Avances en transformación en PapaAvances en transformación en Papapara inducir resistencia a tizón tardío*para inducir resistencia a tizón tardío*

MSc. Martha Vergara Espinoza

Rómulo Aycachi Inga

Universidad Nacional “Pedro Universidad Nacional “Pedro Ruiz Gallo”Ruiz Gallo”

Docente :Alumno :

* María Luisa Guevara Fujita; Bióloga; MSc.Centro Internacional de la Papa – Departamento de Mejoramiento y Recursos Genéticos.

INTRODUCCIÓNINTRODUCCIÓN

Produccion de papa en elmundo se ve afectada

ENFERMEDADES

VIRUS BACTERIAS HONGOS

Graves pérdidas en laproduccion agrícola

Tizón tardío de la papa Phytophthora infestans

•Ocasiona pérdidas de mas de 15% de la pro-ducción mundial.•Causante de hambruna 1845 – 1847.•Distribución mundial (en casi todas las zonaspaperas del mundo).

¿Qué se estaba haciendo?¿Qué se estaba haciendo?Mejoramiento convencional

Combinación de progenitores altamente resistentes

al tizón tardío

Complejidad de características genéticas del patógeno que son heredadas de forma cuantitativa

Dificultades

Presencia de nuevas cepasMas resistentes (recom-

Binación sexual)

¿Qué se está haciendo ahora?¿Qué se está haciendo ahora?

Introducción de genes fo-ráneos que confieran re-sistencia a la enfermedad

¿Qué es lo busca hacer este trabajo?¿Qué es lo busca hacer este trabajo? Usar genes que expresen pp. con efecto

antifúngico y antimicrobiano con la idea de incrementar las respuestas defensivas de la planta frente al ataque del patógeno

Se busca un efecto sinérgico en la acción de estos genes cuando se usan más de dos genes por evento de transformación.

¿Cómo hacerlo?¿Cómo hacerlo?

Osmotina, lisozima (bovina y del fago T4) y glucanasa.

¿Qué se utilizó?¿Qué se utilizó?

Osmotina: pp. que se expresa en las plantas en

respuesta a situaciones de estrés (salinidad

estímulo hormonal, ataque de patógenos).

Familia de genesaltamente con-servada en So-

lanaceas

↑ resistencia a infec-ciones causadas

por hongos

Glucanasa: pp. que cataliza la hidrólisis de poli-

Sacáridos presentes en la pared celular del hongo.

Lizosima: pp. con actividad antimicrobiana, a ni-

Vel de la pared celular de las bacterias.

En

¿Cómo se hizo?¿Cómo se hizo?Desarrollo de construc-

ciones genéticas

Llevan uno, dos y tres delos genes mencionados

Se hicieron clonamientos a par-tir de un ADNc de osmotina

pA13 de S. commersonii

Vector binario de transforma-ción (pMOG800)

Lisozima bovina c2 y la lisozimadel fago T4

Estos genes con sus respectivos pro-motores y terminadores, han sidoaislados en ambos sentidos de ori-entación respecto al vector inicial

Se adicionaron

Gen de glucanasa

ADNc (clon G46) de S. tuberosumEs

Se le escogió el promotor Ubiquitin 3

Ha sido insertado entre la osmotinay lisozima en una sola orientación

Transformación delas plantas

Se seleccionó variedad Amarilis INIA

Resistencia moderada alTizón tardío

Estos genes se introdujeron en la ce-pa LBA4404 de Agrobacterium

Efiencia de esta variedades relativamente baja

Regeneración y selección

Se hicieron modificacionesa los medios de

regeneración

Medio de selección a basede kanamicina, también

fue modificada

De 100 mg/L a 50 mg/Lya que los explantes adosis altas sufrían ne-

crosis y morían

Regenerantes obtenidos fue-Ron colocados en ½ con anti-

Biótico (Km 50 mg/L)

Luego fueron pasados a“Magentas”

Líneas transgénicas ob-tenidas

Prueba de callos

PCR

↑ dosis de Km, formaci-de callos → transgén.

Primers de Km, selec.Líneas amplif. Produc.

Matar a P. infestans

Osmotina

Célula vegetal

Osmotina

ADNc pA13 de S. commersonii

Agrobacterium

DNAc Osmotina

Kanamicina

Vector binario de transformación pMOG800

Se le adiciona lisozi-ma bovina c2 y del

fago T4

Clonamientos

Cepa LBA4404

Transformación de las plantas

Variedad AmarilisINIA

Medio de regene-ración Km 50 mg/L

Medio de selec-ción Km 50 mg/L

Prueba de callos yPCR

Chequeo

Se logró transformar algunas líneas.Eficiencia de transformación baja: 30%

(32/107 líneas chequeadas).Estas líneas serán sometidas a infección

por el patógeno, tanto a nivel de laboratorio como de campo.

Se espera aumentar el número de genes en aquellas construcciones que sean prometedoras.

RESULTADOS Y DISCUSIÓNRESULTADOS Y DISCUSIÓN

¡¡¡Gracias!!!¡¡¡Gracias!!!