Pruebas de Interacción Primaria

Curso de Inmunología Básica Trabajo Práctico N° 2

Clasificación de las pruebas serológicas Interacción primaria: - Inmunofluorescencia

- Enzimoinmunoensayo

- Radioinmunoensayo

- Inmunocromatografía

- Ensayo de polarización de luz fluorescente

Interacción secundaria: -Aglutinación

-Precipitación

Interacción terciaria: -Fijación de complemento

-Pruebas intradérmicas

¿Qué detectan las pruebas de interacción primaria?

Detectan la unión directa (o interacción molecular) entre un Ag determinado y el Ac específico para ese Ag se conocen como pruebas

de interacción primaria.

¿Para que pueden ser utilizadas las pruebas de interacción primaria?

Estas pruebas pueden ser utilizadas para detectar presencia, localización y otras para cuantificar tanto Ag como Ac en muestras problema .

¿Las pruebas de interacción primaria son visibles directamente?

NO. La formación del complejo Ag-Ac se evidencia porque uno de los reactivos Ag o Ac está marcado.

El "marcado" del Ag o del Ac se realiza mediante la unión covalente con elementos que emiten una señal característica y observable.

Al reactivo (Ag o Ac) marcado.

¿A que se denomina conjugado?

¿Que sustancias marcadoras se utilizan para la fabricación de conjugados y como se

detecta la señal emitida?

¿Qué variantes pueden tener las pruebas de interacción primaria?

Inmunohistoquímica

Inmunohistoquímica

Inmunofluorescencia

Luz

excitante

Luz

emitida

Inmunofluorescencia

Ensayo de polarización de la luz fluorescente

(FPIA, FPA)

Principio:

La velocidad de rotación de las moléculas en solución es inversamente

proporcional a su tamaño

Ag marcado libre

Alta velocidad de rotación

Valor mP bajo

Ag marcado unido a Ac específico

Menor velocidad de rotación

Valor mP alto

Ensayo con Ag marcado

para detección de Acs

Ensayo competitivo para

detección de Ag

Moléculas pequeñas

Rotación rápida

Baja polarización

Moléculas más grandes

Rotación lenta

Alta polarización

Unión

Sin Ag

Ag marcado unido a Acs

Alta polarización

Ag en la muestra desplaza al Ag

marcado

Baja polarización

Competencia

Ag marcado

RESULTADO NEGATIVO

RESULTADO POSITIVO

TEST INVALIDO

TEST INVALIDO

Muchas gracias por su

atención!!

C. Lützelschwab, 2002

EJERCICIOS DE LA GUIA

Células dendríticas identificadas mediante anticuerpos marcados con peroxidasa.

Hematoxilina como coloración de fondo

C. Lützelschwab, 2002

Tejido sinovial en rodilla de humano. Identificación de Molécula de Adhesión Vascular 1 (VAP-1) en el

endotelio cuboidal y capas profundas de vénulas de endotelio alto. Inmunoperoxidasa y coloración

de hematoxilina (Akin et al, 2001, Infect Immun, 69(3):1774-1780)

C. Lützelschwab, 2002

Explante de recto de Bovino inoculado con E. coli. Las bacterias adheridas a la mucosa

están teñidas de rojo (flecha). Anticuerpos anti E. coli (O157) marcados con fosfatasa

alcalina, el sustrato utilizado es Vector Red y hematoxilina como coloración de fondo

(Baelher y Mosley, 2000. FEMS Microbiol Lett, 185:239-242)

C. Lützelschwab, 2002

Identificación de fibras de actina en el citoplasma mediante anticuerpos

anti-actina marcados con rodamina

C. Lützelschwab, 2002

Immunofluorescencia en células de mieloma. Plasmocitos productores de IgA, identificados

con anticuerpos anti IgA marcados con FITC x400, ©grip