SENSIBILIDAD Y ESPECIFICIDAD CLÍNICA DE UNA TÉCNICA PARA EL DIAGNÓSTICO

DE HISTOPLASMOSIS

BIOQ. GUILLERMINA ARPAIA

Diagnóstico Puesta a punto

Definiciones Objetivos

Directo y cultivos

ID CIEWB

Gold standard

>Técnicas

complementarias

>

>

Diagnóstico Puesta a punto

Definiciones Objetivos

>151 kDa

Pc

Asp

CN

Resultados

>Sensibilidad

analítica

>

Especificidad analítica

>

>

151 kDa 27 kDa

INESPECÍFICAS ESPECÍFICAS

8,6 µg/wellDil suero 1/100Conjugado 1X

1/100 1/500 1/4500 1/7000 1/12000 1/16000

Diagnóstico Puesta a punto

Definiciones Objetivos

Sensibilidad >

Especificidad

>

Validez >

Capacidad del test para detectar un individuo enfermo

S= __VP___ VP + FN

Capacidad de una prueba diagnóstica para detectar un

individuo sano

E= __VN___ VN + FP

Grado en que un test mide lo que se supone que debe medir

SENSIBILIDAD ESPECIFICIDAD

Diagnóstico Puesta a punto

Definiciones Objetivos

Hasta Tinelli y el Maipo

no paro…

RESOLVER LO QUE LAS DEMÁS NO PUEDEN…

85% pacientes HIV

Marcador de SIDA(CD4<300)

80-100% de muerte

>

>

Sensibilidad y especificidad diagnóstica

Patrones de banda

específicos

Materiales y métodos

Resultados

Conclusiones y discusión

Proyecciones a futuro

>

>Poblaciones estudiadas

Criterios de inclusión

Histoplasmosis confirmada (gold standard)

Otras patologías Aspergilosis Paracoccidioidomicosis Candidiasis TBC

Controles negativos

Control interno: pool Hc

De pacientes:

Ausencia de micosis concomitantes. Ausencia de otras patologías.

De controles negativos

Materiales y métodos

Resultados

Conclusiones y discusión

Proyecciones a futuro

Western blot >

15 kDa

26 kDa

37 kDa

52 kDa

Controlinterno Histoplasma Pc Asp Candida CN

Cálculos >

S banda X = __VP___ VP + FN

VP= Nº sueros H con banda X FN= Nº sueros H sin banda X

E banda X =__VN___=

VN + FP VN= Nº sueros no H sin banda X FP= Nº sueros no H con banda X

BANDAkDa

SENSIBILIDAD% ESPECIFICIDAD%

15 4 100

27 21 95

38 4 91

53 46 81

BANDAkDa

BANDAkDa

SENSIBILIDAD%

15 y/o27 25

38 8

53 46

27 y/o38 25

53 58

38 y/o 53 46

Materiales y métodos

Resultados

Conclusiones y discusión

Proyecciones a futuro

>Conclusiones

Criterio de positividad: aparición de banda

53 kDa 53 y/o 27 kDa

Nuestro WB tendría mayor sensibilidad que las técnicas ID

y CIE ( S en HIV= 25-30%)

Herramienta diagnóstica en casos en que ID y/o CIE dan

negativos

>Situaciones particulares…

CASO 1 : Paciente de 40 años, HIV+, 8 meses

atrás comienza con dolor de encía, buen estado general.

Lesiones granulomatosas en encía superior y paladar duro. Sin

adenopatías. Semiología respiratoria normal.

WB

Servicio de Micología:

Directo (lesión paladar) + Cultivo +

HcID negativa

CIE negativa

IDR negativa

>Situaciones particulares…

CASO 2 : Paciente 62 años, HIV +, refiere

dolor en arcada dentaria superior de tres meses de evolución

WB

Servicio de Micología:

Directo (bx labio superior) + Cultivo +

HcID negativa

CIE positiva

(1+ 1-)

IDR negativa

>Situaciones particulares…

Proporción de sueros con ID/CIE negativa que detectamos con

nuestro WB3/15 sueros

Discusión >

Obtener un antígeno a partir de una o más cepas

Cepas de diferentes formas clínicas

Diferentes estadios de crecimiento

Deglicosilación

SDS PAGE: 1 cepa SDS PAGE: 2 cepas

Materiales y métodos

Resultados

Conclusiones y discusión

Proyecciones a futuro

Aumentar nuestro N Comprobar variabilidad antigénica de

las cepas Evaluar S y E del método usando antígenos

deglicosilados Modificar variables de la técnica que

mejoren parámetro de validez

Contrastar WB con otras técnicas inmunoserológicas

Integrar nuestra técnica con datos clínicos, epidemiológicos y micológicos

MUCHAS GRACIAS!!!!!!

Bibliografía

• Kauffman CA. Histoplasmosis: A Clinical and Laboratory Update. Clin Microb Rev 2007; 20 (1): 115-132

• Zancopé-Oliveira, R M; Bragg, S L; Reiss, E; Wanke, B; Peralta, J M. Effects of histoplasmin M antigen chemical and enzymatic deglycosy-lation on cross-reactivity in the enzyme-linked immunoelectrotransfer blot method. Clin Diagn Lab Immunol. 1994;1:390–393.

• Wheat, L. J., Wheat, H., Connolly, P., Kleiman, M., Supparatpinyo, K. S., Nelson, K., Bradsher, R. & Restrepo, A. (1997). Cross-reactivity in Histoplasma capsulatum var.capsulatum antigen assays of urine samples from patients with endemic mycoses. Clin Infect Dis 24, 1169–1171

• Pizzini, C. V., Zancopé-Oliveira, R. M., Reiss, E., Hajjeh, R., Kaufman, L. & Peralta, J. M. (1999). Evaluation of a Western blot test in an outbreak of acute pulmonary histoplasmosis. Clin Diagn Lab Immunol 6, 20–23

Bibliografía• BCQ Leimann, CV Pizzini, MM Muñiz, PC Albuquerque, PCF Monteiro, RS Reis,

R Almeida-Paes, MS Lazéra, B Wanke, MA Perez & RM Zancopé-Oliveira Histoplasmosis in a Brazilian center: clinical forms and laboratory tests Rev Iberoam Micol. 2005 Sep;22(3):141-6.

• Allan Jefferson GuimarãesI,II; Joshua D. NosanchukII; Rosely Maria Zancopé-

OliveiraI Diagnosis of histoplasmosis Braz. J. Microbiol. vol.37 no.1 São Paulo Jan./Mar. 2006.

• Guimarães, A.J.; Pizzini, C.V.; De Matos Guedes, H.L.; Albuquerque, P.C.; Peralta, J.M.; Hamilton, A.J.; Zancope-Oliveira, R.M. ELISA for early diagnosis of histoplasmosis. J. Med. Microbiol., 53(Pt 6), 509-514, 2004

• Negroni R, Iovannitti C, Arechavala A, Carnovale S, Euguchi K. Preparación y estudio de un exoantígeno de la fase levaduriforme de Histoplasma capsulatum para reacciones serológicas. Rev Iberoamed Micol 1998; 15:282-5.

Agradecimientos• Servicio de Micología del Hospital Muñiz

• Cátedra Micología de la Facultad de Medicina UBA

• Instituto Malbrán. Servicio de Parasitología, área Trichinosis

• Laboratorio Central del Hospital Muñiz

• Servicio de Virología, Sección HIV del Hospital Muñiz

• Coordinadoras de Residencia Bioquímica y Microbiología y Residencia de Microbiología: Dra. Dorotea Baiges y Dra. Alicia Arechavala

• Dr. Ricardo Negroni

• Jorge