Proyecto: Extracción del ADN del hígado de pollo.
18
UNIVERSIDAD DE CUENCA FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS PROYECTO DE AULA: EXTRACCIÓN EL ADN INTEGRANTES: LIBIA CENTENO – LUIS PACCHA – ELENA POMAQUIZA – DIANA SUQUISUPA 08/12/2014 1
-
Upload
luis-armando-paccha-aguilar -
Category
Data & Analytics
-
view
3.514 -
download
11
Transcript of Proyecto: Extracción del ADN del hígado de pollo.
UNIVERSIDAD DE CUENCAFACULTAD DE CIENCIAS
AGROPECUARIASPROYECTO DE AULA:
E X T R A C C I Ó N E L A D N
INTEGRANTES:
LIBIA CENTENO – LUIS PACCHA –
ELENA POMAQUIZA – DIANA SUQUISUPA
08/12/2014 1
OBJETIVOS:
GENERAL:- EXTRACCIÓN E IDENTIFICACIÓN DEL ADN EN EL HÍGADO DE POLLO MEDIANTE UN PROCESO FÁCIL PERO ESPECÍFICO.
ESPECÍFICOS:-EXTRAER EL ADN DEL HÍGADO DE POLLO UTILIZANDO MATERIALES DE LABORATORIO Y REACTIVOS.-OBSERVAR LA ESTRUCTURA FIBRILAR DEL ADN.
08/12/2014 2
• Planteamiento del Problema:
¿Cuál es el método más propicio para extraer y observar
las fibras de ADN?
• Hipótesis:
Con un método fácil y sencillo se puede obtener el ADN del hígado de
pollo y se puede observar sus fibras.
• Objetivo:
Observar e identificar las fibras de ADN posteriormente de haber
realizado el proceso de la extracción del ADN.
08/12/2014 3
CONSEPTO:
Molécula presente en casi
todas nuestras células que
contiene
la información genética.
Encargado de transmitir la
información de lo que
somos a nuestros hijos.
Como vemos, la palabra
clave es “información
Cada molécula de ADN es
una especie de palabra
larguísima
ADN
AT
CG
08/12/2014 4
IMPORTANCIA
Solo el 5% del ADN de los vertebrados es codificante.
El 95% restante,considerado hasta hacepoco ADN «basura».
Un estudio harealizado un mapaglobal de las zonasreguladoras delADN dentro de unaregión del genoma,elcomplejo Iroquois.
Los investigadoresidentificaron unaestructura 3D dentro delcomplejo Iroquois, en laque habría dos genesfísicamente juntos y untercero separado de ellos
08/12/2014 5
EST
RU
CT
UR
A
Cada molécula de ADN está constituida
por dos cadenas o bandas
Estas cadenas forman una especie de
escalera retorcida que se llama doble
hélice.
La molécula de ADN ocupa el centro del
nucleótido y está flanqueada por un
grupo fosfato a un lado y una base al
otro.
Los nucleótidos de cada una de las dos
cadenas que forman el ADN establecen
una asociación específica con los
correspondientes de la otra cadena.
En 1953, el bioquímico estadounidense
James Watson y el biofísico británico
Francis Crick publicaron la primera
descripción de la estructura del ADN.
08/12/2014 6
08/12/2014 7
EXTRACCIÓN
DEL ADN
En PCR, el
ADN es el
analito.
La extracción
consta de una
etapa de lisis y
otra de
purificación.
De los tres
pasos que
componen el
análisis de
patógenos por
PCR, la
extracción de
ADN es el más
conocido y
sobre el que
más control
La extracción
del ADN de
células o virus
es un paso
previo en
muchos
procedimiento
s analíticos y
diagnósticos.
08/12/2014 8
08/12/2014 9
ETAPAS DE
EXTRACCIÓN.
1° Lisis de las
células o virus.
2° Degradación de
la fracción
proteica asociada
al ADN.
3° Purificación.
Consta de 3 fases:
•Precipitación del ADN.
•Lavado del Pellet.
•Recuperación.
Laconfirmaciónde la presenciade ADN se llevaa cabomediante:
1°Electroforesi
s
2) Posterior tinción con bromuro de
etidio.
3) Observación con luz UV odirectamente alespectrofotómetromediante espectro deabsorción de 200 a 350 nm.
08/12/2014 10
08/12/2014 11
INHIBIDORES
DE LA PCR
Sustancias
que
interfieren
con las
moléculas de
ADN
polimerasas
termoestable
s.
Otra
importante
fuente de
inhibición son
los propios
reactivos que
se usan en el
proceso de
extracción de
ADN.
Extracción de ADN en suspensiones
bacterianas.
Las suspensiones bacterianas, son
quizás las que ofrecen menos
problemas por la homogeneidad y
riqueza del material.
Las suspensiones densas de bacterias
gram-negativas pueden liberar
cantidad suficiente de ADN
08/12/2014 12
El laboratorio de
Microbiología que
decide incorporar la
PCR a sus métodos de
investigación de
bacterias patógenas
en alimentos, busca
rapidez y simplicidadAnalizar directamente un
caldo de enriquecimiento
tras un proceso de
extracción primaria de
ADN (lisis celular) suele
producir resultados
satisfactorios.Aquellas matrices cuya presencia
de inhibidores no pueda ser
contrarrestada diluyendo el
extracto de ADN obligarán a
plantear la adopción técnicas de
extracción de ADN que aseguren
un extracto puro.
Obtención
de ADN sin
paso de
purificación.
Chelex®
Ebullición
(combinado
con
congelación)
DNAready®
(Microbial)
08/12/2014 13
REALIZACIÓN DEL EXPERIMENTO:
Mate
riale
s y
Méto
dos.
Agua Destilada
Alcohol etílico
Detergente líquido.
Gasas.
Tejido animal (hígado de pollo).
Vaso de Precipitación.
Pipeta.
Licuadora. 08/12/2014 14
08/12/2014 15
1°Escoger la mitad del hígado y cortarlo en pedazos.
Ubicarlo en el recipiente de la licuadora y licuarlo con 50 ml de agua
destilada.
Filtrar la mezcla con ayuda de gasas.
Medir la mitad del filtrado y ubicarlo en otro recipiente.
Agregar sal en igual cantidad del filtrado y mezclar por 1 minuto.
2°
3°
4°
5°
PROCEDIMIENTO
Luego agregar 1 ml de detergente y mezclar por 5 minutos.
Posteriormente agregar alcohol etílico haciéndolo resbalar por
las paredes del recipiente
Las fibras de ADN irán lentamente.
7°
8°
6
08/12/2014 16
RESULTADOS Y ANÁLISIS:
Los resultados del primer experimento que realizamos,
no fue satisfactorio ya que los materiales que se
utilizaron no fueron los adecuados.
El segundo experimento, sin embargo, nos dio
excelentes resultados por el cuidado que se tuvo en el
proceso.
Afortunadamente en este segundo experimento se pudo observar claramente las fibras de ADN.
08/12/2014 17
CONCLUSIONES:
Este procedimiento fue fácil y sencillo, el cual nos ayudó a observar de una manera más
fácil las fibras de ADN.
La calidad de la observación de las fibras depende del tipo de materiales que se utilice y
el método que se emplee.
08/12/2014 18
