REPORTE DE PRÁCTICA

PRÁCTICA 10 EXTRACCIÓN DE ADN

ASIGNATURA: LABORATORIO DE BIOLOGÍA CELULAR

DOCENTE: DRA. ANA OLIVIA CAÑAS URBINA

2° SEMESTRE

LIC. EN QUÍMICO FARMACOBIÓLOGO

INTEGRANTES DEL EQUIPO:

ÁLVAREZ OCAÑA JOHNNY A.

DOMÍNGUEZ MUÑOZ DEYANIRA A.

GÓMEZ CASTELLANOS DANIELA GPE.

MALDONADO GÁLVEZ ALEJANDRA

OCOZOCOAUTLA DE ESPINOZA, CHIAPAS; A 11 DE NOVIEMBRE DE 2015

UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE CHIAPAS

FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICAS

EXTENSIÓN OCOZOCOAUTLA

ANTECEDENTES.

“El ADN por las siglas de Acido Desoxirribonucleico, es una molécula de gran tamaño que guarda y transmite de generación en generación toda la información necesaria para el desarrollo de todas las funciones biológicas de un organismo”.

“El ADN fue identificado inicialmente en 1868 por Friedrich Miescher, biólogo suizo, en los núcleos de las células del pus obtenidas de los vendajes quirúrgicos desechados y en el esperma del salmón. Él llamó a la sustancia nucleína, aunque no fue reconocida hasta 1943 gracias al experimento realizado por Oswald Avery”.

“La estructura del ADN es una pareja de largas cadenas de nucleótidos. La estructura de doble hélice del ADN fue descubierta en 1953 por James Watson y Francis Crick. Una larga hebra de ácido nucleico está enrollada alrededor de otra hebra formando un par entrelazado. Dicha hélice mide 3,4 nm de paso de rosca y 2,37 nm de diámetro, y está formada, en cada vuelta, por 10,4 pares de nucleótidos enfrentados entre sí por sus bases nitrogenadas”.

El ADN se encuentra en el núcleo de las células, por lo tanto para poder extraer ADN se necesitan romper las 3 membranas que lo recubren, para eso se utiliza el detergente ya que estos emulsionan los lípidos de las membranas y las rompen. La sal evita la unión de las proteínas al ADN, disminuyendo su solubilidad, al igual que el jugo de piña que contiene enzimas que rompen a las proteínas. Para aislar el ADN se hace que precipite en alcohol. El ADN es soluble en agua y el alcohol separa el ADN de otras sustancias que no interesan, que quedan en la solución acuosa.

OBJETIVO.

Observar el ADN de la cebolla.

MATERIALES.

MaterialUna cebolla grande frescaJugo de piña2 vasos de precipitadosCúterLicuadoraAlcohol n-propílico, absoluto, fenol y al 70%Detergente líquido para trastesAgua destilada

Agitador de vidrioCubre bocas para filtrarSal4 tubos de ensaye

METODOLOGÍA.

RESULTADOS.

Para realizar la práctica de extracción de ADN, se prepararon los materiales y la mezcla del detergente (sirve para romper las tres membranas para llegar al núcleo), la sal (sirve para estabilizar el pH), el jugo de piña (sirve para asegurar el ADN) y el alcohol (funciona como un separador de fases, es decir mientras que el ADN esta diluido en el agua, al agregar alcohol éste queda suspendido).

Se pretendió realizar la extracción con cuatro diferentes alcoholes:

1.- alcohol absoluto

2.- alcohol a 70°

3.- alcohol n- propílico

4.- fenol

Paso 1Identificar el centro de la cebolla y cortarlo en cubos

Paso 2En un vaso de precipitado agregar 3 cucharadas de detergente, una de sal y agua hasta llenar el vaso.Mezclar perfectamente.

Paso 3Vaciar la mezcla en el vaso de la licuadora, agregar los trozos de cebolla y licuar por 3 minutos.

Paso 4 Filtrar en un vaso de precipitado

Paso 5Añadir 3 cucharaditas del jugo de piña y mezclar con el agitador de vidrio. Colocar en los tubos de ensaye un poco de esta mezcla.

Paso 6Agregar poco a poco el alcohol, resbalandolo por las paredes, hasta que se llene el vaso y los tubos de ensaye. Dejar reposar por 3 minutos.

Paso 7A los 3 minutos se observa una zona turbia, extraer las fibras de ADN de esta zona.

Se colocó en cuatro tubos de ensaye cierta parte de la muestra, después de esto se añadió, cierta cantidad de alcohol a cada tubo y estos sirvieron como control, a parte de los tubos de ensaye se colocó una mayor parte de la mezcla en un vaso

de precipitado y se le añadió alcohol n- propílico.

Se esperó el tiempo que nos sugería la metodología, y se observaron los resultados, se esperaba que al añadir el alcohol a la mezcla se identificaran fácilmente las hebras del ADN, sin embargo, no fue así,

En el alcohol absoluto se lograron identificar pequeñas bolitas, que se deducía era el ADN.

En el alcohol a 70° no se logró la separación del ADN ya que no hubo ningún cambio o bien no se identificaron las tres fases como

en el n-propílico.

En el alcohol n-propílico si se logró observar la diferencia de las fases, tanto en el vaso como en el tubo de ensaye, en la parte inferior se observó una parte más obscura que al ir subiendo se convertía en más claro hasta transparente, en la parte del medio se encontraba el ADN, que al intentar sacar la hebra de ADN, no se logró.

Con el fenol, definitivamente la reacción no funcionó, en la parte de abajo se formó un “hueco” transparente.

Al final se intentó tomar las hebras de ADN con un hisopo, sin embargo no se logró, este fenómeno ocurrido lo atribuimos a diferentes factores,

DISCUSIÓN DE RESULTADOS.

Los resultados obtenidos no fueron exactamente los esperados de acuerdo a la metodología utilizada en la práctica, se pieza que esto se debe a varios factores, tales como:

Las cantidades utilizadas no fueron trabajadas sobre unidades de medidas(ej.mg, gr, ml, L)

La falta de alcohol al 96% que se requería la práctica. El agua destilada que se utilizó no se encontraba fría.

El jugo de piña no se coló previamente por lo tanto contenido impurezas. En otra práctica realizada con anterioridad se observó que no se utiliza

licuadora, sino mortero con pistilo por lo que piensa que la licuadora pudo haber sido segmentado demasiado al ADN.

A parte de hacer la mezcla en un vaso precipitado, como control se realizó en tubo de ensayo; en donde se observó una mejor separación de fases.

Por lo tanto la metodología se considera esta errada.

CONCLUSIÓN.

En conclusión, al obtener los resultados esperados se aconseja la revisión de la metodología de esta práctica, por lo que al ser una práctica a realizar en un laboratorio de nivel básico, no se maneja un completo control de las variables, por lo tanto la extracción de ADN no es tan sencillo como se preveía.

CUESTIONARIO.

1.- ¿Podrían extraer ADN de otros materiales?, ¿de cuáles?

Sí, siempre y cuando sean materiales qué estén dentro de la categoría de “seres vivos”, ya que éstos poseen células, unidades fundamentales para la vida. Tanto los vegetales, como los animales, incluso microorganismos poseen el material genético, que los hace únicos en su especie, ya que controla los procesos vitales y alberga el material genético.

2.- ¿Podrían distinguir simple vista el ADN de distintos seres vivos?, ¿Por qué?

Si se realiza un experimento similar al de ésta práctica pues sí, ya que el ADN se encuentra de forma condensada, pero con esto, se logra desenrollar al ADN, pudiéndose observar a simple vista. De otra forma ver el ADN es en realidad imposible de observar para el ojo humano, ya que el ADN dentro del núcleo de las células se encuentra en un aproximado de 22-26 Angstroms aclarando que puede variar según la especie. Si tenemos en cuenta que 1 Angstroms=0.1 nm, entonces hablaríamos de 2.2 a 2.6 nm

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS.

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Syngenta. (s.f.). ¿Qué es ADN? Recuperado el 10 de noviembre de 2015, de http://www.syngenta.com.mx/que-es-adn.aspx