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  • Resúmenes de e-posters y conferencias

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    Resúmenes de e-posters y conferencias

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    Comité Científico:

    Misión y Función El Comité Científico de ETIF 2018 está constituido por profesionales relevantes del país que a partir de su trayectoria y experiencia evalúan las problemáticas que hoy se constituyen en las necesidades más críticas desde el medicamento al paciente. A partir de ese análisis se proponen las temáticas y la modalidad de desarrollo, como work shops, conferencias magistrales y mesas de trabajo, con el objetivo de favorecer el intercambio y la actualización profesional.

    Integrantes Presidente: Prof. Dra. Irma Ercolano (Argentina) Vocales: Antonia Petraca (ANMAT - Argentina) Clyde Carducci (Farmacopea Argentina) Rosa María Papale (ANMAT - Argentina) Andres Brandolini (ANMAT - Argentina) Adriana Segall (FFyB-UBA - Argentina)

    Investigación y Desarrollo e-posters pag 4 Presentación de los resúmenes de los trabajos científicos que se presentarán en formato e-posters en el Hall de entrada de ETIF 2018 durante los 3 días de la Exposición.

    Disertaciones conferencias científico/técnicas y empresariales pag 18 Presentación de los resúmenes de las conferencias que se presentarán en ETIF 2018 durante los 3 días del Evento.

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    La hormona de crecimiento humana recombinante (rhGH) se utiliza como tratamiento en diversas enfermedades, particularmente las relacionadas al crecimiento. La rhGH puede ser expresada en la leche de vacas transgénicas con un rendimiento de 5 mg/mL (Salomone et al., 2006), pero la leche es un medio muy complejo por lo que se ne- cesita un método selectivo y eficiente para purificar rhGH a partir de ella. La cromatografía de afinidad permite reducir el número de pasos de un proceso de purificación. Los ligandos peptídi- cos pueden sintetizarse químicamente a bajo costo y son más estables química y físicamente que otros ligandos. Clackson T. et al. (1998) describieron el sitio de recono- cimiento receptor/hormona y definieron los aminoácidos presentes en esa interacción. Por ello, se diseñó un péptido y se evalúo su capacidad como ligando de afinidad: (Ac) GWRIWIPVAC. Finalmente, se estudió la influencia de los triptófanos presentes en la secuencia, ya que son suscep- tibles a sufrir oxidaciones. Metodologías: Se sintetizaron los péptidos (Ac)GWRIWIPVAC (PWW), (Ac) GFRIWIPVAC (PFW), (Ac)GWRIFIPVAC (PWF) y (Ac)GFRIFIPVAC (PFF) por química Fmoc. Se los inmovilizó para ser utilizados como matrices cromatográficas en la resina Sulfolink®- agarosa. Finalmente, se evalúo el desempeño cromato- gráfico de cada nueva matriz y se las comparó con PWW.

    Ligandos de afinidad peptídicos para la purificación de rhGH presente en leche de vaca transgénica Soledad L. Saavedra (1,2), María C. Martínez-Ceron (1,2), Silvana L. Giudicessi (1,2), Osvaldo Cascone (1,2) y Silvia A. Camperi (1,2)

    (1) Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Cátedra de Biotecnología. Junín 956, Buenos Aires, Argentina. (2) CONICET - Universidad de Buenos Aires. Instituto de Nanobiotecnología (NANOBIOTEC). Facultad de Farmacia y Bioquímica. Junín 956, Bs Aires, Argentina. ssaavedra@ffyb.uba.ar

    Se sembraron 0,8 mg de rhGH en cada columna. Se utilizó como buffer de adsorción Tris/HCl 50 mM pH 9 y como bu- ffer de elución buffer de fosfatos 20 mM, NaCl 2 M pH 6.1. Resultados: Se adsorbió el 90% de la hormona cuando se realizó la cromatografía con el péptido PWW. Esta matriz fue tomada como referencia. En las condiciones ensayadas PFW adsorbió el 88% y PWF el 76%. En el caso del PFF las condiciones de elución no fueron suficientes para recuperar el total de la proteína, por lo cual se reemplazó el buffer de elución por Tris/HCl 50 mM pH 7.5, NaCl 1M en propilenglicol 25%. Así se pudo recuperar en la fracción de elución el 99% de la proteína sembrada. Conclusiones: Aquellos ligandos en los cuales se reemplazó uno de los triptófanos por una fenilalanina perdieron capacidad de adsorción comparación con PWW. Por otro lado, el cambio de ambos triptófanos por fenilalanina mejoró la adsorción de rhGH, necesitándose condiciones más astringentes para lograr su recuperación total en la fracción de elución. En el futuro se determinarán las constantes de afinidad de ambos péptidos por la rhGH y su desempeño con una muestra real de leche que contenga la hormona para determinar cuál es el mejor candidato para purificarla a partir de leche de vaca transgénica y para ser utilizado a escala industrial.

    Introducción La ATIII (antitrombina III) se obtiene por precipitación desde plasma humano y purificación por cromatografía de afinidad. El Laboratorio de Hemoderivados UNC, produce y comercializa ATIII en la Argentina, siendo el único productor en Latinoamérica. El presente trabajo buscó la optimización del proceso cro- matográfico para aumentar el rendimiento. Métodos • Obtención y disolución de ATIII: La ATIII es precipitada como fracción IV por el método de Cohn desde plasma humano. Se redisuelve en buffer Tris Hidroximetilaminometano, citrato de sodio, cloruro de sodio (NaCl) en pH 7,40. La solución es filtrada por filtros clarifi- cantes de 6, 1 y 0,45 μm de poros. La solución filtrada es

    BIOTECNOLOGIA

    Obtención de Antitrombina III a partir de plasma humano de donantes sanos Romano Lucas, Pedano Pablo, Víctor Delgado, Medina Cristóbal, Bibolini Mario.

    Laboratorio de Hemoderivados UNC, Unidad de Córdoba Capital, Argentina.

    la siembra para la cromatografía de afinidad. • Cromatografía de Afinidad: La cromatografía se realiza con la resina Heparin Sepharose Fast Flow 6 (HSFF-6) de General Electric, con heparina como ligando. Se equilibra con una solución de Tris Hidroximeti- laminometano, citrato de sodio, NaCl, hasta alcanzar pH y conductividad de especificación. Se siembra la solución conteniendo ATIII y se lava con solución Tris Hidroximetila- minometano, citrato de sodio, NaCl, hasta alcanzar pH y conductividad de especificación. Se eluye con Tris Hidroxi- metilaminometano, citrato de sodio, NaCl, hasta alcanzar pH y conductividad de especificación. Inactivación Viral y Concentración por Ultrafiltración: El eluido es dializado con una solución de Fosfato dibásico de sodio (Na2HPO4). A esta solución se le agrega citrato de

    sodio sólido como estabilizante. La solución se mantiene a 60ºC por 10 horas (termotratamiento), se filtra y se rea- liza la ultrafiltración (UF). Primero se pre-concentra hasta 10 veces, se realiza la diálisis con 6 volúmenes de agua calidad inyectable y se concentra hasta 50-60 Unidades Internacionales (UI) de ATII por mililitro (ml) de solución, se agregan los estabilizantes, se filtra y se envasa. • Determinación de ATIII: La cuantificación de UI/ml de solución se realiza según Farmacopea europea utilizando estándares internacionales. Resultados de la optimización: Se analizan los resultados de 10 lotes de ATIII: El proceso de purificación parte, en promedio con 420820 UI de ATIII, obteniéndose en el bulk final 144334 UI de ATIII. Recuperación de ATIII en la Cromatografía:

    Se observa un aumento de la recuperación de UI de ATIII de hasta un 60 % por reducción del volumen de lavado. Recuperación de ATIII desde el eluido al concentrado post UF: Se observa un aumento de la recuperación de ATIII de 96 % asociándose la mejora a la optimización en la etapa cromatográfica. Recuperación de ATIII desde la siembra al bulk final: Se observa un aumento de la recuperación de ATIII de hasta 50 %. El mismo se asocia a la mejora en la cromatografía. Conclusión: El rendimiento en la purificación de ATIII mejora en forma considerable debido a la optimización en la reducción en el volumen de lavado en la cromatografía, cumpliendo el producto con todas las especificaciones requeridas, además de una optimización de los tiempos de proceso, reduciéndose los mismos.

    BIOTECNOLOGIA

    Optimización mediante la metodología de superficie respuesta para el proceso de purificación de lactoferrina a partir de suero de queso utilizando una matriz cromatográfica a base de quitosano Daniela B. Hirsch 1,2, Nicolás Urtasun 1,2, María F. Baieli 1,2, Lucas M. Martínez-Álvarez 2,3 María V. Miranda 1,2, Federico J. Wolman 1,2

    1 - Universidad de Buenos Aires, Facultad de Farmacia y Bioquímica, Cátedra de Biotecnología 2 - Instituto de Nanobiotecnología (NANOBIOTEC), UBA, CONICET 3 - Instituto Antártico Argentino daniela.b.hirsch@gmail.com

    Introducción: Nuestro grupo de trabajo se ha concentrado en el desa- rrollo de nuevos materiales cromatográficos a partir de quitosano principalmente para la purificación de proteínas provenientes de subproductos o desechos agroindustria- les. En este sentido, se ha desarrollado una matriz en el formato de mini-esferas con características multimodales para la purificación de lactoferrina (LF) proveniente del suero de queso. Tradicionalmente, para la optimización de los distintos parámetros del proceso de purificación se utilizan métodos de un único factor en los que se varí