -es positiva para anticuerpos monoclonales anti CD14, CD36 y CD68. -MPO negativa, pero ocasionalmente positiva.

Puede confundirse son la M3 variedad microgranular


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SERIE BLANCA:PRÁCTICA No. 24“EVALUACIÓN DE FROTIS DE S.P. Y M.O.CON LEUCEMIA

MIELOIDE AGUDA M6 ”

1.INTRODUCCIÓN.

En esta leucemia, también llamada eritroleucemia, la CTH maligna madura de manera simultánea hacia las líneas eritroblástica y granulocítica.


Criterios para el diagnóstico de la leucemia M6.

Al menos 50% de células de Médula osea deben ser eritroblastos que frecuentemente, pero no siempre, tienen anormalidades morfológicas Y al menos 30% de células de la médula ósea deben ser mieloblastos ó promielocitos que pueden tener bastones de Auer.

30% -49% de células medulares sean eritroblastos con alteraciones morfológicas notables Y que al menos 30% de células de Médula Osea sean mieloblastos ó promielocitos

O bien los siguientes criterios reunidos: Cuadro de leucemia agudaSevera anemiaOtras citopeniasLa mayoría de las células de la Médula Osea sean eritroblastos muy anormales en distintas etapas de maduración ó con predominio de eritroblastos.Frecuentemente no más de 5% de mieloblastos, a lo que antes se llamaba MIELOSIS ERITRÉMICA, que por lo general evoluciona hacia una M6 típica con > 30% de mieloblastos.


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CANTIDAD DESCRIPCION1 Frotis de sangre periférica teñido con Wright y/ó diapositivas 1 Aspirado de médula ósea teñido con Wright y/ó diapositivas




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1.INTRODUCCIÓN. Las células proliferantes en las M7 maduran hasta megacarioblastos y en ocasiones hasta promegacariocitos y megacariocitos.A este tipo de neoplasias , formadas casi exclusivamente por células de aspecto blástico sin diferenciación morfológica, y diagnosticables principalmente a través de técnicas inmunocitoquímica, se les llama “leucemias” megacarioblásticas ó M7.


Criterios para el Diagnóstico de la leucemia M7.

>30% de blastos en Médula osea, de los cuales: >50% deben pertenecer a la línea de los megacariocitos.

Las células son positivas para los anticuerpos anti CD41 y CD61, que ponen en evidencia las glicoproteínas plaquetarias. ( técnicas inmunocitoquímicas )

Mieloperoxidasa negativa en los blastos ( megacarioblastos ) Esterasas no específicas positivas focalmente en el aparato de Golgi. De acuerdo con la etapa hasta la cual llegan a madurar las células se consideran:

M7a: La clona proliferante madura hasta la etapa de megacarioblasto.

M7b: La clona proliferante madura hasta promegacariocitos e incluso megacariocitos. Pudiendo presentar plaquetas normales y aumentadas ó morfológicamente anormales ( gigantes y sin gránulos.

En ambas se observa también proliferación de otras líneas celulares,especialmente de eritroblastos. Con frecuencia presentan fibrosis medular.




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“EVALUACIÓN DE FROTIS DE S.P. CON LEUCEMIA LINFOCÍTICA CRÓNICA Y LEUCEMIA DE CÉLULAS

PELUDAS ”

1.INTRODUCCIÓN.

Leucemia Linfocítica Crónica B

Esta es la más común de las leucemias linfoides.Cursa con linfocitosis notable. En ella, el resto de la hematopoyesis se conserva normal.Se presenta con crecimiento ganglionar bilateral.El Linfoma de Linfocitos bien diferenciados es la manifestación tisular (ganglionar ) de la misma enfermedad.Los linfocitos tienen pocas inmunoglobulinas de superficie.

Leucemia de Células PeludasLas tricoleucemias o leucemia de células peludas se presenta generalmente con esplenomegalia, sin linfadenomegalias y con anemia ó citopenias.Las células proliferantes tienen una morfología característica que ayuda a su diagnóstico.


2.1Criterios para el diagnóstico de la leucemia Linfocítica Crónica B.

Hallazgo de linfocitosis y linfadenomegalias en pacientes de más de 50 años de edad, sin otra causa de linfocitosis.

Rasgos Morfológicos: numerosos linfocitos pequeños con escaso citolasma, cromatina gruesa, “segmentada”, como rebanadas de pastel.

En su evolución pueden aparecer prolinfocitos acompañados por citopenias variables. Inmunofenotípicamente, los linfocitos son positivos a CD19, CD20 y a CD5; éste

último los caracteriza por tener la capacidad de formar autoanticuerpos.

2.2 Criterios para el diagnóstico de la Leucemia Linfocítica Crónica T CD8+ ó de Linfocitos Grandes Granulares.

Linfocitosis menos notable. Células con gránulos azurófilos citoplásmicos y cromatina gruesa, pero

no segmentada. Linfocitos con capacidad de inhibir la proliferación de células hematopoyéticas. El cuadro leucémico se acompaña de neutropenia ó pancitopenia. Inmunofenotípicamente son células positivas a CD2, CD3 y CD8

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2.3 Criterios para el diagnóstico de la Leucemia de Células Peludas.

Rasgos morfológicos característicos de ayuda al diagnóstico por bases morfológicas:

Células pequeñas Citoplasma muy pálido y con muchas microvellosidades filiformes Núcleos pequeños como los de los linfocitos, pero cromatina no tan densa.

Las células tienen característicamente gránulos con fosfatasa ácida resistente al ácido tartárico.

La médula ósea es difícil de aspirar, ya que, como es típico, tiene fibrosis. Inmunofenotípicamente son positivas para CD19 y CD20, CD11 y CD25.








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“EVALUACIÓN DE FROTIS DE S.P. CON LEUCEMIA LINFOBLÁSTICA ”

1.INTRODUCCIÓN.

La clasificación FAB señala 3 tipos fundamentales: L1, L2, y L3, independientemente de su inmunofenotipo.

Leucemia L1. Corresponden al tipo más común de leucemia aguda infantil y es la que tiene el mejor pronóstico de las 3. Leucemia L2.Tienen un peor pronóstico que las L1Leucemia L3. Casi todos los casos corresponden a células B.Tienen mal pronóstico


2.1Criterios para el diagnóstico de la Leucemia L1.

blastos muy pequeños, en donde el núcleo ocupa la mayor parte de la superficie y por lo tanto hay muy escaso citoplasma, el cual carece de vacuolas ó presenta muy escasas;

hay homogeneidad en cuanto al tamaño celular y densidad cromatínica; la cromatina es fina, aunque no tanto como la de los mieloblastos- Ocasionalmente, la cromatina es gruesa y pueden confundirse con linfocitos pequeños. Los linfoblastos ocasionalmente adquieren forma de “raqueta de mano”.

2.2 Criterios para el diagnóstico de la Leucemia L2.

Células muy variables en tamaño Las células más grandes tienen cromatina fina y nucleolos bien demarcados, como los

de los mieloblastos; las de tamaño intermedio, tienen cromatina más gruesa, y las más pequeñas, tienen cromatina condensada.

Con frecuencia, los núcleos tienen múltiples indentaciones “cerebriformes” ( en cuyo caso, si se acompañan de gránulos positivos a la fosfatasa ácida y a α-naftil acetato esterasa, corresponden a leucemias T y tienen un mal pronóstico).

Citoplasma más abundante que en las L1, generalmente sin gránulos y con pocas ó ninguna vacuola.

2.3 Criterios para el diagnóstico de la Leucemia L3

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Células muy características, con citoplasma basófilo repleto de vacuolas claras, que contienen lípidos neutros, positivas con rojo oleoso y PAS negativas

Núcleos con cromatina fina granular y enormes nucleolos. Las células son morfológica e inmunofenotípicamente indistinguibles de las que

proliferan en el linfoma de Burkitt.







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SERIE BLANCA:PRÁCTICA No. 28“EVALUACIÓN DE FROTIS DE S.P. Y M.O.CON MIELOMA

MÚLTIPLE ”

1.INTRODUCCIÓN. Neoplasia hematopoyética, en la que proliferan células plasmáticas, que han madurado independientemente de una estimulación antigénica.Cuando llegan a salir las células plasmáticas a la circulación, el diagnóstico que se establece en el de “ Leucemia de células plasmáticas”.Dichas células forman inmunoglobulinas homogéneas, monoclonales, que se reconocen por electroforesis de proteínas.La proliferación se restringe a la médula ósea, ocasionando zonas de osteólisis reconocidas por radiografías, y que se manifiestan clínicamente por dolor ósea y fracturas patológicas y por hipercalcemia.


2.1 Criterios para el diagnóstico del Mieloma Múltiple.

En el aspirado de médula ósea:

Aumento notable de células plásmáticas ( lo normal es <3%) Algunas células presentan núcleos irregulares y multilobulados. Células plasmáticas con cristales múltiples intracelulares, constituídos por

inmunoglobulinas ó cristales azurófilos alargados. Células plasmáticas con bordes citoplásmicos irregulares y de color rojo ( células en

flama).





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SERIE BLANCA: PRACTICA NO. 29“TINCIÓN CITOQUÍMICA PARA MIELOPEROXIDASA “

1.INTRODUCCIÓN

La citoquímica constituye en la práctica hematológica un complemento indispensable de la morfología óptica convencional.Su finalidad es estudiar la presencia de ciertos componentes químicos (enzimas o sustancias diversas) en el interior de las células sanguíneas tanto hematopoyéticas como circulantes en sangre periférica.

A menudo resulta difícil diferenciar los blastos leucémicos de la leucemia linfoblástica aguda de los de la leucemia mieloblastica (M1), monoblástica aguda (M5A) y la leucemia megacarioblástica aguda (M7) utilizando solamente extensiones con las coloraciones de May-Grünwald-Giemsa.

Recientemente se ha propuesto estudiar las leucemias agudas basándose en tres niveles secuenciales de investigación que son: los métodos citoquímicos en primer lugar, el inmunofenotipo intracelular en segundo lugar y por último el inmunofenotipo de membrana.Diversos procedimientos de tinción citoquímica contribuyen a llevar a cabo esta distinción. Cuando se utilizan las reacciones citoquímicas adecuadas junto con el aspecto morfológico de las extensiones con tinción de Wright-Giemsa, puede establecerse un diagnóstico preciso en la mayoría de los casos. Desde el punto de vista técnico todas las reacciones citoquímicas tienen en común 3 etapas fundamentales: fijación, incubación y contraste.Estas tinciones pueden realizarse sobre sangre periférica, extensiones de medula ósea, preparaciones de nódulos linfáticos u otros tejidos.


La mieloperoxidasa se sintetiza en el retículo endoplasmático rugoso, de donde pasa a las cisternas del aparato de Golgi quedando localizada fundamentalmente en la granulación prim aria o azurófila. Dicha enzima se combina in vivo con peróxido de hidrógeno transformándose en un potente agente bactericida, viricida y fungicida. Así, muestra actividad en todos los estadios del desarrollo de los neutrófilos y se halla en los gránulos azurófilos. Los eosinófilos muestran una actividad intensa. Los linfocitos, basófilos y las formas eritroides no se tiñen. La tinción citoquímica de mieloperoxidasa es fundamental en el diagnóstico diferencial de las leucemias agudas (positiva en las mieloblásticas y negativa en las linfoblásticas). La actividad peroxidasa puede faltar en algunos neutrófilos tóxicos de pacientes con infección y leucemia aguda, y en casos raros de deficiencia congénita de mieloperoxidasa.

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La demostración citoquímica de esta enzima se basa en la acción oxidante de la peroxidasa sobre el substrato, bencidina, en presencia de peróxido de hidrógeno, apareciendo un precipitado amarillo ocre en el lugar del citoplasma en donde se ha producido la reacción.

3.LISTA DE REQUERIMIENTOS

3.1 Reactivos.

NUM NOMBRE DEL REACTIVO CONCENTRACIÓN CANTIDAD1 Formol 37% 10ml2 Etanol absoluto 90ml3 Dihidrocloruro de bencidina 0.3g4 ZnSO4.7H2O 3.8% 1ml5 Acetato de sodio3H20 1g6 H202 3% 0.7ml7 NaOH 1.0N 1.5ml8 Safranina 0.2g

3.2 Equipo de LaboratorioBalanza granatariaBalanza analítica

3.3 Material de Laboratorio

CANTIDAD DESCRIPCIÓN2 Vasos de precipitados de 100 ml2 Matraces aforados de 100 ml1 Pipeta graduada de 10 ml2 Pipetas graduadas de 5 ml1 Pipeta graduada de 1 ml2 Frascos de 250 ml10 Frotis de sangre periférica

3.4 Preparación de los Reactivos

3.4.1 Solución Fijadora Formol al 37% 10 ml Etanol absoluto 90 ml

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3.4.2 Solución Colorante

Modo de Preparación: Etanol al 30% ( v/v en agua ) 100 ml Dihidrocloruro de bencidina 0.3 g ZnSO4.7H2O al 3.8% 1 ml Acetato de sodio 3H2O 1 g H2O2 al 3% 0.7 ml NaOH 1.0 N 1.5 ml Safranina 0.2 g

Los reactivos se mezclan en el orden indicado. La bencidina a veces contiene un material insoluble. Al añadir el sulfato de zinc se forma un precipitado que se disuelve al añadir los demás reactivos. El pH de la solución debe ajustarse a 6.00 + 0.05. La solución se filtra y se guarda a temperatura ambiente; puede usarse de manera repetida por meses.

4.PROCEDIMIENTO.

4.1 Técnica:

4.1.1. Los frotis se fijan por un minuto con la solución formol etanol4.1.2 Lavar con agua de la llave4.1.3 Secar al aire PERFECTAMENTE4.1.4 Sumergir en la solución colorante por 30 segundos.4.1.5 Lavar con agua de la llave4.1.6 Contrateñir por 30 segundos con solución acuosa de safranina al 1%4.1.7 Lavar con agua de la llave4.1.8 Secar al aire4.1.9 Sellar con resina sintética y cubrir con cubreobjetos del #1

Actividades:-Practicar la tinción citoquímica para Mieloperoxidasa con frotis de sangre periférica.

4.2 Resultados Esperados.


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SERIE BLANCA: PRACTICA NO. 30“ALFA NAFTIL ACETATO ESTERASA EN

LEUCOCITOS “

1. INTRODUCCIÓN.Las esterasas son un grupo de enzimas capaces de hidrolizar ésteres en sus componentes ácidos y alcoholes. Existen diferentes variedades según el substrato empleado. Se utilizan 4 substratos: naftol-AS-C-cloroacetato, naftol-AS-D-acetato, α -naftil-acetato, α -naftil-butirato, los cuales al ser hidrolizados en presencia de una sal diazoica dan un precipitado insoluble en el lugar de la reacción.

2. PRINCIPIO Y METODOLOGÍA .Utilizando como substrato el naftol-AS-C-cloroacetato (CAE) se detecta una esterasa que es específica de la granulopoyesis neutrófila en la que es positiva a partir del mieloblasto y se expresa en forma de un precipitado rojo anaranjado muy brillante. Su utilidad diagnóstica se centra básicamente en el reconocimiento de células blásticas mieloides, si bien su aparición es más tardía que la de la mieloperoxidasa aunque iguala a ésta en especificidad. Utilizando como substrato el naftol-AS-D-acetato, se obtiene una intensa positividad en la serie monocítica que, a diferencia de las restantes células hematopoyéticas, es fluoruro sensible. Dada su positividad más restrictiva es preferente usar el substrato α-naftil-acetato o α-naftil-butirato para marcar la serie monocítica y sus precursores, cuya positividad es intensa y se manifiesta en forma de un precipitado difuso por todo el citoplasma.

3.LISTA DE REQUERIMIENTOS. 3.1 Reactivos.

NUM NOMBRE DEL REACTIVO CONC. CANTIDAD1 Na2HPO4 20 mg2 KH2PO4 100mg3 Formaldehido 37% 25 ml4 Acetona 45 ml5 Na2HPO4 2.3666 KH2PO4 2.267 g7 Cloruro de Pararosanilina 250 mg8 HCl Concentrado 1.25 ml9 Alfa Naphthyl acetato 50 mg10 Etilén glicol monometil Eter 2.5 ml11 Nitrito de sodio 4% 1.5 ml

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3.2 Equipo de Laboratorio

Balanza granatariaBalanza analítica

3.3Materiales de Laboratorio

CANTIDAD DESCRIPCIÓN2 Vasos de precipitados de 100 ml2 Vasos de precipitados de 500 ml2 Probetas de 100 ml2 Probetas de 500 ml1 Matraz volumétrico de 50 ml1 Tubo de 13X100 ml3 Pipetas de 10 ml4 Pipetas de 5 ml2 Goteros de 10 ml2 Goteros de 100 ml2 Frascos de 500 ml

10 Frotis de sangre periférica

3.4Preparación de Reactivos

Soluciones de Fijación

3.4.1 Solución A

Na2HPO4 20 mg KH2PO4 100 mg Agua destilada 30 ml

3.4.2 Solución de fijación pH 6.6

Formaldehído al 37% 25 mlAcetona 45 mlSolución A ( #1 ) 30 ml( Esta solución se guarda a 4°C )

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3.4.3 Amortiguador de fosfatos 1/15 M pH 7.6

a) Na2HPO4 2.366 g H2O destilada 250 ml b) KH2PO4 2.267 g H2O destilada 250 ml

Preparación del amortiguador: Solucion a) 42.5 ml

Solución b) 7.5 ml

Soluciones de Tinción

3.4.4 Solución de Pararosanilina Cloruro de Pararosanilina 250 mgAgua destilada 5 mlHCl concentrado 1.25 ml

Disolver calentando suavemente y agitando.Dejar enfriar la solución y filtrar( Esta solución se conserva a temperatura ambiente )

3.4.5 Solución de Alfa Naphthyl acetato

Alfa Naphthyl acetato 50 mgEtilén glicol monometil Eter 2.5 ml

( Esta solución se prepara fresca , en cada ocasión ).

3.4.6 Solución de Pararosanilina hexazotizada

Solución de Pararosanilina 1.5 mlNitrito de sodio al 4% recién preparado 1.5 ml

( Esta solución se prepara fresca, en cada ocasión ).

3.4.7 Mezcla de incubación.

Buffer de Fosfatos 1/15 M, pH 7.6 45 mlSolución de Pararosanilina hexazotizada 3 mlSolución de Naphthyl acetato 2.5 mlAjustar el pH a 6.1+ 0.3 con NaOH 1N y filtrar( Esta solución se prepara fresca , en cada )

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4.PROCEDIMIENTO.

4.1 Técnica:

4.1.1. Fijar los frotis a 4°C por 30 segundos4.1.2 Lavar los frotis con agua de la llave4.1.3 Dejar secar a temperatura ambiente4.1.4 Colocar los fotis en la mezcla de incubación a temperatura ambiente por 45

minutos en la oscuridad4.1.5 Lavar con agua de la llave4.1.6 Contrateñir con hematoxilina de Gill por 10 minutos4.1.7 Lavar con agua de la llave4.1.8 Secar a temperatura ambiente4.1.9 Sellar con resina sintética y cubrir con cubreobjetos del #1

Actividades:-Practicar la tinción citoquímica para Esterasas con frotis de sangre periférica.

- Reporte de resultados .________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

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BIBLIOGRAFÍA

1 .BLOOD CELL MORPHOLOGY. Peripheral Smear Evaluation. Manual 1.Lynn Maedel and Sandra Sommer.American Society of Clinical Pathologysts.Chicago.

2.BLOOD CELL MORPHOLOGY. Benign or Reactive Changes in WBCs and Plateletes.Manual 3. Lynn Maedel and Sandra Sommer.American Society of Clinical Pathologysts.Chicago.

3.El Atlas de Hematología.Dr. Joaquín Carrillo Farga

4.Manual de Técnicas Básicas para el Laboratorio de Hematopatología.Instituto de Hematopatología AVL Society.

5.Manual de Técnicas de Laboratorio en Hematología.Segunda edición.Joan Lluis Vives.Josep Lluis Aguilar.Masson.

6.Citoquímica. http://web.udl.es/dept/medicina/citoweb/libro/pass/paginas/contenido/libro/citoquim.htm

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SERIE BLANCA: PRACTICA NO · Web viewEs el principal método de extracción de sangre en el...

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