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Os mecanismos moleculares do olfato: a deleção do gene Ric-8b resulta em um camundongo anósmico
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Olfactory system
Olfactory bulb
Olfactory epithelium
Olfactory cortex
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Buck and Axel, 1991 Cell 65:175
Odorant receptors are expressed in the cilia of olfactory sensory neurons
COOH
NH3cilia
~1000 mouse OR genes~400 human OR genes
olfactory sensory neuron
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A map for odorants in the brain
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The odorant signaling pathway
Biochemistry. 5th edition.Berg JM, Tymoczko JL, Stryer L.New York: WH Freeman; 2002.
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Von Dannecker, Mercadante & Malnic. J. of Neurosci. 25:3793 (2005)
Ric-8B interacts with Gαolf
Y2H screening of an OE cDNA library
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Chan P, Gabay M, Wright FA and Tall GG, JBC (2011)
Ric-8B is a GEF (GTP Exchange fator)
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Ric-8B amplifies signaling through Gαolf in HEK293 cells
GolfRic-8B
Golf
[AMPc] [AMPc]
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Generation of a tissue specific Ric-8B KO using Cre-Lox
‘floxed’Ric-8B gene
OMP = Olfactory Marker Protein
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Generation of a tissue specific Ric-8B KO using Cre-Lox
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Western blot
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In situ hybridization
Anti-digoxigenin antibodyconjugated with alkaline phosphatase
digoxigenin
probe
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The Gαolf gene is transcribed in Ric-8B KO mice
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The number of olfactory neurons is reduced in Ric-8B KO mice
Immunofluorescence
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WT KO
Posi
tive
cells
(x10
-2)/m
m2
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Calcium imaging
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Calcium imaging
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WT
cKO
Odorantes (Mix)
Hexanal
Heptanal
Eugenol
1-Heptanol
(±) Citronellal
1-Nonanol
S(-) Limonene
Acetophenone
(±) Carvone
Olfactory neurons from cKO mice are not responsive to odorants
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Buried food test
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Ric8-B cKO mice show impaired olfactory behavior
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SUMMARY:
- Ric-8B is required for Gαolf expression in olfactory neurons;
- Ric-8B (and Gαolf) are required for survival of olfactory neurons;
- Ric-8B knockout mice are anosmic.
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Department of BiochemistryUniversity of São PauloBettina Malnic [email protected]úcia Armelin CorreaMaíra NagaiJoão Batista Plácido do Nascimento Artur Guazzelli Leme SilvaCleiton Fagundes MachadoCassandra Santantonio de LyraVictor Pereira de Sá Xavier
Past members:Adriana MercadanteLuiz E. C. Von DanneckerMarcela DavalosPedro A.F. GalanteJussara Michaloski SouzaDaniel Shikanai KerrDébora BrandtAna Carolina Bottura de BarrosDaniela Gonzalez-KristellerLuciana GutiyamaTiago JonasLuisa Kfouri Ribeiro
Maíra Nagai
ICB-UFRJJosé Garcia Ribeiro Abreu JuniorAlice Helena dos Reis Ribeiro
Cleiton Fagundes Machado
Hospital Sirio LibanêsAnamaria CamargoPedro AF Galante
Faculdade de Medicina VeterináriaUSPLuciano FelicioThiago Reis