OLÓXICA PRESENCIA DE EN ESTRUCTURAS FUSARIUM … · Puntos muestreados 51 MAT-1 (%) 50,0 MAT-2 (%)...
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Desde la primera identificación, en el año 2004, sobre plántulas de del hongo de cuarentena , la EFA ha realizado diversos muestreos para determinar la extensión del patógeno en nuestra comunidad. La presencia, en el año 2006, de en el 60 % de las semillas procedentes de piñas de muestreadas en árboles adultos en la provincia de Pontevedra, nos ha hecho plantearnos el estudio de las flores como estructuras reproductivas participantes en la formación de las semillas. Para ello, en el año 2007, realizamos un muestreo de flores masculinas en los 62 puntos con presencia del patógeno en las semillas del año anterior (2006), aunque únicamente se tomaron muestras en 51 puntos, debido a la pérdida de masa forestal por incendios, mostrándose en este trabajo los resultados del mismo. Para tratar de conocer mejor la biología del patógeno y sus posibles vías de infección, este estudio está siendo completado con el de las flores femeninas y piñas en distintos estadíos de madurez. P. pinaster Fusarium circinatum F. circinatum P.pinaster 6 6 6 PUNTOS VISITADOS 62 PUNTOS MUESTREADOS 51 PRESENCIA DE 30 F. circinatum MATERIAL MUESTREADO Inflorescencias masculinas de Pinus pinaster # # # # # # # # # # # # # # # # # # # # # # NEGATIVO POSITIVO INCENDIO 2007 PINTOS, C., PÉREZ-OTERO, R., AGUÍN, O., MANSILLA, J.P., GONZÁLEZ-PENALTA, B. Y RIAL, C. Estación Fitopatolóxica do Areeiro. Deputación de Pontevedra. Subida a la Robleda s/n 36153 Pontevedra e-mail: [email protected] ESTACIÓN FITOPATOLÓXICA PRESENCIA DE EN ESTRUCTURAS REPRODUCTIVAS DE EN GALICIA FUSARIUM CIRCINATUM PINUS PINASTER PIÑAS MADURAS INFLORESCENCIAS FEMENINAS PIÑAS Y SEMILLAS EN DISTINTOS ESTADÍOS DE MADUREZ ESTRUCTURAS REPRODUCTIVAS CONSIDERADAS EN DESARROLLO INFLORESCENCIAS MASCULINAS PORTANDO SACOS POLÍNICOS LLENOS DE POLEN Polen germinado MACROCONIDIOS IDENTIFICACIÓN MORFOLÓGICA DE Fusarium circinatum CIRCINOS MONO Y POLIFIÁLIDAS > > > De los 51 puntos muestreados, en más de la mitad (58,8 %), se detectó en las flores masculinas Esto sugiere la posibilidad de que el proceso de polinización pueda ser una de las vías de entrada de las esporas del hongo en el interior de la flor femenina, . Se ha determinado la presencia de los dos mating types ( -1 y -2) en la población estudiada, predominando el -1 (50,0 %) sobre el -2 (33,3 %). En algunos puntos de muestreo se ha detectado la presencia de ambos mating types (16,7 %) en el mismo punto conjuntamente. F. cicrcinatum . MAT MAT MAT MAT antes de iniciarse el desarrollo de la piña y las semillas Actualmente se están llevando a cabo estudios sobre la presencia de , en las flores femeninas y en las piñas en distintos estadíos de evolución, que permitirán conocer mejor la biología del patógeno. F. circinatum Puntos muestreados 51 MAT -1 (%) 50,0 MAT -2 (%) 33,3 MAT -1 y 2 conjuntamente (%) 16,7 Puntos negativos (%) 41,2 58,8 AÑO 2007 Flores masculinas Puntos con presencia de Fusarium circinatum (%) IDENTIFICACIÓN MOLECULAR DE Fusarium circinatum MATING TYPES Gel de agarosa al 2% mostrando los fragmentos de 380 y 190 pb correspondientes a la amplificación de los tipos -1 y -2 de , respectivamente. Calles 2, 3, 5 y 6: aislados -1. Calles 1 y 4: aislados -2. Calle 7: control positivo -1. Calle 8: control positivo -2. Calle 9: control negativo. M: marcador de peso molecular de 100 pb (MWM XIV, Roche Diagnostics). MAT MAT Fusarium circinatum MAT MAT MAT MAT M 1 2 3 4 5 6 7 8 9 380 pb 180 pb Gel de agarosa al 2% mostrando el producto de PCR de 360 pb obtenido con los primers específicos CIRC1A y CIRC4A. Calles 1 a 4 y 6 a 9: muestras positivas de . Calle 5: muestra negativa de . Calle 10: control positivo. Calle 11: control negativo. M: marcador de peso molecular de 100 pb (MWM XIV, Roche Diagnostics). Fusarium circinatum F. circinatum PCR ESPECÍFICA 360 pb M 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 Tamaño relativo de polen de respecto a micelio, macroconidios y microconidios de P. pinaster F. circinatum ANÁLISIS DE MUESTRAS Siembra de sacos polínicos en medio Komada Incubación a 24 ºC en oscuridad Repicado de colonias de sp. en medio SNA. Incubación a 24 ºC en oscuridad Fusarium Estudio morfológico y aplicación de técnicas moleculares Obtención de cultivos monospóricos
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Desde la primera identificación, en el año 2004, sobre plántulas de del hongo de cuarentena
, la EFA ha realizado diversos muestreos para determinar la extensión del patógeno en
nuestra comunidad. La presencia, en el año 2006, de en el 60 % de las semillas procedentes de
piñas de muestreadas en árboles adultos en la provincia de Pontevedra, nos ha hecho plantearnos el
estudio de las flores como estructuras reproductivas participantes en la formación de las semillas. Para ello, en
el año 2007, realizamos un muestreo de flores masculinas en los 62 puntos con presencia del patógeno en las
semillas del año anterior (2006), aunque únicamente se tomaron muestras en 51 puntos, debido a la pérdida
de masa forestal por incendios, mostrándose en este trabajo los resultados del mismo.Para tratar de conocer mejor la biología del patógeno y sus posibles vías de infección, este estudio está siendo
completado con el de las flores femeninas y piñas en distintos estadíos de madurez.
P. pinaster
Fusarium circinatum
F. circinatum
P. pinaster
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PUNTOS VISITADOS 62PUNTOS MUESTREADOS 51PRESENCIA DE 30F. circinatum
MATERIAL MUESTREADO
Inflorescencias masculinasde Pinus pinaster
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POSITIVO
INCENDIO
2007
PINTOS, C., PÉREZ-OTERO, R., AGUÍN, O., MANSILLA, J.P., GONZÁLEZ-PENALTA, B. Y RIAL, C.Estación Fitopatolóxica do Areeiro. Deputación de Pontevedra. Subida a la Robleda s/n 36153 Pontevedra e-mail: [email protected]
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PRESENCIA DE EN ESTRUCTURASREPRODUCTIVAS DE EN GALICIA
FUSARIUM CIRCINATUMPINUS PINASTER
PIÑAS MADURAS INFLORESCENCIASFEMENINAS
PIÑAS Y SEMILLAS EN DISTINTOSESTADÍOS DE MADUREZ
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EN DESARROLLO
INFLORESCENCIAS MASCULINAS PORTANDO SACOSPOLÍNICOS LLENOS DE POLEN
Polen germinado
MACROCONIDIOS
IDENTIFICACIÓN MORFOLÓGICA DE Fusarium circinatum
CIRCINOS MONO Y POLIFIÁLIDAS
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De los 51 puntos muestreados, en más de la mitad (58,8 %), se detectóen las flores masculinas Esto sugiere la posibilidad de que el
proceso de polinización pueda ser una de las vías de entrada de las esporas delhongo en el interior de la flor femenina,
.Se ha determinado la presencia de los dos mating types ( -1 y -2) en
la población estudiada, predominando el -1 (50,0 %) sobre el -2(33,3 %). En algunos puntos de muestreo se ha detectado la presencia deambos mating types (16,7 %) en el mismo punto conjuntamente.
F.cicrcinatum .
MAT MATMAT MAT
antes de iniciarse el desarrollo de lapiña y las semillas
Actualmente se están llevando a cabo estudios sobre la presencia de, en las flores femeninas y en las piñas en distintos estadíos de
evolución, que permitirán conocer mejor la biología del patógeno.
F.circinatum
Puntos muestreados 51
MAT -1 (%) 50,0
MAT -2 (%) 33,3
MAT -1 y 2 conjuntamente (%) 16,7
Puntos negativos (%) 41,2
58,8
AÑO 2007Flores
masculinas
Puntos con presencia deFusarium circinatum (%)
IDENTIFICACIÓN MOLECULAR DEFusarium circinatum
MATINGTYPES
Gel de agarosa al 2% mostrando los fragmentos de 380 y 190 pb correspondientes a la amplificación de lostipos -1 y -2 de , respectivamente. Calles 2, 3, 5 y 6: aislados -1. Calles 1y 4: aislados -2. Calle 7: control positivo -1. Calle 8: control positivo -2. Calle 9: controlnegativo. M: marcador de peso molecular de 100 pb (MWM XIV, Roche Diagnostics).
MAT MAT Fusarium circinatum MATMAT MAT MAT
M 1 2 3 4 5 6 7 8 9
380 pb
180 pb
Gel de agarosa al 2% mostrando el producto de PCR de 360 pb obtenido con los primers específicosCIRC1A y CIRC4A. Calles 1 a 4 y 6 a 9: muestras positivas de . Calle 5: muestranegativa de . Calle 10: control positivo. Calle 11: control negativo. M: marcador de pesomolecular de 100 pb (MWM XIV, Roche Diagnostics).
Fusarium circinatumF. circinatum
PCRESPECÍFICA 360 pb
M 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
Tamaño relativo de polen derespecto a micelio, macroconidios y
microconidios de
P. pinaster
F. circinatum
ANÁLISIS DE MUESTRAS
Siembra de sacos polínicos en medio KomadaIncubación a 24 ºC en oscuridad
Repicado de colonias de sp. en medioSNA. Incubación a 24 ºC en oscuridad
Fusarium Estudio morfológico y aplicación detécnicas moleculares
Obtención de cultivosmonospóricos
