Informe de Laboratorio Microbiologa Ambiental

Informe de Laboratorio Microbiologa Ambiental

PRCTICA N 05PREPARACIN EXTRACTO SUELO

I. INTRODUCCIN

Para estudiar debidamente los microorganismos se necesita como requisito previo el cultivarlos en condiciones de laboratorio. Para lograr esto es preciso conocer cules son los nutrientes y las condiciones fsicas que requieren.Mediante investigaciones extensas se han determinado, las necesidades nutricionales de los microorganismos, y esta informacin ha sido causa del desarrollo de numerosos medios de cultivo. Ya que las necesidades nutricionales de los microorganismos varan de manera muy amplia, existen diferencias muy importantes en cuanto a la composicin de los medios empleados. Los microorganismos tambin tienen diferencias notables en lo que se respeta a las condiciones del ambiente que favorece su proliferacin. Por ejemplo, algunas bacterias prosperan bajo 0C y pueden producirse aun a 700C. Tambin para que un organismo crezca es necesario suplirlo con nutrientes y para los microorganismos es no es diferente. La mayora de ellos necesita de ambientes especficos y nutrientes complejos para crecer y reproducirse. Por lo tanto durante el desarrollo de la microbiologa, se torno claro que el cultivo y la preservacin de microorganismos requieren medio de cultivo adecuado para cada gnero y especie. Algunos medios de cultivo mimetizan el ambiente natural el cual el microorganismo fue aislado y otros suplementos con ingredientes altamente nutritivos como sangre, tejidos y extractos de levadura.

Algunas necesitan atmosfera de oxgeno, en cambio otras inhiben con el oxgeno o bien este elemento les es indiferente.Existen gran variedad de medios de cultivo en los cuales las diferentes especies en una muestra natural pueden ser aisladas y desarrollarse como cultivo puro, entre ellos tenemos: Agar Mac Conkey, Agar SS y Agar Extracto de Levadura. II. OBJETIVOS

Preparacin del extracto suelo. Utilizacin de autoclave.

III. FUNDAMENTO TERICO

EL AGAR-AGAR Es un ficocoloide extrado principalmente, de las algas rojas o Rodoficeas, de las especies aragophytas. Es una sustancia amorfa, que en el comercio se encuentra en forma de polvo, escamas, bloques rectangulares y haces de tiras delgadas.La forma seca del Agar-Agar se conoce de mediados del siglo XVIII, cuando un japons descubri, accidentalmente, la manera de purificarlo y secarlo. Fue llevado de China a Europa y trado a Amrica a mediados del siglo XIX, para utilizarse, principalmente, como substituto de la gelatina en la confeccin de postres gelatinosos.Qumicamente, el Agar-Agar es una mezcla compleja de sales de polisacridos, fundamentalmente, galactsidos. Las grandes molculas que lo constituyen determinan sus cualidades sobresalientes, como coloides y espesantes, que lo han hecho hasta ahora insustituible.Adems de los polisacridos, el Agar-Agar contiene numerosos cationes asociados, tales como sodio, potasio, calcio, magnesio, etc. De los cuales no esta, claramente, establecida su influencia sobre las propiedades de este producto.

Caractersticas Fsicas del Agar-AgarEn Estado Slido:En este estado, el Agar-Agar es poroso, translucido y membranoso, se le encuentra, generalmente, presentando un color blanco- amarillento. En Solucin:En solucin se puede romper su equilibrio elctrico, agregando sales como sulfato de magnesio, de sodio o de amonio, lo que produce la precipitacin parcial de la agaropectina, siendo este mtodo muy utilizado para la obtencin de derivados.La viscosidad de las dispersiones de Agar-Agar es altamente influida por el tipo de alga y las condiciones del proceso utilizado. La viscosidad de una dispersin de Agar a 45C permanece relativamente constante, entre pH 4,9 y 9,0, que no es muy afectada por el tiempo, ni por la fuerza inica, cuando el pH est entre 6,0 y 8,0Como Gel:Por sus propiedades de accin protectora, su textura, elasticidad, transparencia relativa y reversibilidad es muy empleado como agente de suspensin, estabilizacin y espesamiento.Por existir muy pocos microorganismos que metabolizan el Agar-Agar o que elaboran enzimas capaces de degradarlo, le confiere una mayor estabilidad, con respecto a geles de otros coloides naturales, que lo hacen muy til cuando es usado como mezcla con otros geles, polisacridos y protenas, en el sentido que la degradacin marcada no ocurre cuando sus dispersiones son mezcladas. La temperatura de fusin de un gel es funcin de la concentracin y del peso molecular. Un gel con una concentracin de 1,5% en peso, funde entre 60C y 97C.Una caracterstica muy importante en la calidad del Agar-Agar, es su resistencia a ser vencido, en estado de gel, por la presin. Esta fuerza de gel debe ser medida bajo ciertas condiciones y se define como la presin en gr/cm2 de superficie que resiste un gel, de concentracin 1,5% en peso y durante 20 segundos a 20C.

PEPTONALa peptona es una mezcla compleja de productos de la hidrlisis de la carne, obtenida por accin de diversos fermentos, especialmente la pepsina y la pancreatina.

DescripcinSe presenta como un polvo amorfo, o bien como escamas o masas irregulares, esponjosas, de color blanco amarillento o amarillo parduzco; con olor caracterstico que recuerda al de la carne asada; de sabor amargo (peptona pancretica) o amargo y salado (peptona ppsica). Es muy higroscpica y por tanto se altera con facilidad en contacto con aire hmedo.Existen dos tipos de peptona:Peptona ppsica, obtenida a Ph 2 por accin de la pepsina. Peptona pancretica, obtenida a Ph 8 por accin de la pancreatina. Ambas estn constituidas por mezclas de polipeptidos de diversos pesos moleculares, entre lo que se encuentran proteasas, peptonas, polipptidos y aminocidos libres

EXTRACTO DE LEVADURA.Es un extracto soluble en agua de un autolisado de clulas de levaduras seleccionadas. Es una excelente fuente de nutrientes. El extracto de levadura es una rica fuente de vitaminas, especialmente vitaminas del complejo B, proporcin de minerales y tiene baja cantidad de carbohidratos.

AGAR BACTERIOLGICOEs un agar procesado especialmente para ser utilizado como agente solidificante en medios de cultivo microbiolgico. Sirve para el cultivo de microorganismo anaerobios o microaeroflicos, este ultimo debido a que el agar en pequeas concentraciones restringe la conveccin de corrientes y permite tener diferentes grados de tensin de oxigeno.

Agar extracto de levadura: Medio nutritivo empleado para el recuento de microorganismos en aguas.

AUTOCLAVEUna autoclave es un recipiente metlico de paredes gruesas con un cierre hermtico que permite trabajar a alta presin para realizar una reaccin industrial, una coccin o una esterilizacin con vapor de agua. Su construccin debe ser tal que resista la presin y temperatura desarrollada en su interior. La presin elevada permite que el agua alcance temperaturas superiores a su punto de ebullicin. La temperatura y el vapor actuando conjuntamente producen la coagulacin de las protenas de los microorganismos, entre ellas las esenciales para la vida y la reproduccin de estos, llevando as a su destruccin.La palabra autoclave no se limita a los equipos que funcionan con vapor de agua ya que los equipos utilizados para esterilizar con xido de etileno se denominan de la misma forma.Funcionamiento. Las autoclaves funcionan permitiendo la entrada o generacin de vapor de agua pero restringiendo su salida, hasta obtener una presin interna de 103 kPa, lo cual provoca que el vapor alcance una temperatura de 121 grados centgrados. Un tiempo tpico de esterilizacin a esta temperatura y presin es de 15-20 minutos. Las autoclaves ms modernas permiten realizar procesos a mayores temperaturas y presiones, con ciclos estndares a 134 C a 200 kPa durante 5 min para esterilizar material metlico; llegando incluso a realizar ciclos de vaco para acelerar el secado del material esterilizado.El hecho de contener fluido a alta presin implica que las autoclaves deben ser de manufactura slida, usualmente en metal, y que se procure construirlas totalmente hermticas.Las autoclaves son ampliamente utilizadas en laboratorios, como una medida elemental de esterilizacin de material. Aunque cabe notar que debido a que el proceso involucra vapor de agua a alta temperatura, ciertos materiales no pueden ser esterilizados en autoclave, como el papel y muchos plsticos (a excepcin del polipropileno).Debido a que el material a esterilizar es muy probablemente de uso grabable, se requiere de mtodos de testificacin de la calidad de dicha esterilizacin, esto quiere decir que la presin y temperatura aplicadas sern distintas para cada uno de los productos autoclavados.Las autoclaves suelen estar provistas de medidores de presin y temperatura, que permiten verificar el funcionamiento del aparato. Aunque en el mercado existen mtodos testigo anexos, por ejemplo, testigos qumicos que cambian de color cuando cierta temperatura es alcanzada, o bien testigos mecnicos que se deforman ante las altas temperaturas. Por este medio es posible esterilizar todo tipo de materiales a excepcin de materiales voltiles, por lo que se debe tener gran precaucin.Usos Autoclave de uso mdico. Usado para esterilizar instrumental y otro producto sanitario. Autoclave de laboratorio usado para esterilizar material de laboratorio. Autoclave industrial como los que se usan por ejemplo para el tratamiento de la madera expuesta a la intemperie, laminacin de vidrio o tratamiento de composites. Autoclave de materiales compuestos usado para curar y conformar laminados de materiales compuestos polimricos.

Ventajas de una autoclave a vapor:El vapor saturado tiene algunas caractersticas, las cuales se convierten en ventajas; estas son: Calentamiento y penetracin rpida de los textiles o telas. La destruccin de las esporas bacteriales ms resistentes en un breve intervalo de exposicin. El control fcil de la calidad y letalidad para los materiales y suministros. No deja residuo txico en los materiales despus del proceso de esterilizacin. Es el agente esterilizador ms econmico. Son rpidas. Son seguras, ya que los autoclaves cuentan con medidores de Presin, Temperatura y Nivelado de Agua.

Manejo del Autoclave. Agregamos H2O destilada hasta la cintura.

Luego colocamos la tapa interior y el agua debe sobre ella.

Colocamos la canastilla

Procedemos a poner la o las muestras, pero es recomendable rotular.

Cerramos en la forma que nos dan en las indicaciones.

Ponemos la perilla en 15 minutos y la temperatura a 121C

Precauciones: Tener en cuenta que el botn de vapor debe estar abierto para que salga el aire que se encuentra al interior.

Cuando el vapor empieza salir por el tubo de escape, que se encuentra en la parte inferior, entonces cerramos el botn de vapor.

Tambin se debe mantener cerrado la perilla del agua.

Tambin se observara la medicin de la atmosfera, la aguja se pondr en el color azul y cuando esta termine empezara a bajar hasta llegar al color amarillo.

IV. MATERIAL Y MTODOS

4.1 MATERIALES

Peptona 5g Extracto de levadura Cloruro de Sodio Almidn soluble Agar bacteriolgico Extracto de suelo 1000ml con pH=7 Agua destilada. Cocina elctrica Balanza analtica. Esptula Matraz de 1000ml Bureta.

4.2 PROCEDIMIENTO

Primero tomamos la muestra del suelo y pesamos 50g sin partculas gruesas.

Una vez pesado el suelo se coloca en el matraz y aforamos con agua destilada (500mL) y procedemos a homogenizar haciendo movimientos circulares.

Luego se procede a filtrar para limpiar las impurezas que quedaron y procedemos a regresar nuevamente al matraz.

Y finalmente tapamos el matraz con algodn y colocamos en el autoclave por 15 minutos a 121C x 1 Atm.

Una vez cumplido el tiempo en el autoclave, recin se empieza a pesar las siguientes sustancias. Pesamos la peptona 2.5g.

Extracto de Levadura 1.5g

Cloruro de sodios 1.5g

Almidn soluble 1g

Agar bacteriolgico 7.5g

Luego procedemos a depositar todas las sustancias pesadas en el matraz con extracto de suelo. Homogenizamos en una cocina para diluir bien las sustancias.

Una vez homogenizada se procede a colocar nuevamente en el autoclave por 15 minutos a 121C x 1 Atm.

V. RESULTADOS.

Se obtuvo extracto de suelo, listo para servir en las placas petri o tubos de ensayo, para posteriormente realizar el sembrado de microorganismos del suelo.

VI. CONCLUSIONES

Se puede concluir que la preparacin de extracto de suelo son importantes debido los microorganismos que se desarrollan en el nos permiten identificarlos sin son tiles o dainos para el desarrollo de las plantas o animales. Por otro lado una buena elaboracin de extracto de suelo dar mejores resultados cuando se aplica la adecuada tcnica de esterilizacin para no encontrar microorganismos contaminantes en el.El estudio de microorganismos, aislados a partir de muestras de suelo tienen una gran importancia, debido de que algunos de stos se utilizan en la industria, para aislarlos se emplean mtodos distintos dependiendo de las condiciones y caractersticas de los microorganismos. Segn los resultados obtenidos se puede inferir que el suelo es la nica fuente que contiene un sinnmero de bacterias productoras de amilasa, pues otros productos o materiales tienen bacterias productoras de amilasa en pocas cantidades.La siembra en agar extracto de levadura es una medio de cultivo muy imprescindible porque nos permite hacer una primera seleccin de bacterias afines a dicho agar.VII. CUESTIONARIO

IMPORTANCIA DE LOS MICROORGANISMOS DEL SUELO.Los microorganismos del suelo, son los componentes ms importantes de este. Constituyen su parte viva y son los responsables de la dinmica de transformacin y desarrollo. En un solo gramo de tierra, encontramos millones de microorganismos beneficiosos para los cultivos.

Estos microorganismos beneficiosos que se encuentran en el suelo, son bacterias, actinomicetos, hongos, algas y protozoarios. Un suelo frtil es aquel que contiene una reserva adecuada de elementos nutritivos disponibles para la planta, o una poblacin microbiana que libere nutrientes que permitan un buen desarrollo vegetal.Cuando se quema un bosque, observamos la importancia de todo lo que estamos diciendo, ya que muere toda la plantacin, pero muere tambin el suelo de esta, por lo que tardar mucho tiempo en recuperarse.

En la agricultura tradicional, se alternaban las lneas de cultivo en el suelo, o bien se dejaba descansar la tierra durante un tiempo. Actualmente, en la agricultura intensiva, el suelo apenas est sin cultivo, y se planta siempre en la misma lnea de terreno, por lo degradamos el suelo rpidamente.

Por todas estas razones, se est empleado lo que se denomina Biofertilizacin, que consiste en aumentar el nmero de microorganismos de un suelo, para de esta forma, acelerar todos los procesos microbianos, aumentar la cantidad de nutrientes asimilables por la planta, etc.

Una biofertilizacin correcta, ayuda a una fertilizacin tradicional, reduciendo el uso de energa de la planta a la hora de absorber los distintos nutrientes, disminuye la degradacin del agroecosistema y reduce la prdida de nutrientes del suelo por lixividados, sobre todo de nitrgeno.

Pero estos microorganismos actan a la vez como agentes de control biolgico, con lo que reducimos aquellos microorganismos indeseables en el suelo y favorecemos los organismos tiles para los cultivos, con lo que aumentamos la produccin de la planta.Existen muchos hongos en el suelo que son beneficiosos para las plantas. Un hongo, est constituido por una serie de filamentos ms o menos anchos, que se les denomina hifas. Al conjunto de hifas del hongo, se le denomina micelio. La forma de reproduccin de los distintos hongos se realiza mediante las esporas, que se producen en los cuerpos fructferos. La espora para un hongo, es algo similar a la semilla para una planta.El ciclo de vida de los distintos hongos que producen enfermedades en las plantas, es muy diferente de unos a otros. Todos comienzan con una espora que al germinar, produce una serie de hifas, que producirn una serie de cuerpos fructferos, generndose nuevas esporas.

Nos centraremos en unos hongos que son beneficiosos para el suelo y para la planta, y que se engloban dentro del Gnero Trichoderma. HONGOS DEL GNERO TRICHODERMA.El gnero Tricoderma est compuesto por hongos que se encuentran presentes en forma natural, en casi todos los suelos y hbitats del planeta.Es un Deutoromiceto perteneciente al grupo de los Hifomicetos, y se caracteriza porque se desarrolla rpidamente y emite gran cantidad de esporas verdes.Es un hongo que frecuentemente se encuentra sobre madera y tejidos vegetales en descomposicin. Es un organismo dominante en los suelos, debido a su naturaleza agresiva y su capacidad metablica para competir con la abundante microflora circundante.Al introducir en el suelo algn producto con este hongo, las cepas de Trichoderma germinarn y desarrollarn un micelio ptimo y necesario para actuar frente a los patgenos, que estn presentes en el suelo o que pudieran llegar a aparecer.Este hongo es fcil de aislar y reproducir, por lo que muchas empresas estn apostando por su comercializacin, ya que al aplicarlo al suelo beneficia a la planta como veremos posteriormente, y no la perjudica, ya que no puede penetrar en las races.

VIII. BIBLIOGRAFA

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Besednjak Dietrich, Alejandro (2005). Autoclave. Materiales compuestos: procesos de fabricacin de embarcaciones. Ediciones UPC. pp.132.

Ingeniera Ambiental