El género Candida contiene más de 200 especies, de las que cerca del 10% son

patógenas para el humano, causando un amplio rango de manifestaciones clínicas,

destacando la candidiasis invasiva (CI) por su elevada morbilidad y mortalidad en

pacientes inmunocomprometidos.1 Candida albicans era considerada el principal

agente etiológico de la CI, pero actualmente se reportan otras especies no-albicans,

algunas de las cuales no son sensibles al antifúngico de elección, como C. krusei.2 Por lo

que para el adecuado tratamiento de los pacientes con CI es necesario un diagnóstico

específico; sin embargo, no siempre es posible aislar e identificar al patógeno por

medio de los métodos convencionales.3,4 Por ello, se han desarrollado pruebas

moleculares para la detección e identificación de Candida spp., no obstante no son

usadas en la mayoría de los laboratorios intrahospitalarios debido a su costo o

complejidad metodológica.

Identificación simultánea de ocho especies de Candida por PCR simplex

Eduardo García Salazar1, María del Rocío Reyes-Montes2, Esperanza Duarte Escalante2, Erick Martínez Herrera1, Gustavo Acosta Altamirano1, María Guadalupe Frías De León1

1Dirección de Investigación, Hospital Regional de Alta Especialidad de Ixtapaluca2 Departamento de Microbiología y Parasitología, Facultad de Medicina, UNAM

OBJETIVO

MATERIAL Y MÉTODOS

RESULTADOS

CONCLUSIÓN

AGRADECIMIENTOS

Proyecto financiado por CONACyT PDCPN-216112

Diseñar un ensayo de PCR simplex para la identificación de Candida spp. en muestras clínicas

La PCR simplex, utilizando los oligonucleótidos CasppF y R, tiene un potencial uso para el diagnóstico de la candidiasis en laboratorios intrahospitalarios de bajos recursos.

REFERENCIAS

Diseño de oligonucleótidosSecuencias GenBank5 (18S-ITS1-5.8S-ITS2-26S Candida spp.)

Estandarización de la PCRDNA cepas ATCC de C. albicans, C. glabrata, C. tropicalis, C. parapsilosis, C. krusei,

C. guilliermondii, C. lusitaniae y C. dubliniensis

Análisis de especificidadDNA de Candida spp., Histoplasma capsulatum, Sporothrix schenckii,

Paracoccidioides brasiliensis, Aspergillus fumigatus, A. niger, Cryptococcus neoformans

Análisis de sensibilidadConcentraciones de DNA de Candida spp. (10 pg/µL-20 ng/µL)

Validación en muestras clínicasDNA muestras de sangre, orina y esputo

Figura 1. Los oligonucleótidos CasppF y CasppR amplifican, por PCR simplex, fragmentos específicos para C. albicans, C. glabrata, C. tropicalis, C. parapsilosis, C. krusei, C. guilliermondii, C. lusitaniae y C. dubliniensis. M: marcador de tamaño molecular de 100 pb, C(-): control negativo

Figura 2. Amplificación del DNA de aislados de a) Candida albicans, b) C. glabrata, con

los oligonucleótidos Caspp-F y Caspp-R. M: marcador de tamaño molecular 100 pb. T:

testigo negativo.

Figura 3. Especificidad de los marcadores SCAR a) C. parapsilosis, b) C.

lusitaniae.. M: marcador de tamaño molecular 100 pb. T: testigo

negativo.

Figura 4. Sensibilidad de los oligonucleótidos Caspp-F y Caspp-R para amplificar el DNA de a) Candida albicans,

b) C. glabrata, c) C. tropicalis, d) C. parapsilosis. M: marcador de tamaño molecular 100 pb. T: testigo

negativo.

Figura 5. Detección e identificación de Candida spp. en muestras de sangre, LBA y orina, utilizando los

oligonucleótidos Caspp-F y Caspp-R y DNA de cepas de referencia de Candida. albicans, C. glabrata, C.

tropicalis, C. parapsilosis, C. krusei, C. guilliermondii, C. lusitaniae y C. dubliniensis. M: marcador de tamaño

molecular 100 pb. T: testigo negativo.

1. de Bedout C, Gómez BL. Infectio. 2010; 14:S159-S171.

2. De la Torre-Saldaña VA, et al. Med. Int. Méx. 2014; 30:121-132.

3. Reséndiz-Sánchez J, Morales-Aguirre JJ. Bol. Med. Hosp. Infant. Mex. 2007; 64:91-98.

4. Morales-Mendoza Y, et al. Dermatol. Rev. Mex. 2013; 57:155-158.

5. Altschul SF et al. Nucl Acids Res. 1997; 25:3389-3402.

INTRODUCCIÓN