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Camilo: RESULTADOS Y DISCUSION – paper II fase – lipasa • Burkholderia multivorans V2 (BMV2) al cultivada en medio tributirin agar tuvo una máxima producción de lipasas con n-hexano e isooctano (entre otros solventes, como n-, benzene, ethyl acetate, toluene, cyclohexane etc.). Lo que prueba que esta enzima mantiene su acción e incluso la incrementa en solv. Org. Esto hace que sea más fácil la separación de éste del medio de reacción. • Log P = Log K ow es el Índice de polaridad del solvente. Mayor a 5 muy alta lipofilicidad, menor a 1 muy baja. • Solventes orgánicos 1,5 <log K ow <4 son altamente tóxicos para los microorganismos. • Al 6º día de incubación, Máx. actividad lipasa (6.477 U/mL). • El aceite de oliva fue el mejor sustrato en la producción de lipasas en BMV2. • Optimización del medio fue con Triton X-100 + Aceite de oliva, 2,2 veces la actividad (14 U/ml). • Efecto estimulatorio en la actividad enzimática: iones Ca++ , Mg + + y Mn++ y los surfactantes (SDS, triton, tween 80, deoxicolato de sodio. • Inhibieron fuertemente la actividad lipasa: iones Cu++, Fe++, Zn+ +, el EDTA y la PMSF (phenyl methyl sulfonyl fluoride). TÉCNICAS • Zimografía: Técnica electroforética para ver la actividad de enzimas, en gel de tributirina (opaco), cambia a transparente si ocurre la degradación de la tributirina (triglicérido). • Determina la actividad hidrolítica de la lipasa en un solvente orgánico: P.M.: Lipasa 44kDa.
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Camilo:RESULTADOS Y DISCUSION paper II fase lipasa
Burkholderia multivorans V2 (BMV2) al cultivada en medio tributirin agar tuvo una mxima produccin de lipasas con n-hexano e isooctano (entre otros solventes, como n-, benzene, ethyl acetate, toluene, cyclohexane etc.). Lo que prueba que esta enzima mantiene su accin e incluso la incrementa en solv. Org. Esto hace que sea ms fcil la separacin de ste del medio de reaccin. Log P = Log es el ndice de polaridad del solvente. Mayor a 5 muy alta lipofilicidad, menor a 1 muy baja. Solventes orgnicos son altamente txicos para los microorganismos. Al 6 da de incubacin, Mx. actividad lipasa (6.477 U/mL). El aceite de oliva fue el mejor sustrato en la produccin de lipasas en BMV2. Optimizacin del medio fue con Triton X-100 + Aceite de oliva, 2,2 veces la actividad (14 U/ml). Efecto estimulatorio en la actividad enzimtica: iones Ca++ , Mg ++ y Mn++ y los surfactantes (SDS, triton, tween 80, deoxicolato de sodio. Inhibieron fuertemente la actividad lipasa: iones Cu++, Fe++, Zn++, el EDTA y la PMSF (phenyl methyl sulfonyl fluoride).
TCNICAS Zimografa: Tcnica electrofortica para ver la actividad de enzimas, en gel de tributirina (opaco), cambia a transparente si ocurre la degradacin de la tributirina (triglicrido). Determina la actividad hidroltica de la lipasa en un solvente orgnico: P.M.: Lipasa 44kDa.
La purificacin parcial de la lipasa: Lipasa extracelular se precipit con Acetona+ ultra filtracin + cromatografa de exclusin molecular:
Inmovilizacin resumida:
Formacin de esteres:
