IV. DESARROLLO TÉCNICO DE LA INVESTIGACIÓN 1...
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IV. DESARROLLO TÉCNICO DE LA INVESTIGACIÓN 1. Resumen Cydonia oblonga Miller, es un árbol que pertenece a la familia de las rosáceas, es conocido como membrillo. A las hojas de ésta especie vegetal se les atribuye popularmente el alivio de transtornos gastrointestinales, como la diarrea. Los objetivos de este trabajo fueron: Determinar, en ratón, la actividad de Cydonia oblonga Miller sobre un cuadro diarreico inducido, el efecto sobre la motilidad gastrointestinal y la dosis letal media, de los extractos acuoso y etanólico de las hojas de esta especie vegetal. El extracto acuoso se obtuvo con equipos extractores soxhlet; y el etanólico, por maceración. Para las pruebas de actividad antidiarreica se empleó como agente catártico el aceite de ricino y las dosis estudiadas, en ratón, fueron 3, 30 y 300 mg/kg para ambos extractos. Se determinó que los extractos acuoso y etanólico disminuyeron el número de ratones con diarrea, retardaron la aparición de un cuadro diarreico inducido y disminuyeron su intensidad, comparado con el grupo control negativo. Para la experimentación sobre la motilidad gastrointestinal, se usó el modelo que emplea carbón activado como marcador. Se estudiaron las mismas dosis que en la prueba de actividad antidiarreica. Se encontró que ambos extractos disminuyeron la motilidad gastrointestinal en las condiciones experimentales probadas. La prueba toxicológica aguda para determinar la dosis letal media del extracto etanólico se realizó también en ratón, se administraron, por vía intraperitoneal, dosis crecientes del extracto a grupos de diez ratones cada uno, se cuantificó el número de animales muertos a las 24 h, y empleando el método de probitas se determinó el valor de la DL 50 . El valor de la dosis letal media para el extracto acuoso fue de 1.7782 g/kg y para el extracto etanólico fue de 1.1959 g/kg. Estos valores ubican a ambos extractos de las hojas de Cydonia oblonga, como débilmente tóxicos. Los resultados obtenidos contribuyen a explicar el empleo popular de las hojas de Cydonia oblonga, como agente antidiarreico.
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IV. DESARROLLO TÉCNICO DE LA INVESTIGACIÓN
1. Resumen
Cydonia oblonga Miller, es un árbol que pertenece a la familia de las rosáceas, es conocido como
membrillo. A las hojas de ésta especie vegetal se les atribuye popularmente el alivio de
transtornos gastrointestinales, como la diarrea. Los objetivos de este trabajo fueron: Determinar,
en ratón, la actividad de Cydonia oblonga Miller sobre un cuadro diarreico inducido, el efecto sobre
la motilidad gastrointestinal y la dosis letal media, de los extractos acuoso y etanólico de las hojas
de esta especie vegetal.
El extracto acuoso se obtuvo con equipos extractores soxhlet; y el etanólico, por maceración.
Para las pruebas de actividad antidiarreica se empleó como agente catártico el aceite de ricino y
las dosis estudiadas, en ratón, fueron 3, 30 y 300 mg/kg para ambos extractos. Se determinó que
los extractos acuoso y etanólico disminuyeron el número de ratones con diarrea, retardaron la
aparición de un cuadro diarreico inducido y disminuyeron su intensidad, comparado con el grupo
control negativo.
Para la experimentación sobre la motilidad gastrointestinal, se usó el modelo que emplea carbón
activado como marcador. Se estudiaron las mismas dosis que en la prueba de actividad
antidiarreica. Se encontró que ambos extractos disminuyeron la motilidad gastrointestinal en las
condiciones experimentales probadas.
La prueba toxicológica aguda para determinar la dosis letal media del extracto etanólico se realizó
también en ratón, se administraron, por vía intraperitoneal, dosis crecientes del extracto a grupos
de diez ratones cada uno, se cuantificó el número de animales muertos a las 24 h, y empleando el
método de probitas se determinó el valor de la DL50. El valor de la dosis letal media para el
extracto acuoso fue de 1.7782 g/kg y para el extracto etanólico fue de 1.1959 g/kg. Estos valores
ubican a ambos extractos de las hojas de Cydonia oblonga, como débilmente tóxicos.
Los resultados obtenidos contribuyen a explicar el empleo popular de las hojas de Cydonia
oblonga, como agente antidiarreico.
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2. Introducción
Como lo muestran las estadísticas oficiales, los padecimientos gastrointestinales continúan
afectando a grandes grupos de la población mexicana; por lo tanto, es de particular interés el
estudio de las especies vegetales cuya información etnobotánica las señala con acción sobre las
enfermedades mencionadas. Tal es el caso de Cydonia oblonga Miller.
Cydonia oblonga Miller pertenece a la familia botánica de las rosáceas, es un árbol de 4-6 m, con
el tronco sinuoso y la corteza lisa, grisácea, que se desprende en escamas con la edad; copa
irregular; sus hojas se encuentran alternas, son de 5 a 10 cm de longitud, de ovaladas a redondas
con pecíolo corto. Sus flores son de color blanco o rosado, aparecen en las axilas de las hojas,
miden de 4 a 5 cm de diámetro, y tienen 5 pétalos y 20 estambres. Florece de abril a mayo. El
fruto es un pomo piriforme, de color amarillo dorado y de apariencia aterciopelada color marrón,
por fuera; por dentro es blanco, harinoso, ácido, aromático, mide más de 7 cm, dependiendo de la
variedad; posee abundantes taninos, pectinas, proteínas y aceites esenciales. Según Aguilar y
cols. (1994), las hojas de Cydonia oblonga, se emplean para contrarrestar diarreas y dolor de
estómago; hervidas son eficaces contra la tos y se les atribuye efecto febrífugo. Se utiliza como
astringente intestinal en decocción acuosa (Palmese et al., 2001)
Sobre los aspectos que se abordaron en este proyecto de investigación no se detectaron
publicaciones o trabajos en desarrollo.
Dos aspectos esenciales, de inicio en el estudio de una especie vegetal, son la exploración sobre
a) sus posibles efectos farmacológicos y b) su grado de toxicidad; para el caso de C. oblonga, en
este primer proyecto se realizó un estudio sobre toxicidad aguda, en ratón, de los extractos acuoso
y etanólico de hojas, y se determinó el efecto sobre la función gastrointestinal de ratón, con ambos
extractos.
Las hipótesis de trabajo fueron:
1)Dado que la información etnobotánica señala a C. oblonga con efecto sobre padecimientos
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gastrointestinales, como diarrea, es posible que los extractos totales de las hojas disminuyan el
avance del contenido gastrointestinal, en ratón, y también contrarresten un cuadro diarreico
inducido en esa especie animal.
2)Si C. oblonga es una especie medicinal de uso vigente, su grado de toxicidad en ratón, no
representará riesgo inmediato.
La metodología fue interdisciplinaria e inició con la adquisición del material vegetal, secado y
preparación de muestras para extracción, obtención de extractos acuoso (soxhlet) y etanólico
(maceración) en cantidades suficientes para las experimentaciones farmacológica y toxicológica;
empleando el método de probitas se determinó la dosis letal media (Loomis y Wallace, 1996) de
ambos extractos, en ratón; y a través del modelo que emplea como marcador carbón activado
(Tanira et al, 1996) se determinó el grado de avance del contenido gastrointestinal, en ratón,
Además, se estableció la acción sobre un cuadro diarreico inducido por aceite de ricino también en
ratón, bajo el efecto de los extractos citados. Se empleó como fármaco control positivo la
loperamida a la dosis de 5mg/kg (Williamson et al, 1996),
Los resultados generados permiten fundamentar el empleo popular de la especie vegetal en
estudio y contribuyen a ubicarla como fuente potencial de principios activos y/o de moléculas tipo a
sintetizar para su posterior estudio de inhibición sobre sistemas enzimáticos del tracto
gastrointestinal.
Bibliografía citada:
Aguilar A., Camacho J. R., Chino S., Jacquez P., López M. E. 1994. Herbario medicinal del IMSS.
1ª. Edición, México, D. F.
Loomis TA, Wallace HA. 1996. Loomis’s essentials of toxicology, fourth ed. Academic Press. San
Diego. USA. Pp22-23.
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Palmese T., Uncini M. R., Tomei P. E. 2001. An ethno-phamacobotanical survey in the Sarrabus
district (south-east Sardinia). Fitoterapia 72:619-643.
Tanira BH, Bashir K, Wasfi IA, Chandranath I. 1996. Evaluation of relaxant activity of some United
Arab Emirates plants on intestinal smooth muscle. J. Pharmacol 48:545-550.
Williamson E, Okpako D, Evans F. 1996. Selection, preparation and pharmacological evaluation of
plant material. John Wiley & Sons Ltd. Buffins Lanc. Chichester. England. Pp15-25, 26-47.
3. Métodos y materiales
Tratamiento del material vegetal y obtención de extracto
La identificación de la especie vegetal fue realizada por el Cand. a Dr. Alfredo Patiño Siciliano, del
Departamento de Botánica, de la Escuela Nacional de Ciencias Biológicas, del Instituto Politécnico
Nacional.
La adquisición de las hojas de Cydonia oblonga Miller se realizó en el Mercado Sonora de la
Ciudad de México. Una vez obtenido el material vegetal, se secó durante un mes a temperatura
ambiente, con ventilación constante y a la sombra.
Obtención del extracto acuoso (soxhlet)
Se empleó una serie de ocho equipos soxhlet para realizar la extracción, utilizando como líquido
extractor agua destilada (tipo II, de la Central de Instrumentación de la ENCB-IPN). El material
vegetal ya empaquetado en cartuchos de papel filtro se colocó dentro de la cámara de extracción
soxhlet. El disolvente se colocó en un matraz bajo la cámara, se calentó hasta llegar a ebullición,
se evaporó y condensó en un refrigerante y el líquido cayó sobre la muestra. De esta manera se
extrajeron los metabolitos del material vegetal solubles en agua. Para la concentración del extracto
se utilizó un rotavapor Buchi RE III y corriente de aireación continua.
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Obtención del extracto etanólico (maceración)
En un frasco se colocaron las hojas de Cydonia oblonga, secas y molidas, en etanol a temperatura
ambiente, se agitó dos veces al día (en la mañana y en la tarde), para que todo el material vegetal
tuviera contacto con el disolvente y se lograra una mejor extracción. Se dejó reposar hasta
alcanzar el equilibrio. Se retiró el etanol con las sustancias extraídas del material vegetal y se
adicionó disolvente nuevo. Lo anterior se repitió tres veces para cada muestra.
Determinación de la dosis letal media (DL50)
Extracto acuoso
La experimentación constó de dos etapas.
En la primera etapa se formaron siete grupos de diez ratones albinos cada uno, machos, entre 20-
25 g de peso, los cuales se pesaron y marcaron. Posteriormente, por vía intraperitoneal, se les
administraron dosis crecientes del extracto etanólico. Se incluyó un octavo grupo al que se le
administró el vehículo que fue solución salina isotónica. Los ratones estuvieron bajo observación y
después de 24 h se registró el número de animales muertos (Abdullahi et al., 2001). Con los datos
obtenidos se construyó una gráfica dosis-respuesta (%) preliminar. Con esta gráfica se buscó
ubicar la zona de la curva que da una correlación lineal.
En las mismas condiciones, se realizó la segunda etapa del ensayo toxicológico, en la cual se
empleó un intervalo de dosis más estrecho, se registró el número de ratones muertos durante las
24 h siguientes. Se observó el comportamiento de los animales sobrevivientes durante una
semana posterior al experimento. Se elaboró la curva dosis-respuesta final y se determinó la dosis
letal media por el método de unidades probitas (Batson, 1956; Tallarida, 2000).
Extracto etanólico
Se procedió de igual manera que con el extracto acuoso, pero el vehículo fue solución salina
isotónica más Tween 80 (0.5%).
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Pruebas de actividad antidiarreica
Extracto acuoso
Los ratones se mantuvieron en ayuno 24 h antes de realizar las pruebas.
Se formaron cinco grupos de 10 animales cada uno, machos, entre 20-25 g de peso y se les
administraron, por vía oral, los siguientes tratamientos:
Grupo testigo negativo: solución salina isotónica.
Grupo testigo positivo: loperamida (5 mg/kg)
Grupos de prueba: extracto acuoso de hojas de Cydonia oblonga, en las dosis de 3, 30 y
300 mg/kg (Astudillo et al., 2004).
Después de 30 min se les administró a todos los grupos de animales, por vía oral, el agente
catártico aceite de ricino, a partir de esta administración se registró el tiempo de aparición de
diarrea y el número de evacuaciones de cada ratón, durante 6 h.
Los datos se trataron estadísticamente con un ANOVA seguido de la prueba Dunnett.
Del extracto etanólico
Se trabajó de igual manera que lo descrito para el extracto acuoso. El vehículo fue solución salina
isotónica más tween 0.5%
Experimentación sobre motilidad gastrointestinal, con el extracto acuoso Se emplearon ratones albinos, machos (20-25 g de peso), se mantuvieron en ayuno durante 24
horas proporcionándoles solamente agua.
Posteriormente, se formaron cinco grupos con 10 ratones cada uno y se les administró por vía
oral, el siguiente tratamiento.
Grupo testigo negativo: Solución salina isotónica
Grupo testigo positivo: loperamida (5 mg/kg pc)
Grupos de prueba: extracto acuoso a las dosis de 3, 30 y 300 mg/kg.
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Después de 30 min, a todos los grupos se les administró, por vía oral, una suspensión de carbón
activado al 10% y acacia al 5%.
Después de 30 min, los animales se sacrificaron por dislocación cervical, se procedió a la
disección de la cavidad abdominal y se extrajo la porción de los intestinos; se midió el largo total
del intestino (LTI) y la distancia del avance del carbón activado administrado (ACA). Se calculó el
porcentaje de avance del marcador (%AM):
Estos resultados se analizaron estadísticamente mediante una prueba ANOVA seguida por la
prueba de Dunnett.
Experimentación sobre motilidad gastrointestinal, con el extracto etanólico.
Se siguió un procedimiento similar al señalado para el extracto acuoso, pero el vehículo fue
solución salina isotónica más Tween 80 (0.5%).
4. Resultados
Meta 1. Obtener el extracto acuoso de parte aérea de Cydonia oblonga Miller, por el método soxhlet, en cantidades suficientes para el desarrollo de la experimentación toxicológica y la experimentación farmacológica.
Se obtuvo el extracto acuoso de parte aérea de Cydonia oblonga Miller, por el método soxhlet.
La obtención de este extracto se realizó durante todo el desarrollo del proyecto con la frecuencia
necesaria hasta obtener las cantidades suficientes para la realización de las experimentaciones
farmacológica y toxicológica.
El extracto acuoso de las hojas de Cydonia oblonga Miller, presentó las características que se
muestran en la Tabla adjunta.
Meta 2. Obtener el extracto etanólico de parte aérea de Cydonia oblonga Miller, por maceración, en cantidades suficientes para el desarrollo de la experimentación toxicológica y la experimentación farmacológica.
El extracto etanólico de Cydonia oblonga Miller, se obtuvo por el método de maceración.
La obtención de este extracto también se realizó durante todo el desarrollo del proyecto con la
frecuencia necesaria hasta obtener las cantidades suficientes para la realización de las
experimentaciones farmacológica y toxicológica.
El extracto etanólico de las hojas de Cydonia oblonga Miller, presentó las características que se
muestran en la Tabla siguiente.
Características de los extractos totales de Cydonia oblonga Miller
Características
Extracto acuoso
Extracto etanólico
Color
café rojizo
Verde muy oscuro
Olor
dulce
herbal
Sabor
dulce astringente
herbal
Consistencia
espesa y chiclosa
espesa y chiclosa
8
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Meta 3. Realización del estudio de toxicidad aguda de los extractos acuoso y etanólico de Cydonia oblonga Miller.
La forma de administración usual de Cydonia oblonga es como infusión acuosa, por ello se empleó
agua como líquido extractor. Sin embargo, el etanol es el disolvente de elección para iniciar los
estudios fitoquímicos, porque dada su polaridad sus extractos son bastante completos. Por estas
razones se trabajó tanto con extractos acuosos como con etanólicos en las experimentaciones
toxicológica y farmacológica.
En el grupo de ratones al que se administró sólo el vehículo (testigo negativo), no se observó
ningún animal muerto; inclusive dentro del periodo de siete días posteriores al experimento.
Se observó que al incrementar la dosis el porcentaje de ratones muertos fue mayor. Durante los
siete días de observación posteriores a la administración de cada extracto de Cydonia oblonga, no
se murió ninguno de los animales sobrevivientes, por el contrario, estos presentaron
comportamiento normal.
Los ratones a los cuales se les administraron las dosis mayores a 6 g/kg de extracto etanólico,
presentaron taquicardia, ligeros espasmos, dificultad para respirar y la actividad motora se vio
disminuida; cabe resaltar que a estas dosis se murió el 100% de la población de ratones.
Los resultados de la determinación de las dosis letales medias de los extractos de Cydonia
oblonga Miller, se presentan en las siguientes gráficas:
0
20
40
60
80
100
120
0 2 4 6 8 10Dosis (g/kg)
Mor
talid
ad (%
)
Curva dosis-respuesta del ensayo toxicológico en ratón, del extracto acuoso
de las hojas de Cydonia oblonga Miller 10
0
1
2
3
4
5
6
7
0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9
Log dosis
Prob
itas
DL50= 1.7782 g/kg
Relación dosis-respuesta en probitas del ensayo toxicológico en ratón, con el extracto acuoso de Cydonia oblonga Miller
11
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
110
-2.5 -2 -1.5 -1 -0.5 0 0.5 1 1.5
Log dosis (g/kg)
Mor
talid
ad (%
)
Curva dosis–respuesta del ensayo toxicológico en ratón, del extracto
etanólico de las hojas de Cydonia oblonga Miller.
12
0
1
2
3
4
5
6
7
-0.6 -0.5 -0.4 -0.3 -0.2 -0.1 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6
Log dosis (g/kg)
Pro
bita
s
r = 0.9631Log dosis = 0.0777 g/kgAntilog dosis = 1.1959 g/kgDL50 = 1.1959 g/kg
Determinación de la DL50 del extracto etanólico de las hojas de Cydonia oblonga Miller, en ratón.
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Meta 4. Determinación del efecto de los extractos acuoso y etanólico de Cydonia oblonga Miller sobre un cuadro diarreico inducido y sobre la motilidad gastrointestinal, en ratón.
Pruebas de actividad antidiarreica Extracto acuoso Se observó que el mayor porcentaje de animales diarreicos correspondió al grupo administrado
sólo con solución salina isotónica y aceite de ricino (grupo testigo negativo). Del grupo que recibió
loperamida (control positivo), el 50 % presentó evacuaciones diarreicas. Los animales de los
grupos administrados con el extracto acuoso de C. oblonga, presentaron menor número de
animales con diarrea comparados con el grupo testigo negativo, inclusive el que correspondió a la
dosis de 300 mg/kg mostró resultados similares al grupo control positivo.
Los resultados obtenidos respecto al tiempo en que se inició la diarrea, en los ratones que la
presentaron para cada tratamiento, indican que en los animales con diarrea, ésta se presentó más
tardíamente tanto en los grupos administrados con el extracto acuoso de C. oblonga como en el
grupo que recibió loperamida, comparados con el grupo testigo negativo.
Los resultados obtenidos para el número de evacuaciones de los ratones que presentaron diarrea,
señalan que fue menor el número de evacuaciones diarreicas en los ratones que la presentaron
en los grupos de prueba del extracto, y del grupo administrado con el fármaco de referencia,
comparados con el grupo testigo negativo.
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
T (-) T (+) 3 mg/kg 30 mg/kg 300 mg/kg
Ani
mal
es c
on d
iarr
ea (%
)
Efecto del extracto acuoso de las hojas de Cydonia oblonga sobre diarrea provocada en ratones. T(-): Solución salina isotónica T(+): Loperamida 5 mg/kg
15
200 *
*180
160
140 **
Tiem
po d
e in
icio
de
diar
rea
(min
) 120
100
80
60
40
20
0
T (-) T (+) 300 mg/kg 3 mg/kg 30 mg/kg
Efecto retardatorio de la diarrea en ratones administrados con el extracto
acuoso de hojas de Cydonia oblonga. T(-): Solución salina isotónica, T(+): Loperamida 5 mg/kg. *Diferencia estadísticamente significativa respecto al grupo control negativo; ANOVA seguido de la prueba Dunnett, p < 0.05
16
7
6
5
Núm
ero
de e
vacu
acio
nes
diar
reic
as
4
*
3
2 ** *
1
0 T (-) T (+) 300 mg/kg 3 mg/kg 30 mg/kg
Número de evacuaciones diarreicas de ratones administrados con el extracto
acuoso, de hojas de Cydonia oblonga. T(-): Solución salina isotónica, T(+): Loperamida 5 mg/kg. *Diferencia estadísticamente significativa respecto al grupo control negativo, ANOVA seguida de la prueba Dunnett, p<0.05
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Extracto etanólico
Se observó que fue menor el número de ratones diarreicos en los grupos de prueba del extracto y
en el grupo testigo positivo, comparados con el grupo testigo negativo. Los resultados obtenidos
respecto al tiempo de inicio de diarrea muestran que en los ratones diarreicos de los grupos
administrados con las dosis de 30 y 300 mg/kg, y en los del grupo que recibió loperamida, la
diarrea se presentó más tardíamente, comparados con el grupo testigo negativo.
Se determinó que el número de evacuaciones diarreicas fue menor en los ratones que presentaron
diarrea del grupo administrado con loperamida, y en los pretratados con el extracto etanólico de C.
oblonga.
100
90
80
70
60
Ani
mal
es c
on d
iarr
ea (%
)
50
40
30
20
10
0 T (-) T (+) 3 mg/kg 30 mg/kg 300 mg/kg
Efecto del extracto etanólico de las hojas de Cydonia oblonga sobre diarrea provocada en ratones, por aceite de ricino. T(-): Solución salina isotónica más Tween 80 (0.5%), T(+): Loperamida 5 mg/kg. *Diferencia estadísticamente significativa respecto al grupo control negativo. ANOVA seguido de la prueba Dunnett, p < 0.05
18
300
*250
*
Tiem
po d
e in
icio
de
diar
rea
(min
)
200
150
100
50
0 T (-) T (+) 3 mg/kg 30 mg/kg 300 mg/kg
Efecto retardatorio de la diarrea en ratones administrados con el extracto etanólico de hojas de Cydonia oblonga. T(-): Solución salina isotónica más tween 80 (0.5%), T(+): Loperamida 5 mg/kg. *Diferencia estadísticamente significativa respecto al grupo control negativo ANOVA seguido de la prueba Dunnett, p < 0.05
19
0
0
1
2.5
3
4
5
T (-) T (+) 3 mg/kg 30 mg/kg 300 mg/kg
*
*
.5
4
.5
Núm
ero
de e
vacu
acio
nes
diar
reic
as
3
2
.5
1
.5
20
Número de evacuaciones diarreicas de ratones administrados con el extracto
e o de la prueba
etanólico, de hojas de Cydonia oblonga. T(-): Solución salina isotónica más tween 80 (0.5%), T(+): Loperamida 5 mg/kg. *Diferencia
stadísticamente significativa respecto al grupo control negativo, ANOVA seguidDunnett, p < 0.05
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) Pruebas sobre motilidad intestinal
os resultados experimentales sobre la motilidad gastrointestinal en ratón, del extracto acuoso,
e la misma manera se trataron los resultados obtenidos con el extracto etanólico, los cuales se
b
L
utilizando carbón activado como marcador, se muestran en las gráficas siguientes, en donde se
representa el porcentaje de avance del marcador de los diferentes grupos de trabajo y se señala
también su respectivo error estándar. Los resultados se analizaron estadísticamente por una
ANOVA, y las pruebas t de Student y de Dunnett.
D
muestran en la gráfica respectiva.
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
Soluciónsalina
isotónica
Loperamida 5 mg/kg
Extracto 3 mg/kg
Extracto 30 mg/kg
Extracto 300 mg/kg
Ava
nce
del m
arca
dor (
%)
*
**
*
Efecto del extracto acuoso de hojas de Cydonia oblonga Miller, sobre la
motilidad gastrointestinal, en ratón. *Diferencia estadística significativa con respecto al testigo negativo, ANOVA seguida de la prueba de Dunnett p<0.05
22
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
SSI+Tween80¤
Loperamida 5 mg/kg
Extracto 3 mg/kg
Extracto 30 mg/kg
Extracto 300 mg/kg
Ava
nce
del m
arca
dor (
%)
*
*
* *
Efecto del extracto etanólico de hojas de Cydonia oblonga Miller sobre la
motilidad gastrointestinal, en ratón ¤SSI+Tween 80: Solución salina isotónica al 0.9%+Tween 80 (0.5%) *Diferencia estadística significativa con respecto al testigo negativo, ANOVA seguida de la prueba de Dunnett p< 0.05 23
24
Meta 5. Análisis de resultados y elaboración del informe del proyecto.
Los datos estadísticos indican que la diarrea es un padecimiento frecuente en México. Aparte de
las terapias médicas modernas, una de las alternativas que emplea la población para afrontar este
padecimiento es el uso de plantas medicinales, esta es una práctica común en muchos países en
vías de desarrollo. Este uso data de tiempos muy antiguos, pero sólo en forma más o menos
reciente, la farmacología y toxicidad de las plantas medicinales empezó a recibir la atención de los
científicos para la verificación de las propiedades farmacológicas o terapéuticas que se les
atribuyen y para la investigación de sus aspectos tóxicos en atención a la seguridad en el uso de
estas especies vegetales.
Se seleccionó a Cydonia oblonga Miller (membrillo) porque es un árbol cuya información
etnobotánica mexicana lo señala con acción sobre trastornos diarreicos, además por la
disponibilidad del material vegetal y por la ausencia de estudios experimentales sobre los aspectos
abordados en este trabajo.
Para las pruebas farmacológicas se obtuvieron los extractos acuoso y etanólico, de las hojas del
membrillo. El extracto acuoso se obtuvo por medio de equipo soxhlet, se eligió estudiar este
extracto porque su obtención se asemeja a la forma en que comúnmente lo emplean las personas,
que es en té (decocción o cocimiento acuoso). Se seleccionó el extracto etanólico, que se obtuvo
por maceración, porque el etanol es un disolvente de mediana polaridad, y con él se extraen
compuestos de menor polaridad que los extraídos con agua, la maceración en frío evitó la
descomposición de compuestos activos termolábiles que pudieran estar presentes en Cydonia
oblonga. La consistencia de ambos extractos fue la misma, pero el color, sabor y olor cambiaron,
lo que puede deberse a que se extraen diferentes metabolitos con cada tipo de disolvente; por
ejemplo, los azúcares reductores se extraen con agua, en tanto pigmentos como la clorofila son
extraídos con etanol.
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Como se mencionó, gran parte de la población utiliza remedios herbolarios para contrarrestar los
padecimientos que le aquejan, por lo que es importante conocer cuál es el grado de toxicidad de
las especies vegetales que consume; pues no son escasas las especies vegetales que contienen
compuestos de gran toxicidad.
Por todo lo anterior se realizó el ensayo toxicológico agudo de las hojas de Cydonia oblonga.
Aunque los estudios experimentales de toxicidad en animales no siempre pueden ser totalmente
extrapolados al hombre, éstos son importantes como un indicador del nivel del toxicidad de una
especie medicinal.
El resultado de las DL50 de ambos extractos de Cydonia oblonga, tomando en consideración la
información presentada por autores que manejan este parámetro (Montoya, 1992), los ubica como
débilmente tóxicos.
El modelo para probar la actividad antidiarreica del extracto acuoso de las hojas de Cydonia
oblonga Miller fue el que emplea aceite de ricino como agente desencadenante de diarrea. El
aceite de ricino es un agente catártico (esto es que provoca la evacuación de materia fecal por lo
general acuosa, desde el colon); este aceite se obtiene del fríjol de la planta Ricinus communis, y
en sí no es irritante, pero al ser hidrolizado por las lipasas en el intestino delgado se libera ácido
ricinoleico, que origina la irritación e inflamación de la mucosa intestinal y provoca que se liberen
prostaglandinas. Las prostaglandinas ejercen un efecto citoprotector frente a la irritación e
inflamación de la mucosa intestinal, pero provocan que la longitud del músculo liso se acorte (por
la prostaglandina E) mientras que el músculo circular se contrae (por la prostaglandina I), o sea,
estimulan la motilidad y secreción y como consecuencia se presenta la diarrea. El ácido ricinoleico
también modifica la absorción de potasio y sodio, y disminuye la actividad de la bomba Na+, K+,
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ATPasa en el intestino delgado y colon, lo que provoca la modificación en el transporte de
electrolitos y agua en la mucosa intestinal, y acelera el tránsito intestinal.
El porcentaje de ratones que presentaron diarrea disminuyó conforme se incrementó la dosis de
ambos extractos; en los grupos tratados con el extracto etanólico el porcentaje de ratones con
diarrea fue menor que en los administrados con el extracto acuoso.
El extracto etanólico retardó más, el inicio del cuadro diarreico comparado con el extracto acuoso,
esto puede deberse al tipo de compuestos que se extraen con este disolvente. En la dosis de 3
mg/kg el cuadro diarreico se presentó primero en los ratones tratados con el extracto etanólico,
esto indica que esta dosis no fue suficiente para evitar la aparición de diarrea. La frecuencia de
evacuaciones disminuyó en los ratones tratados tanto con el extracto acuoso como con el extracto
etanólico, comparado con el testigo negativo (vehículo).
Así pues, los resultados obtenidos permiten apreciar una clara eficacia de los extractos acuoso y
etanólico para disminuir la frecuencia y el número de evacuaciones diarreicas que se provocaron
por medio del agente catártico aceite de ricino, en ratones.
En los ensayos farmacológicos, la vía de administración del extracto acuoso y etanólico fue oral,
semejando las condiciones de consumo de la comunidad que emplea por esa vía el té de las hojas
de Cydonia oblonga Miller.
Los resultados sobre motilidad intestinal indican que las dosis administradas de ambos extractos
en comparación con el testigo negativo, ocasionan una disminución de la motilidad gastrointestinal
en ratón, ya que se observa un menor porcentaje de avance del marcador con las dosis que se
probaron del extracto.
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El extracto etanólico de Cydonia oblonga según la DL50 determinada en este proyecto, se
considera débilmente tóxico de acuerdo a la clasificación presentada por Montoya (1992), pero
contiene agentes terapéuticos, por lo que se requiere continuar con el estudio en los aspectos
toxicológico y farmacológico de esta especie medicinal. En particular, sería importante investigar si
los activos antidiarreicos también son responsables de la débil toxicidad del extracto etanólico de
las hojas de esta especie vegetal.
De esta manera, los resultados obtenidos en este trabajo, contribuyen a explicar el uso popular de
Cydonia oblonga como agente antidiarreico dentro de la medicina tradicional mexicana.
CONCLUSIONES GENERALES
• Según la clasificación de toxicidad presentada por Montoya, 1992, el valor de las dosis
letales medias, del extracto acuoso y del extracto etanólico, de las hojas de Cydonia
oblonga Miller, los ubican como débilmente tóxicos.
• Los extractos, acuoso y etanólico, de las hojas de Cydonia oblonga Miller, en comparación
con el grupo control negativo:
♦ disminuyeron el número de ratones con diarrea,
♦ retardaron la aparición de un cuadro diarreico inducido y
♦ disminuyeron la intensidad de la diarrea en los ratones que la llegaron a
presentar.
• Los extractos acuoso y etanólico de las hojas de Cydonia oblonga Miller disminuyen el
avance del contenido gastrointestinal, en ratón, en las condiciones de los experimentos
realizados.
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Por lo que Cydonia oblonga Miller puede ser útil en el tratamiento de cuadros diarreicos, como lo
señala el conocimiento popular.
• Se alcanzaron los objetivos propuestos para este trabajo y las hipótesis planteadas
fueron correctas.
5. Impacto
Para la elucidación del mecanismo de acción de un fármaco determinado, es indispensable la
realización de estudios de posibles efectos del compuesto sobre sistemas enzimáticos.
En la búsqueda de fuentes potenciales de compuestos con actividad farmacológica es importante
considerar los recursos vegetales con que se cuenta en México. De particular interés es el estudio
de las especies vegetales cuya información etnobotánica las señala con efecto sobre
padecimientos gastrointestinales, porque éstos continúan afectando a grandes grupos de la
población del país como lo muestran las cifras estadísticas. En un estudio biodirigido las primeras
evidencias de actividad farmacológica suelen obtenerse a partir de extractos totales de la especie
vegetal a explorar, por lo tanto, este primer proyecto sobre Cydonia oblonga Miller estableció las
bases para que, en proyectos posteriores, se proceda al aislamiento del (los) principio(s) activo(s)
y la exploración sobre su mecanismo de acción enfatizando en el rastreo de efectos inhibitorios
sobre sistemas enzimáticos.
También, este estudio contribuye a validar el conocimiento empírico popular sobre Cydonia
oblonga Miller y contribuye a explicar bajo el rigor de la experimentación de laboratorio su uso por
parte de la población mexicana.
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En general:
Este proyecto contribuyó a establecer las bases para el posterior estudio de inhibición de Cydonia oblonga Miller sobre sistemas enzimáticos del tracto gastrointestinal.
Se determinó que tanto el extracto etanólico como el acuoso de Cydonia oblonga Miller
presentan efecto inhibitorio sobre la motilidad gastrointestinal, en ratón. Se estableció que los extractos acuoso y etanólico de Cydonia oblonga Miller son capaces de
contrarrestar un cuadro diarreico inducido, en ratón. Se encontró que la toxicidad aguda de Cydonia oblonga Miller no tiene repercusión inmediata a
las dosis que la consume la población. Se contribuyó a la formación de recursos humanos a través de atención a becarios PIFI, del
desarrollo de servicios sociales y de seis Tesis Profesionales para Químico Farmacéutico Industrial (ENCB-IPN).
Se presentaron trabajos en foros académicos.
