PEMURNIAN DAN KARAKTERISASI ENZIM ASETIL-CoA HIDROLASE

NC-IUBMB 3.1.2.1Acetyl-CoA acylase, acetyl-CoA thiol esterase, acetyl-CoA deacylase, Ach1Pertama ditemukan di hati babi (1952) Hati & otak Tikus, Jaringan adiposa Hamster, Saccharomyces cerevisiae

PENDAHULUANPEMURNIAN DAN KARAKTERISASI ENZIM ASETIL-COA HIDROLASEDonny Nugraha M20508024

MEKANISME REAKSIPENDAHULUANPENGGUNAANTEKNIK ANALISISKESIMPULAN AGENDA

PENDAHULUANASETIL-CoA..?Senyawa yang dioksidasi siklus Krebs As donor substrats in co-translational, post-translational or chemical modification : acetylationGel Filtration chromatographySDS-PAGE (Sodium Dodecyl Sulphate-PolyAcrilamide-Gel Electrophoresis) TEKNIK ANALISISDEAE Sepharose

TEKNIK ANALISISHomogenity and Molecular PropertiesMenggunakan prosedur kromatografi DEAE-Sepharose, Sepharose CL-4B, Hidroxilapatit

Enzim terdiri kira-kira 0,2 % dari total Cellular protein Molecular Weight Analysis Menggunakan elektroforesis jel - metode Laemmli dan dibandingkan dengan berat molekul standar (miosin 205kDa, Bovin serum albumin 66kDa)Mr 64,000 5,000 . monomeric

TEKNIK ANALISISIsoelectric AnalysisPita Single protein pada pI=5,8

pH Dependence AnalysisPengujian pH dari 4Sampai 10

TEKNIK ANALISISTemperature Optimum AnalysisAktivitas enzim dari 5 sampai 65C ,maksimum terjadi pada 37 -42C

Amino Acid Analysis

TEKNIK ANALISISSubstrat Specificity Analysis

PENGGUNAANPharmaceutical UsesEnzyme would inhibit acetylation of platelets, thus increasing clotting time Agriculture Uses

KESIMPULAN Mr 64,000 5000 Da Isoelectric point 5,8 pH optimum 8,0 Temperatur Optimum 37 42C Irreversibel denaturasi setelah 1 menit pada 70C Substrat tergantung spesifisitas

OrganismeSenyawa AktifasiT O(oC)Sumber JaringanLokalisasiInhibitorRattus norvegicus3-thiadicarboxylic acid37Otak, jaringan adipose, hati, jantungSitosol, lisososm, peroksisom2,3-Butanedione, ADPMus musculusL(-)-Carnitin37HatiSitosolADPMesocricetus auratusADP37Jaringan adipose, hatiMitokondrionKoenzim ATrypanosoma brucei bruceiGDP37Flagelata-ATP, ADPPisum sativum-37DaunMitokondrionKoenzim ASaccharomyces cerevisiaeAsetat37-SitoplasmaGlukosaTERIMAKASIHSEKIAN&

SubstratProdukOrganisme3-butenoyl-CoA3-butenoate + CoAAcidaminococcus fermentansasetoasetyl-CoAasetoasetate + CoAOvis ariesasetoasetyl-CoAasetoasetate + CoARattus norvegicusasetyl-CoA + H2OCoA + asetateAscaris suumasetyl-CoA + H2OCoA + asetateHomo sapiens