Procesamiento citológico y tisular tema 1

43
PROCESAMIENTO CITOLÓGICO Y TISULAR TEMA 1 Realización del procesamiento de la muestra

Transcript of Procesamiento citológico y tisular tema 1

Page 1: Procesamiento citológico y tisular tema 1

PROCESAMIENTO CITOLÓGICO Y TISULAR

TEMA 1Realización del procesamiento

de la muestra

Page 2: Procesamiento citológico y tisular tema 1

I. Materiales, reactivos y equipos en histotecnología y citotecnología

• 1.1 Materiales. Algunos de los más básicos son:– Casetes. Recipientes perforados de plástico

donde se introduce el material seleccionado para ser estudiado por el patólogo.

– Bisturíes.– Pinzas.– Tijeras de varios tipos y tamaños.– Sondas-guías.

Page 3: Procesamiento citológico y tisular tema 1

• Portaobjetos. Lámina fina de cristal donde se colocan los cortes tisulares para ser estudiados.

• Cubreobjetos. Lámina de cristal más fina que un portaobjetos, que se sitúa encima del mismo para proteger los cortes tisulares.

• Mechero de alcohol.

Page 4: Procesamiento citológico y tisular tema 1

• 1.2. Reactivos:– Formol.– Xilol.– Alcohol en diferentes graduaciones.– Agua destilada.– Parafina.– Colorantes más habituales:

• Para histotecnología: hematoxilinas varias, eosina, Giemsa, etc.

• Para citotecnología: hematoxilina de Harris, EA50, Orange G, colorantes azul y rojo para técnica de Diff-Quick.

– Medio de montaje. Pegamento espacial para unir portaobjetos y cubreobjetos.

– Diferentes reactivos químicos en polvo (nitrato de plata, ácido fosfomolíbdico, etc.) y líquidos (ácido clorhídrico, ácido sulfúrico, etc.) para hacer compuestos químicos.

Page 5: Procesamiento citológico y tisular tema 1

• 1.3. Equipos para histotecnología.– Estación de tallado. Mesa especial para tallar con aspiradores para los

vapores del formol, además de grifos de agua y accesorios para el instrumental necesario para tallar.

– Procesador. Aparato donde se introducen las biopsias. El agua de las mismas se sustituye por parafina.

Page 6: Procesamiento citológico y tisular tema 1

– Estación de parafina/parafinero. Contiene la parafina líquida para hacer los bloques de parafina.

– Microtomo. Para hacer secciones micrométricas de bloques de parafina. Existen dos tipos: manual y automático. Además, también pueden ser de rotación (o de Minot), de congelación y de deslizamiento. Hay varias partes comunes a todos ellos:

• El portabloques,• El soporte de la cuchilla y• El mecanismo de precisión, sistema de precisión o sistema de avance.

Page 7: Procesamiento citológico y tisular tema 1

– Baño de flotación. Contiene agua caliente en la que se depositan los cortes de parafina para que se estiren y poder seleccionar los de mejor calidad.

– Placa calefactora.– Estufa. Contenedor cerrado con una temperatura constante

programable (las más utilizadas son 37º y 60º C). Se usa para secar las preparaciones sobre los cristales y que éstas se queden adheridas.

Page 8: Procesamiento citológico y tisular tema 1

• 1.4. Equipos para citotecnología– Centrífuga. Pone en rotación una muestra

para acelerar, mediante fuerza centrífuga, la sedimentación de sus componentes.

– Citocentrífuga. Centrífuga de menor tamaño, especial para seleccionar las células contra un portaobjetos mediante moldes especiales (Cytospin).

Page 9: Procesamiento citológico y tisular tema 1

• 1.5. Equipos comunes– Teñidores. Los hay manuales y automáticos.

Contienen todos los reactivos necesarios para hacer las tinciones que deseemos.

– Montadores automáticos. Utilizados para poner cubreobjetos sobre los portaobjetos ya teñidos.

Page 10: Procesamiento citológico y tisular tema 1

II. Uso eficiente de recursos• Eficiencia: relación entre los recursos utilizados

en un proyecto y los logros conseguidos con el mismo.

• El análisis de los costos del sistema sanitario conduce a un uso racional y eficiente de los recursos para continuar satisfaciendo las necesidades de salud de la población con la máxima calidad.

• Hay que adaptar las medidas de eficiencia a la rutina y volumen de trabajo de cada laboratorio para no entorpecer el trabajo.

Page 11: Procesamiento citológico y tisular tema 1

III. Seguridad y prevención de riesgos en el laboratorio. Gestión de residuos

• Ley 31/95, de 3 de diciembre de 2003, de Prevención de Riesgos Laborales.

• 3.1. Identificación de los riesgos asociados a las técnicas.– Riesgos de seguridad.– Riesgos biológicos.(*)– Riesgos químicos.

• Peligros físicos (gases inflamables o corrosivos, p. ej.).• Peligros para la salud humana (toxicidad aguda, lesiones

oculares, carciogénicos tóxicos, etc.).– Riesgos ergonómicos.

Page 12: Procesamiento citológico y tisular tema 1

• 3.2. Determinación de las medidas de prevención– Recomendaciones de seguridad ante riesgos eléctricos.– Recomendaciones de seguridad ante riesgos biológicos

(vacunación hepatitis B, higiene personal, elementos de protección barrera, esterilización y desinfección correcta de instrumentos y superficies, etc.).

– Recomendaciones de seguridad ante riesgos químicos (leer la etiqueta y/o datos de seguridad de un producto antes de su utilización y seguir las indicaciones recomendadas, mantener los envases originales, trabajar en cabina de seguridad cuando sea necesario, etc.).

– Recomendaciones de seguridad ante riesgos ergonómicos (cuidar higiene postural, utilizar la maquinaria y herramientas siguiendo las indicaciones prescritas, etc.).

Los equipos de protección individual (EPI) deberán utilizarse cuando

existan riesgos para la seguridad o salud de los trabajadores que no hayan podido

evitarse o limitarse por medios técnicos de protección colectiva. Son equipos

individuales porque sólo son usados por la persona que realiza el trabajo.

Page 13: Procesamiento citológico y tisular tema 1

• 3.3. tipos de residuos y procedimientos de eliminación– Gestión de residuos en el

laboratorio.• Potencial peligrosidad.• Debe comenzar en el centro

productor.• Minimización de residuos y

separación eficaz.• Envasado conveniente.• Transporte seguro y

habilitación de almacenes.• Un gestor externo se

encargará de la recogida, el transporte, el tratamiento y la eliminación o reciclado de estos residuos.

Page 14: Procesamiento citológico y tisular tema 1

• Clases de residuos sanitarios (Decreto 83/99)– I. Residuos generales: papel, cartón, comida, vidrio, mobiliario,

restos de jardinería.– II. Residuos biosanitarios asimilables a urbanos: todos aquellos

no incluidos en los nueve grupos de la clase III.– III. Residuos biosanitarios especiales:

• Grupo 1: procedentes de pacientes con infecciones altamente virulentas, erradicadas, importadas o de muy baja incidencia en España.

• Grupo 2: los contaminados con heces de pacientes afectados de cólera o disentería amebiana.

• Grupo 3: residuos contaminados con secreciones respiratorias de pacientes con tuberculosis o fiebre Q.

• Grupo 4: filtros de diálisis de pacientes portadores de hepatitis B, C o VIH.

• Grupo 5: residuos punzantes o cortantes.• Grupo 6: cultivos y reservas de agentes infecciosos (placas de

Petri, hemocultivos, extractos líquidos, etc.).• Grupo 7: residuos de animales infecciosos.• Grupo 8: recipientes que contengan más de 100 ml de muestras de

sangre o productos derivados en cantidades superiores a 100 ml.• Grupo 9: cualquier resto anatómico humano reconocible como tal.

Page 15: Procesamiento citológico y tisular tema 1

– IV. Cadáveres y restos humanos de entidad suficiente.– V. Residuos químicos: residuos caracterizados como peligrosos según la

legislación vigente y según su contaminación química.– VI. Residuos citotóxicos.– VII. Residuos contaminados por sustancias radiactivas.

• Envasado.– Los envases serán de un solo uso y no podrán volver a abrirse.– Los de residuos biosanitarios especiales y citotóxicos permanecerán

intactos hasta su eliminación, sin someterse a presiones mecánicas.– Hay una serie de envases especiales para residuos de tipo II, III y IV.

• Traslado interno. Hay que evitar cualquier riesgo, para ello:– Los envases se trasladarán cerrados y por circuitos distintos a los de

pacientes y público.– Prohibido trasvasar residuos entre envases.– No utilizar trampillas, bajantes, etc.– No arrastras envases.– Los residuos se trasladarán separados por clases.– Los carros para el transporte serán de uso exclusivo para residuos, con

paredes lisas y fáciles de limpiar.

Page 16: Procesamiento citológico y tisular tema 1

• Depósito intermedio. Sólo tendrá lugar en espacios habilitados para ello.

• Depósito final– Los envases de residuos de tipo II y IV se almacenarán separados de

los envases de residuos de otras clases y, a su vez, separados entre sí, salvo que el destino de eliminación sea el mismo.

– Los residuos de tipo III y IV no podrán compactarse o triturarse.– Los residuos de tipo II se almacenarán en contenedores, con o sin

compactación.

Decreto 83/99, de 3 de junio, por el que se regulan las actividades de producción y de gestión de los residuos biosanitarios y citotóxicos en la Comunidad de

Madrid

Page 17: Procesamiento citológico y tisular tema 1

• IV. Características macroscópicas de la muestra– Consiste en la inspección del material y su descripción, lo más

semejante a la realidad, indicando los siguientes aspectos:• Muestras de pequeño tamaño:

– Tamaño.– Color.– Consistencia.– Hallazgos.

• En órganos parenquimatosos:– Tamaño, color, forma, superficie externa.– Peso. – Consistencia.– Hallazgos.– Superficie de corte.

• En órganos huecos:– Tamaño, forma, serosa.– Peso.– Pared (espesor, consistencia, hallazgos).– Mucosa (color, pliegues, aspecto, hallazgos).– Luz.

Nódulo subpleural bien delimitado

Quiste de ovario gigante

Page 18: Procesamiento citológico y tisular tema 1

V. Proceso de fijación tisular

• 5.1. Fundamentos y objetivos– La fijación tisular consiste en la interrupción de los procesos de

degradación (autolisis y putrefacción) que aparecen tras la muerte celular, intentando así preservar lo más fielmente posible tanto la arquitectura como la estructura de células y tejidos.

– No existe un método universal de fijación.– No todos los fijadores son conservadores.– Hay que elegir el fijador adecuado teniendo en cuenta las

características del estudio microscópico a realizar.– Un defecto de fijación jamás puede ser corregido.– Es inútil realizar un estudio histológico correcto sobre un material con

defectos de fijación.– Cuanto mayor sea la capacidad de bloquear la autólisis de un fijador,

mayor será la preservación y el procesamiento del tejido.– Un buen fijador debe producir los menores cambios posibles en la

estructura del tejido.

Page 19: Procesamiento citológico y tisular tema 1

• Causas que imposibilitan o dificultan la fijación:– Autólisis.– Presión. La pieza debe ser cortada con instrumentos

afilados para someter la pieza a la menor presión posible.

– Exceso de H2O. Aunque se elimine el exceso de sangre no hay que embeber la pieza.

– Desecación. Produce encogimiento y retracción del tejido.

– Grosor excesivo de la pieza. Si ésta es demasiado gruesa la autólisis puede avanzar antes de que el fijador penetre en profundidad.

– Exceso de sangre y moco. La sangre tiene tendencia a coagularse y el moco, a desecarse. Esto forma una película que hace que se dificulte la fijación.

Page 20: Procesamiento citológico y tisular tema 1

• 5.2. Procesos previos a la fijación de la muestra. Reglas generales para la utilización de fijadores:– Tras el correcto registro de la muestra y la comprobación de todos los

elementos contenidos en el contenedor, se deben tomar las precauciones necesarias para garantizar la llegada del fijador a todas las zonas, especialmente al interior de cavidades o piezas grandes como el pulmón.

– El tejido debe ser introducido lo más rápidamente posible en el líquido fijador.

– Cuanto más tiempo transcurra en introducirse el mismo, más avanzada estará la autólisis.

– El recipiente o frasco que contenga el líquido fijador debe ser lavado cuidadosamente una vez utilizado.

– Es necesario etiquetar correctamente el recipiente.– Hay que evitar que las piezas floten en el fijador.– Tanto la presión osmótica como el pH deben ser lo más aproximados al

del tejido. – Hay que respetar el volumen de líquido (al menos 10 x el volumen de la

pieza).– El recipiente debe moverse con cierta asiduidad con el fin de favorecer

la penetración del fijador en el tejido.– La duración de la fijación varía dependiendo del fijador, de la naturaleza

y del tamaño de la pieza.

Page 21: Procesamiento citológico y tisular tema 1

• 5.3. Tipos de fijadores y normas de aplicación.– Los fijadores se clasifican genéricamente dependiendo

del mecanismo de actuación. Existen dos grandes grupos: fijadores por métodos físicos y por métodos químicos.

– Físicos. Utilizan el frío como agente para provocar la estabilización tisular. Se deben elegir cuando se quiera conservar intacta la estructura antigénica del tejido o su contenido enzimático. La clave para una correcta fijación es que sea instantánea para evitar microcristales de hielo que pueden producir roturas tisulares. Existen dos fijadores para congelación instantánea:

• Nitrógeno líquido. Debido a su temperatura (-196 ºC) no es fácil de manejar y vuelve los tejidos muy quebradizos.

• Isopentano o metilbutano. Necesita ser enfriado en congeladores; su temperatura óptima de uso está entre -50 ºC y -70 ºC.

Page 22: Procesamiento citológico y tisular tema 1

– Químicos. Existen multitud de agentes químicos que pueden usarse como fijadores, tanto individualmente como en compuestos. Cada fijador químico tiene una velocidad de penetración y de fijación. Estas dos velocidades no siempre están en concordancia.

• La velocidad de penetración es la rapidez con la que el fijador se difunde por el interior de un tejido.

• La velocidad de fijación es el tiempo que cada fijador tarda en precipitar y estabilizar los componentes químicos de los tejidos.

El fijador químico ideal debe:• Bloquear inmediatamente la autolisis.• Impedir la acción bacteriana desencadenante de la

putrefacción.• Respetar la arquitectura tisular.

Page 23: Procesamiento citológico y tisular tema 1

• 5.3.1. Fijadores simples– Formaldehído o formol (CHOH)

• Es el fijador más barato, más importante y más utilizado en la rutina de anatomía patológica.

• Actúa por reticularización de las proteínas.• En estado puro es un gas muy tóxico e irritante.• Se disuelve muy bien en agua.• Se ha reconocido como potencial carcinógeno en humanos. • Su toxicidad se va consumiendo durante el proceso de

fijación.• Es un buen desinfectante.• No endurece excesivamente los tejidos.• Tiene una escasa retracción tisular.• No disuelve lípidos.• Su velocidad de penetración es intermedia (aprox. 1 mm/h).• Se puede acelerar o retrasar su proceso mediante la

temperatura.• Debido a su baja presión osmótica las piezas fijadas

incrementan su peso y volumen considerablemente.

Page 24: Procesamiento citológico y tisular tema 1

– Alcohol etílico o etanol (CH3-CH2OH)• Papel primordial como deshidratante,

aunque en ocasiones se utiliza como fijador.

• Líquido incoloro, volátil, soluble en agua y utilizado generalmente en concentraciones del 70-100%.

• Precipita proteínas.• Su acción prolongada encoge y endurece

los tejidos.• Actúa por deshidratación tisular.• Para extensiones citológicas.• Altera escasamente la estructura

antigénica de los tejidos, por lo que es bueno para inmunohistoquímica.

• A medida que va actuando va perdiendo efectividad al incorporar el agua que extrae de los tejidos.

Page 25: Procesamiento citológico y tisular tema 1

– Ácido acético (CH3-COOH)• Actúa por cambios en el estado coloidal de las

proteínas.• Se utiliza en concentraciones del 0,3-5%.• Penetra fácilmente en el tejido.• Es un fijador ideal para ácidos nucleicos y

nucleoproteínas.• Provoca poca retracción tisular.• Favorece la posterior observación del núcleo.• Aumenta el volumen tisular.• Mal fijador de membranas y citoplasmas. Destruye

las mitocondrias.

Page 26: Procesamiento citológico y tisular tema 1

– Acetona (CH3-CO-CH3)• Actúa por deshidratación

tisular.• Líquido transparente

inflamable, muy volátil y de olor dulzón.

• Provoca gran contracción tisular y artefactos.

• Controlar el tiempo por posible endurecimiento.

• La rápida extracción del agua desde el tejido provoca una contracción nuclear, que deja un halo perinuclear, especialmente en los epitelios.

• Prácticamente limitado a los métodos histoquímicos e inmunohistoquímicos, ya que preserva muy exactamente la estructura antigénica y la actividad enzimática de éstos.

La fijación con acetona provoca una deshidratación rápida de la muestra para la coagulación de proteínas, con el inconveniente de producir un halo perinuclear.

Page 27: Procesamiento citológico y tisular tema 1

– Ácido pícrico o trinitrofenol (C6H3N3O7)• Actúa por formación de sales en los tejidos.• Comercialmente, se encuentra en forma de agujas

cristalizadas de color amarillo y es muy tóxico.• Coagula y precipita las proteínas a través de la formación de

picratos.• Es soluble en agua, alcohol y benceno.• Presenta color amarillo blanquecino.• Contrae los tejidos, aunque no endurece en exceso.• Es explosivo.• Tiene mala velocidad de penetración.• Algunos tejidos los vuelve frágiles y quebradizos.• Tiñe los tejidos de color amarillo.• Fija bien los ácidos nucleicos.• Tiene acción decalcificadora.

Page 28: Procesamiento citológico y tisular tema 1

– Dicromato potásico (K2Cr2O7)• Actúa por formación de sales.• Se utiliza en concentraciones del 1-

2%.• Es útil para la fijación de

fosfolípidos.• Permite la correcta preservación de

lípidos y proteínas.• Lenta penetración en el tejido

otorgándole una rigidez que favorece el seccionamiento con microtomo.

• No precipita proteínas.• En contacto con sustancias

orgánicas puede provocar combustiones.

• Es tóxico y potencialmente cancerígeno.

Page 29: Procesamiento citológico y tisular tema 1

– Bicloruro de mercurio (HgCl2)• Actúa por formación de sales.• Se emplea, generalmente, en eolución acuosa al

5%.• Precipita proteínas.• Endurece notablemente los tejidos.• Da un aspecto muy brillante a la finalización de la

muestra.• Provoca buena fijación de los citoplasmas.

– Cloruro de cadmio (CdCl2)• Actúa por formación de sales.• Totalmente en desuso en la actualidad.• Fue utilizado por Ramón y Cajal.

Page 30: Procesamiento citológico y tisular tema 1

– Tetraóxido de osmio (OsO4)• Fija por reticularización.• Es uno de los fijadores más antiguos (1865).• Aumenta el contraste de la ultraestructura del tejido.• Preserva preferentemente proteínas y lípidos, pero vuelve

frágiles las muestras de tejidos.• Escaso poder de penetración.• Muy volátil e irritante de las mucosas.• Se utiliza en concentraciones del 1-2%.• Es un fuerte oxidante.

– Ácido crómico (H2CrO4)• Actúa por formación de sales.• Se utiliza en solución acuosa en concentraciones del 0,5-2%.• Es un fuerte oxidante.• Tiene mucha utilidad cuando realizamos muestras con

tinciones básicas.• Se lo recomienda para preservar lípidos, ya que actúa igual

que el dicromato de potasio. No es un buen fijador para el resto de estructuras histológicas.

Page 31: Procesamiento citológico y tisular tema 1

– Sulfato de zinc (ZnSO4)• Se emplea para la preservación de lípidos de las

membranas celulares y componentes de la lámina basal (fina capa de matriz extracelular que separa el tejido epitelial y muchos tipos de células, como las fibras musculares o los adipocitos, del tejido conjuntivo).

• También se utiliza para la fijación de proteínas tisulares en protocolos inmunohistoquímicos.

• Se usa en bajas concentraciones (0,5%).• Es mal oxidante y actúa suavemente sobre las

membranas, aunque con ligera contracción de la muestra).

Page 32: Procesamiento citológico y tisular tema 1

• 5.3.2. Fijadores compuestos– Glutaraldehído.

• Es uno de los fijadores más usados.• Actúa de manera análoga a la del formaldehído.• Es un líquido oleoso que se encuentra diluido al

25%.• Excepcional capacidad para preservar la

morfología celular.• Es el fijador ideal para microscopía electrónica.• Velocidad de penetración muy baja.• Gran capacidad de endurecimiento y retracción

tisular.• No se recomienda para inserciones en parafina.

Page 33: Procesamiento citológico y tisular tema 1

– Líquido de Bouin (diferentes tipos)• Funcionamiento análogo al del formaldehído.• Líquido amarillo de fuerte olor avinagrado.• Formado por ácido pícrico, formaldehído y ácido acético

glacial en solución acuosa.• Es muy útil para tejidos blandos y embriones, y preserva

bien el núcleo y el glucógeno. • Hay que tener cuidado con el tiempo de fijación, que no

debe exceder de 48 h en el caso de fijaciones por inmersión.• Penetra rápidamente en los tejidos.• Excelente fijador estructural.• Óptima contracción de los tejidos.• Buena velocidad de fijación.• En uso prolongado endurece excesivamente las muestras y

las vuelve quebradizas.• No está recomendado para el riñón ni para el estudio de

mitocondrias.

Page 34: Procesamiento citológico y tisular tema 1

6. Decalcificación y reblandecimiento tisular

• Se llama decalcificación a la completa eliminación de las sales de Ca presentes en los tejidos previamente fijados.

• Habitualmente se realiza de rutina en tejidos mineralizados (huesos, dientes) y esporádicamente en biopsias con calcificaciones que impidan su correcto procesamiento y observación microscópica.

• Para decalcificar se emplean principalmente ácidos fuertes o débiles, empleados aisladamente o en conjunto con otros componentes como líquidos fijadores.

Page 35: Procesamiento citológico y tisular tema 1

• 6.1. Soluciones decalcificantes más usuales.– Solución acuosa de ClH: no es tan rápido como el ácido nítrico

pero produce menor agresión tisular y no precisa lavado post-decalcificación.

– Solución acuosa de ácido nítrico.• Ácido nítrico concentrado: 5 ml• Agua destilada: 95 ml• El caso de que la solución sea alcohólica la proporción de ácido

nítrico debe ser del 7.5%. • El tiempo medio de decalcificación para un bloque óseo de 5mm de

espesor es de 12 a 24 horas.– Ventajas:

• 1. Provoca rápida decalcificación.• 2. Causa baja retracción tisular.• 3. Mejor coloración de los núcleos que la solución de formol y

nítrico.• 4. No es necesario neutralizar el agente decalcificante sino que

puede pasar directamente el tejido a etanol de 70º para iniciar la deshidratación.

– Inconvenientes:• La prolongación excesiva del tiempo de decalcificación suele anular

la fijación previa y alterar progresivamente el tejido.

Page 36: Procesamiento citológico y tisular tema 1

– Formol – ácido nítrico.• Formalina: 10 ml.• Ácido nítrico concentrado: 10 ml.• Agua destilada: 80 ml.• Tiempo medio de decalcificación para un bloque de tejido

óseo de 5 mm de espesor de 1 a 3 días.

– Ventajas:• 1. Es de acción relativamente rápida.• 2. Provoca menos alteraciones titulares que la solución

acuosa de ácido nítrico.• 3. Por su facilidad de manejo es la solución decalcificante

más utilizada para técnicas histológicas de rutina.

– Inconvenientes:• 1. Dificulta la tinción nuclear.• 2. Antes de su procesamiento los tejidos requieren

neutralización en sulfato sódico al 5% y un lavado posterior en agua corriente al menos durante 2 horas.

Page 37: Procesamiento citológico y tisular tema 1

– Solución acuosa de ácido fórmico.• Acido fórmico al 90%: 5−10 ml.• Agua destilada: 90−95 ml.• Tiempo medio para un bloque óseo de 5 mm de espesor es

de 3 a 7 días.– Ventajas:

• 1. Fija y descalcifica simultáneamente.• 2. No dificulta demasiado la coloración nuclear.• 3. Está especialmente recomendado para decalcificar bien.

– Inconvenientes:• 1. Acción muy lenta.• 2. Requiere neutralización previa a la inclusión en sulfato

sódico al 5%.• 3. Lavado en agua posteriormente durante 18 horas.• El ácido fórmico es muy tóxico por contacto, inhalación e

ingestión.

Page 38: Procesamiento citológico y tisular tema 1

• 6.2. Normas genéricas para la utilización de decalcificantes:– La fijación debe haberse completado para disminuir en lo

posible los efectos alterativos del decalcificador.– La concentración del agente decalcificador debe ser óptima.– El decalcificador debe encontrarse en un volumen muy elevado

(aproximadamente 20 veces el volumen que ocupe la pieza a decalcificar) y debe ser renovado frecuentemente.

– No deben dejarse los bloques suspendidos en el fondo del envase, ya que en él se acumulan las sales cálcicas solubles.

– Temperatura ideal: 25ºC.– Después de la decalcificación hay que lavar la pieza con

líquidos neutralizantes.– Existen diversas formas de acelerar en mayor o menor medida

el proceso:• Aumentar la temperatura por encima de 25ºC, pero sin superar los

60ºC.• Aplicar una agitación manual o mecánica.• Añadir alguna resina de intercambio iónico, porque atrapa los iones

de Ca liberados por el decalcificador químico.• Mediante ultrasonidos. Este método se desaconseja por la

destrucción de las estructuras celulares.

Page 39: Procesamiento citológico y tisular tema 1

7. Artefactos • Existen dos grandes grupos de artefactos: los

causados en la técnica quirúrgica y los causados en el procesamiento de la muestra en el laboratorio.– Causados por la técnica quirúrgica:

• Aplastamiento del tejido.• Fisuras.• Fragmentaciones.• Pseudoquistes.• Hemorragias.• Inflamación aguda.• Material quirúrgico que dañe el tejido o no permita su estudio

(grapas, hilos de sutura, etc.).• Artefactos naturales (heces, líquido biliar, etc.).

Page 40: Procesamiento citológico y tisular tema 1

– Causados durante el procesamiento de la muestra en el laboratorio:

• Fijación. Una mala fijación puede distorsionar la forma, el color o el aspecto de la muestra-

• Tallado. No hay que dejar secar demasiado las muestras para evitar el deterioro de la estructura tisular y dañar las células.

• Procesado. Una mala deshidratación no dejará penetrar la parafina, dificultando el corte y el diagnóstico. Un error de orientación puede llevar a perder la lesión a estudiar.

• Coloración. Un exceso o defecto de tinción no permitirá ver correctamente las estructuras tisulares y dificultará el diagnóstico.

• Reactivos de tinción mal elaborados, conservados, utilizados o caducados. Pueden provocar precipitados y depósitos de productos sobre los tejidos.

• Montaje. Pueden ocasionarse cortes y arañazos en los cortes, perdiendo parte de la muestra. Además, pueden provocarse burbujas de aire entre el cubre y el portaobjetos que dificulten el diagnóstico a través del microscopio.

Page 41: Procesamiento citológico y tisular tema 1

• 7.1. Descripción macroscópica y tallados de las muestras.– Consiste en la inspección del material y su descripción lo más

semejante a la realidad, indicando los siguientes aspectos:• Muestras de pequeño tamaño:

– Tamaño.– Color.– Consistencia.– Hallazgos.

• En órganos parenquimatosos:– Tamaño, color, forma y superficie externa.– Peso.– Consistencia.– Hallazgos.– Superficie de corte.

• En órganos huecos:– Tamaño, forma y serosa (tapiza las cavidades corporales y recubre los

órganos).– Peso.– Pared (espesor, consistencia y hallazgos).– Mucosa (color, pliegues, aspecto y hallazgos).– Luz.

Page 42: Procesamiento citológico y tisular tema 1

– Importante:• Existen protocolos de

descripción macroscópica tipo, dependiendo del órgano y de la patología a estudiar.

• Si la muestra a estudiar es una biopsia de pequeño tamaño se incluirá entera.

• Si la muestra es de gran tamaño siempre se incluirán, como mínimo, los márgenes de resección quirúrgica, una muestra de lo que macroscópicamente consideremos patológico y una de lo que consideremos normal.

Tallado de pieza de prostatectomía total

Page 43: Procesamiento citológico y tisular tema 1

8. Registro y conservación de muestras• El registro debe hacerse siempre al recibir las piezas en el laboratorio.• Una vez hecho el registro detallado de las biopsias, éstas pasan a ser

talladas y a iniciar al proceso para el diagnóstico final.• Las muestras deben estar siempre acompañadas de un volante de petición

de estudio debidamente cumplimentado que comprendrá:– Datos del paciente.– Datos del servicio y médico que ha tomado la biopsia y es responsable de recibir

el diagnóstico de la muestra (servicio, nombre del médico, número de colegiado, teléfono de contacto, fecha, etc.).

– Origen anatómico de la biopsia.– Resumen de la historia química que pueda ayudar al diagnóstico.– Posible diagnóstico por el que se remite la muestra para ser estudiada.

• Las biopsias que no se incluyan enteramente para su estudio anatomopatológico han de ser guardadas en un archivo temporal.

• Los fragmentos que no sean de interés en un principio tienen que ser conservados en el envase en el que llevaron al laboratorio. Todos los envases se ordenarán y colocarán en un archivo adecuado para su posterior localización. El tiempo de archivo vendrá dado por el tamaño del almacén, pero nunca podrá ser inferior al tiempo necesario para realizar un diagnóstico definitivo.