Camilo:RESULTADOS Y DISCUSION paper II fase lipasa

Burkholderia multivorans V2 (BMV2) al cultivada en medio tributirin agar tuvo una mxima produccin de lipasas con n-hexano e isooctano (entre otros solventes, como n-, benzene, ethyl acetate, toluene, cyclohexane etc.). Lo que prueba que esta enzima mantiene su accin e incluso la incrementa en solv. Org. Esto hace que sea ms fcil la separacin de ste del medio de reaccin. Log P = Log es el ndice de polaridad del solvente. Mayor a 5 muy alta lipofilicidad, menor a 1 muy baja. Solventes orgnicos son altamente txicos para los microorganismos. Al 6 da de incubacin, Mx. actividad lipasa (6.477 U/mL). El aceite de oliva fue el mejor sustrato en la produccin de lipasas en BMV2. Optimizacin del medio fue con Triton X-100 + Aceite de oliva, 2,2 veces la actividad (14 U/ml). Efecto estimulatorio en la actividad enzimtica: iones Ca++ , Mg ++ y Mn++ y los surfactantes (SDS, triton, tween 80, deoxicolato de sodio. Inhibieron fuertemente la actividad lipasa: iones Cu++, Fe++, Zn++, el EDTA y la PMSF (phenyl methyl sulfonyl fluoride).

TCNICAS Zimografa: Tcnica electrofortica para ver la actividad de enzimas, en gel de tributirina (opaco), cambia a transparente si ocurre la degradacin de la tributirina (triglicrido). Determina la actividad hidroltica de la lipasa en un solvente orgnico: P.M.: Lipasa 44kDa.

La purificacin parcial de la lipasa: Lipasa extracelular se precipit con Acetona+ ultra filtracin + cromatografa de exclusin molecular:

Inmovilizacin resumida:

Formacin de esteres: