INTRODUCCIN I

A travs de este trabajo realizado, damos a conocer informacin elemental sobre lo aprendido durante la prctica de laboratorio as como tambin profundizamos y damos explicaciones sencillas y de gran importancia sobre cada proceso que se lleva a cabo en el laboratorio de microbiologa

Se dan a conocer los diferentes medios de cultivo los cuales son una mezcla de nutrientes que en concentraciones adecuadas y en condiciones fsicas ptimas, permiten el crecimiento de los microorganismos. Estos medios son esenciales en el Laboratorio de Microbiologa

En el laboratorio de microbiologa utilizamos diferentes tipos de medios de cultivo que pueden ser preparados en forma lquida o en forma slida. Usualmente para preparar un medio slido se parte de un medio lquido al que se le aade un agente solidificante como el agar, la gelatina o la slicagel.

OBJETIVOS* Identificar y conocer las normas de seguridad en el laboratorio de microbiologa* Conocer el manejo de los diferentes reactivos que se utilizan en el laboratorio.* Utilizar correctamente el material y equipos de laboratorio manejados ms frecuentemente.* Describir de manera bsica el funcionamiento de los equipos de laboratorio mas utilizados en el laboratorio.* Explicar el significado de los trminos ms comnmente usados en el laboratorio.* Familiarizar con los nombres, manejo, aplicaciones, precisin del material de laboratorio. Familiarizarse con los mtodos bsicos disponibles para la esterilizacin de medios de cultivo y materiales en el laboratorio.

PRACTICA 1. NORMAS GENERALES DE BIOSEGURIDADQU ES BIOSEGURIDAD? Bioseguridad se refiere al conjunto de medidas preventivas destinadas a proteger la salud de los trabajadores frente a riesgos por agentes biolgicos, fsicos o qumicos en el laboratorio Todo laboratorio debe contar con un manual de bioseguridad, que est en conocimiento y al alcance de todo el personal de la unidad. Especial nfasis debe colocarse en este sentido con aquel personal recin ingresado al laboratorio. Todo el personal debe estar consciente de los riegos involucrados en el manejo de agentes infecciosos; conocer los mecanismos prcticos por los cuales puede producirse infeccin intrahospitalaria. Del mismo modo, debe aplicar y respetar estrictamente los procedimientos y tcnicas especialmente diseadas para disminuir el riesgo y debe implementarse un programa de supervisin y educacin Contina del personal. http://www.buenastareas.com/materias/laboratorio-de-microbiologia-unad/0Es la disciplina que se ocupa de la prevencin y control del riesgo biolgico al que estn expuestas, directa o indirectamente las personas, los animales y las plantas como consecuencias de accidentes o negligencias, en los laboratorios de microbiologa, clnicos, etc. As como en la industria biotecnolgica y el trabajo con organismo transgnicos.http://www.ecured.cu/index.php/Laboratorio_Microbiolog%C3%ADaLas normas de bioseguridad son un conjunto de medidas preventivas destinadas a proteger la salud y seguridad de las personas que realizan actividades en el laboratorio frente a riesgos procedentes del manejo de agentes biolgicos, fsicos o qumicos.CULES SON LAS NORMAS BSICAS DE BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGA? Para el desarrollo de las prcticas de laboratorio es conveniente tener en cuenta algunas normas elementales que deben ser observadas con toda escrupulosidad. Cuando se trabaja en un laboratorio existe el peligro potencial de accidentes, debido a las sustancias qumicas y elementos que se utilizan y la posibilidad de cometer algn error al realizar un experimento, por tal motivo la seguridad y la proteccin de la salud son indispensables para un ambiente de estudio y trabajo seguro en un laboratorio, por lo tanto todo estudiante, auxiliar y docente debe cumplir las reglas de seguridad e higiene en el laboratorio.Para el desarrollo de las prcticas de laboratorio es conveniente tener en cuenta algunas normas elementales que deben ser observadas con toda escrupulosidad. Cuando se trabaja en un laboratorio existe el peligro potencial de accidentes, debido a las sustancias qumicas y elementos que se utilizan y la posibilidad de cometer algn error al realizar un experimento, por tal motivo la seguridad y la proteccin de la salud son indispensables para un ambiente de estudio y trabajo seguro en un laboratorio, por lo tanto todo estudiante, auxiliar y docente debe cumplir las reglas de seguridad e higiene en el laboratorio.Cualquier estudiante que sufra de alguna deficiencia en sus defensas ante la infeccin debe comunicarlo previamente al profesor. Los laboratorios de investigacin son de acceso restringido al personal del Departamento. Es obligatorio utilizar batas abrochadas siempre que se est trabajando en el laboratorio. Durante el periodo de prcticas, la bata no debe utilizarse fuera del laboratorio. Debe respetarse la prohibicin de beber, comer, masticar chicle o fumar en el laboratorio y se debe evitar llevarse a la boca ningn objeto (bolgrafos...) o tocarse los ojos y nariz. En la superficie de trabajo no deben depositarse en ningn momento ropa u objetos personales. Cada alumno es responsable de la limpieza de su lugar de trabajo y del material asignado, as como de los microscopios que haya usado. Est prohibido pipetear con la boca. Se deben usar los mecheros Bunsen con precaucin, no dejando material inflamable cerca y evitando el posible contacto con pelo y ropas. No se pueden utilizar guantes de ltex cuando se trabaja con mechero Bunsen. Se comprobar que se ha apagado el gas al finalizar el experimento y al abandonar el laboratorio. Ante un vertido accidental de material microbiolgico debe informarse inmediatamente al profesor encargado del grupo. No se debe forzar un tubo de vidrio o la apertura de un frasco sin tener protegidas las manos. No se manejarn los autoclaves o el material recin esterilizado si no se dispone de guantes apropiados. La eliminacin de residuos, material desechable y material reciclable se realizar siguiendo las pautas descritas en la Gua de Prcticas, utilizando los contenedores dispuestos a tal efecto. Se deben lavar las manos con jabn antisptico ante cualquier sospecha de contaminacin y siempre antes de marcharse del laboratorio.

PRACTICA 2. PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVOMateriales_Beaker_Agarth_Estufa_MallaTubos de ensayo_Agua destiladaProcedimientoColocamos 60ml de agua destilada en el beakar, posteriormente pesamos 0,6 de Agar,(scharlau), se hecha los 0,6 de agar al agua se mezcla, se coloca la mezcla en tubo de ensayo se tapa con papel aluminio; calienta en una estufa, se lo deja enfriar. _ Colocamos 20 ml de agua destilada en la probeta, pesamos 0,3 de Nutrient Broth, posteriormente se mezcla con el agua destilada se coloca la mezcla en un tubo de ensayo se tapa con papel aluminio y se calientan en una estufa. Despus que las muestras se reposaron se las lleva a esterilizar en una autoclave a 250c y 30 de presin por 20 minutos. CUESTIONARIO1. qu es un medio de cultivo; de qu estn compuestos principalmente; cmo se clasifican segn su proporcin de agar y segn su suministro de nutrientes?Uno de los sistemas ms importantes para la identificacin de microorganismos es observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es elMedio de Cultivoy el crecimiento de los microorganismos es elCultivo. Se han preparado ms de 10.000 medios de cultivo diferentes.Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presin de oxgeno adecuado, as como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo microorganismo contaminante.La mayora de las bacterias patgenas requieren nutrientes complejos similares en composicin a los lquidos orgnicos del cuerpo humano. Por eso, la base de muchos medios de cultivo es una infusin de extractos de carne y Peptona a la que se aadirn otros ingredientes.El agar es un elemento solidificante muy empleado para la preparacin de medios de cultivo. Se lica completamente a la temperatura del agua hirviendo y se solidifica al enfriarse a 40 grados. Con mnimas excepciones no tiene efecto sobre el crecimiento de las bacterias y no es atacado por aquellas que crecen en l.La Gelatina es otro agente solidificante pero se emplea mucho menos ya que bastantes bacterias provocan su licuacin.En los diferentes medios de cultivo se encuentran numerosos materiales de enriquecimiento como hidratos de carbono, suero, sangre completa, bilis, etc. Los hidratos de Carbono se adicionan por dos motivos fundamentales: para incrementar el valor nutritivo del medio y para detectar reacciones de fermentacin de los microorganismos que ayuden a identificarlos. El suero y la sangre completa se aaden para promover el crecimiento de los microorganismos menos resistentes.Tambin se aaden colorantes que actan como indicadores para detectar, por ejemplo, la formacin de cido o como inhibidores del crecimiento de unas bacterias y no de otras (el Rojo Fenol se usa como indicador ya que es rojo en pH bsico y amarillo en pH cido. La Violeta de Genciana se usa como inhibidor ya que impide el crecimiento de la mayora de las bacterias Gram-positivas).http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioMedios.htm

Adaptado de http://www.qb.fcen.uba.ar/microinmuno/SeminarioMedios.htmLic. Eric CaballeroUno de los sistemas ms importantes para la identificacin de microorganismos es observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio.

El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de Cultivoy el crecimiento de los microorganismos es el Cultivo. Se han preparado ms de 10.000 medios de cultivo diferentes.

Para que los microorganismos crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial ste debe reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presin de oxgeno adecuado, as como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo microorganismo contaminante.

La mayora de las bacterias patgenas requieren nutrientes complejos similares en composicin a los lquidos orgnicos del cuerpo humano. Por eso, la base de muchos medios de cultivo es una infusin de extractos de carne y Peptona a la que se aadirn otros ingredientes.Uno de los sistemas ms importantes para la identificacin de microorganismos es observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el Cultivo. Se han preparado ms de 10.000 medios de cultivo diferentes.Podemos decir que la microbiologa empieza su verdadero desarrollo como ciencia en el momento en que se descubre el microscopio y comienza la observacin de los primeros microorganismos, pero es indudable que la puesta a punto de los medios de cultivo y la utilizacin del agar como solidificante, marcan dos importantes puntos de inflexin en su evolucin.Los medios de cultivo que se utilizan en el laboratorio de Bacteriologa, son instrumentos de suma importancia en la dignosticacin de bacterias patgenas dentro de los individuos.Los medios de cultivo son un mtodo fundamental para estudiar las bacterias es cultivarlas en un medio lquido o en la superficie de un medio

cul es la utilidad de los medios de cultivo y qu diferencia un caldo de un medio slido?En el manejo de enfermedades infecciosas, es necesario saber con certeza cul es el microorganismo que est causando la enfermedad, pues ello nos permite tratarlo y eliminarlo de forma ms rpida y efectiva, sin dao para el paciente; adems, permite conocer el pronstico o la posible evolucin de la infeccin y establecer su eliminacin. Adems permite detectar bacterias u hongos que aunque no estn produciendo directamente enfermedad en el sitio donde se encuentran (colonizacin), puedan causar dao futuro (infeccin oportunista por estado de portador) o empeorar otras patologas (p.e. asma, urticaria, roscea, prurigo, acn, prpura trombocitopnica idioptica, anemia por deficiencia de hierro, entre otras patologas).

Con el estudio mdico microbiolgico del cultivo se logra aislar e identificar al agente causal de la infeccin (corroborar el diagnstico clnico) y poder practicarle las pruebas de susceptibilidad a los antimicrobianos (antibiograma), para saber a ciencia cierta cmo los antibiticos afectan al microorganismo que est produciendo la enfermedad, y as optimizar el tratamiento de las infecciones.

Fuente:http://www.medicomicrobiologo.com/home.html

Medios Lquidos o caldos de cultivo Son los que una vez preparados se mantienen en estado lquido. Suelen utilizarse para realizar la suspensin de disolucin de la muestra analizar conel finde conseguir ladisolucin madre. Pueden presentarse enbolsas de5litros, en frascos de 250 ml, o en tubos de un solo uso.

Medios slidos: Contiene un agente espesante, por lo general agar a una concentracin del 1,5 %. El agar es un derivado de algas. Es slido a temperaturas inferiores a los 40

Diferencia un caldo de un medio slido?La principal diferencia entre un medio de cultivo slido y uno lquido es que el medio de cultivo slido contiene un 1,52% de agar-agar, mientras que el medio lquido no contiene agar-agar.http://es.wikipedia.org/wiki/Cultivo_(microbiolog%C3%ADa)en qu momento se esteriliza un medio decultivoy por qu?Los medios de cultivo contienen diferentes organismos que proceden de las diferentes materias primas y de los recipientes utilizados. Estos organismos deben ser eliminados antes de la inoculacin para evitar falsos resultados. Existe una gran variedad de mtodos de esterilizacin Mtodos fsicos Mtodos trmico Calor hmedo Calor secopero el ms utilizado es la esterilizacin por calor. Las clulas vegetativas se eliminan rpidamente y a temperaturas alrededor de los 60C durante 5-10 minutos, sin embargo, para la eliminacin de las esporas se necesitan una temperatura de 121C durante 15 minutos.Para la esterilizacin del medio seguir las instrucciones de preparacin de la etiqueta de cada medio. En general, estas instrucciones son para volumen de medio pequeo. Para volmenes ms grandes, es necesario incrementar el tiempo de esterilizacin. Hay que tener en cuenta que aunque el tiempo de esterilizacin incremente, la temperatura utilizada se debe mantener. Por quPara evitar que se diseminen las bacterias patgenas que se cultivaron o contagien a quienes manejan los residuos, siempre que se cultivan bacterias, hongos o lneas de clulas animales o vegetales por normas sanitarias se deben esterilizar. Es antibiograma.https://espanol.answers.yahoo.com/question/index?qid....

PRACTICA 3. MICROORGANISMOS DEL AMBIENTE

QU ES UN MEDIO DE CULTIVO SELECTIVO Y UN MEDIO DE CULTIVO NO SELECTIVO?SELECTIVOS: son slidos en los que la selectividad se consigue alterando las condiciones fsicas del medio o aadiendo o suprimiendo componentes qumicos especficos con el fin de inhibir el crecimiento de especies qumicas cuyo crecimiento no interesa. Este tipo de medio slo permite el crecimiento de un grupo de microorganismos e inhibiendo el de otros. Se utiliza para seleccionar y aislar microorganismos a partir de poblaciones mixtas. Por ejemplo Ag ar salado-manitol o Chapman (permite el crecimiento de ciertos estafilococos).http://www.biologia.edu.ar/microgeneral/tp4.pdfSon medios utilizados para favorecer el crecimiento de ciertas bacterias contenidas en una poblacin polimicrobiana.El fundamento de estos medios consiste en facilitar nutricionalmente el crecimiento de una poblacin microbiana especifica Un ejemplo de medio selectivo es el caldo selenito, que se utiliza para favorecer el crecimiento de salmonellas y frenar el del resto de enterobactieiaNO SELECTIVO O DIFERENCIAL :Consiste en unmedio de cultivoque es capaz de distinguir dosmicroorganismospor su crecimiento diferencial en el mismo, usando las propiedades metablicas de ambos en presencia de un determinado nutriente y de un indicador que evidencia por ejemplo, unpHcido en su entorno.. Agar TSI: Triple sugariron (hierro tres azcares) Agar citrato Agar urea Caldo peptonado: para prueba de indol Caldo MR-VP: para prueba rojo metilo y VogesProskauer LIA: Lisineiron agar (lisina hierro) SLU: Sacarosa, lactosa y urea. Visualizacin de movimiento OF: Oxidacin-fermentacin. Para diferenciar metabolismo aerobio y anaerobio.

http://www.izt.uam.mx/ceu/publicaciones/MMBG/files/manual_microbiologia_general.pdf.PRCTICA 4. SIEMBRA DE MICROORGANISMOS

PRACTICA 5. TCNICAS DE TINCINMateriales_ Mechero_Porta objetos_ Asa_Porta lminas_Agua Procedimiento Se limpi un portaobjetos con alcohol y posteriormente se flame, luego se coloc una gota de agua destilada en el centro del portaobjetos y con el asa de siembra, esterilizada a la llama, se coloc una pequea cantidad de suspensin de bacterias la caja de Petri cerca del mechero, , sobre la gota de agua destilada, despus con el asa se extendi la gota y las bacterias sobre el portaobjetos y se fij la muestra por el calor, luego se calent suavemente a la llama del mechero hasta que se sec. Muestra de estafilococo 1 Muestra e coli 1 Fotos cmara-laboratorio Luego se procedi a la coloracin.Se aplic a la muestra fijada anteriormente violeta de genciana o cristal violeta y dejarlo actuar durante 1minuto, se lava con agua para eliminar el exceso de colorante luego se aade lugol y dejarlo actuar durante 1 minuto se Lavar con agua para eliminar el exceso de colorante luego se Aade alcohol- cido y dejarlo actuar durante 15 segundos y lavar rpidamente con agua, luego se Aadir fucsina y dejar actuar durante 5 minutos se Lavar con agua para eliminar el exceso de colorante se deja secar al aire libre segn las indicaciones del profesor.

Se procede a observar en el microscopio

ESTABLEZCA LAS DIFERENCIAS ENTRE UNA COLORACIN SIMPLE Y UNA COLORACIN DE GRAMDiferenciasPara la coloracin simple se utiliza un solo colorante azul de metileno y se trabaja con Staphylococcus aureus. Mientras que para la coloracin de Gram se utilizan 2 colorantes, uno primario: cristal violeta o violeta de genciana y uno de contraste, safranina o fucsina de Gram y se trabaja con en cultivos de Staphylococcus aureus, y Escherichia coli. Ademas la tincin de Gram es diferencial porque segn la composicin qumica de la pared celular las bacterias quedan teidas con el cristal violeta o la safranina, como mordiente o sustancia fijadora del color se utiliza lugol.

INVESTIGUE QUE COLORACIN SE DEBE UTILIZAR PARA OBSERVAR LAS ENDOPORAS O ESPORAS BACTERIANAS, Y PARA OBSERVAR LA CPSULA

CONCLUSIONES

Tanto las bacterias Gram positivas como las Bacterias Gram negativas se presentan morfolgicamente como cocos o bacilos, sin embargo al ejecutar tincin de Gram en estas para identificar su grupo taxonmico, las Gram positivas se tien de color violeta mientras que las Gram negativas se tien de color rosado.