EXTRACCIN DE PECTINA A PARTIR DE CSCARA DE LIMON Purificacin de biomolculas

Jos Irn Aquino Ventura 083002 Karen Alejandra Castillo Aguilar 083031 Alejandra Ramrez Torres 083019 Purificacin de biomolculas M.C Grethel Pea Gomar

SEPTIEMBRE-DICIEMBRE 2011

Tuxtla Gutirrez, Chiapas, 10 de octubre de 2011.

CUERPO ACADMICO DE INVESTIGACIN Y DESARROLLO AGROINDUSTRIAL Universidad Politcnica de Chiapas INGENIERA AGROINDUSTRIAL ___________________________________________________________________________

Dr. Sergio Saldaa Trinidad M. en C. Roberto Berrones Hernndez Dra. Peggy Elizabeth lvarez Gutirrez M en C. Yolanda del C Prez Luna M. C Grethel Pea Gomar M.C Claudia Coronel Aguilera

Alumnos: Jos Irn Aquino Ventura Karen Alejandra Castillo Aguilar 083031 Alejandra Ramrez Torres 083019

Universidad Politcnica de Chiapas Eduardo J Selvas s/N Col Magisterial Tuxtla Gutirrez, Chiapas +52 961 6120484 www.upchiapas.edu.mx

2

NDICE

II. III. IV. V. VI. VII. VIII. IX.

JUSTIFICACIN.................................................................................................................................. 8 PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA ............................................................................................... 8 OBJETIVOS .................................................................................................................................... 9 METODOLOGA................................................................................................................................. 9 RESULTADOS Y DISCUSIN......................................................................................................... 11 CONCLUSIONES .......................................................................................................................... 16 BIBLIOGRAFA ............................................................................................................................. 17 GLOSARIO DE TRMINOS ........................................................................................................... 17

3

I. INTRODUCCIN ___________________________________________________________________ La palabra pectina se deriva del griego "pektos" que significa solidificar. Fue descubierta por Vauguelin (1790), pero no fue caracterizada, sino hasta 1825 por Bracounot, quien descubri que esta sustancia era el principal agente gelificante en las frutas y la llam pectina, adems descubri que era la responsable de la formacin de jaleas cuando se calentaba a ebullicin la fruta con azcar.

La sociedad qumica Americana decidi en 1927 estandarizar una nomenclatura para nombrar a estas sustancias y en 1944 esta fue aceptada. El concepto "pectina" se defini como aquellos cidos pcticos capaces de formar un gel estndar cuando se combinan en proporciones adecuadas con la fruta, azcar, agua, cido. Cuando los frutos ctricos an estn verdes, la mayor parte de las sustancias pcticas se encuentran en el albedo como protopectina insoluble, a medida que la maduracin del fruto sigue adelante, la protopectina se va convirtiendo en pectina soluble. Cuando el fruto est completamente maduro aproximadamente 2/3 partes de las sustancias pcticas estn en forma soluble; la transformacin o hidrlisis de la protopectina, que se forma en los tejidos de las plantas durante la maduracin.

Las sustancias pcticas son los compuestos derivados de los carbohidratos de naturaleza coloidal ya que contiene como unidad bsica el cido anhidrogalacturnico, el cual al unirse con otras molculas similares forman una cadena de cido poligalcturnico. Los grupos carboxilos de esta sustancia pueden estar parcialmente o completamente neutralizados por una o ms bases.

El presente trabajo trata de la la extraccin de pectina a partir de limn persa y de la caracterizacin fisicoqumica de la misma. A continuacin se presenta el procedimiento mediante el cual se realiz la extraccin, as como tambin la metodologa para sus anlisis.

4

I. ANTECEDENTES ____________________________________________________________________ Las pectinas son productos qumicos que se obtienen las materias primas vegetales, principalmente frutas, se usan en varias industrias, especialmente la de alimentos, para darle propiedades de gel a los productos y como estabilizante. Las sustancias pcticas comnmente se encuentran en todos los tejidos de las plantas y en especial de los frutos. La pectina es muy importante desde el punto de vista fisiolgico; la parte intermedia del albedo y las capas entre cada una de las paredes celulsicas, que se componen casi por completo de sustancias pcticas, en la corteza de los frutos ctricos jvenes se forman las pectinas. La obtencin de pectina ha sido autocriticado por algunos autores, encontrndose desventajas: La obtencin de pectina en polvo es un proceso lento, pero a pesar de estas desventajas, el proceso de obtencin de pectina, se ve compensado con el alto costo que tiene la pectina en el mercado y la diversidad de usos que se le puede dar. Las propiedades gelificantes de la pectina se han utilizado por siglos desde el mtodo de conservar fruta, por ebullicin con azcar para formar un gel, se ha inventado. Las pectinas se usan mucho por su capacidad de gelificar, propiedad que est determinada por factores intrnsecos, como su peso molecular y su grado de esterificacin (que a su vez dependen de la materia prima, de las condiciones de su fabricacin), y por factores extrnsecos tales como el pH, las sales disueltas y la presencia de azcares. La viscosidad de sus dispersiones, al igual que la de otros polisacridos, se incrementa a medida que aumenta el peso molecular, en el caso de las pectinas, la viscosidad es mayor cuanto ms se incrementa el grado de esterificacin. Su metoxilacin es muy importante, razn por la cual las pectinas comerciales se han clasificado en dos grandes grupos: las consideradas como de alto metoxilo, que contienen de 55 a 80% de sus grupos carboxilo de manera esterificada y las de bajo metoxilo que slo presentan de 18 a 45% de esterificacin. Clasificacin de las pectinas Todas las sustancias pcticas son polmeros del cido poligalacturnico y pueden ser diferenciados por el grado de sustitucin de los grupos metilos que se encuentran esterificando los carboxilos de las pectinas. El grado de metoxilo es un trmino ampliamente utilizado en la industria. Mc Cready y Owens realizaron una divisin de las pectinas en tres grupos dependiendo de su velocidad de gelificacin.

Tabla 1

.l. Tipos de Pectina.Pectinas de rpida gelificacin Pectinas de lenta gelificacin Pectinas de bajo metoxilo

Tipos de pectina

Para la pectina de rpida gelificacin se debe tener un grado de esterificacin del 70% o mayor, para pectina de gelificacin lenta se debe tener un grado de esterificacin (GE) entre el 50 y 70%, para la de bajo contenido de metoxiloun GE del 50% o ms bajo, tomando como 100% de GE el 14% mximo posible de esterificacin como grupos metoxilos en sustancias pcticas. Propiedades fsicas de la pectina Peso molecular: El peso molecular de las pectinas vara de acuerdo a la materia prima, condiciones de extraccin, y procedimientos de purificacin. En base a viscosimetra, el peso molecular de las pectinas comerciales normalmente se encuentra dentro del rango de 50,000 a 150,000 daltons. Pureza: Debe tener un mnimo del 78% de cido anhidrournico, as mismo debe estar libre de humedad y cenizas. pH: Trazas de cido mineral que contaminan las pectinas (derivadas de tratamiento de extraccin y purificacin) pueden afectar la concentracin de iones hidrgeno en mayor magnitud de lo que afectara la acidez titulable. La mayor parte de las cenizas que acompaan a las pectinas consisten de carbonatos alcalinos o bases. En general, una alta alcalinidad de cenizas acompaa a una baja acidez y viceversa. Ms an, cuando es tomado en cuenta el pH es notable la relacin existente entre las tres propiedades. La alta alcalinidad-baja acidez acompaa a un pH alto, mientras que a una baja alcalinidad-alta acidez lo hace con un pH bajo. Esto es Io que se esperara si la ceniza alcalina hubiera sido combinada en la pectina con una proporcin de los grupos cidos no esterificados; la relacin entre los grupos cidos libres y combinados gobernaran el pH de la solucin en un cierto grado. El modo de preparacin de las pectinas repercute directamente en la alcalinidad de las cenizas. Esto se observa ms claramente si se toma en cuenta que cuando las pectinas son extradas con agua (o con una solucin muy dbil de cido) y se utiliza cloruro de sodio en vez de cido clorhdrico para ayudar a la coagulacin durante las ltimas etapas de la purificacin, la proporcin de constituyentes bsicos es alta; mientras que cuando la extraccin se realiza con una solucin fuerte de cido clorhdrico o se adiciona cido en alguna etapa de la purificacin, la alcalinidad de las 6

cenizas es baja. Esto demuestra que no hay importancia significativa en la proporcin de bases metlicas en las pectinas. La proporcin encontrada es claramente dependiente de los mtodos de extraccin y purificacin utilizados. Solubilidad: La pectina debe ser soluble en 20 partes de agua y formar una solucin coloidal opalescente, de fcil fluidez, cida al papel tornasol e insoluble en alcohol o en alcohol diluido y en otros solventes orgnicos. La solubilidad de las pectinas aumenta con un incremento el grado de esterificacin y con un decremento en su peso molecular. Si las pectinas son completamente esterificadas no son precipitadas por electrolitos, son estables en condiciones ligeramente cidas, pero inestables en lcalis y cidos fuertes. Mientras ms insoluble En agua sea una pectina se precipitar fcilmente por la adicin de un electrolito. La solubilidad de la pectina es menor cuando el tamao de la cadena aumenta y el contenido de metoxilos es bajo. Las pectinas con un grado de esterificacin del 20% son precipitadas por soluciones de cloruro de sodio, con un grado de esterificacin del 50% por soluciones de cloruro de calcio, y con una grado del 70% por cloruro de aluminio o cobre.

Propiedades Qumicas. Reactividad: Las sustancias pcticas son carbohidratos complejos ya que a diferencia de la gran mayora de los polisacridos, estas contienen grupos carboxilo que pueden estar protonados (COOH) a pHc3; en forma ionizada (COO - ) a pH>3, o como ster metlico (COOCH,); en cada caso las pectinas tienen diferente capacidad de interaccin con los otros constituyentes de los alimentos, pero en el de los carboxilos ionizados son ms reactivas. Los cidos, a altas temperaturas, hidrolizan las uniones glicosdicas. El grado de fragmentacin de la molcula depende del pH del medio. Con cido clorhdrico a ebullicin, la pectina produce furfural (se deriva de las porciones de la pentosa y cido galacturnico) dixido de carbono y agua; por cada mol de cido galacturnico, se forma un mol de dixido de carbono. La accin directa de un lcali comienza cuando ste se encuentra en exceso rompiendo la pectina para liberar alcohol metlico y cido pctico (como sal de lcali). La hidrlisis alcalina rompe la molcula de pectina y se obtiene cido galacturnico, arabinosa y galactosa. Acidez titulable: Cuando se titula una solucin de pectina con lcali para la determinacin de su acidez, se tiene que tener mucho cuidado, pues un pequeo 7

exceso de lcali podra saponificar algunos de los grupos ster de la pectina. Esto dara por supuesto, valores altos para la acidez titulable. Ya que esta saponificacin de la pectina puede ocurrir cuando el grado de alcalinidad de la solucin es menor que cuando la fenoftalena se torna de color, es muy importante encontrar el punto adecuado en el cual la acidez pueda ser titulada. Para titulaciones de la acidez libre de las pectinas, se requiere un indicador con un cambio muy cercano a un pH de 7.5 y una mezcla de indicadores con un cambio

Propiedades sensoriales. La pectina debe tener un color blanco amarillento y sin olor, adems de presentar un gusto de aspecto mucilaginoso, as mismo su tamao de partculas deber estar comprendido entre la malla 60 y 80.

II.

JUSTIFICACIN

La cscara de limn que se obtiene de las industrias ofrece una opcin para aprovecharla como fuente de materia prima para la obtencin de pectina; ya que es de gran disponibilidad y bajo costo. Con la extraccin de pectina a partir de la cascara de limn ayudamos a la disminucin de residuos agroindustriales que daan nuestra capa de ozono as como tambin contribuye a darle un valor agregado a dicho residuo agroindustrial.

III. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA ______________________________________________________ Gran parte de la tecnologa usada hoy en da depende directa o indirectamente de la generacin de residuos agroindustriales como lo es en este caso la cscara de limn. En el mercado existen diversas calidades de pectinas que se usan principalmente por su capacidad de gelificacin. La fabricacin de estos polmeros por lo general se hacen a partir de las cscaras de los ctricos, (en Mxico, la del limn), debido a que estos son residuos agroindustriales que en muchas ocasiones no se les hace otro uso ms que el de ser depositados en rellenos sanitarios o bien directamente al ambiente lo cual ocasiona la contaminacin.

8

IV. OBJETIVOS ____________________________________________________________________ Objetivo general: . Obtener pectina a partir de cscara de limn persa.

Objetivos especficos: Determinar los propiedades fisicoqumicas de la pectina ctrica obtenida del limn persa y de la pectina comercial. Evaluar el rendimiento de la pectina ctrica del limn persa.

V. METODOLOGA ____________________________________________________________________ Materiales Matraces erlenmeyers Crisoles Pinza para crisol Desecador Mechero de fisher Esptula Agitador magntico Piseta Vidrio de reloj Manta cielo Cuchillos Recipiente de plstico Pipeta Perilla de hule 7 2 1 1 1 1 2 1 1 1m 2 2 1 1

Reactivos cido clorhdrico Hidrxido de sodio 25 ml 5g 9

Fenolftalena Soluciones buffers Agua destilada Equipos Horno Mufla Termobalanza Balanza analtica

3 ml 4y7 500 ml

Extraccin de pectina 1. Preparacin de la materia prima. Estas deben estar en completamente limpias y libre de hongo. 2. Separar manualmente la pulpa del endocarpio o bagazo restante del albedo. 3. Corte del albedo. 4. Inactivacin de enzimas pcticas: poner en agua, con concentraciones a 300 g por litro y calentar hasta ebullicin 30 o 40 min despus de alcanzar el punto de ebullicin. 5. Decantar. Filtrar con manta de cielo y lavar con agua destilada hasta detectar en el agua de desecho cero slidos solubles totales (Brix), 6. Hidrlisis acida: agregar la misma cantidad de agua usada inicialmente, agregar cido sulfrico, ntrico o clorhdrico. Hasta obtener pH 1.5-3 y mantener en agitacin. 7. Filtracin de residuos: Filtrar con manta de cielo y lavar con agua destilada hasta detectar en el agua de desecho cero slidos solubles totales (Brix), 8. Concentracin. 9. Precipitacin: solucin alcohol al 80%. Dejar reposar 1 a 2 horas 10. Lavado: disolver la pectina, que est separada en el filtro de tela en agua acidulada (pH 1.5-3) y precipitar nuevamente con el alcohol. 11. Centrifugado. A 5000 rpm durante 20 min. 12. Secado. Baja temperatura 40C utilizando una corriente de aire caliente por 12 hrs. Contenido metoxlico Ingredientes Hidrxido de sodio al 0.25 N y 0.1 N Acido Clorhidrco al 0.25 N y 0.1 N

10

Procedimiento 1. Aadir a 0.5 g de sustancia pctica 25 ml de cido clorhidrco al 0.25 N y agitar suavemente. 2. Dejar en reposo 30 min y posteriormente titular con una solucin de NaOH al 0.1 N.

Alcalinidad de cenizas Determinar la alcalinidad de las cenizas 1. Disolver las cenizas en 25 ml de HCL al 0.1 N. 2. Calentar hasta hervir y dejar enfriar. 3. Titular con NaOH al 0.1 N usando fenolftalena como indicador.

VI.

RESULTADOS Y DISCUSIN

Acidez titulable Formula:

x 100

mEq: 0.006404 g de cido ctrico anhidro NNaOH: 1N

Orgnica x 100

Comercial x 100

11

1. Disolver 1 g de muestra en 9 ml de agua destilada Pectina Ml de NaOH %acidez Orgnica Comercial 2ml 8.3 ml 1.2808 5.3153

pH Pectina Orgnica Comercial pH 2.80 3.10

Humedad Formula:

Orgnica

Comercial

12

Pectina Orgnica Comercial Cenizas

% humedad 78.21 86.61

Formula:

Orgnica

Comercial

%

Pectina Orgnica Comercial

%cenizas 1.37 2.16

13

Alcalinidad de las cenizas

Formula: %

Orgnica

% % %

Comercial % %

Pectina Orgnica Comercial

ml de NaOH 8 10

% alcalinidad 3.50 2.77

Grado de metoxilacin Formula:

14

Orgnica

21.7 %

Pectina Orgnica

% metoxilacin 21.7

Rendimiento

TABLA COMPARATIVA Caractersticas fisicoqumicas pH Pectina orgnica 2.80 Pectina comercial 3.10 5.31% 86.61% 2.16% Referencia 3.3 0.86% 11.12 % 4.1%

Acidez titulable 1.28% Humedad Cenizas 78.21 % 1.37%

15

Grado metxilo 21.7%

Bajo metxilo 18-45% Alto metxilo 55-80%

8.36%

Alcalinidad de 3.50% cenizas Color Verde-amarillo

2.77% Blanca

0.27 % Blancaamarillenta

VII. CONCLUSIONES ____________________________________________________________________ La pectina se present en una forma cristalizada, esto debido a la perdida de agua durante el proceso de secado. El color de la pectina era verde- amarillenta, esto debido a que existen pigmentos provenientes de la cscara de limn. La pectina posee textura rgida, esto debido a la cristalizacin de la misma. Los altos porcentajes de alcalinidad de cenizas provocan los bajos niveles de acidez y a su vez altos pH. La pectina se clasifica como pectina de bajo grado de metxilo, ya que posee menos del 45 % de esterificacin. Este tipo de pectina puede ser considerada como potencial para la elaboracin de mermeladas. La alcalinidad de las cenizas es baja porque durante la extraccin se adiciona cido clorhdrico en alguna etapa de la purificacin. El porcentaje de pectina estuvo por debajo al mencionado en el artculo (2.53%), esto debido a que hubieron perdidas de masa durante el proceso. Por ejemplo, pectina adherida al papel aluminio que fue imposible de retirar.

16

VIII. BIBLIOGRAFA ____________________________________________________________________ FERRERA, S. et al. Aislamiento y caracterizacin de las pectinas de algunas variedades de frutos ctricos colombianos. Revista colombiana de ciencias qumicosfarmacuticas. GARCA, B. Obtencin de pectina a partir de cscara de limn deshidratada. UAM. Industrializacin de cscara de limn.

IX. GLOSARIO DE TRMINOS ____________________________________________________________________ .

Pectina: son una mezcla de polmeros cidos y neutros muy ramificados. Constituyen el 30 % del peso seco de la pared celular primaria de clulas vegetales. Grado de esterificacin: se calcula viendo la proporcin de grupos carboxilos

metilado (steres metlicos) entre los carboxilos totales de las molculas de cido galacturnico.

17

ANEXO AGRADO DE ESTERIFICACIN

El grado de esterificacin de las pectinas se calcula viendo la proporcin de grupos carboxilos metilado (steres metlicos) entre los carboxilos totales de las molculas de cido galacturnico. En funcin del grado de esterificacin podremos hablar de distintos tipos de pectinas: Pectinas de alto metoxilo donde GE es mayor al 50%. Pectinas de bajo metoxilo donde GE es menor al 50%

Fundamento: Pectinas de alto metoxilo (HMP, High Metoxyl Pectin) Tienen la capacidad de formar geles en pH cido (2.0 4.5), en presencia de slidos solubles (60-65%) e incluso temperatura elevada; sufren rpidas degradaciones en medios alcalinos. Estas pectinas producen geles ms rgidos y slidos que los de menor esterificacin. (2, 9, 21).

La presencia de grupos carboxilos (que estn protonados) hace que se creen puentes de hidrgeno entre si o con los oxidrilos de una molcula vecina de pectina o del disacrido. La adicin de azcar ejerce un efecto deshidratante sobre los polmeros, lo que coacciona que se favorezcan las interacciones polisacrido-polisacrido de manera hidrfoba y se cree una estructura tridimensional que rodea la molcula de sacarosa altamente hidratadas.

Fig. 2 Estructura de la pectina de alto metoxilo.

18

El grado de esterificacin de esta pectina es superior al 50%, algunos autores mencionan que debe estar entre (55-80%). En el mercado se pueden encontrar 3 tipos de pectinas de HMP basadas segn la rapidez de gelificacin versus el porcentaje de metoxilacin o esterificacin de grupo carboxilo (4). Entre mayor sea su grado de esterificacin las pectinas pueden gelificar a mayores temperaturas y ms rpido.

Tabla 1. Tipos de alto metoxilo segn su porcentaje de esterificacin.

Segn su rapidez de gelificacin y el medio, se las emplea en la industria de las mermeladas, principalmente aquellas que contienen frutas en suspensin o aquellas mermeladas que contienen bajo contenido de pectinas. (Ver tabla 5).

Pectinas de bajo metoxilo (LMP, Low Methoxyl Pectins) Se generan a partir de degradacin de las pectinas de alto metoxilo, por hidrlisis acida, enzimtica u otro factor que reduzca la esterificacin de la molcula de pectina. Presentan una esterificacin menor del 50%, algunos autores indican menor al 45%. Este porcentaje significa que si la cadena de cido galacturnico tiene por ejemplo 100 grupos carboxlicos y solamente 50 estn esterificados se dir que es de bajo metoxilo; para gelificar requieren la presencia de iones calcio y de un pH de 2.8 a 6.5, (2, 21); ya que en estas condiciones los carboxilos se encuentran ionizados y pueden establecer uniones inicas con otras molculas de pectina mediante el Ca++; de esta manera se crea la estructura bsica del gel, en la cual a su vez los grupos hidroxlicos de los residuos del cido galacturnico retienen agua por medio de puentes de hidrgeno, para su gelificacin no necesita sacarosa, aun cuando una pequea cantidad ayuda a proporcionar mayor rigidez ya que favorece a la interaccin carboxilo-calcio.

Algunas veces aparecen grupos amidados en el lugar de los grupos metoxilados. Esta substitucin se acenta en los procesos industriales de desmetilacin en medio amoniacal, dando lugar a pectinas amidadas. 19

PROCEDIMIENTO PARA DETERMINAR EL GRADO DE ESTERIFICACIN. . 1. Se pesan 5 gr. de pectina, se adiciona una mezcla de 5 mL de HCL y 100 mL de etanol al 60% y se agitan durante 10 minutos. 2. La solucin se filtra en un filtro de vidrio poroso lavando con 6 porciones de 15 mL de la mezcla anterior (5 mL HCL y 100mL de etanol al 60%), se lava con etanol al 60% hasta que la muestra queda exenta de cloruros, ste se determina mediante el uso de nitrato de plata. 3. Se lava con 20 mL de etanol y se seca en una estufa a 105 C durante 2.5 horas. 4. Se enfra y se pesa. Se toma 1/10 del peso neto total, se agrega 2 mL de alcohol y 100 mL de agua destilada recin hervida y enfriada, se coloca un tapn y se agita hasta solubilizar la pectina. Esta se titula con NaOH 0.1N, empleando fenoftalena como indicador. El valor que se obtiene se registracomo v1. Luego se aade exactamente 20 mL de NaOH 0.5N, se agita fuertemente y se deja en reposo por 15 minutos, transcurrido este tiempo se adiciona exactamente 20 mL de cido clorhdrico hasta que desaparezca el color rosa. 5. Se titula nuevamente con NaOH 0.1N adicionando 3 gotas de fenoftalena y se registra su valor como v2. 6. Se pasa el contenido a un matraz de destilacin provisto con una trampa Kjeldahl cuyo tubo de desprendimiento llegue a una mezcla de 150 mL de agua exenta de dixido de carbono y 20 mL de HCL 0.1N. 7. Se aade al matraz de destilacin 20 mL de una solucin 1 a 10 de NaOH y se calienta cuidadosamente para evitar un exceso en la formacin de espuma, hasta que se haya recuperado 80-120 mL de la solucin destilada. 8. Se agrega unas cuantas gotas de rojo de metilo al matraz colector y se valora el exceso de cido con NaOH 0.1N, se registra el volumen requerido como S. 9. Se hace una determinacin en blanco sobre 20 mL de HCl 0.1N y se registra el volumen requerido como B. El contenido de amida (B-S) se registra como v3. El clculo del grado de esterificacin (como porcentaje de grupos carboxilos totales) para pectinas no amidadas se determina segn la expresin ( FAO, 1975).

20

ANEXO B Obtencin de pectina a partir de cscara de limn persa

Recepcin de materia prima (Limn)

Obtener el peso de la materia prima y caracterizar los parmetros bromatolgicos

Seleccin de materia prima

Libres de hongos, gusanos y libres de descomposicin. Frutos con maduracin temprana. Obtener el rendimiento

Extraer el jugo (despulpar)

Triturar la cascara y la pulpa obtenida, con,licuadora

Poner en agua, con concentraciones a 300 g por litro y calentar hasta ebullicin 20 min despus de alcanzar el punto de ebullicin. (95-98C/ 15 20 min)

Colar el material triturado y lavarlo con agua destilada en manta de cielo, presionando para extraer la mayor cantidad de agua..

Inactivacin de enzimas pcticas

Decantar Filtrar con manta de cielo y lavar con agua destilada hasta detectar en el agua de desecho cero slidos solubles totales (Brix),

Agregar la misma cantidad de agua usada inicialmente, agregar cido sulfrico, ntrico o, clorhdrico. Hasta obtener pH 1.5-3 mantener en agitacin. 60 minutos a 85C Filtro de tela

Hidrlisis cida

Filtracin de los residuos Filtrar con manta de cielo y lavar con agua destilada hasta detectar en el agua de desecho cero slidos solubles totales (Brix), Concentracin

Precipitacin

Solucin alcohol al 80% con un volumen igual al obtenido. Dejar reposar 1 a 2 horas Disolver la pectina, que est separada en el filtro de tela en agua acidulada (pH 1.5-3) y precipitarla nuevamente con el alcohol.

Lavado (varias veces)

Centrifugar a 5000 rpm durante 20 min

21

Baja temperatura (40 C) utilizando corriente de aire caliente por 12 hrs. Y cuantificar

Secado

Molino de bolas, de un tamao de 1 pulgada aprox. Hasta que pase por un tamiz de malla 80.

Molienda

Lugar seco y en recipientes que la cubran de la contaminacin.

Almacenamiento

22

EVIDENCIAS

Fig.1. Bagazo de limn Fig.2. filtrado con manta cielo

Fig.3. Equipo de reflujo

Fig.4. Inactivacin de enzimas pcticas.

Fig.5. Filtrado de la muestra.

Fig.6. Centrifugacin de la muestra.

23

Fig.7. Cenizas de la pectina Fig.8. Alcalinidad de cenizas

24