MÉTODOS PARA EL

ESTUDIO DE LA ECOLOGÍA MICROBIANA

RECUENTO EN PLACA ESTÁNDAR PARA LA DETERMINACIÓN DE MICROORGANISMOS DEL SUELO

Se basa en contar las colonias de microorganismos que se desarrollan después de inocular en un medio de cultivo adecuado e incubar a una temperatura y tiempo determinados un volumen determinado de muestra. Se utiliza para determinar el número de células aisladas o microorganismos unicelulares viables como bacterias, levaduras, también se utiliza para el conteo de esporas fúngicas presentes en la muestra.

Disponible en :http://aulavirtual.usal.es/aulavirtual/demos/microbiologia/unidades/documen/uni_02/58/texthtml/cap804.htm

Disponible en: http://www.oocities.org/roberto_raul/crecimiento.html

NUMERO MAS PROBABLE PARA LA DETERMINACIÓN DE COLIFORMES TOTALES Y FECALES EN AGUA

La denominación genérica coliformes designa a un grupo

de especies bacterianas que tienen ciertas características

bioquímicas en común e importancia relevante como

indicadores de contaminación del agua y los alimentos

La determinación de microorganismos coliformes

totales por el método del Número más Probable (NMP), se

fundamenta en la capacidad de este grupo microbiano de

fermentar la lactosa

El medio de cultivo que se utiliza es el caldo LMX Fluorocult el cual permite la recuperación de los microorganismos dañados

que se encuentren presentes en la muestra y que sean capaces

de utilizar a la lactosa como fuente de carbono.

La determinación del número más probable de

microorganismos coliformes fecales se realiza a partir de los

tubos positivos de la prueba coliformes totales

TECNICA PARA DETERMINAR LA RESPIRACION DE

SUELOS

RESPIRACIÓN DEL SUELO

Es la producción

de CO2 debido a 2 procesos :

La oxidación de materia

orgánica rica en carbono por medio M.O del

suelo

La respiración de las células de las raíces

de las plantas

Se colocan recipientes de plástico boca abajo sobre varios lugares de muestreo para actuar como cámaras de aire para recoger el CO2 del Suelo. Se colocan un recipiente mas pequeño NaOH dentro de cada de aire para atrapar el CO2 : Este sistema usa las propiedades de acido débil del CO2 en una reacción de neutralización acido base que produce carbonato.

Disponible en: http://www.dspace.espol.edu.ec/bitstream/123456789/8666/1/lkrebs.pdf

RECUENTO DE MICROORGANISMOS

DEL AIRE USANDO EL RECIPIENTE ANDERSEN

Método utilizado para el muestreo de bacterias del aire, donde se fuerza a pasar un volumen determinado de aire a través de un dispositivo como un filtro de membrana.

En el recipiente de Andersen el aire se arrastra atraves de una serie de rejillas graduadas de

tamaño

Se dispone una placa de agar

bajo cada rejilla para recoger los M.O y partículas contenidas en el

aire

La velocidad del aire aumenta a

medida que disminuye las

aberturas de la rejilla de manera

que en las sucesivas placas con agar se van

depositando partículas mas

pequeñas

Disponible en : http://www2.uah.es/antonia_andrade/aeropalinol.htm

Disponible en : http://www.jmcprl.net/ntps/@datos/ntp_203.htm

TÉCNICA CHOLODNY ROSSI

La técnica de la laminilla en contacto de Cholodny y Rossi es una manera sencilla en la recogida y recuento directo de M.O del suelo y sedimentos.Aunque esta técnica no es confiable para enumerar organismos del suelo, es útil parailustrar la orientación de unos microorganismos con otros en las partículas de suelo.

En un recipiente estéril deposite un gran cantidad de suelo a examinar

Posteriormente entierre en este

suelo varias laminas

portaobjetos y déjelas allí por días

Retire las laminas con cuidado de la muestra de suelo

Limpie u n lado de la lamina para

evitar contaminación,

fijar la muestra al mechero

Aplicar cristal violeta y cubrir con

una laminilla

Identificar en el microscopio las

estructuras de M.O en la muestra

observada

Disponible en :http://www.eapcri.eu/

RECUENTO DE ESPORAS DE MICORRIZAS Y % DE MICORRIZACION EN RAÍCES DE PLANTAS

Disponible en:http://www.agro.uba.ar/agro/ced/microbiologia/clases/micorrizas/clases/tp_clase3.htm

Disponible en:http://www.agro.uba.ar/agro/ced/microbiologia/clases/micorrizas/clases/tp_clase3.htm

Disponible en:http://www.agro.uba.ar/agro/ced/microbiologia/clases/micorrizas/clases/tp_clase3.htm

Disponible en:http://www.agro.uba.ar/agro/ced/microbiologia/clases/micorrizas/clases/tp_clase3.htm

Disponible en:http://www.agro.uba.ar/agro/ced/microbiologia/clases/micorrizas/clases/tp_clase3.htm

Disponible en: http://www.agro.uba.ar/agro/ced/microbiologia/clases/micorrizas/clases/tp_clase3.htm

MICROSCOPIA DIRECTA DE

EPIFLUORESCENCIA

Es una técnica que emplea sondas de oligonucleótidos marcadas con fluorocromos las cuales van dirigidas hacia secuencias específicas del ADN y ARNr, lo que permite la identificación rápida y específica de células microbianas ya sea que estén como células individuales o se encuentren agrupadas en su ambiente natural.

Disponible en: quimicoclinico.wordpress.com

Coloración con naranja de acridina

Coloración con DAPI

Disponible en: http://morfoudec.blogspot.com/2008/07/microscopa-de-fluorescencia.html

DETERMINACIÓN DE MICROORGANISMOS

SOLUBILIZADORES DE FOSFATO

EL fósforo es uno de los elementos esenciales para el funcionamiento de los organismos y los ecosistemas y usualmente se encuentra entre los factores limitantes en el crecimiento de cultivos, lo que ha motivado el desarrollo de productos biotecnológicos, con base en microorganismos solubilizadores de fosfatos inorgánicos.

PROCEDIMIENTO

10 g de la muestra

90 ml – 10 -1

1 ml

9 ml – 10 -2 9 ml – 10 -3 9 ml – 10 -4

Sembrar en agar NBRIPIncubar 5-7 días (37°C)Contar UFC, reportar

BIBLIOGRAFIA REGINATTO LUCIANO, «Respiración del suelo como herramienta para evaluar

calidad de fondos en acuicultura. I. Desarrollo de un protocolo estándar para medir dióxido de carbono» Facultad de Ingeniería Marítima y Ciencias del Mar, ESCUELA SUPERIOR POLITÉCNICA DEL LITORAL Guayaquil – Ecuador 2003