KIT DETECCIÓN IgG

FRENTE A

CHLAMYDOPHILA PSITTACI

Avian Chlamydophila Antibody Test Kit

50ACP301 / 50ACP310

I. OBJETIVO DE KIT

Este kit está diseñado para determinar anti-

cuerpos frente Chlamydophila psittaci en san-

gre/suero aviar (más adelante referido como

ACP). El kit puede ser utilizado en instalacio-

nes con capacidad limitada para el testaje la-

boratorial y ayuda en el diagnóstico de casos

clínicos.

II. INFORMACIÓN GENERAL

Chlamydophila pssittaci es una bacteria que

infecta a muchas especies de aves y puede

ser transmitida a humanos, causando una en-

fermedad conocida como Chlamydiosis. Esta

enfermedad es también conocida como Psit-

tacosis (Fiebre del Loro) en loros y otras es-

pecies de psitácidos; y Ornitosis en pollos y

pavos. La personas que manipulan o están

expuestos a animales infectados tienen un

mayor riesgo de contraer una infección de

psitacosis por C. psittaci, la cual se transmite

por aerosoles. La detección de anticuerpos

puede ayudar en el diagnóstico.

III. ¿QUÉ ES LA PRUEBA IMMUNOCOMB?

Immunocomb es un ELISA modificado, en fa-

se sólida que detecta los niveles de anticuer-

pos en suero o sangre entera. Este kit contie-

ne todo los reactivos necesarios para el desa-

rrollo del test. Los resultados se obtienen en

60-120min.

IV. ¿CÓMO FUNCIONA IMMUNOCOMB?

El kit de Immunocomb contiene 2 componen-

tes principales: un peine de plástico con los

antígenos absorbidos en los dientes (tarjeta) y

una bandeja con multicompartimentos inde-

pendientes entre sí.

Las muestras (sangre en disco, plasma/

suero) se depositan por separado en los poci-

llos de la fila A de la bandeja.

Los Controles Positivo y Negativo de muestra

se aplican por separado en los pocillos de la

fila A.

El peine se inserta en los pocillos de mues-

tras donde los anticuerpos se unirán a los antí-

genos fijados en los dientes del peine.

Se puede testar una muestra individual o

múltiples, rompiendo el número de dientes

que sean necesario. En cada carrera del kit

deberían incluirse el control positivo y el nega-

tivo.

Los anticuerpos no fijados son lavados en la

segunda fila.

La siguiente fila de pocillos contiene el conju-

gado anti-IgG de loro marcado con una enzi-

ma.

Después de otra etapa de lavado, el peine se

inserta en una fila en la que tiene lugar la

reacción enzimática. Esto genera un cambio

de color, su intensidad indica la cantidad de

anticuerpos presentes en cada muestra.

La intensidad de color púrpura-gris obtenida

en los puntos más bajos se deben convertir en

los niveles de anticuerpos mediante el uso de

la Combo Scale.

Los puntos de control internos indican que el

desarrollo es completo y válida.

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V. SIGNOS CLÍNICOS

Las aves infectadas pueden mostrar signos

clínicos desde inaparentes hasta cuadros gra-

ves principalmente del tracto respiratorio. Un

animal enfermo presenta mal aspecto con se-

creciones oculonales con o sin diarrea.

Las bacterias se liberan vía oral, ocular y por

secreciones respiratorias, y por las heces. Las

aves infectadas pero aparentemente sanas,

así como las enfermas son capaces de liberar

Chlamidophila. Sin embargo, la liberación

puede ser intermitente, por lo que un resulta-

do negativo fecal o cloacal no debe descartar

VII. ALMACENAMIENTO Y MANIPULACIÓN

1. Almacenar el kit a temperatura de refrige-

ración (2-8ºC) . No congelar.

2. Antes de realizar el kit, dejar los elemen-

to a Tª ambiente, preferiblemente 60-120min

antes (o 22 min a 37ºC) Realizar la prueba a

Tª ambiente de 20-25º.

3. Evite derrames y contaminación cruzada

de soluciones.

4. Mezcle los reactivos invirtiendo el plato

varias veces antes de usar.

5. No mezcle reactivos procedentes de dife-

rentes kits, ni de diferentes compartimentos

dentro del mismo kit.

6. No toque los dientes de la tarjeta Im-

munoComb(peine).

7. Mientras se esté desarrollando el kit, ir

perforando las tapas de cada compartimento

de acuerdo con el manual de instrucciones.

No retirar la cubierta de aluminio de la placa

de una vez.

8. El kit Immunocomb contiene material bio-

lógico inactivado. Debe ser manipulado y eli-

minado de acuerdo con los requerimientos

sanitarios.

3

VI. DIAGNÓSTICO

Actualmente, se utilizan una serie de ensayos

para diagnosticar aves infectadas con C. psit-

taci. Los tests se dividen en 2 categorías:

1– Detección de antígenos en secreciones

corporales, heces e hisopados cloacales: Los

métodos por inmunofluorescencia indirecta,

PCR y cultivos. La mayor limitación de estos

métodos son los falsos negativos, debido a la

liberación intermitente de los organismos y la

necesidad de personal especializado en el

laboratorio con habilidades y conocimientos

para realizar las pruebas.

2– Evaluación de anticuerpos anti-

Chlamydophila en sangre de aves: Las técni-

cas incluidas son fijación del complemento,

aglutinación y ELISA, donde se incluye la téc-

nica de Immunocomb Antibody Test Kit. Estos

métodos serológicos ofrecen la ventaja de ser

capaces de identificar un ave infectad que no

se encuentra liberando bacterias. Todos los

métodos, excepto ImmunoComb son realiza-

dos por laboratorios especializados.

VII. IMMUNOCOMB PASO A PASO

Antes de realizar la prueba, llevar la placa de desarrollo a temperatura ambiente retirando todos

los componentes de la caja kit y colocarlos en la mesa de trabajo durante 60-120 minutos o incu-

bar solamente la placa a 37 ° C / 98.6 ° F durante 25 minutos.

Realizar el ensayo a temperatura ambiente de 20-25ºC

1-Obtener la sangre del ave.

3-Utilice las pizas para perforar la cubierta pro-

tectora de aluminio de la fila A. Un pocillo para

cada muestra.

No abrir ningún pocillo de la fila A o de otras fi-

las que no vayan a ser usadas.

4-Perforar un disco saturado de sangre.

El disco saturado de sangre puede ser seco.

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2-Cuando utilice el disco de papel, corte cuida-

dosamente una de las uñas del pájaro. Tome el

papel para muestra y sature de sangre los dos

discos fijados.

5-Insertar el disco dentro del pocillo A. Sumerja

totalmente en el reactivo líquido. Proceder con

las otras muestras en los próximos pocillos.

Incubar el disco en el pocillo A por 60 minutos a

Tª ambiente para permitir la extracción de anti-

cuerpos.

Al utilizar muestras de suero / plasma se deben

omitir los pasos 2, 4 y 5. Depositar 5μl de suero/

plasma en el pocillo (s) en la fila A con una pipe-

ta. Subir y bajar el émbolo del pistón varias veces

para mezclar. Continuar con el Paso 6.

6-Abrir los próximos 2 pocillos consecutivos para el suero control.

Tomar 5μl de suero Control Positivo (C +) e insertar al lado de la última muestra. Mezclar el sue-

ro en pocillo. Hacer lo mismo con el suero de control negativo (C-) en el siguiente pocillo.

7-Retire el peine de la envoltura protectora.

No toque los dientes de la tarjeta Immuno-

Comb.

Para la prueba de menos de 10 muestras,

cortar o romper el peine tantas puntas como

pruebas se requieran.

Insertar el peine en los pocillos de la fila A,

incubar durante 20 minutos. Para mejorar la

mezcla, subir y bajar el peine al comienzo de

cada incubación. Repetir este movimiento al

menos 2 veces en todos los cambios de fila.

8- Use las pinzas para perforar la lámina de la

siguiente fila B de pocillo(s). Lavar el peine

bajo el grifo e incubarlo en el pocillo B duran-

te 2 minutos.

Antes de transferir el Peine en la fila siguien-

te, perforar la lámina de los pocillos de la fila

C. Sacudir cuidadosamente el exceso de lí-

quido de los dientes del peine en un pañuelo.

Durante 20 minutos incubar el peine en la fila

C.

Use pinzas para perforar la lámina de la si-

guiente (fila D). Lavar Peine bajo el agua fría

del grifo e insertar en la fila D durante 2 minu-

tos.

Antes de transferir Peine en la fila siguiente,

perfore el papel aluminio de la fila E. Sacudir

cuidadosamente el exceso de líquido de los

dientes del peine en un pañuelo e incubar el

Peine en la fila E durante 10 minutos.

9- Use pinzas para perforar la lámina de la

Fila F. Una vez completado el desarrollo del

color en la fila E, mover peine a la fila F du-

rante 2 minutos para la fijación del color. Sa-

cudir del peine el exceso de líquido y dejar

secar durante 1-10 minutos.

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VIII. LECTURA E INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS

• Leer los resultados de la prueba inmediatamente. Durante la lectura referirse al ejemplo de un

peine desarrollado y la tabla de la página 7.

•El punto inferior en el Peine es el punto de Chlamydophila psittaci.

•Evaluar los resultados de cada punto por separado.

• El nivel de IgG de C. psittaci se determina comparando la intensidad del color de cada muestra

con la intensidad de color del control positivo (C +).

• La intensidad del color púrpura-gris aceptado en los puntos de prueba se califica en una escala

de 1 a 6 mediante la comparación de cualquier resultado de color de prueba al resultado de color

Control Positivo, que se marcó como 3 en la escala de colores (CombScale - ver la sección X).

• Resultados con intensidad de color idéntico o mayor que el control positivo se puntúan ≥S3, lo

que indica alto título de anticuerpos. Resultados obtenidos como S2 se consideran positivos tam-

bién. Resultados <2 y>1 no se consideran concluyentes.

• Diferentes especies de aves presentan una sensibilidad diferente en esta prueba. Un resultado

positivo bajo puede no ser significativo en las especies de aves más sensibles y viceversa. Para

obtener información detallada acerca de las especies y su grado de sensibilidad, por favor con-

sulte nuestra página web (www.biogal.co.il) para obtener información del producto.

• El control negativo consiste en suero no inmune y debe leerse como cero (S = 0). Las mues-

tras sin color o sólo un rastro de color púrpura-gris se califican como S0 o S1 y se consideran ne-

gativos.

•En la sección XI encontrará ejemplo de un peine desarrollado y su interpretación de los resulta-

dos.

• El peine seco puede mantenerse como regristro.

IX. LECTURA DE LOS RESULTADOS CON LA ESCALA

Cuando el peine está completamente seco, se alinean

los puntos con CombScale calibrado. Se encuentra el

tono de color púrpura-gris que más se ajuste al positivo

de referencia (punto positivo superior). Deslizar la escala

hasta que C+ se encuentre en la ventana superior del

tono de color que ha sido encontrado. Mantener la esca-

la en esa posición para toda la lectura. Este paso sirve

para la calibrar el C+ en S3 que es el punto de corte con

el que los puntos de la prueba se pueden comparar.

Con la posición de CombScale fijada, comparar el color de

la escala que más se ajuste al punto de la muestra testada.

El número que aparece en las ventanas de arribas es la

puntuación CombScale que va desde S0-S6.

Repetir este paso con cada punto de prueba por separado.

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X. EJEMPLO DE UN PEINE DESARROLLADO

Prueba Resultados

1,5 S > 3 Reacción Positiva alta frente C. psittaci

2, 7 S ≥ 2 Reacción Positiva frente C. psittaci

3 S1-2 inconcluyente - sospechoso Reacción baja frente C. psittaci

4, 10 S < 1 Reacción negativa frente C. psittaci

6 ACP positivo Alto fondo con reacción positiva

8 Test no válido Control Interno no desarrollado

9 Test no válido Alto color de fondo

11 S 3 Control Positivo

12 S 0 Control Negativo

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Otra forma de leer los resultados es mediante el uso de CombScan. Es un programa de Sofware que

utiliza un ordenador y un escáner compatible Twain. Cuando el peine se coloca en el escáner el pro-

grama traduce los resultados en valores numéricos. CombScan ayuda a la lectura de resultados de

ImmunoComb y a la conservación de datos. Se suministra de forma gratuita previa solicitud.

Al igual que con todas las pruebas de diagnóstico, un diagnóstico clínico definitivo no debe basarse

exclusivamente en los resultados serológicos, pero sólo debe ser realizada por el veterinario después

de haber evaluado todos los hallazgos clínicos y de laboratorio.

XI. CONTENIDO DEL KIT

Componentes 10 Test Kit (50ACP301) 100 Test Kit (ACP310)

A. Tarjeta ImmunoComb (envuelto con aluminio)

1 10

B. Peine de desarrollo 1 10

C. Papel para muestras perforados previos 1 10

D. Pinzas desechables 1 1

E. Escala Calibradora (CombScale) 1 1

F. Pipeta 5 µl y puntas 1 -

G. Tubos Control Positivo y Negativo 1 1

Manual de instrucciones 1 1

XIII. REFERENCIAS

Bendheim et al. (1994). Proceedings of Deutsch Veterinarmedizinische Gesellschaft, Munchen, Ger-

many.

Lublin et al. (1997). The 4th Conference of the European Committee of the Association of Avian

Veterinarians, May, London, England.

Morales et al. (2007). Proceedings of the 12th International Conference of the Association of Institutions

for Tropical Veterinary Medicine (AITVM), Montpellier, France, 20-22 August, 2007. Does control of ani-

mal infectious risks offer a new international perspective?

Phalen et al. (1999). Proceedings: Birds and all that Jazz. 20th Annual Conference and Expo, Septem-

ber, New Orleans, Louisiana, USA.

Phalen D. N. (2001). Seminars in Avian & Exotic Pet Medicine, 10 (2), 77-89

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