Passiflora mixta

7/25/2019 Passiflora mixta

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ESCUELA SUPERIOR POLITCNICA DE CHIMBORAZO

FACULTAD DE CIENCIAS

ESCUELA DE BIOQUMICA Y FARMACIA

ANTEPROYECTO DE TRABAJO DE TITULACIN

ESTUDIO FITOQUMICO, Y ANLISIS DE LA ACTIVIDAD

ANTIOXIDANTE IN VITRO DE HOJAS Y FLORES DE Passiflora

mixta

PRESENTADOPOR: DIANA CAROLINA PAREDES LVAREZ

TUTOR: BQF. FAUSTO CONTERO

COLABORADOR: Lic. KAREN ACOSTA

RIOBAMBAECUADOR

!"#$


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NDICE

I. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA..................................................................11.1. Identificacin del problema..........................................................................1

1.2. !"tificacin de la in#e"ti$acin...................................................................2

II. MAR%O TEORI%O...........................................................................................3

2.1. &'NDAMENTA%I(N TE(RI%A...................................................................3

2.1.1. Medicina con#encional.........................................................................3

2.1.2. Problema" con medicamento" con#encionale"........................................3

2.1.2.1. Efecto" ad#er"o" a medicamento"..................................................3

2.1.2.1.1. Clasificacin de efectos adversos............................................4

2.1.3. Medicina tradicional.........................................................................4

2.1.4. Fitofarmacia.....................................................................................4

2.1.). %oncepto" "obre O*idacin..................................................................4

2.1.).1. Radicale" libre"............................................................................5

2.1.).2. E"pecie reacti#a de o*+$eno ,ERO-.................................................5

2.1.).. E"tr/" o*idati#o............................................................................5

2.1.0. Antio*idante"......................................................................................5

2.1.0.1. Antio*idante" nat!rale"..................................................................5

2.1.6.1.1. Clasificacin de antioxidantes segn su origen.........................5

2.1.. Pa""ifloramixta,Pa""ifloraceae-...........................................................6

2.1..1. A"pecto" botnico".......................................................................6

2.1.7.1.1. Princiales caracteres cualitativos oli!rficos........................7

2.1..2. %on"tit!cin 3!+mica.....................................................................7

2.1.7.2.1. "lavonoides............................................................................8

2.1.7.2.1.1. Clasificacin......................................................................82.1.7.2.1.2. Proiedades far!acolgicas..............................................9

2.1.7.2.2. #lcaloides...............................................................................9

2.1.7.2.2.1. Proiedades $u%!icas........................................................9

2.1.7.2.2.2. Proiedades far!acolgicas............................................10

2.1.7.2.2.&. #lcaloides '(car)ol%nicos.................................................10


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2.1... Propiedade" farmacol$ica" de Pa""iflora......................................11

2.2. Antecedente" de la in#e"ti$acin...............................................................11

III. 4IP(TE5I5 6 OBETI7O5..........................................................................12

.1. 4ipte"i" $eneral.....................................................................................12

.2. Ob8eti#o" de la in#e"ti$acin.....................................................................12

.2.1. Ob8eti#o $eneral................................................................................12

.2.2. Ob8eti#o" e"pec+fico".........................................................................12

I7. MATERIALE5 6 M9TODO5.........................................................................12

:.1. Tipo ; di"e


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).1. Pre"!p!e"to............................................................................................21

).2. %rono$rama............................................................................................22

BIBLIO@RA&A....................................................................................................23


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I. P,#N-E#IEN-/ DE, P0/,E#

I.1. Identificacin del ro)le!a

En lo" ltimo" aan obtenido por #+a "int/tica "e >a #i"to en a!mento. ,1-

Lo" efecto" "ec!ndario" por "! parte p!eden "er le#e" como dolor de cabe?aCotro" "on "e#ero" e incl!"i#e mortale" como daeptico. Al$!no" p!eden d!rarpoco" d+a" o "emana"C otro" permanecen d!rante todo el tratamiento e incl!"i#el!e$o de finali?ado. Mientra" !no" oc!rren dentro de lo" primero" d+a" o "emana"de tomar !n medicamento otro" por "! parte "on manife"tado" l!e$o de "e$!ir!na terapia por me"e" o a!bo en 212C por lo c!al d!rante e"te

periodo la" m!erte" a ca"!"a de cncer pa"arn de FC2 millone" a 1 millone" pora


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mientra" 3!e en la" m!8ere"C el m" frec!ente e" el cncer de mama" con !n2)C2. ,)-

Di#er"a" in#e"ti$acione" >an demo"trado 3!e la aplicacin de planta" del $/neroPassiflora en tratamiento de an"iedad a"+ como "! capacidad antio*idante >atenido $ran eficacia. Passiflora mixta e" !na e"pecie "il#e"tre 3!e no >a "idoe"t!diado a prof!ndidad en relacin a "! compo"icin fito3!+micaC por lo c!al "er+ade $ran inter/" !n e"t!dio en e"te ni#el para determinar metabolito" "ec!ndario"como fla#onoide" ; alcaloide" ; anali?ar la capacidad antio*idante de e"tae"pecie.

I.2. ustificacin de la investigacin

La fitoterapia "e >a con#ertido en !na b!ena alternati#a para poder reempla?ar alo" medicamento" "int/tico" 3!e debido a "!" efecto" "ec!ndario" en l!$ar de "er!na "ol!cin p!ede #ol#er"e !n problema. La !tilidad de fitomedicamento" "eenc!entra re"paldada por e"t!dio" cient+fico" ; cl+nico"C "! !"o no ca!"a efecto"colaterale" ; el +ndice de to*icidad e" menor al de lo" medicamento"comerciali?ado"C "! !"o a lar$o pla?o e" recomendado debido a 3!e "! impactone$ati#o en la "al!d e" m!c>o menor 3!e !n medicamento con#encional. ,0-

La b"3!eda de prod!cto" nat!rale" 3!e "ean beneficio"o" a la "al!d "e >a #i"toincrementado en lo" ltimo" aan"!$erido como f!ente" potenciale" de mol/c!la" nat!rale" de rele#anciafarmacol$ica. 4o; en d+aC lo" e"t!dio" >an identificado #ario" comp!e"to"fenlico" en la" >o8a" de la" e"pecie" de Pa""ifloraC como orientina 2GOG

ramn"ido ; l!teolina GOG ,2Gr>amno";l$l!co"ido-C ; deri#ado" de api$enina ;l!teolina. Lo" polifenole" tienen propiedade" antio*idante"C ;a 3!e podr+ane!trali?ar o eliminar o*idante". ,F-

Lo" efecto" de lo" fla#onoide" en el "i"tema ner#io"o central "e >an con"iderado"lo en e"to" ltimo" 1 aiben !n efecto an"iol+ticoC 3!e afectan apena" la rela8acin m!"c!larC

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"edacin ; la locomocin c!ando "e in;ecta en ratone". Por lo c!al en el $/neroPa""iflora "e conoce farmacol$icamente 3!e tiene $ran potencial para elde"arrollo de frmaco" tanto an"iol+tico" como "edante"H por lo c!al >a; "ido enm!c>o" pa+"e" !"ada" para tratamiento de an"iedadC in"omnioC >i"teriaC epilepiaCe"pa"mo" ; dolor. ,-

Alcaloide" indlico" JGcarbol+nico" como >armanoC >arminaC >armalinaC pre"ente"en #aria" e"pecie" de Pa""iflora" pre"entan acti#idade" al!cin$ena"C deri#ado"de >armano actan de manera "imilar a lo" receptore" de "erotonina por lo c!al "edeber+a "! acti#idadH adem" "e >a de"c!bierto 3!e >armina po"ee acti#idadin>ibidora de mono amino o*ida"aC la ma;or+a de e"t!dio" con JGcarbolina" "e >andemo"trado efecto" an"iol+tico" ; anticon#!l"i#ante". ,1-

Determinar en Passiflora mixta la pre"encia de metabolito" "ec!ndario" tale"como fla#onoide" ; alcaloide"C "er+a de $ran importancia para e#itar el !"o de

frmaco" con#encionale" en paciente" 3!e >an pre"entado #aria" reaccione"ad#er"a" o efecto" "ec!ndario" ; a"+ reempla?arlo" por fitomedicamento"de"arrollado" en ba"e al !"o de e"ta planta como !n potente antio*idante oan"iol+tico.

II. #0C/ -E/0IC/

II.1. "3ND#EN-#CI4N -E40IC#

II.1.1. Medicina con#encional

E" la medicina cient+ficaC 3!e "e f!ndamenta en la" relacione" ca!"a efectolineale" entre lo" microor$ani"mo"C lo" proce"o" or$nico" ; lo" factore"relacionado" con el ambiente ; el de"arrollo de la enfermedad ; por tanto "!c!racin. 5e apo;a en la farmacopea 3!+mica para "!" tratamiento"C en lo"rec!r"o" de la cir!$+a biol$icaC el empleo de in"talacione" >o"pitalaria" ; lo"e3!ipamiento" e in"tr!mental e"pec+fico. A"+ tambi/n podemo" decir 3!e el !"oinadec!ado de #ario" frmaco" con#encionale" >a cond!cido en lo" paciente" a

#ario" problema" en "! "al!dC lo c!al "e le conoce como efecto" ad#er"o" almedicamento. ,11-

II.1.2. Problema" con medicamento" con#encionale"

II.1.2.1. Efectos adversos a medicamentos

5e$n la Or$ani?acin M!ndial de la 5al!d !n efecto ad#er"o "e con"idera ac!al3!ier re"p!e"ta noci#a o no intencionada del c!erpo a !n frmaco 3!e "e

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prod!ce a do"i" normale" para el tratamiento dia$n"tico o profila*i". 'na"reaccione" de medicamento "e pre"entan en todo" lo" paciente" mientra" 3!eotra" "olo en cierta" poblacione". ,12-

II.1.2.1.1. Clasificacin de efectos adversos

-a)la.1 Clasificacin de reacciones adversas a !edica!entos

&!enteK De Mi$!elC Ale$re ,1-

II.1.3. Medicina tradicional

E" el con8!nto de todo" lo" conocimiento" terico" ; prctico"C e*plicable" o noC!tili?ado" para dia$n"ticoC pre#encin ; "!pre"in de tra"torno" f+"ico"C mentale"o "ociale"C ba"ado" e*cl!"i#amente en la e*periencia ; la ob"er#acin ;tran"mitido" #erbalmente o por e"crito de !na $eneracin a otra. P!edecon"iderar"e tambi/n como !na firme amal$ama de la prctica m/dica acti#a ; lae*periencia ance"tral ,11-

II.1.4. Fitofarmacia

En "+C la fitoterapia e" la ciencia 3!e e"t!dia el !"o de planta" medicinale" ; la"incorpora en forma" farmac/!tica" ,fitofrmaco"-C c!;a calidadC "e$!ridad ;eficacia e"tn $aranti?ada"C teniendo en c!enta la" caracter+"tica" de la" dro$a"

#e$etale" ; e*tracto". ,1:-

II.1.). %oncepto" "obre O*idacin.

II.1.5.1. Radicales libres

E" !na e"pecie 3!+mica c!;a e"tr!ct!ra pre"enta !no o m" electrone"de"apareado" ; "e caracteri?a por "! ele#ada reacti#idad ; facilidad para crearotro" radicale" libre" ,1)-

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II.1.5.2. Especie reactiva de oxgeno (ERO)

A e"te $r!po pertenecen lo" radicale" libre ; e"pecie" deri#ada" del o*+$eno 3!epre"entan $ran acti#idad ; 3!e "on capace" de prod!cir radicale" libre" en elor$ani"mo >!mano. 'n e*ce"o de e"to" p!eden oca"ionar"e por di#er"o" factore"como por e8emplo la accin de "!"tancia" e*$ena" 3!e ca!"an e"tr/" al

or$ani"mo por e8emplo contaminacin ambientalC radiacione"C taba3!i"moCalco>oli"moC dro$adiccinC alimentacin inadec!ada entre otra". ,1)-

II.1.5.3. Estrs oxidativo

%!ando el contenido intracel!lar pre"enta !n a!mento de ERO ; e"te "obrepa"ael de la" defen"a" antio*idante" de la c/l!la cond!ce a !n e"tr/" o*idati#omediante el c!al "e prod!ce daidro*itol!eno ,B4T- ;el 2Gterb!tilG>idro*iani"ol ,B4A- lo" c!ale" p!eden pre"entar to*icidad. Entre lo"antio*idante" 3!e "obre"alen "on lo" polifenole" ; e"pecialmente fla#onoide" ;tanino". ,1)-

II.1.6.1.1. Clasificacin de antioxidantes segn su origen

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-a)la.2 Clasificacin de antioxidantes segn su origen

&!enteK 7en/reoC 22 ,1-

II.1.. Pa""ifloramixta,Pa""ifloraceae-

II.1.$.1. "spectos bot%nicosLa" pa"iflorcea" "on liana" o enredadera" 3!e trepan por medio de ?arcillo"Ca!n3!e e*i"ten e"pecie" arbrea" o arb!"ti#a". 5!" >o8a" "on alterna" ; cone"tip!la". Lo" pec+olo" p!eden o no lle#ar $lnd!la"C la" c!ale" p!eden "er "/"ile"o e"tipitada" ; ca"i "iempre pareada". La" lmina" foliare" $eneralmente "onentera" o 2G lobada". Al$!na" e"pecie" de Pa""iflora pre"entan en la lmina!na" $lnd!la" llamada" ocelo"C 3!e c!mplen la f!ncin de en$a


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maripo"a" de la "!bfamilia 4eliconiinae 3!e "e alimentan de ella"C ; e#itar a"+ 3!epon$an "!" >!e#o" "obre la planta. La" flore" tienen !n andro$inforo prominenteCcon meno" frec!encia "olamente $inforoC ; en poca" e"pecie" el o#ario e" "/"il.Po"een !na corona e*trae"taminal bien de"arrolladaC 3!e a;!da a atraerpolini?adore"C a!n3!e en al$!na" e"pecie" "e red!ce a !na fila de pe3!ea"ta Boli#iaC entre 1. m ; . m de ele#acin. E"!na trepadora con >o8a" trilobada" ; coricea". Lo" fr!to" tiene pericarpiocoriceo ; "on m!; #ariable" en tama


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comp!e"to" ciano$/nico". Entre lo" principale" fla#onoide" "e enc!entraKapi$eninaC l!teolinaC 3!ercetinaC aempferolC #ite*inC i"o#ite*inC orientin. Adem"contiene alcaloide" indlico" "imple" 3!e "e enc!entran ba"ado" en !n "i"temade anillo" JGcarbol+nico" comoK >armanoC >armolC >arminaC >armalol ; >armalina.,21-

II.1.7.2.1. "lavonoides5on metabolito" "ec!ndario" re"pon"able" de m!c>a" coloracione" comoamarilloC a?!lC ro8oC de planta" ; de fr!ta"C E"tr!ct!ralmente "e trata de !npi$mento >eteroc+clico 3!e po"ee o*+$eno. ,22-

II.1.7.2.1.1. ClasificacinEn dependencia de la" #ariacione" 3!e tienen en "! e"tr!ct!ra "e lo" >acla"ificado de la "i$!iente maneraK fla#ona"C c>alcona"C fla#onole"C fla#anonole"Cantocianidina"C fla#anona"C i"ofla#onoide"C a!rona"C cate3!ina"C pterocarpano"C

rotenoide" ,2-

"igura 1 Estructura $u%!icas de algunos ncleos )5sicos de flavonoides

&!enteK Pro#en"iC 2 ,1-

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II.1.7.2.1.2. Proiedades far!acolgicasAl$!na" propiedade" 3!e po"een lo" fla#onoide" "onK antio*idante"Cantitrombtica"C antiinflamatoria"C antial/r$ica"C antia"mtica"C antimicrobiana" ein>ibidora" de #aria" en?ima" como tran"cripta"a re#er"aC tiro"ina 3!ina"a %Cprote+na 3!ina"a %. "iendo de toda" /"ta" la acti#idad antio*idante la m"

importante. ,2:-

II.1.7.2.2. #lcaloidesLa ma;or+a de lo" alcaloide" "on "!"tancia" cri"talina" bien definida" 3!e "e !nencon cido" para formar "ale". En la planta p!eden e*i"tir en "! e"tado libreC enforma de "ale" o como NG*ido". Adem" de lo" elemento" carbonoC >idr$eno ;nitr$enoC la ma;or+a de lo" alcaloide" contienen o*+$eno. ,2)-

"igura 2 #lgunos ncleos alcaloideos

&!enteK Aran$oC 2F ,20-

II.1.7.2.2.1. Proiedades $u%!icas

'n conocimiento de la "ol!bilidad de lo" alcaloide" ; "!" "ale" e" de con"iderableimportancia farmac/!tica. No "lo "on la" "!"tancia" alcaloidale" admini"trada"en "ol!cinC "ino tambi/n la" diferencia" de "ol!bilidad entre lo" alcaloide" ; "!""ale" proporcionan m/todo" para el ai"lamiento de lo" alcaloide" de la planta ; "!"eparacin de la" "!"tancia" no alcaloidale" tambi/n pre"ente". La" "ol!bilidade"

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de diferente" alcaloide" ; "!" "ale" m!e"tran !na #ariacin con"iderableC comopodr+a e"perar"e de "! e"tr!ct!ra e*tremadamente #ariadaC e" cierto 3!e la"ba"e" libre" "on con frec!encia poco "ol!ble" en a$!aC pero "ol!ble" endi"ol#ente" or$nico"H con "ale" e" a men!do lo contrarioC "iendo e"ta" por lo$eneral "ol!ble" en a$!a pero poco "ol!ble" en di"ol#ente" or$nico". ,2)-

II.1.7.2.2.2. Proiedades far!acolgicas

La ma;or+a de alcaloide" con acti#idad "obre >!mano" afectan el "i"temaner#io"oC en e"pecial act!ando "obre tran"mi"ore" 3!+mico" como acetilcolinaCepinefrinaC norepinefrinaC @ABAC dopamina ; "erotonina. ,2-

Adem" de e"to pre"entan otra" propiedade" comoK rela8ante" m!"c!loe"3!el/ticoC ane"t/"ico" locale"C anal$/"ico"C anti>iperten"i#o"C antiarr+tmico"Canticancer+$eno"C antimalrico". ,2-

II.1.7.2.2.&. #lcaloides '(car)ol%nicos

Pertenecen a lo" alcaloide" del $r!po indlico lo" c!ale" pre"entan !n $r!poindlico ; !n anillo pirid+nico >idro$enado de "ei" carbono"C "on conocido" comoalcaloide" de la >armana lo" primero" en "er de"c!bierto" "on la >armina ;>armalina ,2F-

"igura & Estructuras de ncleo indlico # * anillo irid%nico resentesen alcaloides '(car)ol%nicos

&!enteK Mo!raC20 ,2F-

E"te tipo de alcaloide" actan "obre el 5N% in>ibiendo la en?ima monoaminoGo*ida"a tipo AGMAOC por lo c!al "e le" atrib!;e "! efecto al!cin$enoC adem" dealcaloide" como >armalolC >armalinaC >armol ; >armina po"een propiedade"antio*idante" ;a 3!e in>iben la pero*idacin lip+dica en preparacione"micro"cpica" >eptica" en ratone". ,2F-

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II.1.7.&. Proiedades far!acolgicas de PassifloraEl $/nero Passiflora "e >a !tili?ado tradicionalmente en la" Am/rica" ;po"teriormente en E!ropa como >ierba calmante para la an"iedadC el in"omnioCcon#!l"ione"C ; la >i"teria. Toda#+a "e !tili?a >o; en d+a para tratar la an"iedad ; elin"omnio. Lo" cient+fico" creen 3!e la" obra" de pa"iflora "e dan mediante el

a!mento de lo" ni#ele" de cido $ama aminob!t+rico ,@ABA- en el cerebroC el c!alred!ce la acti#idad de al$!na" c/l!la" del cerebroC >aciendo 3!e "e "ienta m"rela8ado. ,2-

II.2. #ntecedentes de la investigacin

En el e"t!dio de %abrera ,21:- "e determin la acti#idad antio*idante ;antimicrobiana en e*tracto" ac!o"o" e >idroalco>lico" de Passiflora ligularisdonde "e determin 3!e lo" e*tracto" >idroalco>lico" pre"entan ma;or acti#idad

; "e ob"er# correlacin entre lo" fenole" ; la acti#idad antio*idante. ,-

7ario" e"t!dio" en e"pecie" de pa"iflora" en e"pecial P. alata ; P.ed!li"demo"traron acti#idad antio*idante en e*tracto" >idroalco>lico"C acti#idadma;oritaria en P. ed!li". Adem" "e dem!e"tra !na relacin linear entre contenidode fenole" totale" ; acti#idad antio*idanteC p!diendo decir"e 3!e lo" fenole" "onlo" re"pon"able" de la acti#idad en lo" e*tracto". ,1-

5ara#ananC 21: mediante el anli"i" por 4PL% de Passiflora subpeltatare#el lapre"encia de comp!e"to" bioacti#o" tale" como 3!ercetina ,22C0 m$ $ dee*tracto =- ; api$enina ,21C20 m$ = $ de e*tracto- en cantidade" m" alta" ; tra?a"de cido $lico ; cate3!ina. %omp!e"to" 3!e p!eden act!ar como potente"antio*idante"C antiiflamatorio" ; anal$/"ico". ,2-

E"pecie" de Pa""iflora pre"entan !n !"o tradicional importante como an"iol+tico ;"edati#o. La" e"pecie" m" citada" en literat!ra "onK P. actiniaC P. alataC P. ed!li"CP. incarnataC P. 3!adrand!lari". Por lo c!al pre"entan !n $ran potencial para elde"arrollo de medicamento" an"iol+tico" e >ipntico" ; "edati#o". ,1-

Por e"ta ra?nC "e e*aminar el e*tracto de Passiflora mixta ;a 3!e e" !nae"pecie meno" e"t!diadaC para encontrar po"ible acti#idad antio*idante ; "!

relacin con el contenido de fla#onoide"C adem" de #erificar la pre"encia dealcaloide"

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III. 8IP4-E9I9 : /E-I;/9

III.1. 8itesis generalLo" e*tracto" de flore" ; >o8a" de Passiflora mixta pre"entarn metabolito""ec!ndario" propio" del $/nero Passifloraen ba"e a "! "imilit!d filo$en/tica.

Lo" e*tracto" de flore" ; >o8a" de P. mixtapre"entarn acti#idad antio*idante"imilar a e"pecie" ;a e"t!diada" del $/nero Passiflora.

III.2. /)+etivos de la investigacinIII.2.1. Ob8eti#o $eneral

E"t!diar la compo"icin fito3!+mica ; acti#idad antio*idante in #itro de P. Mixta

III.2.2. Ob8eti#o" e"pec+fico"

III.2.2.1. Identificar metabolito" "ec!ndario" pre"ente" en >o8a" ; flore" de P.mixtamediante "creenin$ fito3!+mico.

III.2.2.2. Reali?ar el control de calidad a la planta P. mixtaIII.2.2.. Obtener e*tracto" ac!o"o"C metanlico" ; en acetato de etilo de

flore" ; >o8a" de P. mixtaIII.2.2.:. Anali?ar c!alitati#amente la pre"encia de fla#onoide" en e*tracto" de

flore" ; >o8a" de P. mixtamediante TL%III.2.2.). %!antificar el contenido de fenole"C fla#onoide" ; alcaloide" totale"

en >o8a" ; flore" de P. mixtamediante e"pectrofotometr+a ; 4PL%III.2.2.0. Determinar mediante pr!eba" in #itro la acti#idad antio*idante de lo"

e*tracto" alco>lico" de >o8a" ; flore" de P. mixta.

I;. #-E0I#,E9 : a reali?ado tomando en c!enta#ario" criterio" comoK

-a)la >. -io * dise=o de la investigacin

%RITERIO Tipo de in#e"ti$acin

Temporali?acin Tran"#er"alEl l!$ar De laboratorioNat!rale?a de la in#e"ti$acin %!antitati#aLa" f!ente" Emp+ricaEl enfo3!e E*perimentalNat!rale?a de lo" ob8eto" De"cripti#oC E*perimental

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I;.2. Deter!inacin del ta!a=o !uestralLa cantidad de materia #e$etal a anali?ar "e >a "eleccionado en ba"e a la"pr!eba" 3!e "e #an a reali?ar de la mi"maC determinando a"+ !n ilo de plantafre"ca o 1 $ramo" de >o8a" ; flore" "eca" ; p!l#eri?ada" de P.mixta

I;.&. 3nidad?es de #n5lisis o uestra.

La" flore" ; >o8a" de Passiflora mixtaC "ern la" !nidade" de anli"i"C a"+ comotambi/n "!" diferente" e*tracto"C ac!o"o"C alco>lico" ; et/reo"

I;.>. Criterios de 9eleccin de la uestra.

La" >o8a" ; flore" de P. mixta "e recolectarn #erificando lo" "i$!iente" criterio" deincl!"in ; e*cl!"inK

-a)la @Criterios de inclusin * exclusin ara seleccin de !uestra

C0I-E0I/9 INC,39I4N EAC,39I4N

%RE%IMIENTODe"de 2 m"nm Por deba8o de lo"

2m"nmEn ?ona" de la pro#inciade %>imbora?o

&!era de la pro#incia de%>imbora?o.

RE%OLE%%I(N En etapa de floracin. Dema"iado 8o#enC "infloracin.

%ONTAMINA%I(N 5in pre"encia decontaminante"

%ontaminada

E5TADO 5anoC "in rot!ra" nide"$arre"

Rota o con de"$arre".

E5PE%IE nica E"pecie" "imilare".

La" flore" ; >o8a" "eleccionada" para el anli"i" deben po"eer el me8or e"tadopo"ibleC "er la" m" fre"ca" ; f!erte"C a3!ella" con al$n da


19/34

Recoleccin de muestra de assi!ora mi"ta

Identi#cacin ta"onmica

$e%aracin de &o'as ( !ores de la %lanta

$ecado en estufa a 45)* durante 3 d+as ( molienda

re%aracin de e"tractos

Elaborado porK Parede"C 21)

I7.).2. Parmetro" de control de calidad

I*.5.2.1. +eterminacin del contenido de ,#medad

5e reali?a mediante m/todo $ra#im/tricoC 3!e "e ba"a en la p/rdida de ma"a de lam!e"tra l!e$o de !na de"ecacin en e"t!fa. ,-

I*.5.2.2. +eterminacin de ceni-as totales

5e reali?a mediante determinacin $ra#im/trica del re"id!o de la incineracin dela m!e"tra ,-

I*.5.2.3. +eterminacin de ceni-as sol#bles en ag#a

5e reali?a mediante determinacin $ra#im/trica ,-

I*.5.2.. +eterminacin de ceni-as insol#bles en %cido clor,drico

5e reali?a mediante determinacin $ra#im/trica ,-

I7.).. Tami?a8e fito3!+mico

14


20/34

El tami?a8e fito3!+mico "e reali? a tra#/" de reaccione" 3!+mica" deidentificacinC mediante cambio" de color o formacin de precipitado"C de"tinada"a determinar la pre"encia de metabolito" "ec!ndario" en el #e$etalC "i$!iendoprocedimiento" "e$n ,MirandaC M. 2-. ,:- 5e prepararon tre" e*tracto"Ket/reoC alco>lico ; ac!o"o "e$n lo 3!e indica el "i$!iente e"3!emaK

"igura @ Ela)oracin de extractos ara ta!ia+e fito$u%!ico

&!enteK ,MirandaC M. 2-.

A partir de e"to "e procede a determinar lo" metabolito" "ec!ndario" mediantereaccione" de coloracin

15

"igura 6 Prue)as colori!Btricas a realiar en el extracto etBreo


21/34

I7.).:. Anli"i" TL%

I*.5..1. "n%lisis /0' para flavonoides

16

"igura 7 Prue)as colori!Btricas a realiar en el extracto alcolico

"igura Prue)as colori!Btricas a realiar en el extracto acuoso


22/34

,a-o de aua / 5 min a 60)* seuido de sonicacin %or

Filtrar

2030m se usa %ara cromatoraf+a

1 de materia seca ( %uleriada

10 ml de metanol

"tracci

F$ MI R :I*$I;


23/34

I*.5.5.1. '#antificacin de fenoles totales !ediante el !Btodo "olin(Ciocalteu

5e procede a c!antificar lo" fenole" totale" pre"ente" en el e*tracto metanlico

FC para lo c!al "e prepara !na c!r#a de calibracin con !n e"tndar cido$lico a determinada" concentracione"K )H 1H 2H : ; 0 m$=L.

Tomar 2mL de m!e"tra o e"tndar dil!ido Ao8a" como en flore" de Passiflora mixta ba"ada en la metodolo$+a de Bo!>ri"C5immond"C 5a;adiC Q Bo!a?i?C 212 ,-

5e procede a c!antificar lo" fla#onoide" totale" pre"ente" en el e*tractometanlico FC para lo c!al "e prepara !na c!r#a de calibracin con !n e"tndar3!ercetina a determinada" concentracione"K 2H :H 0H F ; 1 m$=L.

Tomar 1mL de la m!e"tra o e"tndar dil!ido A


24/34

I7.).).. '#antificacin de alcaloides totales

Para la e*traccin de lo" alcaloide"C "e reali?a la maceracin con etanol ;a con lam!e"tra "eca pre#iamente p!l#eri?ada ; pe"ada. L!e$o "e filtra el macerado ; con

la a;!da del rota#apor "e concentra el filtrado teniendo a"+ el e*tracto cr!do "eco.De"p!/" "e aa"ta "ol!bili?ar todo el e*tracto "lido.Del c!al "e obtiene !n e*tracto ac!o"o cido 3!e "e aa cambiado a color#erde.

I7.).0. Anli"i" por cromato$raf+a l+3!ida de alta eficiencia ,4PL%-

I*.5.!.1. "n%lisis por &0' de flavonoides

El anli"i" 4PL% re3!iere de !na col!mna de 5BG%1F ,2) mmS:.0 mmC ) m-C

con !na fa"e m#il 3!e con"i"te en !na combinacin de cido frmicoC acetonitrilo; metanol ,0K10K2:C #=#=#- a U1%C con !na #elocidad de fl!8o de 1mL=min. El#ol!men de in;eccin e" de )L ; la lon$it!d de onda para la deteccin "emantiene en )nm.

Prearacin de la solucin atrn * solucin de tra)a+o

19


25/34

La "ol!cin patrn de l!teolina ; api$enina ,apro*imadamente C) m$=ml- ; elpatrn internoC 3!ercetina ,apro*imadamente 1C m$=ml-C "e preparan di"ol#iendola" cantidade" apropiada" de e"ta" referencia" en metanolC re"pecti#amente. 'na"erie de "ol!cione" de traba8o 3!e contienen l!teolina ; api$enina "e preparan pordil!cin po"terior de la "ol!cin madre anterior con metanol para alcan?ar !n

inter#alo de concentracin de C1 a 12) $=mlC ; la "ol!cin de traba8o de3!ercetina tambi/n debe "er preparada a !na concentracin de 1 m$=ml.

Prearacin de la !uestra

A !n #ol!men determinado del e*tracto "e aidro*itol!eno b!tilado ,B4T- "e !tili? como control po"iti#o ; toda" la" pr!eba""e lle#an a cabo por triplicado.

I;.6. Identificacin * /eracionaliacin de las ;aria)les.

20


26/34

-a)la 6 Identificacin * /eracionaliacin de las ;aria)les.

7ARIABLE DE&INI%I(N INDI%ADOR E5%ALA TIPOActi#idadantio*idante

%apacidad paraprote$er !namol/c!la del daa ele$ido !"ar TG"t!dent debido a 3!e e" la pr!eba e"tad+"tica m" adec!adopara comparar lo" e*tracto" de flore" ; >o8a" ; "! relacin con "! capacidadantio*idante.

Para tab!lacin de Dato" "e >a ele$ido el pro$rama E*cel.

;. P0E93P3E9-/ : C0/N/G0## DE #C-I;ID#DE9

;.1. Presuuesto.

-a)la 7 Presuuesto

ART%'LO5 @A5TO5 EN D(LARE5

21


27/34

Reacti#o"5ol#ente"

11

MATERIALE5

Materiale" de laboratorioOtro"

))

TRAN5PORTE )OTRO5 )TOTAL :

;.2. Cronogra!a.-a)la Cronogra!a

#ctividades es 1 es 2 es & es > es @ es

9e!anas

1 2 & > 1 2 & > 1 2 & > 1 2 & > 1 2 & > 1

M!e"treo dePa""iflorami*ta

A A

Identificacinta*onmica

A

Tratamientode la planta

A

5creenin$fito3!+mico ;control decalidad

A A

Identificacinde

fla#onoide" ;alcaloide" porTL%

A A A A A

%!antificacin defla#onoide" ;alcaloide"

A A A

22


28/34

totale"

%!antificacin por 4PL%

A A

E#al!acinde lato*icidad

A A

E#al!acinde laacti#idadantio*idante

A A

Preparacinde la defen"ade $rado ;

elaboracindel e"crito.

A A

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D#-/9 DE C/N-#C-/ DE, P0/P/NEN-E

No!)res * aellidosH

Diana %arolina Parede" l#are?

E(!ailH

dipa22Z>otmail.com

N!ero de telBfono celular

F:0

N!ero de telBfono convencional2F1)

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33/34

T+t!lo E9-3DI/ "I-/J3IC/K : #NL,I9I9 DE ,# #C-I;ID#D

#N-I/AID#N-E IN ;I-0/ DE 8/#9 : ",/0E9 DE &assiflora mixtaM

&ec>aK 1> de setie!)re de 21@

GGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGG

ProponenteK DI#N# C#0/,IN# P#0EDE9 L,;#0EO

GGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGG

T'TORK J". "#39-/ C/N-E0/

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Passiflora mixta

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Transcript of Passiflora mixta