"Ao de la Inversin para el Desarrollo Rural y la Seguridad Alimentaria"

UNIVERSIDAD NACIONAL INTERCULTURAL DE LA AMAZONA

INFORME DE PRCTICA DE LABORATORIO

TEMA:ENSAYO FITOQUIMICO DEL EXTRACTO ETANOLICO

ALUMNO: SANDI CHAVEZ, William Beder PUA CURITIMA, Richer MAINAS ROJAS, Jerson ANTUASH HUAMAN

Docente: Qco. Lylyams IngaCarrera profesional: Ing. Agroindustrial CICLO / Semestre: VIII / 2013-I

YARINA COCHA - PUCALLPA PER11 DE JUNIO DEL 2013I. INTRODUCCINEl Per es uno de los pases ms destacados en diversidad biolgica; existen alrededor de 25,0000 especies de plantas medicinales, mucha de las cuales poseen propiedades teraputicas. La Organizacin Mundial de la Salud reconoce la importancia del rol que desempea el uso y utilizacin de las plantas medicinales en la Atencin Primaria de la salud; recomienda y respalda su integracin en los sistemas nacionales de salud; estima que casi el 80% de todos los habitantes de la Tierra los usan para resolver sus principales problemas de salud. De acuerdo con la Organizacin Mundial de la Salud (OMS), las enfermedades cardiovasculares, como el infarto al miocardio y accidente cerebro vascular, cobran 17,5 millones de vidas al ao en el mundo y tienen como causa principal la trombosis o coagulacin sangunea en el interior de las arterias para producir estas enfermedades; entre otras.

Para su tratamiento se dispone de varios grupos de medicamentos, denominados en conjunto como anticoagulantes; entre stos se encuentran: antiagregantes plaquetarios, anticoagulantes orales y trombolticos. Entre los antiagregantes plaquetarios reconocidos tenemos la Aspirina, pero produce inflamacin gstrica como efecto adverso principal.

Actualmente es necesario buscar metabolitos secundarios o compuestos qumicos procedentes de fuentes naturales con actividad antiinflamatoria y de uso en desrdenes digestivos como es el caso de los flavonoides, que son compuestos fenlicos distribuidos ampliamente en la naturaleza y han demostrado tener una gran actividad biolgica, principalmente como antioxidantes y antiinflamatorios.

II. OBJETIVOS

Conocer los mtodos de anlisis fitoqumico del extracto etanlico de las hojas.

Identificar las familias qumicas como Alcaloides, Quinonas, Flavonoides Lactonas y Cumarinas, Fenoles y Taninos, Saponinas, aminocidos y aminas, Carotenos, Lipidos y/o Aceites Esenciales.

III. MARCO TEORICOFOTOQUMICAEn hojas y flores se han detectado alcaloides, adems de saponinas y triterpenos; en tallos, alcaloides y triterpenos. La presencia de alcaloides, saponinas y triterpenos puede dar indicio de la actividad biolgica, ya que los alcaloides presentan tal actividad y las papaveraceae han proporcionado alcaloides antimicrobianos y otros de accin narcotizante. Se conoce que algunas saponinas y triterpenos son activos.

EXTRACTOS VEGETALESLa extraccin y el empleo de algunas de las sustancias que intervienen como mecanismo de defensa, pueden ser de gran ayuda para los agricultores, sobre todo en aquellos casos de mayor complejidad, donde el control de plagas y enfermedades requieren manejos alternativos.

Se cree que gran parte del efecto de los extractos de plantas sobre las enfermedades, ms que deberse a algn tipo de toxicidad directa, se produce por el fortalecimiento estructural de la planta, incrementando su resistencia a la penetracin de los micelios de los hongos y a los ataques de insectos chupadores como los pulgones, o bien estimulando un desarrollo vigoroso para superar un ataque. La cola de caballo contiene una saponina txica para los hongos llamada equisetonina y cido silcico que favorece la estructura de la planta. Por lo general no hay una nica sustancia responsable, sino que es una interaccin compleja entre una gama de agentes.

Lampkin afirma que los extractos pueden actuar como repelentes de los insectos, tal es el caso del ajenjo, el aj, el ajo o pueden ser directamente txicos como el pelitre, el neem. Las sustancias repelentes pueden ser utilizadas en forma preventiva o asociadas con polvo de roca o extractos de ruibarbo y ortiga que tienen un efecto irritante. En Suiza se realizaron algunos ensayos sobre tratamientos alternativos de desinfeccin de semillas para el control de Septoria y Fusarium en trigo; se encontr que el extracto de cola de caballo era comparable a las desinfecciones de semillas con preparados a base de mercurio, en parte debido a un efecto depresor del crecimiento. La cola de caballo elimin completamente la Septoria, lo que no se consigui con ningn otro tratamientode desinfeccin. Los resultados que se obtienen son muy variables y esto se relaciona con que muchos de los compuestos son aromticos, o solubles al agua, o son degradados rpidamente por la luz solar, por lo que no pueden aplicarse con xito al aire libre ya que desaparecen muy rpidamente.

La calidad y concentracin de las sustancias activas pueden llegar a variar hasta 500% de una estacin a otra o con la localizacin de la planta, edad y madurez del material vegetal con que se prepara el extracto. La sustancia activa se encuentra a menudo concentrada en una parte especfica de la planta, aunque frecuentemente y por razones comerciales, se emplee toda la planta.

Otra causa de la variabilidad incluye el hecho de que la sustancia activa suele estar ligada a un azcar y necesita ser separada por una enzima antes de activarse y el secado rpido impide o reduce este proceso, por lo tanto baja su efectividad. Dejar las plantas en remojo tambin puede destruir la sustancia o dejarla escapar.

ESQUEMA DEL PROCESO DE UN ESTUDIO FITOQUIMICO

La recoleccin de especies vegetales depende de las caractersticas de cada especie. Se puede hacer de forma manual o mecanizada. La recoleccin manual es mas selectiva y artesanal pero mas lenta y poco rentable. El momento de la recoleccin condiciona notablemente la calidad y cantidad de principio activo de la especie recolectada, y es preciso tener en cuenta una serie de factores como son:

1. La edad de la especie vegetal2. El estadio de la planta 3. La poca del ao4. El momento del da

Los rganos vegetales que se recolectan condicionan asimismo la poca y las caractersticas de la recoleccin: Las hojas, flores, frutos, semillas, capullos Cortezas, raz, etc.

SECADO

Los procedimientos utilizados para eliminar agua son:A. DESECACIN NATURAL: Es el procedimiento ms lento y ms econmico pero generalmente menos efectivo.

a) Desecacin al aire libre y al sol: Mtodo poco utilizado en la mayora de especies vegetales, porque puede haber alteraciones en el color, volatilizacin de principios activos etc.

b) Desecacin al aire libre y a la sombra: se trabaja con aire clido o ambiental que circula por las instalaciones donde estn distribuidas los vegetales que se desea secar.

B. DESECACION ARTIFICCIAL: El secado con calor artificial es generalmente el ms adecuado ya que permite un control de la temperatura, de la humedad ambiental y del tiempo que dure la operacin.

a) Tneles de secado b) Torres de secado c) Estufa al vaci d) Radiacin infrarroja e) Liofilizacin

MOLIENDA Y ALMACENAMIENTO

La moliendo se realiza cuando la especie vegetal esta en condiciones como la perdida total de agua. Y puede ser de forma artesanal o mecnica. Las condiciones generales de almacenamiento de especies vegetales son las siguientes: Almacenar en lugar fresco Almacenar en lugar seco Preservar de la luz Aislar de la atmsfera Evitar el desarrollo de parsitos hongos, e insectos. Controlar el tiempo de almacenamiento de las drogas .

EXTRACCION

Hay varias formas de obtener los principios activos a partir de una especie vegetal: Tenemos los siguientes mtodos de extraccin:

-Extraccin Mecnica: Es una tcnica que permite obtener los principios activos disueltos en los fluidos propios de la planta, los cuales una vez extrados se denominan jugo. La extraccin mecnica se puede realizar:

a) Por presin: consiste en ejercer una presin sobre la muestra vegetal. b) Con calor c) Mediante incisiones por las que fluyen los fluidos de la planta.

- EXTRACCION CON DISOLVENTES: Consiste en poner en contacto la droga con un disolvente capaz de solubilizar los principios activos. Los principios activos deben pasar de la droga al disolvente de manera que se obtenga un extracto lquido. Posteriormente dicho extracto se puede concentrar eliminando el disolvente en un rotavapor.

Para que la extraccin con disolvente se lleve a cabo correctamente haya que tener en cuenta:

a- caracterstica de la drogab-Naturaleza del disolventec-Temperaturad-Tiempo de contacto entre la droga y el disolventeLos diferentes tipos de extracciones podemos agrupar en dos: Las extracciones discontinuas y las extracciones continuas.

Extraccion discontinua: se sumerge la droga en el disolvente. Incluye varios procedimientos.-Maceracin. Consiste en poner en contacto la droga seca, molida con el isolvente utilizando para la extraccin temperatura ambiente, durante un tiempo determinado, a continuacin filtramos obtenindose un extracto lquido, llevndolo a un rotavapor para recuperar el solvente y realizar otra maceracin hasta agotamiento.

DETERMINACIN DE FAMILIAS QUMICASPara determinar la composicin qumica de las plantas medicinales y conocer sus constituyentes biolgicamente activos pueden seguirse metodologas que van desde un anlisis fitoqumico preliminar preliminar hasta estudios qumicos sistemticos bioguiados.

Puesto que este ltimo tipo de estudio requiere una inversin considerable de tiempo y recursos, lo ideal es iniciar con estudios fitoqumicos preliminares que permitan hacer una discriminacin de las plantas a estudiar en trminos de su composicin qumica, con el fin de seleccionar nicamente aquellas ms interesantes para posteriores estudios sistemticos. El objetivo de un estudio fitoqumico preliminar es determinar la presencia o ausencia de los principales grupos de metabolitos en una especie vegetal, a saber: alcaloides, antraquinonas y naftoquinonas, esteroides y triterpenos, flavonoides, taninos, saponinas, cumarinas, lactonas terpnicas y cardiotnicos. Dado que cada unode estos grupos de compuestos est relacionado con actividades biolgicas especficas, partiendo de los resultados obtenidos en el estudio fitoqumico preliminar es posible orientar investigaciones posteriores para determinar la actividad biolgica de las especies en cuestin y los principios activos involucrados.

IV. MATERIALES

4.1 Material biolgico Hoja de granadila seca

4.2 Materiales: vasos de precipitacin de 250 ml. pipetas de 1 y 5ml. estril. probetas de 50ml. estril. tubos de ensayo estril. Placa petri Pro pipeta

5.4 Equipos: Balanza analtica Estufa Campana extractora de gases Bao mara

5.5 Reactivos Alcohol cido clorhdrico al 10 % Dragendroff Cloroformo (CHCl3) hidrxido de sodio al 5 % HCl concentrado etanol cloruro ferrico (FeCl3) ninhidrina al 5 % Carr-Prince Sudan III

V. PROCEDIMIENTOEnsayo para AlcaloidesPesamos 400 mg. de extracto seco se le adiciona 15 ml de cido clorhdrico al 10 % se calienta hasta disolver y filtramos. De esta forma se obtiene un residuo y una disolucin cida (lavados cidos). Se mide 1 mL de los lavados cidos en cuatro (4) tubos de ensayo un tubo es para muestra patrn y adicionamos unas gotas de los reactivos de reconocimiento de Dragendroff (la presencia de turbidez, floculacin o precipitado rojo- naranja), de Mayer (precipitado crema), de Wagner (precipitado marrn).Pruebas directas para alcaloides.Al lavado cido sobrante lo colocamos en un pera de separacin y extraemos con cloroformo, donde se obtiene dos fases: clorofrmica y acuosa. La fase clorofrmica lo pasamos a un baln y lo llevamos a sequedad en un rotavapor , hacemos una CCF, la presencia de manchas de color naranja indica la presencia de alcaloides .Ensayo para Quinonas (Borntrager)Tomar un tubo de ensayo con la muestra ya disuelta en. Cloroformo (CHCl3), se adiciona 1 mL. de (NaOH) hidrxido de sodio al 5 %, agitamos y dejamos en reposo, se forman dos fases la clorofrmica y alcalina . Una coloracin, rojo, rosa en la fase alcalina indica la presencia de quinonas. De la disolucin clorofrmica obtenida a partir de la fraccin para el ensayo de triterpenos y esteroides. Tubo N2 se utiliza 1 mL. la cual se le adiciona la misma cantidad de hidrxido de sodio al 5 % Una coloracin, rojo, rosa en la fase alcalina indica la presencia de quinonas. En el tubo N 3 adicionar 1 mL. de solucin de acetato de magnesio al 0.5 % en metanol. Coloracin roja indica presencia de antraquinonas libres.

Ensayo para Flavonoides (Mtodo de Shinoda)Colocar en un tubo de ensayo con la muestra ya diluida en etanol, adicionar un trocito de cinta de magnesio y 5 a 6 gotas de HCl concentrado. Observndose la reaccin del Mg con el HCl donde se realiza un cambio de color en la parte superior del lquido de nuestra dando:Resultados Positivos:Amarillo-rojo = Flavonas, chalconas, auronasRojo-magenta = FlavanonolesRojo, magenta, violeta,azul = Antociancidos Amarillo claros, incoloros = Flavonoles, Flavonas y Isoflavonas.

Ensayos para Lactonas y Cumarinas (Baljet)A una fraccin de extracto se disuelve en 2 mL. de etanol se distribuye en dos tubos de ensayo un tubo para control, al otro tubo se le aade una mezcla recin preparada de de 1 mL. de cido pcrico al 1 % en etanol y 1 mL de hidrxido de sodio al 10 % en agua.Un color o precipitado rojo-naranja indica la presencia de agrupamientos lactnico (cumarinas).Ensayo para Fenoles y Taninos A una fraccin del extracto ya disuelto en etanol se toma 1 mL, adicionamos de 3 a 5 gotas de cloruro ferrico (FeCl3), lentamente, fijndonos la variacin y aparicin de un color o precipitado verde. Rojo, azul o negro indica la presencia de Fenoles y/o Taninos. La coloracin azul indica posible presencia de Taninos hidrolizables, y coloracin verde de taninos condensados. Si el color o precipitado es Prpura o rojo-pardo indican presencia de Fenoles.Ensayo para Saponinas.A una fraccin del extracto diluida en etanol se le adiciona 4 mL de agua y se agita la mezcla fuertemente durante 2 minutos, dejar reposar 5 minutos.Si aparece una espuma jabonosa de ms de 2 mm de altura en la superficie del lquido y persiste esto indica la presencia de saponinas.Ensayo para aminocidos y aminas (Ninhidrina)A una fraccin el extracto diluido en etanol se le adiciona 1 mL de disolucin de ninhidrina al 5 % en etanol. Se calienta en bao de agua de 5 10 minutos.La aparicin de una coloracin azul violcea indica la presencia de aminas.Ensayos para Carotenos (Carr-Prince)A una fraccin del extracto hexanico 1 ml. se le adiciona igual volumen del reactivo de Carr-Prince.La aparicin de una coloracion verde azulada indica la presencia de carotenos.Ensayo para Lipidos y/o Aceites Esenciales ( Sudan III)A una fraccin del extracto hexanico 2 ml se evapora hasta sequedad en presencia de la disolucin de Sudan III. La aparicin de gotas oleosas de color rojo oscuro, indica la presencia de lpidos y/o aceites esenciales.

VI. RESULTADOS Al realizar el ensayo de solubilidad y marcha fotoqumica se observ gran cantidad de compuestos fotoqumicos,Las pruebas de precipitacin y coloracin realizadas al extracto etanlico y material frescos de hoja de granadilla indican la presencia, de alcaloides, flavonoides, quinonas, aminocidos, lactonas, Lpidos y/o Aceites Esenciales,

EXTRACTOENSAYO O PRUEBA

ETANOLICO

AlcaloidesD+

WNo

MNo

Triterpenos No

EsteroidesNo

Quinonas+

Flavonoides+

Lactonas+

Fenoles -

Taninos+

Saponinas-

Aminocidos y Aminas+

Lpidos y/o Aceites Esenciales+

CarotenosNo

Cumarinas FijasNo

Cumarinas VoltilesNo

Leyenda:Ensayo positivo (+), contenido: (+) Poco; (++) Medio; (+++) AbundanteEnsayo negativo (-)No s realiza el ensayo para este tipo de extracto (No).VII. DISCUSIN

El tamizaje fitoqumico, efectuado al extracto alcohlico de las hojas, demostr la existencia de varias familias de metabolitos secundarios de inters biolgico y farmacolgico, entre los que se destacan, por su significativa presencia, las alcaloides, taninos hidrolizables,flavonoides, etc

Mara del Carmen Victoria AmadorEn el extracto etanlico en algunos casos comparados con otros solventes no se encuentran fcilmente metabolitos secundarios. Esta diferencia pudiera explicarse, principalmente por la desigualdad de polaridad del etanol respecto al agua; as como, a que el extracto fluido, preparado por repercolacin, tiene mayor poder extractivo que la decoccin o a que en stas concentraciones no son suficientes para ser identificadas por los mtodos cualitativos de Shinoda para flavonoides, de Bortrager para quinonas y de Rosemhein para las antocianidinas.

Lyndon Carvajal Rojas

Con respecto a los alcaloides, siempre se encuentra en mayor proporcin. Sin embargo, dado que la cantidad de precipitado obtenido es proporcional a la concentracin de alcaloides en la muestra, puede inferirse que las hojas son el rgano de la planta donde tiene lugar la mayor acumulacin de alcaloides, aunque cabe aclarar que en tallos y semillas tambin se encuentran en concentracin apreciable.

Los tallos y las semillas presentan alcaloides, flavonoides, lactonas y esteroides. Las semillas contienen lactonas terpnicas, mientras que en los tallos se encuentran lactonas pero no de tipo esteroidal.

VIII. CONCLUSIN

Se conoci los mtodos de anlisis fitoqumico del extracto etanlico de las hojas.

Se identific las familias qumicas como Alcaloides, Quinonas, Flavonoides Lactonas y Cumarinas, Fenoles y Taninos, Saponinas, aminocidos y aminas, Carotenos, Lipidos y/o Aceites Esenciales.

IX. REFERENCIA BIBLIOGAFICA

Pablo E Bonilla Rivera. 2011. COMPOSICIN QUMICA Y ACTIVIDAD FARMACOLGICA DEL EXTRACTO ETANLICO DE Satureja sericea (GOYAL). Universidad Nacional Mayor de San Marcos

Hilda Vanessa Daz Porras. 2011. EFECTO ANTIAGREGANTE PLAQUETARIO in vivo Y FIBRINOLTICO in vitro DEL EXTRACTO ETANLICO DE LAS HOJAS DE Oenothera rosea Aiton (chupasangre)

JAVIER ARCILA CASTRO. 2006. EVALUACIN DEL EXTRACTO DEL TROMPETO (Bocconia frutescens L.) EN EL MANEJO DE PROBLEMAS FITOSANITARIOS DE INTERS AGRCOLA. Colombia

Mara del Carmen Victoria Amador Tamizaje fitoqumico, actividad antiinflamatoria y toxicidad aguda de extractos de hojas de Annona squamosa L. REV CUBANA PLANT MED 2006;

Jorge Eliecer Espitia-Baena, 2011. Qumica y biologa del extracto etanlico del epicarpio de Crescentia cujete L. (totumo) Universidad de Cartagena. Cartagena, Colombia

Lyndon Carvajal Rojas ANLISIS FITOQUMICO PRELIMINAR DE HOJAS, TALLOS Y SEMILLAS DE CUPAT (STRYCH NOS SCHULTESIANA KRUKOFF). Revista Colombia Forestal Vol. 12: 161-170 / Diciembre 2009

X. ANEXOS

Anlisis preliminar de alcaloides.

Rotavapor