Tercer Cuatrimestre

Asignatura:

Química analítica

Actividad 5. Práctica 1: Cuantificación de glucosa en mermeladas

Alumna

L i l i a n a E r e n y P a c h e c o R a i g o z a

Facilitador

F E L I P A C U A U T L E O R T E G A

Yucatán a enero 2014

MARCO TEÓRICO

Una mermelada corresponde a una mezcla de fruta entera, trozada o molida, con una

misma cantidad de azúcar (sacarosa, granulada), que ha sido calentada y evaporada

hasta alcanzar una concentración de azúcar equivalentes a los 65 °Brix.

La adición de azúcar más ciertas sustancias de las frutas producen la consistencia de gel

que conforma la textura de las mermeladas y jaleas. Para lograr esto es necesario que

exista un nivel de acidez y un porcentaje de azúcar adecuados.

Para determinar la concentración de glucosa en mermelada es necesario hidrolizar las

moléculas de sacarosa en glucosa y fructosa en presencia de ácido 3,5-dinitrosalicílico

(DNSA) generando una coloración rojo-marrón.

OBJETIVOS

Determinar la concentración de glucosa en una muestra de mermelada.

DESARROLLO

Material Equipo Reactivos

Matraz aforado Balanza Muestras de mermelada

Pipeteas Baño de agua DNSA (ácido 3,5-

dinitrosalicílico)

Matraz Erlenmeyer Espectrofotómetro Ácido sulfúrico H2SO4

Embudo Solución de NaOH

Papel filtro Tartrato de sodio y

potasio

Tubos de ensaye

Preparación del reactivo DNSA (ácido 3,5-dinitrosalicílico)

Disuelvan 10 g de DNSA en 200 ml de NaOH 2.0M.

Calienten la disolución y mezclen perfectamente.

Disuelvan 300 g de tratrato de sodio y potasio en 500 ml de agua (estabilizante

de color).

Mezclen ambas disoluciones, agiten y enrasen a 1.0 l con agua destilada.

Cuantificación de azúcares totales

1. Pesen 1.0 g de mermelada en un matraz Erlenmeyer y añadan 10 ml de H2SO4

2M.

2. Calienten en baño de agua hirviendo durante 20 minutos

3. Dejen enfriar y añadan con mucho cuidado 12 ml de NaOH al 10% p/v

4. Agiten y filtren a un matraz aforado de 100 ml y enrasen con agua destilada.

5. Transfieraan 10 ml de la disolución de la mermelada a otro matraz aforado de

100 ml y enrasar con agua destilada.

Cuantificación de azúcares reductores

1. Pesen 3.0 g de mermelada en un matraz Erlenmeyer y añadan 50 ml de agua

destilada.

2. Calienten y agiten durante 10 minutos

3. Filtren a un matraz aforado de 100 ml y enrasen con agua destilada.

4. Transfieran 10 ml de la a otro matraz aforado de 100 ml y enrasar con agua

destilada.

ANÁLISIS DE LOS RESULTADOS

Obtención de la curva de calibración

1. Preparen la solución estándar de glucosa (15 mg/ml): pesen 1.5 g de glucosa en

un matraz aforado de 100 ml y enrasen con agua destilada.

2. Etiqueten 5 matraces aforados de 100 ml con las letras A, B, C, D y E.

3. En cada matraz transfieran los volúmenes de solución estándar de glucosa y

agua destilada de acuerdo a la siguiente tabla:

Matraz A B C D E

Volumen de solución estándar de

glucosa (ml)

2 3 6 8 10

Volumen de agua destilada (ml) 98 97 94 92 90

Concentración de glucosa (mg/ml) 0.

3

0.4

5

0.

9

1.

2

1.

5

1. Etiqueten y llenen seis tubos de muestra tal y como se muestra en la siguiente

tabla:

Número de la muestra Blanc

o

1 2 3 4 5

Solución estándar de glucosa

(matraz)

N/A A B C D E

Volumen de solución estándar

de glucosa (ml)

0 1 1 1 1 1

Volumen de reactivo DNSA (ml) 1 1 1 1 1 1

Volumen de agua destilada (ml) 3 2 2 2 2 2

2. Calienten los tubos en agua hirviendo durante 5 minutos.

3. Dejen enfriar los tubos y añadan 6 ml de agua destilada a cada tubo.

4. Midan la transmitancia de cada uno de los tubos a 430 nm en el

espectrofotómetro.

Concentración de

glucosa (mg/ml)

Transmitancia

(lectura del

Spektra, T%)

Absorbanci

a (A)

Absorbancia

específica de la

glucosa (A –

Ablanco)

0 (Blanco) 27.54 0.56 0

0.30 23.44 0.63 0.07

0.45 20.04 0.69 0.13

0.90 18.21 0.74 0.18

1.20 15.13 0.82 0.26

1.50 14.45 0.84 0.28

8. Grafiquen los valores de absorbancia vs. Concentración, para obtener la curva

de calibración.

0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2 1.4 1.60.0000

0.0500

0.1000

0.1500

0.2000

0.2500

0.3000f(x) = 0.17172619047619 x + 0.0345982142857143R² = 0.961377864535206

Curva de Calibración de Glucosa

Concentración de Glucosa (mg/mL)

Abso

rban

cia

Medidas de las muestras de mermelada

1. Coloquen 1 ml de la disolución de mermelada, 1 ml del reactivo de DNSA y 2 ml

de agua destilada en un tubo de ensayo.

2. Calienten los tubos en agua hirviendo, durante 5 minutos.

3. Dejen enfriar los tubos y añadan 6 ml de agua destilada a cada tubo .

4. Determinen la transmitancia de cada tobo en el espectrofotómetro a 430 nm.

5. Los valores obtenidos para las muestras fueron los siguientes:

Muestr

a

Transmitancia

(lectura del

Spektra, T%)

Absorbanci

a

(A)

Absorbancia

específica de la

glucosa

(A – Ablanco)

1 18.6 0.73 0.17

2 21.3 0.67 0.11

6. Con la ayuda de la curva estándar, determinen la concentración de glucosa en

las muestras.

Utilizando la ecuación de la gráfica y=0.1717 x+0.0336 despejando x

x= y−0.03360.1717

Sustituimos la absorbancia para cada muestra y obtenemos valores de concentración

para las muestras, resultados en la siguiente tabla:

Muestra

Transmitancia(lect

ura del Spektra, T

%)

Absorbanci

a

(A)

Absorbancia

específica de

la glucosa

(A – Ablanco)

Concentraci

ón de

glucosa

(mg/ml)

1 18.6 0.73 0.17 0.79

2 21.3 0.67 0.11 0.44

1. Finalmente determinen la concentración de glucosa por gramo de mermelada,

no olviden considerar las diluciones de cada una de las muestras.

a) Considerando que para obtener la concentración de la muestra se aplica la

siguiente fórmula:

C=PmFd

Donde:

C = Concentración de la muestra expresado en mg/mL

Pm = Peso de la muestra expresado en mg

Fd = Factor de dilución de la muestra (mL)

b) El factor de dilución de la muestra de mermelada de acuerdo a la preparación

para la cuantificación de azúcares totales es:

Peso de la muestra: 1 g

Volumen de primer aforo: 100 mL

Volumen de alícuota: 10 mL

Volumen final de aforo: 100 mL

Fd=100mL10mL

∗100mL=1000mL

c) Despejando Pm y sustituyendo para cada muestra:

Pm=C∗Fd

Pm=0.79 mgmL

∗1000mL=790mg=0.79 g

Pm=0.44 mgmL

∗1000mL=440mg=0.44 g

La concentración de glucosa por gramo para la muestra 1 es de 0.79 g y para la muestra

2 es de 0.44 g.

CONCLUSIONES

En esta práctica se observó la utilización correcta del espectrofotómetro como método

instrumental para determinar la concentración de azúcares en una sustancia orgánica.

REFERENCIAS

Skoog Douglas, Análisis Instrumental, México, 2000, Ed Interamericana

Daniel C. Harris; Análisis Químico Cuantitativo, 1999.Ed. Reverté