UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADORFACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS

MICROBIOLOGÍA GENERAL

MÉTODOS ESPECTROMÉTRICOS

PAULINA LUCINA

INTRODUCCIÓN

Aquellos métodos de análisis óptico más usados en el área de investigación.

Es la medida de la cantidad de radiación absorbidapor las moléculas de una muestra en función de laslongitudes de onda específicas.

Radiación Electromagnética

Se puede describir como un flujo de partículas llamadas fotones

o bien como una onda propagándose en el espacio.

Se toma el concepto de longitud de onda, definiéndolo como la distancia entre dos máximos consecutivos de la onda.

Esta es inversamente proporcional a la energía de la misma, de tal manera que el espectro de radiaciones electromagnéticas abarca un amplio rango de energías, las de menor energía son las ondas de radio y las de mayor energía son las llamadas radiación gamma.

Tipos de Métodos Espectroscópicos

Efecto del haz de luz sobre un objeto

Un haz choca con una sustancia puede suceder:

Puede pasar a través de lamateria haciendo una solapequeña absorción.

La dirección de propagaciónde la luz puede ser alteradapor :

Refracción Reflexión Difracción Dispersión

Energía puede ser absorbida total o parcialmente

Transmitancia: Es la fracción de radiación incidente transmitida por la

materia

Si:

Absorbancia: Es una medida de la cantidad de Energía incidente absorbida por

una sustancia en solución.

Si:

La Ley de Lambert y BeerExpresa que la absorbancia de una solución es directamenteproporcional al camino recorrido por la radiación electromagnéticay a la concentración de la solución

= Es la cte. de proporcionalidad llamada coeficiente de absortividad molar (L mol-1cm-1).b = Es el paso óptico, anchura de la celda (cm).c = concentración de la muestra (M).

Requerimientos:

Luz monocromática.Disolución diluida (< 0,01M).Especie absorbente no participe en un equilibrio que dependa de su concentración.

Espectrofotómetro

Los aparatos de medida de la absorción de la radiaciónelectromagnética se denominan espectrofotómetros y puedenrepresentarse de forma sencilla mediante el siguiente esquema:

Componentes esenciales de un Espectrofotómetro

Lámpara: Fuente de luz de alta intensidad para efectuar la medición.

Fuentes continuas

Fuentes Líneas

Laser

LÁMPARAS

Fuentes Continuas TungstenoHidrógeno /Deuterio Arco de Xenón

Vis – IRUVUV –Vis

Fuentes de Líneas SodioMercurioHidrógeno

VisUV –Vis

Selectores de longitud de

onda

Filtros

Absorción

Interferencia

Monocromadores

Prisma

Red de difracción

Transmisión

Reflexión

Filtro de Interferencia

Monocromadores Dispositivos ópticos que descomponen laradiación electromagnética en sus

componentes y permite aislar cualquierporción deseada del espectro

De prisma: Aíslan la radiación mediante el

fenómeno de la dispersión óptica

De Red: Aíslan radiación mediante el

fenómeno de interferencia óptica

Portamuestras

Material de la celda

Cuarzo o Sílice fundida

Región UV

Vidrio

Región Vis

Forma de la celda

Cilíndricas Rectangulares

DetectoresDispositivos que convierte laradiación electromagnética en unaseñal utilizable

Fototubos FotomultiplicadoresFotodiodos

Bibliografía: Skoog, Principios de Análisis Instrumental, 5ta Edición, Editorial McGraw Hill, Cap. 6 – 7 http://www.slideshare.net/SantosSerkovic/espectrofotometria-pdf http://www.fcn.unp.edu.ar/sitio/quimicabiologica1/wp-content/uploads/2010/08/2011-TP-1-ESPECTROFOTOMETRIA.pdfhttp://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/cineticapractica6_19764.pdf