C U R S O DP R O T O C O L O : G e n o t i p i fe n h u e v o s , l a r v a s y h e mC o r r e l a c i ó n s e r o t i p oS a l v a d o r . 2 0 1 1P r e s e n t a d o p o r : DI n t r o d u c c i ó n .A n i v e l m u n d i a l e lE n f e r m e d a d e s q u e h a o c u pm o r t a l i d a d , d e l o s r e p o r t em u c h o s p a í s e s c o m o á r e a ss e h a r e p o r t a d o e n t o d a s l aP a r a s e p t i e m b r e 2 0 1 1 s e t iS a n S a l v a d o r y S a n M i g u e l3 8 0 m i l l o n e s e n r i e s g o d e tS e h a c e n e s f u e r z o s m u n d i ac o n t r o l a r y e r r a d i c a r e l v e cr e s u l t a d o s p r o m e t e d o r e s .d e s t a c a e l u s o d e q u í m i c o sr i e s g o d e c a u s a r i n t o x i c a c i oA l m o m e n t o e l D e n ga q u e s e i n v i e r t e n m i l l o n e sd e r i v a d o s d e l p r e s u p u e s t o*1 Hay; Simón. y otros. Un mapa mundial de malaria: Endemicidad de

2007.

Protocolo dengue Master Dr. Antonio Vásquez Hidalgo D E P C R D E N G U E . E L S A L V A D O R 2 0 1 1f i c a c i ó n p o r R T - P C R / R S S - P C R d e l v i r um b r a s a d u l t a s c o m o d i a g n ó s t i c o p r e lc i r c u l a n t e e n l a z o n a m e t r o p o l i tM a s t e r D r . A n t o n i o V à s q u e z H i d a l g oM i c r o b i ó l o g o M e d i c o S a l u b r i s t aD o c e n t e d e l a F a c u l t a d d e M e d i c i n aU n i v e r s i d a d d e E l S a l v a d o r .P a l u d i s m o y e l D e n g u e s e c o n s i d e r a n c op a d o a l g ú n l u g a r e n l a s d i e z p r i m e r a s c a u s a se s e p i d e m i o l ó g i c o s d e l M i n i s t e r i o d e S a l u ds e n d é m i c a s y e p i d é m i c a s c o n u n a l t o r i e s g oa s r e g i o n e s d e l p l a n e t a . 1e n e s o s p e c h a p o r d e n g u e m a s d e 8 0 0 0 c a s oc o n e l m a y o r n ú m e r o d e c a s o s . A n i v e l m u nr a n s m i s i ó n p o r M a l a r i a y D e n g u e . * 1a l e s a u s p i c i a d o s o d i r i g i d o s p o r l a O M S , O Pc t o r , p e r o q u e h a s t a e l m o m e n t o h a s i d o i m pS e h a n u t i l i z a d o d i v e r s o s m é t o d o s d e c o n t r oe n l a s p l a n t a c i o n e s y á r e a s d o m i c i l i a r e s , c o no n e s e n e l s e r h u m a n o . 2g u e e s u n p r o b l e m a d e S a l u d P ú b l i c a y d e g os d e d ó l a r e s e n e r r a d i c a r e l v e c t o r y t r a t a rn a c i o n a l a s i g n a d o a s a l u d .Hay; Simón. y otros. Un mapa mundial de malaria: Endemicidad de Plasmodium falciparum

1Protocolo dengue Master Dr. Antonio Vásquez Hidalgo u s d e l d e n g u ei m i n a r v e r s u st a n a d e S a n

o m o u n a d e l a sd e m o r b i l i d a d y. . L o c a l i z a d o e n. D e i g u a l f o r m ao s , r e p o r t á n d o s en d i a l s e e s t i m a 1

P S y o t r o s , p a r ap o s i b l e d e l o g r a ro l , e n l a s q u e s en e l c o n s i g u i e n t eo b i e r n o s , d e b i d ol a e n f e r m e d a d ,

Plasmodium falciparum en el

E l S a l v a d o r n o e s l ap o b l a c i o n a l , h a c e f a v o r a b ls e c a y l l u v i o s a c o n t e m p et r o p i c a l e s y d e s p l a z a m i ec o n d i c i o n e s i d e a l e s p a r a s uJ U S T I F I C A C I O N .A l u t i l i z a r e l P C R c o mc a s o s d e D e n g u e e n l a tc o n t r i b u i r a l a c o m u n i d a dz o n a y t o m a r l a s m e d i de p i d e m i o l ó g i c o .O B J E T I V O SG E N E R A L :I d e n t i f i c a r p o r m e d iy z a n c u d o s d e l s e r o t i p o c i r cE S P E C I F I C O S :1 . U t i l i z a r e l R T - P C R e n l aa d u l t a s h e m a t ó f a g a s .2 .

I d e n t i f i c a r l a s z o n a s p o t3 . C o r r e l a c i o n a r e l t i p o d e s eH I P O T E S I SH 1 : L a c o r r e l a c i ó n d i a g n o s t i c ah e m a t ó f a g a s p o r m e d i o d e R TH 0 : N o e x i s t e c o r r e l a c i ó n d i a gh e m b r a s h e m a t ó f a g a s p o r m

Protocolo dengue Master Dr. Antonio Vásquez Hidalgo a e x c e p c i ó n , d e b i d o a q u e p o r s u c l i m a t o l ol e l a t r a n s m i s i ó n p a l ú d i c a , c o n p r e d o m i n i oe r a t u r a s e n t r e 2 2 0 C a 3 0 0 C e n z o n a s c o s tn t o e n a l t u r a s m e n o r e s d e 3 0 0 m t su e s t a n c i a y p r o p a g a c i ó n .m o m é t o d o d e d i a g n o s t i c o d e e x a m e n d e l at i p i f i c a c i ó n d e h u e v o s , l a r v a s y h e m b r a sa p r e v e n i r e l r i e s g o d e c u a l s e r o t i p o e s t a ca s c o r r e s p o n d i e n t e s e n e l p l a n d e v i g i l a

i o d e R T - P C R y R S S - P C R l a g e n o t i p i f i c a c i ó n dc u l a n t e e n e l p a í s .a g e n o t i p i f i c a c i ó n d e g r u p o s d e h u e v o s , l at e n c i a l e s d e r i e s g o e n l a z o n a m e t r o p o l i t a n ae r o t i p o e n r e l a c i ó n a l c i c l o d e v i d a d e l z a n c u d o d

a e n t r e g e n o t i p i f i c a c i ó n d e g r u p o s d e h u e v o s , l a r vT - P C R a d e n g u e i n d i c a e l s e r o t i p o d e l v i r u s d e l d eg n o s t i c a e n t r e g e n o t i p i f i c a c i ó n d e g r u p o s d e h u e ve d i o d e R T - P C R a d e n g u e i n d i c a e l s e r o t i p o d e l v i

2Protocolo dengue Master Dr. Antonio Vásquez Hidalgo o g í a y d e n s i d a do e n l a e s t a c i ó nt e r a s o s a b a n a sh a c e n p r o p i c i o

b o r a t o r i o e n l o sa d u l t a s , p u e d ec i r c u l a n d o e n l aa n c i a y c o n t r o le h u e v o s , l a r v a s

r v a s y h e m b r a sd e S a n S a l v a d o re l d e n g u e .v a s y h e m b r a se n g u ev o s , l a r v a s yi r u s d e l d e n g u e

M A R C O T E O R I C OA N T E C E D E N T E SE n E l S a l v a d o r d e s d ec o n t r o l y e r r a d i c a c i ó n e n t o m oc o m u n i d a d e s u r b a n o m a r g i n aE n 1 9 9 3 l a O M S t o m óe n c o o r d i n a c i ó n c o n l o s e s t a de p i d e m i o l ó g i c o l o c a l .E l c i c l o d e v i d a :

H u e v o : l a h e m b r a dp u e d e d e p o s i t a r e n t r e 1 0 0 at e m p e r a t u r a d e 2 1 C . l o s h u e v

Protocolo dengue Master Dr. Antonio Vásquez Hidalgo

e h a c e v a r i a s d é c a d a s , s e h a n r e a l i z a d o m é t o do l ó g i c a d e l o s v e c t o r e s e n z o n a s e n d é m i c o s y a i da l e s y r u r a l e s d e n u e s t r o p a í s p o r e l M S P A S .e l l i d e r a z g o e n l a “ D e c l a r a c i ó n M u n d i a l e n l a l u cd o s m i e m b r o s p a r a c r e a r s i s t e m a s e f i c a c e s d e V i

e p o s i t a l o s h u e v o s e n p a r t e s h ú m e d a s o e n a ga 5 0 0 h u e v e c i l l o s , e c l o s i o n a n d o e s t o s e n t r e 2 4v o s p u e d e n r e s i s t i r h a s t a p o r 4 5 0 d í a s .

3Protocolo dengue Master Dr. Antonio Vásquez Hidalgo

d o s d e v i g i l a n c i a ,d e n t i f i c a d o s e n l a sc h a A n t i p a l ú d i c a ”i g i l a n c i a y c o n t r o l

g u a . C a d a h e m b r a4 a 7 2 h r s a u n a

L a r v a s : v i v e n d e b a j on a d a n h a c i a e l f o n d o h a c i e n dL a s l a r v a s p o r l o g e n e r a l t i e n el o s d o s d í a s p i e r d e e l e x o e s q uL 4 s e d e s a r r o l l a e n t r e u n o a dl o h a c e f o r m a n d o u n á n g u l o d

A d u l t o s : e s e l z a n c u dm a n c h a s p l a t e a d a s a l o s l a d oh o r i z o n t a l .

Protocolo dengue Master Dr. Antonio Vásquez Hidalgo

d e l a s u p e r f i c i e d e l a g u a t o m a n d o s u a l i m e n td o u n o c h o y l u e g o r e g r e s a n a l a s u p e r f i c i e p a r ae n 4 f a s e s o e s t a d i o s l a r v a l e s : L 1 e s l a q u e e c l o s iu e l e t o y p a s a a l s e g u n d o e s t a d i o L 2 ; e l t e r c e r y cd o s d í a s . L a L 4 s e d e s a r r o l l a e n p u p a , l a l a r v a c u a nd e 4 5 g r a d o s .

d o q u e v i v e e n c a s o o p r o x i m a l a e l l a , e s d eo s d e l c u e r p o , t i e n e a n i l l o s b l a n c o s e n l a s p a t a s ,

4Protocolo dengue Master Dr. Antonio Vásquez Hidalgo

t o . G e n e r a l m e n t eo b t e n e r o x i g e n o .i o n a l d e l h u e v o , ac u a r t o e s t a d i o L 3 ,n d o p o s a e n a g u a

c o l o r a z u l n e g r o ,s e p o s a e n f o r m a

L a h e m b r a e s h e m a t ó f a g a o av e c e s a l d í a , r e p o s a e n l a v i v ih u e v o s o t r a s v i v e n a m e n o s dP r i n c i p a l e s M é t o d o s d e C o n t rE n t r e l o s p r i n c i p a l e sM é t o d o q u í m i c o . S e h a n d e s cy o r g a n o c l o r a d o s , p e r i t r o i d eu l t i m a d é c a d a s e h a n r e p o r to r g a n o c l o r a d o s y p e r i t r o i d e s .a n u e v a s g e n e r a c i o n e s 2 6 , 2 . CC u l t u r a l , 6 . C o n t r o l B i o l ó g i c o ,T é c n i c a d e R T - P C R y R S S - P C RE s u n a V a r i a n t e d e l a P C R d o nA R N p a r a s i n t e t i z a r e l A D N c oM A T E R I A L Y M E T O D O S .A .

E n c a d a b l o q u e s e a g r e gh e m b r a s a d u l t a s s e t a p a nB .

M u e s t r a s d e s u e r o e ns o s p e c h a d e d e n g u e .C .

M u e s t r a s d e h u e v o s y l

Protocolo dengue Master Dr. Antonio Vásquez Hidalgo

a n t r o p o f i l i c a , p i c a d e d í a o d u r a n t e l a n o c h e , p ui e n d a . A l g u n a s h e m b r a s p u e d e n v o l a r h a s t a 3 kd e 5 0 m e t r o s d e l a s c a s a s d o n d e n a c i e r o n .r o l .s m é t o d o s d e c o n t r o l u t i l i z a d o s a n i v e l m u n dc r i t o d o s : i n s e c t i c i d a y h e r b e c i d a , d e r i v a d o s d e os y o t r o s . S o n c o n s i d e r a d o s c o m o m é t o d o s t et a d o c a s o s d e r e s i s t e n c i a e s p e c i a l m e n t e a l o s o2 2 - 2 5 T a m b i é n s e h a e n c o n t r a d o t r a n s m i s i ó n h e r eC o n t r o l f í s i c o , 3 . C o n t r o l P a t ó g e n o , 4 . C o n t r o l P e7 . C o n t r o l N a t u r a l y 8 . C o n t r o l l e g a l .R n d e i n i c i a l m e n t e s e r e a l i z a u n a T r a n s c r i p c i ó n r e v eo m p l e m e n t a r i o q u e l u e g o e s a m p l i f i c a d o m e d i a n tM E T O D O L O G I A .g a n 6 v a s i j a s d e 2 5 0 m l c o n t e n i e n d o : 1 0 0 h u e v on l o s r e c i p i e n t e s c o l o c a n d o u n a g a s a .n r a t o n e s l a c t a n t e s a l i m e n t a d o s c o n h e m bl a r v a s p o r m e d i o d e i d e n t i f i c a c i ó n P C R

5Protocolo dengue Master Dr. Antonio Vásquez Hidalgo

e d e p i c a r h a s t a 8k m p a r a p o n e r l o sd i a l , 1 1 - 2 1 e s t á n : 1 .o r g a n o f o s f o r a d o se m p o r a l e s . E n l ao r g a n o f o s f o r a d o s ,e d i t a r i a p o r g e n e se r s o n a l , 5 . C o n t r o l

e r s a a p a r t i r d et e u n a P C R .s , 1 0 0 l a r v a s , 1 0 0r a s a d u l t a s c o n

D .

E x t r a c c i ó n A R N V i r a l . Es e g ú n p r o t o c o l o e s t a b l eE .

U t i l i z a r R S S - P C R p a r ae l e c t r o f o r e s i s e n g e l d ee x t r a í d o s .F . M é t o d o e s t a d í s t i c o . S e uu t i l i z a n d o e l m é t o d o p o r dG . Á r e a d e E s t u d i o . E l e n s a yH . C r i t e r i o s d e s e l e c c i ó n . P ad e i n c l u s i ó n : 1 . M u e s t r aA e d e s A e g y p t i 3 . I g u a l n ú7 . I g u a l o b s e r v a c i ó n a l a se x c l u s i ó n , e s t á n : 1 . M u e sl o s r e c i p i e n t e s , 3 . M a l dD e s i g u a l d a d e n l a s o b s e r vi n a d e c u a d a s .I . S e s g o s : C a r g a v i r a l d i s m i nj

. E x t r a c c i ó n d e A R N v i r a l y s í" E l s o b r e n a d a n t e ( 1 2 5 µ L ) d eC o r p . ) y s e i n c u b a r a a t e m p ec l o r o f o r m o y d e s p u é s d e e x t rm e z c l a c o n 2 5 0 µ L d e i s o p r ol a v ó c o n 5 0 0 µ L d e e t a n o l 7 5e n 5 0 µ L d e a g u a t r a t a d a c o ns í n t e s i s d e A D N s e u s a r o n 5 µq u e c o n t e n í a 2 0 0 µ M d e c a d0 , 2 5 U d e e n z i m a T t h D N A P oµ L . L a r e a c c i ó n s e l l e v ó a c a b oR S S - P C RV i r u s d e r e f e r e n c i a y a i s l a d o sd e s c r i t o s p o r H a r r i s y o t r o s 5 ya d i c i o n a r o n a u n a m e z c l a d e0 , 3 5 - 0 , 8 µ M d e l o s i n i c i a d o( P r o m e g a ) , 5 µ L d e b u f f e r d ep o r 3 2 c i c l o s d e 9 4 ° C p o r 1 m° C p o r 1 0 m i n . E l A R N d e c ar e p r o d u c i b i l i d a d d e l r e s u l t a d o

Protocolo dengue Master Dr. Antonio Vásquez Hidalgo l A R N v i r a l s e e x t r a e u t i l i z a n d o e l Q I A a m p v i re c i d o p o r e l f a b r i c a n t e .a i d e n t i f i c a c i ó n d e g e n o t i p o , e l a n á l i s i se a g a r o s a 1 . 5 % d e l A R N e x t r a í d o a p a r t i r du t i l i z a r a l a P r u e b a d e F i s h e r , a n á l i s i s d e v a r i a n z a ,d i s e ñ o s d e b l o q u e s a l a z a r . 3 2 - 3 4y o s e r e a l i z a r a e n l o s l a b o r a t o r i o s d e C E N S A L U Da r a l a s e l e c c i ó n d e l a m u e s t r a , s e u t i l i z a r a l o s s i ga e n e s t a d o h u e v o , l a r v a , h e m b r a a d u l t a , 2 . Mú m e r o d e h u e v o s , l a r v a s y a d u l t a s h e m b r a s e n c as 2 4 h r s , 8 . C o n d i c i ó n a m b i e n t a l a d e c u a d a . E n t rs t r a c o n t a m i n a d a . 2 . D i f e r e n t e e s p e c i e d i f e r e n t ei l u c i ó n o c o n c e n t r a c i ó n t é c n i c a P C R , 4 . T e s t i g ov a c i o n e s , 6 . T r a t a m i e n t o i n a d e c u a d o , 9 . C o n d i c i on u i d a , m a l i d e n t i f i c a c i ó n m o r f o l ó g i c a , m a l u s o d eí n t e s i s d e A D N *e c u l t i v o s i n f e c t a d o s s e m e z c l a r a c o n 3 7 5 µ L d er a t u r a a m b i e n t e p o r 5 m i n . A l t é r m i n o s e a d i c i or a c c i ó n s e c e n t r i f u g ó a 1 2 0 0 0 r p m . L a f a s e a c u oo p a n o l y l u e g o d e c e n t r i f u g a c i ó n a 1 2 0 0 0 r p m% y s e s e c a a t e m p e r a t u r a a m b i e n t e . E l A R N v i rn d i e t i l - p i r o c a r b o n a t o ( D E P C ) y l u e g o s e a l m a c e nµ L d e l A R N e x t r a í d o q u e s e a d i c i o n a r o n a u n a ma d N T P , 0 , 5 - 1 , 0 µ M d e i n i c i a d o r e s a n t i - s e n t i d o ,o l i m e r a s a ( P r o m e g a ) , 2 , 5 µ L d e b u f f e r , e n u n v o lo a 9 0 ° C p o r 2 m i n y l u e g o a 6 0 ° C p o r 3 0 m i n . “s l o c a l e s d e c a d a s e r o t i p o s e h a r á u s o m o d i f i c a ny M i a g o s t o v i c h y o t r o s . B r e v e m e n t e , 1 0 µ L d e Ae r e a c c i ó n q u e c o n t e n í a 2 m M d e M g C l 2 , 2 0 0 µ Mo r e s , 5 µ L d e b u f f e r q u e l a n t e , 0 , 2 5 U d e T t he n z i m a , e n u n v o l u m e n f i n a l d e 5 0 µ L . L a a m p l i fm i n , 5 4 ° C p o r 1 m i n y 7 2 ° C p o r 2 m i n c o n u n a e xa d a c e p a f u e a m p l i f i c a d o p o r m á s d e u n a v e z po .

6Protocolo dengue Master Dr. Antonio Vásquez Hidalgo r a l R N A M i n i K i ts s e h a c e p o rd e l o s s e r o t i p o s, t a b l a d e A N O V Ag u i e n t e s c r i t e r i o sM i s m a e s p e c i e d ea d a r e c i p i e n t e , 4 . ,r e l o s c r i t e r i o s d ee a l a d e s c r i t a e no o t r a e s p e c i e , 5 .o n e s a m b i e n t a l e se l a t é c n i c a P C R .T r i z o l ( I n v i t r o g e no n a r a n 1 0 0 µ L d eo s a r e c u p e r a d a s ee l p r e c i p i t a d o s er a l s e r e s u s p e n d i ón ó a - 7 0 ° C . P a r am e z c l a d e r e a c c i ó n1 m M d e M n C l 2 ,l u m e n f i n a l d e 2 5

d o l o s p r o t o c o l o sA D N v i r a l c o p i a s eM d e c a d a d N T P ,D N A P o l i m e r a s af i c a c i ó n s e r e a l i z óx t e n s i ó n f i n a l a 7 2p a r a c o n f i r m a r l a

S u b t i p o R S S - P C RL o s p r o d u c t o s d e l a a m p l i f i c ad i s u e l t o e n t a m p ó n t r i s b o r a t oy u s a n d o u n e s t á n d a r d e t a mc o l o c a r o n 1 5 - 2 0 µ L t a n t o d er e f e r e n c i a d e l m i s m o s e r oe l e c t r o f o r é t i c o ( t a m a ñ o y np r o t o t i p o .T R A N S C R I P C I Ó N R E V E R S A Y AR T - P C RS e u t i l i z a r a e l p r o c e d i m i e n t o pt r a n s c r i p c i ó n r e v e r s a y a m p l i____________________________________________________

• Subtypes o

Santander District, Colombia.

A C T I V I D A D E S E N ED e f i n i c i ó n d e lt e m a d ei n v e s t i g a c i ó n X X XR e v i s i ó n d el i t e r a t u r a X X XE l a b o r a c i ó n d ea n t e p r o y e c t o X X XR e v i s i ó n d ea s e s o r e s XP r e s e n t a c i ó n yd e f e n s a XP r u e b a s e nl a b o r a t o r i oF a s e d e c a m p o /T o m a d e

Protocolo dengue Master Dr. Antonio Vásquez Hidalgo a c i ó n s e a n a l i z a r a n m e d i a n t e e l e c t r o f o r e s i s e n g eo - E D T A ( T r i s - H C l 8 9 m M p H 8 , á c i d o b ó r i c o 8 9 m Mm a ñ o s d e 1 0 0 - p b ( D N A l a d d e r . P r o m e g a ) . E ne l o s a m p l i f i c a d o s o b t e n i d o s c o n v i r u s l o c a l e so t i p o . P a r a d e t e r m i n a r e l s u b t i p o s e c o mn ú m e r o d e f r a g m e n t o s ) g e n e r a d o p o r l a c e p aA M P L I F I C A C I Ó N P O Rp o r H a r r i s e t a l , p o r l a t é c n i c a m u l t i p l e x R T - P C R pf i c a c i ó n d e l A R N v i r a l u t i l i z a n d o s e t s e g ú n f a b r i c a____________________________________________________

Subtypes of dengue virus serotypes 2, 3 and 4 isolated in

Santander District, Colombia. 2007

C r o n o g r a m a 2 0 1 2F E B M A R A B R I M A Y J U NX X XX X X X X XX X X

7Protocolo dengue Master Dr. Antonio Vásquez Hidalgo e l d e a g a r o s a 2 %M , E D T A 2 , 5 m M )u n m i s m o g e l s ec o m o c o n l o s d em p a r ó e l p a t r ó na l o c a l v e r s u s l a

p a r a l aa n t e .f dengue virus serotypes 2, 3 and 4 isolated in

J U L A G

m u e s t r a sF a s e d el a b o r a t o r i o /A n á l i s i s d em u e s t r a sA n á l i s i se s t a d í s t i c o d ed a t o sD i s c u s i ó n d er e s u l t a d o sE n t r e g a d ed o c u m e n t o f i n a lp a r a r e v i s i ó nP r e s e n t a c i ó nd e l t r a b a j o f i n a lE n t r e g a d ed o c u m e n t o f i n a l PM a t e r i a l y e q u i p o sT e r m o r e c i c l a d o rC e n t r i f u g a P C RT u b o s c ó n i c o sM i c r o p i p e t a sG r a d i l l a sR e a c t i v o sA l c o h o l e t í l i c oC l o r u r o d e m a g n e s i ob u f f e rK i t R T - P C RO T R O S I M P R E V I S T O ST O T A L

Protocolo dengue Master Dr. Antonio Vásquez Hidalgo X X XX X XX X X X X XX X XX X X X

P r e s u p u e s t o ( B O R R A D O R E S T I M A D O )U n i d a d C o s t o U n i t a r i o1 5 0 01 6 0 01 0 0 52 5 02 3 03 0 01 9 0 0

8Protocolo dengue Master Dr. Antonio Vásquez Hidalgo

X X XC o s t o t o t a l5 0 06 0 05 0 01 0 06 03 0 09 0 0$ 5 0 0 0 A P R O X .

1 . F r e d e r i c k s o n , E . C h r i s t i a n . 1 9 9 32 . O . M . S . 1 9 8 7 . V e c t o r c o n t r o l i n P3 .

M S P A S . R e p o r t e s E p i d e m i o l ó g i c4 .

R u b i o M o r a n , R . 1 9 9 4 . P a r a s i t o l5 . L ó p e z , F . J . 1 9 9 0 . M i c r o s c o p i c d5 1 2 : 3 7 - 4 76 . K o n e m a n , A l l e n . 1 9 9 6 . D i a g n ó s t7 .

J a w e t z . 1 9 9 6 . M i c r o b i o l o g í a M e8 . B r e e l a n d , S . 1 9 7 2 . S t u d i e s o nc h o l i n e s t e r a s e . J . E n t o m o l o g y 69 . B r o w , A . W . 1 9 7 2 . B e i n g o l e a , O .E n t o m o l o g í a A g r í c o l a . 2 0 : 3 3 - 41 0 . B r o w n , A . W . 1 9 7 2 . A l t e r n a t i vB o r n e . D i s e a s e s . W a s h i n g t o n . D1 1 . B r o w n , H . W . 1 9 9 1 . P r o t o z o a r in u e v a I n t e r a m . M é x i c o . 8 4 : 2 7 81 2 . O P S . 1 9 9 2 . G u í a s t é c n i c a s d e c o1 3 .

M S P A S . 1 9 9 2 . A s p e c t o s g e n e r a l1 4 .

D e B a c h , P . 1 9 8 7 . C o n t r o l B i o l ó1 5 . K i n g , A . S . 1 9 8 4 . L a s p l a g a s d e i n1 6 .

M e l g a r , M . 1 9 9 6 . T e n d e n c i a s me n e l c o n t r o l d e v e c t o r e s d e m a1 7 . O M S . 1 9 9 4 . A p l i c a c i ó n d e l a e s t1 8 . B r u c e , J . 1 9 8 7 . M a l a r i a a n d i t s1 9 . O M S . 1 9 8 7 . W e e k l y e p i d e m i o l o2 0 . B r o w , A . 1 9 8 6 . I n s e c t i c i d e r e s i s t2 1 .

G e o r g h i o u , G . 1 9 7 2 . S t u d i o sa l b i m a n u s : J . A . T r o p M e d i c i n e .2 2 . L o w e , R . & o t h e r s . 1 9 8 0 - F i e l d ai n E l S a l v a d o r a n d e v i d e n c e f o r2 3 . A y a d , H . % o t h e r s . 1 9 7 5 . R e s i s tr e d u c e d s e n s i v i t y o f a c e t h y l c h o2 4 . A s m a n . S . & o t h e r s . 1 9 8 1 . Fe n t o m o l o g y . 2 6 : 2 8 9 - 3 1 8 .2 5 .

V e n t u r a , P o r t i l l o . B y M a t a m o r oc u l t i v o d e m a í z . U E S .2 6 .

G a r c í a , E . M . 1 9 8 8 . E s t u d i o ye n f e r m e d a d e s d e c u l t i v o s a g r í c2 7 .

M u n c h , E . L . 1 9 8 8 . P l a n t a s c oH o n d u r a s .2 8 .

S a x e n a , R . C . & o t h e r s . 1 9 8 4 . E v5 0 7 .2 9 .

C h u m u t t e r e r , H . 1 9 8 4 . N a t u r a l

Protocolo dengue Master Dr. Antonio Vásquez Hidalgo R E F E R E N C I A S B I B L I O G R A F I C A S .3 . B i o n o m í a y c o n t r o l d e A n o p h e l e s a l b i m a n u s . O P S P u b l i c a cP r i m a r y H e a l t h C a r e . N o 7 6 5 . G e n e v a .c o s d e 1 9 8 0 - 1 9 9 6o g í a y E n t o m o l o g í a M é d i c a . 1 ª e d i c . M é x i c o . 6 5 : 4 3 9 - 4 3 7 .i a g n o s i s o f m a l a r i a p a r i s i e t e s i n t h e b l o o d . “ D i a g n o s i s i n M at i c o M i c r o b i o l o g i c o . 3 ª e d i c . 1 5 : 7 4 6 - 7 4 7e d i c a . 1 5 e d i c .t h e e c o l o g y o f A n o p h e l e s a l b i m a n u s b a s e d i n r e d u c e d6 8 : 2 9 5 - 2 9 7 .. 1 9 7 7 . C o n s i d e r a c i o n e s s o b r e c o n t r o l b i o l ó g i c o y p r e d a c i ó n4 7v e M e t h o d s o f v e c t o r c o n t r o l . V e c t o r c o n t r o l a n d t h e r e c rD . C . P P 5 9 - 6 3i o s d e l a s a n g r e y t e j i d o d e l h o m b r e - m o s q u i t o . P a r a s i t o l8 - 2 8 7o n t r o l f í s i c o y A p l i c a c i ó n d e i n s e c t i c i d a s e n l o s p r o g r a m a s d el e s d e l P r o g r a m a d e M a l a r i a .g i c o d e l a s P l a g a s d e i n s e c t o s y m a l a s h i e r v a s . 1 3 e d i c . e d i t .n v e r t e b r a d o s d e c u l t i v o s a n u a l e s a l i m e n t i c i o s e n A m é r i c a cm o d e r n a s e n e l c o n t r o l d e v e c t o r e s y p r o b l e m a s a s o c i a d o sa l a r i a y d e n g u e e n E l S a l v a d o r .t r a t e g i a m u n d i a l d e l u c h a a n t i p a l ú d i c a . M a n a g u a . I n f o r m e tc o n t r o l . A n n u a l r e v i e w o f p u b l i c a h e a l t h 8 : 7 5 - 1 0 0 .o g i c a l R e c o r d . G e n e v a .t e n c e i n m o s q u i t o e s : a P r a g m a t i c a r e v i e w , J . M o s q u i t o s c o no n r e s i s t a n c e t o c a r b a m a t e a n d o r g a n o p h o p h a t e i n s e c t2 1 : 7 9 0 - 8 0 6a n d l a b o r a t o r y a s s e s s m e n t o f t e m p h o s f o r l a r v a l c o n t r o l o f Ar e s i s t a n c e . M o s q u . N e w s 4 0 : 4 1 8 - 4 2 3 .s t a n c e t o o r g a n o p h o s p h a t e s a n d c a r b a m a t e s i n A n o p h e l e so l i n e s t e r a s e . J . E n t o m o l o g y . 6 8 : 2 9 5 - 2 9 7 .F i e l d s t u d i e s o f t h e g e n e t i c c o n t r o l s y s t e m s o f m o s q uo s , D . 1 9 9 7 . D o s i f i c a c i ó n d e A . I n d i c a p a r a e l c o n t r o l d e l “ G ud e s a r r o l l o y a p l i c a c i ó n d e e x t r a c t o s a c u o s o s e n e l c oc o l a s .n p r o p i e d a d e s p l a g u i c i d a s . P o s i b i l i d a d e s p a r a e l D e p a r t a mv a l u a t i o n s a n d u t i l i z a t i o n s o f N e e m a g a i n s t h e r i c e b r o w n . PP e s t i c i d e s f r o m t h e N e e n t r e e a n d o t h e r t r o p i c a l p l a n t s . G e

9Protocolo dengue Master Dr. Antonio Vásquez Hidalgo c i ó n C i e n t í f i c a N o 3 4 .a l a r i e ” P u b l i c . C i e n t i f .s e n s i t i v i t y o f a c e t h y ln . R e v i s t a P e r u a n a d er u d e s c e n s e o f v e c t o r -l o g í a c l í n i c a . 5 ª e d i c .e M a l a r i a . N i c a r a g u a .C o n t i n e n t a l .e n t r a l . C o s t a R i c a .a l u s o d e i n s e c t i c i d a st é c n i c o . N o 8 3 9 .n t r o l A s s o c .t i c i d e s i n A n o p h e l e sA n o p h e l e s a l b i m a n u ss a l b i m a n u s b a s e d o nu i t o e s a n n u a l r e v i e wu s a n o c o g o l l e r o ” e n e lo m b a t e d e p l a g a s ym e n t o d e C h o l u t e c a .P l a n t h o p p e r . 7 7 : 5 0 2 -e r m a n y .